jc-1线粒体膜电位染色实验原理
JC 线粒体膜电位的检测方法
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品组成：产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3规格20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 100ul 250ul 500ul10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml产品简介：线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；使用方法：悬浮细胞1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。
取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
(完整版)线粒体膜电位检测(JC-1).
线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程 - 线粒体膜电位变化检测细胞凋亡
线粒体膜电位变化检测细胞凋亡实验原理JC-1（5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光（FL-2 通道）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体(monomer)，可以产生绿色荧光（FL-1 通道）。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实验用品1.12⨯75mm 的Falcon 管和15ml 聚苯乙烯离心管2.微量加样器和加样头3.线粒体检测试剂盒（货号551302，100tests），包括JC-1和10 ⨯ Assay Buffer, 注：每个KIT 包括 4 小瓶JC-1 试剂，每小瓶试剂足够检测25 个样本4.离心机5.CO2 培养箱6.流式细胞仪样本制备图1：试剂准备和JC-1 染色步骤总揽1.在JC-1粉末中加入125ulDMSO使其充分溶解，配成JC-1 Stock Solution，需根据实验的量分装-20度保存。
2.根据样本量配制JC-1 Working Solution，每个样品500ul 1×Assay Buffer + 5ulJC-1 Stock Solution。
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式摘要：I.引言A.介绍JC1荧光探针B.阐述JC1与线粒体膜电位的关系II.JC1在细胞内的分布与线粒体膜电位A.线粒体膜电位的定义B.JC1在不同线粒体膜电位下的分布C.JC1荧光信号与线粒体膜电位的关系III.流式细胞术检测JC1荧光信号A.流式细胞术的原理B.流式细胞术在JC1检测中的应用C.流式细胞术检测JC1荧光信号的结果分析IV.JC1在生物医学研究中的应用A.JC1在细胞凋亡研究中的应用B.JC1在神经科学研究中的应用C.JC1在其他生物医学研究中的应用V.总结正文：I.引言JC1是一种荧光探针，可以用于检测线粒体膜电位。
线粒体是细胞内的能量工厂，参与细胞的生长、发育和凋亡等过程。
线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要指标。
JC1与线粒体膜电位之间存在一定的相关性。
当线粒体膜电位低于-100mV时，JC1主要分布在细胞质中，呈现绿色荧光。
当线粒体膜电位高于-100mV时，JC1开始聚集在线粒体上，呈现红色荧光。
因此，通过流式细胞术检测JC1的荧光信号，可以间接反映线粒体膜电位的变化。
II.JC1在细胞内的分布与线粒体膜电位A.线粒体膜电位的定义线粒体膜电位是指线粒体膜内外两侧存在的电位差。
线粒体膜电位在细胞的能量代谢、信号转导等方面起着重要作用。
B.JC1在不同线粒体膜电位下的分布当线粒体膜电位低于-100mV时，JC1主要分布在细胞质中，呈现绿色荧光。
当线粒体膜电位高于-100mV时，JC1开始聚集在线粒体上，呈现红色荧光。
C.JC1荧光信号与线粒体膜电位的关系JC1的荧光信号与线粒体膜电位呈负相关。
当线粒体膜电位较低时，JC1的绿色荧光信号较强；当线粒体膜电位较高时，JC1的红色荧光信号较强。
III.流式细胞术检测JC1荧光信号A.流式细胞术的原理流式细胞术是一种通过激光束对细胞进行快速、准确计数和分选的技术。
流式细胞术可以对细胞进行多参数检测，包括荧光信号检测。
jc-1共聚焦步骤
jc-1共聚焦步骤
JC-1是一种荧光染料,常用于测定细胞线粒体膜电位。
其共聚焦显微镜观测步骤如下：
1. 将待测细胞接种在共聚焦培养皿中,使其附着并生长至适当的数量。
2. 用PBS缓冲液洗涤细胞1~2次,以去除培养液和细胞碎片等。
3. 将含1µM JC-1的PBS加入共聚焦培养皿中,孵育30分钟至1小时,使JC-1染料进入细胞,并形成线粒体膜电位相关的荧光染色体。
4. 用PBS缓冲液洗涤细胞1~2次,尽可能地去除未结合的JC-1染料。
5. 将培养皿放入共聚焦显微镜中,使用荧光激发光源激发JC-1的红色和绿色荧光。
6. 通过软件调节激发波长和滤镜,使观察到的荧光信号最佳。
7. 通过共聚焦显微镜观察线粒体膜电位的变化。
通常,高线粒体膜电位的细胞会表现出更多的红色荧光,而低线粒体膜电位的细胞会表现出更多的绿色荧光。
JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响
JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响官福新;周露露;张宸豪;李妍【摘要】目的：分析碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）对人脐静脉内皮细胞ECV304线粒体的影响。
方法体外培养ECV304细胞，不同浓度CCCP处理细胞20 min 后，装载荧光探针JC-1或Rh123，流式细胞术检测JC-1单体的发射绿色荧光。
结果伴随线粒体毒性剂CCCP浓度增加，代表JC-1单体含量的绿色荧光强度增加。
结论流式细胞术检测JC-1单体的绿色荧光可反应线粒体膜电位的变化。
