饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
食品中苯甲酸的测定
食品中苯甲酸、山梨酸与糖精钠的测定4h）,加水溶解并定容至200mLo此溶液中糖精钠的含量为1、OOg/mLod）混合标准使用液:分别准确吸取不同体积苯中酸、山梨酸与糖精钠标准储备溶液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸与糖精钠含量分别为0、000mg/mL、0、020mg/mL> 0、040mg/mL% 0、080mg/mL、0、160mg/mL^ 0、320mg/mL 的混合标准使用液。
2、2、10微孔滤膜:0、45 um,水相。
2、3仪器与设备2、3、1高效液相色谱仪:配有紫外检测器。
2、3、2离心机:转速不低于4000r/min2、3、3超声波水浴振荡器。
2、3、4食品粉碎机。
2、3、5旋涡混合器。
2、3、6pH计。
2、3、7天平:分度值为0、01g与0、lmgo2、4分析步骤2、4、1样品处理2、4、1、1液体样品①碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品:称取10g样品（精确至0、001g）（如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积）于25mL容量瓶中，用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
②乳饮料、植物蛋口饮料等含蛋口质较多的样品:称取10g样品（精确至O.OOlg）于25mL容量瓶中，加入2mL亚铁氛化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度,4000r/min离心10min,取上清液,经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
2、4、1、2半固体样品①含有胶基的果冻样品:称取0、5g〜lg样品（精确至0、001g）,加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约20mL,置60°C〜70°C水浴中加热片刻，加塞，剧烈振摇使其分散均匀后,加氨水（1+1）调节pH至近中性，加塞，剧烈振摇，使样品在水中分散均匀，置60°C〜70°C水浴锅中加热30min,取出后趁热超声5min,冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
仪器关机
测定结束后，点停止，停止泵运行。把A瓶 中的滤头取出，放入超纯水中，设定水：甲 醇=90：10的比例，点运行，启动泵运行 30分钟。30分钟后再设定100%甲醇运行 30分钟，后关闭软件，电脑。依次关闭各模 块电源。
实验步骤1
按照下列高效液相色谱参考条件和仪器操作说明开 机，设定。 检测器：紫外检测器，230nm波长， 色谱柱：C18 4.6×250mm, 5μm不锈钢柱 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02 mol/L） =5:95（先100%甲醇运行10分钟后再设定次比 例） 流速：1 mL/min 进样量：10 μL
实验步骤2
样品处理 每组派一个同学称取汽水10.00g，放入小烧 杯中，微温搅拌除去二氧化碳，加水定容至 50 mL，用水系0.22um滤膜过滤至离心 每组派一个同学，从混合标准贮备液（浓度 1.0mg/mL），用移液管准确取适量（？）， 到25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此混 合标准溶液浓度为0.1mg/mL。 后用水系0.22um滤膜过滤至离心管待用。
饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠 的测定—HPLC法
1、掌握HPLC测定饮料中糖精钠、苯甲酸钠和山 梨酸钾的原理和方法。 2、了解HPLC的结构，学习HPLC的操作方法。 3、掌握HPLC的定性定量方法
糖精钠是最古老的甜味剂。糖精于1878年被美国 科学家发现，很快就被食品工业界和消费者接受。 糖精的甜度为蔗糖的300倍到500倍，它不被人体 代谢吸收，在各种食品生产过程中都很稳定 。 据国外资料记载，1977年加拿大进行的一项多代 大鼠喂养实验发现，摄入大量的糖精钠可以导致雄 性大鼠膀胱癌。因此，美国等发达国家的法律规定， 在食物中使用糖精时，必须在标签上注明“使用本 产品可能对健康有害，本产品合有可以导致实验动 物癌症的糖精”的警示。
教案3 食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定
项目五用高效液相色谱法检测物质任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成教学内容苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。
但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。
表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准抑制物质腐败的药剂。
即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。
重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。
对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。
在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。
特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。
对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。
我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。
防腐剂应具备的几个条件：1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性2、低浓度下具有较强的抑菌作用3、本身不应具有刺激气味和异味4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用5、价格合理，使用较方便。
防腐剂的作用机理：1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。
