酵母RNA的提取实验报告
实验三 酵母RNA的提取及含量测定
华南师范大学实验报告学生姓名吴志军学号20082502046专业生物工程年级、班级08工程1班课程名称下游技术实验项目酵母RNA提取实验类型验证设计综合实验时间2011年10月17 日实验指导老师江学文实验评分实验三酵母RNA的提取及含量测定一、实验目的与要求1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法，3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。
一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验是最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。
向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（-C=C一C=C-），能够强烈吸收250-280nm 波长的紫外光。
核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处。
遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。
所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）。
酵母rna的提取与鉴定实验报告
4. RNA含量的测定
- 使用紫外分光光度计测定RNA在260nm处的吸光度- 根据标准曲线计算RNA浓度
- OD260值：- 标准曲线方程：- RNA浓度（μg/ml）：
- 测定结果的准确性和可靠性- 与标准RNA液的浓度对比
- 酵母粉质量：- 沸水浴时间：- 离心转速和时间：- 乙醇体积和洗涤次数：
- 提取的RNA沉淀量（通过观察或称重）- 提取过程中可能的损失和干扰因素
3. RNA的纯化
- 使用特定试剂（如异硫氰酸胍-苯酚-氯仿）进行抽提- 或根据RNA在等电点的pH环境下溶解度最小进行纯化
- 纯化试剂的种类和用量：- pH调节范围和纯化时间：
- 分析实验结果的可靠性和准确性- 讨论可能的误差来源和改进措施
7. 结论与展望
- 总结实验过程和结果，得出实验结论- 提出改进方法和未来研究方向
- 实验结论：- 改进建议：- 未来研究方向：
- 对实验结果的全面评价- 对未来研究的展望和建议
5. RNA的鉴定
- 进行磷酸的检测、核糖的显色反应以及嘌呤碱基的检测等化学反应- 观察颜色变化或生成物
- 磷酸检测结果：- 核糖显色反应结果：- 嘌呤碱基检测结果：
- 鉴定结果的准确性和可靠性- RNA组分的完整性和稳定性
6. 数据整理与分析
- 整理实验数据，计算RNA的纯度、提取率和产率等
- RNA纯度（%）：- RNA提取率（%）：- 总制品重量和产率：
rna的提取与鉴定实验报告
实验步骤
操作细节与试剂
数据记录
结果与分析
1. 实验准备
- 仪器：紫外分光光度计、离心机、水浴锅等- 试剂：酵母粉、NaCl、HCl、乙醇、氨水、RNA沉淀剂等
生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定
实验五酵母RNA的提取与鉴定一、实验目的1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、实验原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。
临用时配制。
五、实验步骤1.RNA的提取：（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。
然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。
（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。
2.鉴定：（1）取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。
（2）取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。
（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
六、实验结果加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀七、实验分析实验注意事项1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。
酵母RNA的提取
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论 • 参考文献
01 实验准备
实验材料
01
02
03
04
新鲜酵母样品
确保酵母样品新鲜且无污染， 以保证RNA提取的质量。
无菌水
用于清洗实验器具和稀释提取 液。
离心管和离心机
用于离心分离酵母细胞和上清 液。
滤纸和过滤器
用于过滤上清液和去除杂质。
价值的信息。
05 参考文献
参考文献
01
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02
[请在此处插入参考文献2]
[请在此处插入参考文献3]
03
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破碎条件优化
