EXPO32中文版操作手册

EXPO32 ADC中文简易操作手册For Epics XL-MCL、Epics ALTRA目录一、 开机步骤与软件主画面说明 1二、 建立一个新的使用者 5三、 设定一个新的Protocol与新的Panel 9设定一个新的Protocol 9设定一个新的Panel 21 四、 Flow Check 与样品Data的收集26Flow Check 26 样品Data的收集28 五、 LMD(List Mode Data)分析30单一LMD Data的分析30编写打印页FlowPAGE 36建立一个可以同时分析多个LMD档案的Protocol 39批次分析44一、基本开机步骤与软件主画面说明：1.依常规模式进入Window98系统。

2.双点桌面上，即可激活机器并进入操作软件。

此时您可见到下面的画面：3.选取您自己的数据夹（若有密码，请在Password处输入），并按下Next继续。

接着您能看到下面的画面：4.此时您能在左边的窗口选取您即将使用的Protocol，然后按下Finish进入软件。

或不选取任何Protocol，直接按下Finish进入软件。

此时您即可见到软件的工作区（workspeace），如下图：工作区分成三部份：a. 工具列（EXPO32 Toolbars）:各种功能的操作工具列，包含1. 存取工具列提供开启、储存、打印及一般Windows操作系统下软件编辑功能2. 绘图工具列提供绘制分析图形（Dotplot、Histograme）及框选区域（Gating）的功能。

3. 统计设定各框选区域（Gate）的颜色、选择统计数值、及将数据输出至Winsow Excel。

4. 打印页（FlowPAGE）提供编辑打印页所需的各项功能。

5. 机器操控操控机器的各项功能，包括：流速及机器所有的设定值。

6. 批次分析提供批次分析的各项设定及操控。

7. 工作清单编写供使用者编辑工作清单的内容。

b. 档案总管（Resource Explorer）:可利用鼠标在此处做切换，让您能够看到您专属资料夹中的Worklist、Penal、Protocol、LMD Data和HST Data等档案。

另外，您也可以利用鼠标将这些档案直接选取并拖曳至软件的桌面上，以供分析及应用。

c. 工作清单编写区（Acquisition Manager）:利用工作清单工具列您可以在此处编写您即将要收集的样本内容，包括用来收集Data的Protocol、设定参数名、Data存盘的模式…..等等。

二、建立一个新的使用者在EXPO32 ADC这个软件中，您可以预先设定属与自己的档案资料夹，藉由这个资料夹的设定，计算机会自动的将您在实验中设定的资料和实验时收集的Data储存到您专属的资料夹中，以避免不同使用者之间资料存取造成的混乱。

以下步骤说明如何建立一个属于您自己的资料夹：1.依常规模式进入Window98系统。

2.双点桌面上，即可激活机器并进入操作软件。

此时您可见到下面的画面：3.点选程序管理员（admin）后，左下角的Admin按键会反黑，点选它，您能见到下面的画面：在此您可以新增一个使用者（Add user）；删除一个使用者（Delete user）；或修改已经存在的使用者（Modify user）。

4.点选Add user，您会看到下面画面：5.键入您的使用者姓名（Username），并键入您的密码（Password），您也可以选择不设定密码。

Privilege部份是用来设定当您使用这个使用者时存取的权限，建议您依照上图勾选。

6.点选Paths，您会看到下面的画面：当您建立一个新的使用者后，计算机自动帮您在软件的资料夹中（C:\EXPO_32\User）建立数个您专属的资料夹，用来存取不同类型的档案。

7.您也可以点选键，将档案储存在您另外选定的资料夹中。

例如，如果您想要把LMD档案存在D槽的Data这个资料夹中，您便可以将上列选项改为如下：如此一来，您所收集的LMD档案就会自动存在D:\DATA中了。

8.设定好后，按下OK键，您会看到一个让您确认的对会窗口按下OK，您便完成了一个新使用者的设定。

三、设定一个新的Protocol与新的Panel：设定一个新的ProtocolProtocol是EXPO32这个软件的中心骨架，一个完整的Protocol档案包含您所选取的参数种类，您想要表现的图形，和机器的所有设定值。

叫出一个Protocol后，您可以利用它来收取Data，或分析之前收下来的Data。

一般来说，设定一个新的Protocol分为四个步骤：a.选择您想要收取的参数，并利用这些参数绘制您想要表现的Flow图形（双参数图Dotplot或单参数图Histograme）（此时可以不用Run样品）。

b.实际Run样品，调整FS、SS的Volts和Gain值，让您在FS/SS Dotplot图中能看到你想要分析的细胞族群。

c.Run阴性控制组（Negative Control），调整各个萤光参数的Volts和Gain值，让阴性控制组（Negative Control）的细胞族群落在萤光图中的第一个对数方格内。

d.Run单一萤光染色的样品调整出适当的萤光补偿值。

＊以上所有的设定，都被储存在Protocol这个档案中，日后您若要进行相同的实验时，仅需把以前设定好的Protocol叫出，就可以直接收取您想要的Data。

依照上述的步骤，以双萤光染色的Surface Marker实验为例，作为说明：a. 选择您想要收取的参数，并利用这些参数绘制您想要表现的Flow图形：1.进入EXPO32的软件后，点选File/New/New Protocol（如下图），您便可以产生一个新的Protocol（此Protocol的设定值为软件的原始设定值），以此为出发点，我们将其修改为合乎您实验需求的Protocol。