2、防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。
由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，从而具有抗微生物的作用。
3、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。
4、作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。
高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸_山梨酸和糖精钠
第34卷第10期辽宁化工Vol.34,No.10 2005年10月Liaoning Chemical Industry October,2005分析检测高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠刘渭萍(辽宁省产品质量监督检验院,辽宁沈阳110004)摘要:将饮料样品定量稀释后,用针筒式水膜过滤器处理后,直接进样,外标法进行液相色谱定性、定量分析。
用此方法进行了不同水平的加标回收率测试,证明方法快捷可靠,非常适用于大量的样品的快速测定。
关键词:食品添加剂;针筒式水膜过滤器;苯甲酸;山梨酸;糖精钠中图分类号:O657.7+2文献标识码:A文章编号:10040935(2005)10045403随着化学添加剂的诞生和发展,人类健康不断受到威胁。
食品添加剂对人体的毒性概括起来有致癌性、致畸性和致突变性[1,2],这些毒性要经过较长时间才能显露出来,即对人体产生潜在的毒害[3,4],这也是人们关心食品添加剂安全性的原因。
近年来我国使用的食品添加剂由20世纪70年代的几十种发展到目前卫生部颁发许可使用的1516种[5,6](截止到1997年7月),食品添加剂的绝对用量虽然只占食品的千分之几到万分之几[7,8],但是随着现代食品工业的发展,食品的种类日益增加,食品添加剂的超量和超范围使用现象十分严重,因此食品添加剂对人类产生了极大的危害,对食品添加剂的检测也越来越受到人们的重视。
1实验部分1.1仪器与试剂(1)Agilent1100液相色谱(二级管阵列检测器)。
(2)甲醇(色谱纯)。
(3)水(石英亚沸二次蒸馏水)。
(4)乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,加石英亚沸二次蒸馏水溶解至1000mL,经滤膜(0.45L m)过滤。
(5)碳酸氢钠溶液(20g/L):称取2g碳酸氢钠(优级纯),加水至100mL,振摇溶解。
(6)苯甲酸标准储备液:准确称取0.1000g (精确至0.0001g)苯甲酸(色谱纯),加碳酸氢钠溶液(20g/L),加热溶解,移入100mL容量瓶中,加水定容至100mL,苯甲酸含量为1mg/m L。
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量摘要: 采用高效液相色谱法同时检测饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠。
样品经除乙醇（如果含有乙醇），氨水调pH至中性，定容，过水相微孔滤膜，以 C18 （6 × 250mm）色谱柱分离，用配紫外检测器的高效液相色谱仪进行检测。
结果显示安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度在 1.0mg/ L ～ 100. 0mg/ L 范围内呈线性关系，回收率在87% ～ 98% 之间，相对标准偏差在 1%以下，最低检测限0.5mg/kg，适用于同时检测碳酸饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量。
关键词:碳酸饮料；安赛蜜；苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 高效液相色谱仪防腐剂能抑制微生物生长繁殖，在食品中应用普遍，我国到目前为止已批准了32种使用的食物防腐剂，其中最常用的有苯甲酸钠、山梨酸钾等经常用于食品防腐，苯甲酸钠价格低廉，主要用于碳酸饮料和果汁饮料。
糖精钠及安赛蜜作为甜味剂应用于食品中调整食品口味，它们属于高倍甜味剂。
这些产品的甜度都比蔗糖高，现在糖精钠的使用得越来越少，而安赛蜜普遍添加到饮料中。
但过量使用会对人体产生毒副作用，甚至引发癌症。
因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要。
现有的国家标准方法中，只有同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠的方法。
由于碳酸饮料中一般添加安赛蜜比较普遍，很少添加糖精钠，在日常工作中，为节约时间提高分析效率，就要求检测人员研究出适合食品中普遍存在的多种添加剂同时测定的检测方法。
1 材料与方法1. 1 仪器（1）赛默飞世尔高效液相色谱仪U3000带紫外检测器；（2）C18 ( 4.6× 250mm) 色谱柱；(3)万分之一电子天平；（4）无油真空抽滤装置 (5)水浴锅（6）刻度吸管10mL,移液管5mL,容量瓶50mL(7)0.22μm水相微孔滤膜1.2 试剂：（1）盐酸（优级纯）；（2）氨水 ( 优级纯) ; （3）甲醇 ( 色谱纯 ) ;（4）醋酸铵(20mmol/L)：称取1.54g优级纯醋酸铵，加入少量水溶解后，转入1000mL的容量瓶中，加水定容到刻度，经0.22μm水相微孔滤膜用真空抽滤装置抽滤后备用。
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解(转自仪器信息网色谱论坛)苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-1996，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-1996，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-1996和GB/T5009.29-1996 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-1996使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1m ol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
高效液相色谱法同时测定饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠
添 加 剂 同时 分 析 方 面有 其 十 分 有 利 的 条 件 ， 丽 珍 ＿ 、 刘 ２ Ｊ 彭 巨成 ［ 黄 方 取 ［ 曾做 过 这 方 面 的 报 道 。 本 文 采 用 引、 】 液 相 色 谱 同 时 测 定 饮 料 中 苯 甲 酸 、 梨 酸 和 糖 精 山 钠 ＿ ， 立 了一 种 快 速 分 析 方 法 。 ６建 】
１ 前 言
瓶 中 ， 水 定 容 至 １０ｍ 。 由此 制 得 ２ 、Ｏ ６ 、Ｏ和 加 ０ Ｌ ０ ４ 、０ ８ １０ｔ ／ Ｌ苯 甲 酸 、 ０ ｇ ｍ ｔ 山梨 酸 和 糖精 钠 混 合 标 准 溶 液 。
２ ２ 实 验 方 法 ． ２ ２ １实 验 原 理 ．． 试样 加温 除 去 二 氧 化 碳 和 乙醇 ， ｐ 至 近 中 性 ， 调 Ｈ
谱 技 术 有 限 公 司 ） Ｃ８色 谱 柱 （ｉ ｒｓｈｒ４ ６× １０ ，１ Ｌｃ ｏｐｅ， ． ｈ ５ ｍ ） 微 量 进样 器 （０ ）超 声 波 清 洗 器 （Ｂ ２０ ， ｍ ， ５ ， Ｓ ２０ ） 电子
天 平 （ Ｎ ０ ４ ） Ｍ ｌ ｏｅ 纯 水 机 （ Ｉ Ｉ￣Ｒ ） Ｆ ２ ０ Ｎ ， ｉｐｒ 超 ｉ Ｍ ＬＸ Ｅ 。
２ １ ２试 剂 ．．
拌 除 去 二 氧 化 碳 ， 氨 水 （ ＋Ｉ调 ｐ 约 为 ７ 加 水 定 容 用 Ｉ ） Ｈ ．
至 适 当 的体 积 ， ０ ４ ｍ滤 膜 过 滤 。 经 ．５ｔ ｉ
果 汁 类 ：称 取 ５０ ～１ ． ， 氨 水 调 Ｐ ．０ ００ ｇ用 ０ Ｈ约 为 ７ ，
２ １１仪 器 ．．
汽水 ： 取 ５０ 称 ．０～ｌ ．０ｇ 放 人 小 烧 杯 中 ， 温 搅 Ｏ ０ ， 微
５５液 相 色谱 泵 （ 国 Ｗａ ｒ公 司 ）２８ 外 检测 １ 美 ｔｓ ｅ ，４ ７紫 器 （ 国 Ｗａ ｒ公 司 ）液 相色 谱 仪 工 作 站 （ 岛盛 瀚 色 美 ｔｓ ｅ ， 青
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证
066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。
苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。
GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。
GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。
国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。
本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。
一、仪器与试剂1.仪器。
高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。
2.试剂。
苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。
二、实验与方法1.色谱条件。
（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。
（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。
准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
仪器关机
测定结束后，点停止，停止泵运行。把A瓶 中的滤头取出，放入超纯水中，设定水：甲 醇=90：10的比例，点运行，启动泵运行 30分钟。30分钟后再设定100%甲醇运行 30分钟，后关闭软件，电脑。依次关闭各模 块电源。
实验步骤2
样品处理 每组派一个同学称取汽水10.00g，放入小烧 杯中，微温搅拌除去二氧化碳，加水定容至 50 mL，用水系0.22um滤膜过滤至离心管 学，从混合标准贮备液（浓度 1.0mg/mL），用移液管准确取适量（？）， 到25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此混 合标准溶液浓度为0.1mg/mL。 后用水系0.22um滤膜过滤至离心管待用。
饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠 的测定—HPLC法
1、掌握HPLC测定饮料中糖精钠、苯甲酸钠和山 梨酸钾的原理和方法。 2、了解HPLC的结构，学习HPLC的操作方法。 3、掌握HPLC的定性定量方法
糖精钠是最古老的甜味剂。糖精于1878年被美国 科学家发现，很快就被食品工业界和消费者接受。 糖精的甜度为蔗糖的300倍到500倍，它不被人体 代谢吸收，在各种食品生产过程中都很稳定 。 据国外资料记载，1977年加拿大进行的一项多代 大鼠喂养实验发现，摄入大量的糖精钠可以导致雄 性大鼠膀胱癌。因此，美国等发达国家的法律规定， 在食物中使用糖精时，必须在标签上注明“使用本 产品可能对健康有害，本产品合有可以导致实验动 物癌症的糖精”的警示。
实验步骤1
按照下列高效液相色谱参考条件和仪器操作说明开 机，设定。 检测器：紫外检测器，230nm波长， 色谱柱：C18 4.6×250mm, 5μm不锈钢柱 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02 mol/L） =5:95（先100%甲醇运行10分钟后再设定次比 例） 流速：1 mL/min 进样量：10 μL
实验步骤4
先进混和标准溶液（ 0.1mg/mL）一针分 析，记录色谱图及各峰面积保留时间。 进汽水样品溶液，根据保留时间定性，外标 峰面积法定量。以其峰面积求出样液中被测 物质的含量，供计算。
数据处理
以糖精钠为例
式中 X------试样中糖精钠含量，g/kg; A------进样体积中糖精钠的质量，mg； V2-----进样体积，mL； V1-----试样稀释液总体积，mL； m-----试样质量，g。
山梨酸（钾）能有效地抑制霉菌，酵母菌和 好氧性细菌的活性，从而达到有效地延长食 品的保存时间，并保持原有食品的风味。 由于山梨酸（钾）是一种不饱和脂肪酸（盐） 它可以被人体的代谢系统吸收而迅速分解为 二氧化碳和水，在体内无残留。
苯甲酸通常用作定香剂或防腐剂。也用作果 汁饮料的保香剂。可作为膏香用入薰香香精。 还可用于巧克力、柠檬、橘子、子浆果、坚 果、蜜饯型等食用香精中。烟用香精中亦常 用之。 《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760－ 1996）规定：碳酸饮料，最大使用量为 0.2g/kg