为了获得最佳的破碎效果，可能 需要优化破碎条件，如破碎时间 、破碎次数、破碎温度等。
沉淀与洗涤
沉淀
在破碎后的酵母细胞液中加入适量的沉淀剂，如异丙醇或乙醇，使RNA沉淀下 来。
洗涤
将沉淀物洗涤干净，去除杂质和残留的沉淀剂。洗涤过程中需注意洗涤液的更 换和洗涤次数。
RNA的提取与纯化
提取RNA
将沉淀物溶解在适量的缓冲液中，通过离心或过滤的方法将 RNA从细胞残渣中分离出来。
纯化RNA
去除提取液中的蛋白质、DNA等杂质，获得纯度较高的RNA 。纯化方法包括凝胶电泳、离心机分离、酶解等方法。
03 结果分析
RNA浓度测定
总结词：准确测量
详细描述：使用紫外分光光度计测定提取的RNA溶液的吸光度，根据标准曲线计 算RNA浓度。
实验结果可重复
通过实验操作，成功从酵母细胞中提 取出RNA，且质量较高，无明显杂质。
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取实验报告实验报告：酵母RNA的提取一、实验目的1.学习和掌握酵母RNA的提取基本原理和方法。
2.了解RNA在生物体内的生物功能及其重要性。
3.培养实验技巧和操作能力，提高实验素养。
二、实验原理RNA（核糖核酸）是生物体内的重要生物分子之一，它参与蛋白质合成、基因表达等重要生命活动。
酵母是一种常用的真核生物模型，其RNA提取方法与人体、植物等真核生物类似。
本实验采用氯仿-异戊醇法提取酵母RNA。
主要步骤包括细胞破碎、离心分离、有机溶剂抽提、乙醇沉淀等。
三、实验步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：氯仿、异戊醇、无水乙醇、DEPC水、RNA酶。
（2）器材：研钵、离心管、移液器、玻璃棒、氮气吹干器、分光光度计等。
2.酵母细胞破碎（1）在冰上用研钵将酵母细胞研磨成粉末。
（2）加入适量DEPC水，搅拌均匀。
（3）用玻璃棒将细胞碎片挑出，弃去上清液。
（4）加入适量DEPC水，搅拌均匀，重复上述步骤，直到细胞完全破碎。
3.离心分离（1）将破碎的酵母细胞溶液转移到离心管中。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
4.有机溶剂抽提（1）用移液器将上清液小心地转移到另一个离心管中。
（2）加入等体积的氯仿-异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1），用玻璃棒搅拌均匀。
（3）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
5.乙醇沉淀（1）将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
6.洗涤和干燥（1）用移液器小心地将上清液吸出，留下沉淀物。
（2）加入适量75%乙醇，用玻璃棒搅拌均匀，去除残留的乙醇和水分。
（3）在氮气吹干器下将沉淀物吹干约5分钟。
7.RNA溶解与定量（1）加入适量DEPC水，将沉淀物溶解。
（2）用分光光度计测定RNA溶液的吸光度值（A260nm），计算RNA浓度。
四、实验结果与分析表1：酵母RNA提取结果本实验通过氯仿-异戊醇法成功地提取出了高浓度的酵母RNA。
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告引言：RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内承担着转录和翻译的重要功能。
在分子生物学研究中，提取RNA是一项常见的实验操作。
本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，探究RNA的提取方法和应用。
材料与方法：1. 实验材料：酵母细胞、细胞裂解缓冲液、RNA提取试剂盒、异丙醇、氯仿、异丁醇、乙醇、载玻片、显微镜等。
2. 实验步骤：a. 酵母细胞的培养与收获：将酵母细胞培养于培养基中，通过离心将细胞收获。
b. 细胞裂解：将收获的细胞用细胞裂解缓冲液裂解，以释放RNA。
c. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行RNA提取。
d. 纯化RNA：通过异丙醇沉淀和氯仿萃取，去除DNA和蛋白质等杂质。
e. 洗涤与干燥：使用异丁醇和乙醇进行洗涤，最后将RNA干燥。
f. 检测RNA：将提取得到的RNA溶解于适当的缓冲液中，使用紫外可见光谱仪或显微镜观察RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地提取到了酵母细胞中的RNA。
在实验过程中，我们注意到以下几点：1. 细胞裂解的缓冲液选择：细胞裂解缓冲液的选择对RNA提取至关重要。
合适的缓冲液可以有效地破坏细胞膜，释放细胞内的RNA。
在本实验中，我们选择了一种经充分验证的缓冲液，以确保细胞能够完全裂解。
2. RNA提取试剂盒的使用：RNA提取试剂盒是一种常用的RNA提取方法。
它通过特定的试剂和离心步骤，将RNA从细胞裂解物中分离出来。
在本实验中，我们按照试剂盒的说明书进行操作，成功地提取到了RNA。
3. RNA的纯化：RNA的纯化是为了去除细胞裂解物中的杂质，如DNA和蛋白质。
在本实验中，我们使用了异丙醇沉淀和氯仿萃取的方法，成功地纯化了RNA。
这些方法可以有效地去除DNA和蛋白质，提高RNA的纯度。
4. RNA的检测：在实验中，我们使用紫外可见光谱仪或显微镜对提取得到的RNA进行检测。
通过观察RNA的浓度和纯度，我们可以评估提取的RNA是否适用于后续的实验操作。
实验三酵母核糖核酸(RNA)的提取
