血液学基础

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血细胞自动分类的普遍观点
血液分析仪分析许多异常标本,会引起散点图和直方图,全血计数的结 果的变化,
下面的一些原因妨碍了标本的血细胞计数和分类结果的准 确性:
白细胞计数的不准确 分类的不准确
血红蛋白计数的不准确
由于血小板凝块造成的血小板计数不准确
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Hematology Work Cell*
Instrument Manager*
中端产品 100-400 CBC’s/Day
CELL-DYN Ruby™
CELL-DYN® 3700SL
CELL-DYN® 3200SL CELL-DYN EasyCellTM *
低端产品 <100 CBC’s/Day
CELL-DYN® 1800
1953年发明
最初的发明用于食品和涂料工业中的颗粒计数
查阅库尔特原理
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阻抗测量
最为公用的自动血液学分析的工具 阻抗计数器有一个实时通过弱电流的小孔.当一个细胞通过小孔时,就会有 一个实时的电阻增加. 实时地确定电阻的变化
.每一个电阻变化都会被统计.在给定的液体体积内,电阻变化的数目被确定.
特定角度光散射的数量用以确定: • 0º-细胞的尺寸
• 10º-细胞的复杂性-核质比
• 90º-细胞核的分叶性-几个分叶 • 90ºD –消偏振,细胞的粒度-颗粒性
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四个角度的激光散射
Various Angles of Scattered Light 90°Scatter
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基础血液学 手工分类
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手工分类
• 什么是手工分类? -分类是一种用外周血涂片来进行的检测 • 为什么进行分类? - 确定不同类型的白细胞/红细胞形态 -确定异常细胞 - 监测疾病的情况 - 标出了全血计数的结果.
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手工复检-分类
血液涂片的评价为病人的血液学信息的评估提供了大量的 信息 在手工复检过程中,一滴血放置在载玻片上,被涂成一薄层,然 后用Wright-Giemsa染色剂染色.
载玻片被放置在显微镜上,对白细胞进行分类计数,确定红细 胞的形态数量,并进行血小板的分析.
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阻抗测量
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CELL-DYN EMERALD™
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CELL-DYN EMERALD™ 22
* In Development
三分类，已退役
实验室的需求 HEMATOLOGY LABORATORY GOALS:
仪器可靠稳定 操作容易 具有自动校准能力 较少的手工分类且不漏检 先进的光学分析技术和准确的结果 最少的试剂种类及消耗
Ret检测的性价比高
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Ruby---高精确的结果，极低的复检率！
1. 专利的全光学技术，简称为MAPSS，保证了一次通过率
最高，手工复片率最低； 针对sysmex，复片率高达30%;我 们5%
2. 三种试剂给出五分类，Sysmex 5分类9制剂以上，加网红 要11种制剂(染色试剂，费时费试剂费钱)。我们要5￥/测试。 我们做网织红细胞加一种试剂共4种试剂。 3.直接给出光学PLT结果（无需折返和试剂）。 我们对低值PLT，CV达到20%，电阻抗技术一般30%，或 更高。
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Ruby 基本性能指标
1. 检测速度：≥84个/小时；
2. 参数25项＋10个直方图+8个散射图； 3. 样本量 开放式：<150ul 封闭式：<250u
4. 四种检测模式；
• • • • CBC（计数分类模式） CBC+NOC（有核细胞模式） CBC+RRBC（难溶红细胞模式，肝病、孕妇病人多） RETIC（网织红模式）
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Ruby 工作流程
样品
150uL open mode 230uL closed mode Hgb Chamber (NOC) WBC Dilution Chamber RBC/Platelet Dilution Chamber
比色法 Hgb
Optical Flow Cell WOC, Diff, (NOC)
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白细胞三分群
CELL五分类散点图
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主流五分类检测方法
多角度激光偏振光散射检测法 （MAPSS），以雅培产品为代表
阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法 ，以Sysmex产品为代表
电阻抗和射频电导联合检测法 ，以Backman－Coulter为代表
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全血细胞计数
• 白细胞计数 – 感染, 自身免疫应答, 疾病监测 • 红细胞计数 – 健康的重要指标 • 血红蛋白, 均细胞体积, 平均血红蛋白浓度, 细胞平均血红蛋白含量 – 贫血, 红细胞异常 • 红细胞比容 – 红细胞大小 • 血小板
– 血液凝集失调
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Hydrodynamic focusing