2.按下机器操控工具列中的，您能开启机器设定值控制窗口（Cytometer Control）3.将Setup Mode的选项勾起。

4.按下Parameter键后，便会出现选择参数的窗口（如下图）：勾选您实验所需要的参数（如上图，我们选择了FS、SS、FL1 Log和FL2 Log 等四个参数），按下OK键，软件会问您是否要储存这个新的Protocol（如下图），输入您想要的Protocol档名后，即完成参数的选择。

此时在档案总管您的资料夹的Ptotocol选项中会出现一个新的Protocol，如下图：5.回到软件工作区，在绘图工具列中点选Color Dotplot键，您会看到下面的对话窗口：依照上图，将X轴的参数设为SS，Y轴的参数设为FS，按下OK；您便可以得到一个以SS为X轴，FS为Y轴的Dotplot。

如下图：点选绘图工具列中的多边形框选或矩形框选，在此图中画出一个区域（计算机会自动将此区域命名为A；您也可以利用鼠标点选A处，将此区域名称更改为您所希望的。

）如下图：6. 再次点选绘图工具列中的Color Dotplot键，绘制第二个Dotplot：依照上图，将X轴的参数设为FL1 Log，Y轴的参数设为Fl2 Log，Gate处选为A，按下OK；您便可以得到一个以FL1 Log为X轴，Fl2 Log为Y轴的Dotplot。

如下图：7.按下存取工具列中的储存Protoco l，将您对这个Protocol所做的修改储存起来。

b.调整FS、SS的Volts和Gain值，让您在FS/SS Dotplot图中能看到你想要分析的细胞族群：8.待机器暖机完毕后，插入标准样品（未染色的样品，或以Isotype染色的阴性样品，Negative Control）。

机器开始收集Data，并显示在您刚刚设定好的SS-FS Dotplot图上（因为您刚刚已将Setup Mode选项勾起，故现在此时机器所收集的Data并不会储存。

）9.开启机器设定值控制窗口（Cytometer Control）中的Detector选项如下图：10.调整FS和SS的Volts和Gain值，直到FS-SS Dotplot的图中能够见到您想要分析的细胞族群（此时机器仍在收集Data）。

11.调整区域A的位置，框选您有兴趣的细胞族群以血液样本为例，您可以看到如下面的图形，A框选的区域为淋巴球：12.按下存取工具列中的储存Protoco l，将您调整的FS、SS设定值储存起来。

此时即完成FS、SS的设定。

（检机器仍在收集样品）c.调整各个萤光参数的Volts和Gain值，让阴性控制组（Negative Control）的细胞族群落在第一个对数方格内：13.继续调整机器设定值控制窗口（Cytometer Control）中Detector选项内FL1、FL2的Volts和Gain值，如下图最后使FL1-FL2 Dotplot图中的细胞落在第一个对数方格内，如下图（此时机器仍在收集Data）：15.点选绘图工具列中的四方格选项，将四方格区域的横线定位在上图中细胞区域的上缘，纵线定位在细胞区域的右缘，如下图（计算机会自动将四个区域命名）：16.按下存取工具列中的储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

17.按下机器操控工具列中的放弃键，将出现下列窗口：选择重复这管（Repeat the tube），按下OK，此时机器停止Data的收集（样品架会下降）。

d. 调整光补偿（Compensation）：18.分别插入单染的样品（在本例中为FL1:FITC；FL2:PE），进行光补偿调整：以FL1单染样品调整FL2-%FL1以FL2单染样品调整FL1-%FL219-a.您可以利用机器设定值控制窗口（Cytometer Control）中的Compensation选项来调整补偿值，如下图19-b.或在机器设定值启控窗口（Cytometer Control）内勾选QuickCOMP选项此时您可以在FL1-FL2 Dotplot图的两侧看到调整萤光补偿的滚动条，如下图：直接拉动滚动条，您也可以做萤光补偿的调整。

20. Run FL1单染样品调整FL2-%FL1，如下图：No Compensation Compensation set OK20.按下存取工具列中的储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

22. Run FL2单染样品调整FL1-%FL2，如下图：No Compensation Compensation set OK20.按下存取工具列中的储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

21.按下机器操控工具列中的放弃键，选择重复这管（Repeat the tube），按下OK，此时机器停止Data的收集（样品架会下降）。

22.去除机器设定值启控窗口（Cytometer Control）中Setup Mode的勾选，并将Max. events设定为10000，如下图：23.选取File/workspace preference中的Plot Display，勾选show % in region，如下图：24.再按一次储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。