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12
2.磷酸的鉴定：取试管两只，分别标明测 定管与对照管，然后依次加入下列各试剂：
管号
RNA水解 5％H2SO4 钼酸铵试剂 液
测定管 0.2ml
不加
5滴
VC 5滴
对照管 不加
0.2ml
5滴
5滴
放置数分钟，观察两管颜色有何不同。 磷酸+钼酸铵——磷钼酸+Vc——钼蓝
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实验三 酵母菌RNA的提取、鉴定及
定量测定
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1
一、实验目的
• 掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理 与方法
• 了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
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2
二、实验原理
• （一）目前常用的RNA的制备方法 • 浓盐法：是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁
的通透性，使核酸从细胞内释放出来。成本低、适于大规模 操作。
3.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与 对照管，然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5％H2SO4 3，5-二羟甲苯
测定管 4滴
不加
6滴
对照管 不加
4滴
6滴
将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色。
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4.脱氧核糖的鉴定：取两试管分别标明测定管与 对照管，然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5％H2SO4 二苯胺
测定管 4滴
不加
6滴
对照管 不加
4滴
6滴
将两试管同时放入沸水浴内，加热10分钟后，比较两 管之颜色。
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思考题
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告。
实验目的，通过实验研究酵母RNA的提取方法，为后续的基因表达调控研究提供技术支持。
实验材料与方法：1. 实验材料，酵母细胞培养物、TRIzol试剂、异丙醇、氯仿、乙醇、DEPC水等。
2. 样品制备，取酵母培养物，离心收集酵母细胞，冰上洗涤去除培养基。
3. 细胞破碎，向酵母细胞中加入TRIzol试剂，用离心管摇匀，静置离心管5分钟。
4. RNA提取，加入氯仿，摇匀，离心分离上清液，上清液转移至新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。
5. RNA沉淀，离心沉淀RNA，弃上清液，加入乙醇洗涤RNA，再次离心沉淀RNA。
6. RNA溶解，用DEPC水溶解RNA，测定纯度和浓度。
实验结果：1. 细胞破碎，经过加入TRIzol试剂处理后，酵母细胞成功破碎，形成混浊的混合液。
2. RNA提取，通过氯仿萃取法，成功分离出上清液中的RNA，得到透明的上清液。
3. RNA沉淀，加入异丙醇后，观察到RNA在离心管底部形成白色沉淀。
4. RNA溶解，最终得到溶解度较高的RNA样品，纯度和浓度符合实验要求。
实验分析：本次实验采用的酵母RNA提取方法较为简单，通过TRIzol试剂的使用，成功实现了酵母细胞的破碎和RNA的提取。
氯仿的加入有效分离出RNA，异丙醇的沉淀步骤也取得了良好的效果。
最终得到的RNA样品纯度高，浓度适宜，可以用于后续的实验研究。
实验结论：本实验成功建立了一种适用于酵母细胞的RNA提取方法，为后续的基因表达调控研究提供了可靠的技术支持。
该方法操作简便，提取效果良好，适用于大规模样品的提取工作。
参考文献：1. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987Apr;162(1):156-9.2. Schmitt ME, Brown TA, Trumpower BL. A rapid and simple method for preparation of RNA from Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 1990 Jan25;18(10):3091-2.。
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酵母RNA的提取紫外吸收法测RNA浓度实验报告
一、实验目的
1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2、掌握紫外线（UV吸收法测定核酸浓度的原理。
3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理
核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。
对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。