液流聚焦技术 10,000 到 20,000 cells 单个的通过激光检测器；Sysmex是8000细 胞，所以我们样本量大更准确。 收集每个细胞4个不同角度散射光的数据 35 结果分类: 白细胞/非白细胞
Optical Flow Cell RBC-o Plt-o, Retics
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CBC＋NOC模式
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MAPSS技术和白细胞分类
1. 激光检测平台
2. 流动池，光学单元
3. 散点图获得
EXPLORE THE LIGHT BENCH
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白细胞
• 常见的白细胞 嗜中性白细胞 • 具有典型的分叶状的核 • 成熟细胞核通常有5个分 叶
• 高度游走的吞噬细胞 • 巨噬细胞以及外周组织和淋 巴组织中发现的各种类型大 型吞噬细胞的前体细胞
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单核细胞
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白细胞
•包含：T/B/NK细胞
•参与体液及细胞免疫应答

90° scatter

细胞的体积
核的分叶性
10°scatter

细胞的复杂性 细胞核与细胞质的比例

90° depolarized scatter
细胞的颗粒性 从嗜中性粒细胞中分离 嗜酸性粒细胞 嗜酸性粒细胞的颗粒会 使偏振光消偏振
1.使用高精度激光光源照射待检颗粒 2.细胞的稀释悬液通过液体动力聚焦的作用后穿过流式细 胞检测窗。液体动力聚焦是由细胞悬液注射入一个快速 流动的sheath(鞘液) 溶剂而产生的。这确保了细胞在检测 区域的中心点通过，当单个细胞经过激光光路时实现了 细胞的分离。 3. 分析软件收集多角度光的散射的数据，然后产生分类结 果。 多角度激光是由0度角辨大小、10度角辨核质比、90度角 辨细胞核分叶、90度偏振辨嗜酸颗粒（这是雅培的核心专 利）
因为血液的数量和浓度是已知的,因此血细胞的数量可以被计算出来
• 电阻强度的变化与细胞的体积尺寸是相关的
• 细胞体积的大小被确定
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阻抗测量
在正常标本的情况下,提供了准确的计数 • 白细胞,红细胞,血小板 病理学标本会影响阻抗法测量
• 巨大血小板
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血液学检验基础培训
血液的主要功能
• 将机体所需的氧，营养物质，激素，酶运输到全身各 个组织 •参与体液的调节并保持内环境的稳定 •防御或消灭入侵机体的细菌和毒素 •通过凝血作用防止血液流失
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造血作用（血细胞的形成）
成血细胞
IG`s
NRBC`s
异常/不成熟
进入血液中的正常的
MAPSS Technology
第一步: 鉴别单个核 / 分叶核细胞
90º Lobularity
第一步：用10度角和90度角区分 嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞 (分叶 核细胞)因他们不同的颗粒与分叶的特 性，从单核的细胞中得到分离. 嗜碱 性粒细胞由于在流式细胞技术使得去 颗粒性的特性而被归类于单核的细胞
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阻抗测量的缺点
重合通过
– 多个细胞同时通过检测区
– 做为一个大的细胞读取数据 非轴向通过 – 细胞以非轴向角度通过检测区 – 可能做为一个大的细胞读取数据 细胞回流 – 细胞往返流动于检测区
– 可能被多次计数
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光学测量
细胞单个分析 (指纹分析技术)
当细胞单个列队通过激光检测区时被监测和计数
• 在外周血中循环周期大概为10天
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全血计数
白细胞计数
白细胞分类
• 二分群 (淋巴细胞与非淋巴细胞) • 三分群 (淋巴细胞, 中间细胞与粒细胞) • 五分类 (淋巴细胞, 单核细胞, 嗜中性粒细胞, 嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞) 红细胞计数 • 红细胞参数 • 血红蛋白 • 红细胞比容（压积） 血小板计数
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RBC 成熟过程