%Objective Analyze the influence of carbonyl cyano-to-chlorobenzene hydrazone ( CCCP ) on human um-bilical vein endothelial cells ECV-304 mitochondria .Methods ECV-304 cell was cultured in vitro and treated with different concentrations of CCCP for 20 minutes .After straining by fluorescent probes Rh 123 or JC-1 ,cells were meas-ured by flow cytometry .Results The intensity of green fluorescence emitted by JC-1 monomer increased with the in-creasing of CCCPconcentration .Conclusion The changing of cell MMP could be well detected by flow cytometry staining by new fluorescent probe JC-1 .【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P324-326)【关键词】线粒体膜电位;碳酰氰基-对-氯苯腙;流式细胞术【作者】官福新;周露露;张宸豪;李妍【作者单位】吉林医药学院药学院2012级药学本班，吉林吉林 132013;吉林医药学院药学院2010级药学本班，吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R363线粒体是细胞内能量代谢的重要细胞器，是决定生存的控制中心。
线粒体膜电位测定方法
线粒体膜电位测定方法线粒体膜电位测定方法是一种用于研究线粒体膜电位的定量方法,能够确定线粒体膜内外离子浓度的差异,进而推断线粒体代谢活动的状态。
下面将介绍线粒体膜电位测定方法的基本原理和步骤,并对其进行拓展。
一、线粒体膜电位测定的基本原理线粒体是一种细胞质颗粒,在细胞内起着至关重要的作用,它是细胞呼吸过程中的关键环节。
线粒体膜的主要功能是屏障,可以限制溶液中的离子进入线粒体内部,同时也允许离子从线粒体膜外进入。
当线粒体膜内外的离子浓度存在差异时,就会影响线粒体膜的电性质,导致线粒体膜发生电位变化。
线粒体膜电位的变化可以通过测量膜内外的电势差来实现。
具体来说,可以使用电极技术来测定线粒体膜内外的电势差。
常用的电极包括pH电极和na+-K+-ATP酶电极。
pH电极可以测量线粒体膜外的pH值,而na+-K+-ATP酶电极则可以测量线粒体膜外K+离子的浓度,从而推断线粒体膜外的离子浓度。
二、线粒体膜电位测定的步骤线粒体膜电位测定通常包括以下几个步骤:1. 准备电极材料和测量液。
通常需要使用pH电极和na+-K+-ATP酶电极,并准备相应的测量液。
其中,pH电极的pH值范围为7.4-8.4,na+-K+-ATP酶电极的na+离子浓度范围为35-65mM,测量液的pH值和na+离子浓度也需符合上述范围。
2. 将电极材料和测量液放入仪器中。
然后,将仪器连接到电脑或传感器上,并启动仪器,进行测量。
3. 记录测量结果。
根据电极的pH值和na+-K+-ATP酶电极的电动势差,可以计算出线粒体膜电位的变化值。
拓展:线粒体膜电位测定方法不仅可以用于研究线粒体膜电位的变化,还可以用于确定线粒体代谢活动的状态。
例如,当线粒体膜内外的离子浓度差异较大时,可能会导致线粒体代谢活性的变化,从而影响细胞的生长和死亡。
因此,通过线粒体膜电位测定方法可以确定线粒体膜内外离子浓度的差异,进而推断线粒体代谢活动的状态。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
仅供科研版本号：161213 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】JC-1是一种检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) 的理想荧光探针。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1丌能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，产生绿色荧光。
这样就可以通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，这种转变也可作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm。
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的装置即可。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】1、配制JC-1染色工作液：取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。
然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。
6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每0.5～1.0×106细胞需0.5ml JC-1染色工作液。
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jc-1线粒体膜电位染色实验原理
线粒体膜电位染色实验是一种测定线粒体膜电位的方法。
线粒体膜电位是指线粒体内外膜之间的电位差，是维持线粒体功能的重要参数之一。
线粒体膜电位的高低与线粒体的能量代谢、ATP合成、离子通道的开闭等过程密切相关。
因此，测定线粒体膜电位对于研究线粒体的生物学功能具有重要意义。
线粒体膜电位染色实验是利用荧光染料JC-1来测定线粒体膜电位的方法。
JC-1是一种双荧光染料，它在低电位下形成绿色荧光单体形式，而在高电位下形成红色荧光聚集体形式。
因此，在线粒体膜电位高时，JC-1会形成红色聚集体，而在线粒体膜电位低时，JC-1会形成绿色单体形式。
通过测定JC-1的荧光强度比值，可以反映线粒体膜电位的高低。
具体实验步骤如下：
1.将细胞或组织块离心，去除上清液，用PBS洗涤一遍，离心。
2.将细胞或组织块加入含有1μM的JC-1的PBS缓冲液中，室温下孵育30分钟。
3.离心洗涤一遍，去除上清液。
4.将细胞或组织块加入含有PBS缓冲液的离心管中，用流式细胞仪或荧光显微镜观察JC-1的荧光强度比值。
通过对JC-1的荧光强度比值的测定，可以反映线粒体膜电位的高低。
若JC-1的荧光强度比值越大，说明线粒体膜电位越高；若JC-1的荧光强度比值越小，说明线粒体膜电位越低。