研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。
本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA o RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA 酶的作用。
本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。
核酸（RNA都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
使用浓盐法提取RNA勺时候应该注意掌握温度，直接至90~100C浸提，避免在20~70C的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。
这两种方法是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的—般方法。
但是这两种方法各有利弊，如浓盐法提取的RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产。
RNA在260nm处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可以用紫外分光光度计通过比色来测定RNA t量。
由于蛋白质在280nm波长处也有光吸收，对RNA测定有一定的干扰作用，但蛋白质的最大吸收峰在280nm 处，如同时测定280nm的光吸收，通过计算可消除其对RNA M定的影响。
因此如其中含有蛋白质时必须同时测定280nm和260nm的吸光度，可通过计算测定溶液中RNA的含量。
三、实验器材
电子天平、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶、紫外分光光度计、容量瓶（100mL 、移液管（5ml）、试管和试管架、PH 1-14试纸
四、实验试剂
0.2%NaOH酸性乙醇(5mlHCI加入剂、500ml 95%乙醇)、95聽醇、无水乙醇、酵母粉、第一次实
验所提取的酵母 RNA 标准RNA 液(100ug/ml )、0.2%NaoH 溶液、蒸馏水 五、实验步骤
1、 称取4g 干酵母粉，放入200ml 锥形瓶中，加入40mI0.2%NaOH 沸水浴 30分钟，后流水冷却。
将冷却后的液体倒入离心管中，离心15分钟，4000转/min 。
留上清液，加入95%酸性乙醇溶液40ml ，边加边搅拌，再4000转/min 离心5min 。
保留沉淀，用10ml95%L 醇洗沉淀两次，每次洗后离心 3000转/min ，5分钟。
洗 完后，再用10ml 无水乙醇分别洗涤两次，每次洗后离心 5min ，3000转/min 。
最 后，收集沉淀于滤纸上，保存备用。
2、 称取 0.2460gRNA 于 100ml 烧杯中，加 2ml0.2%NaOHS 1mlH 2O 溶解，调 成糊状，加入50ml
左右水，边溶解边用0.2%NaOH^ PH 至7.0，后定容至100ml 混匀。
3、 取2ml 定容后溶液再定容至100ml ，按表1.所示分别向试管中加入定量 试剂，混匀，用紫外
分光光度计 260nm 紫外线测吸光度其并记录表格
4、 重复步骤3.
5、 再一次重复步骤3.
表1.
1
2 3 4 5
6
7平衍
平他 平他
10 15 20 25
30 x.
初\
、
徐恵曲量) 0 : 1.5 2
2.5
3
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瞞埶⑴ 10
9 8.5
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刪耐量(11)
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10 10
六、实验结果
表2.
1
2
3
4 5
6
7
怖1
怖3
260 M 彌
0 0.235
0J52
0.468 0.5E2 0.6E9
OJOB
0.698 0.T25 0.69?
根据表1.表2.绘制出标准曲线
紫外线测RNA 浓度标准曲线
260nm吸光^
♦260nrr吸光度
----- Unear(2fiOnm 服光度］
样品平均吸光度为0.707
通过标准曲线可得到稀释后样品浓度为30.739卩g/ml
所得样品RNA百分含量3 = =62.48%
七、分析与讨论
1、在使用离心机时，离心管要对称放置，而且对称的离心管重量也要相同，否则会对离心机造成毁坏。
2、提取RNA最后在用酒精洗涤沉淀时，要充分混匀，提高提取的RNA勺浓度。
3、根据理论在5-45卩g/ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到，这样所得到的标准曲线的范围变小，而且可能会有一定偏差，进而可能导致实验结果出现误差。
4、用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，具有简单、快速、灵敏度高的优
点，但是待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质时，会产生较小测定误差。
由于蛋白质在280nm波长处有光吸收，如果同时测定280nm
的光吸收，通过计算可消除蛋白质对RNA测定的影响，减少实验误差
5、我们组得到的RNA的浓度相对来说是较高的，这得益于我们操作过程的更加准确与细心，在
测定吸光度时，对没有用手碰触比色皿的光滑一面，保持实验的准确性。