亚低温对大鼠急性缺血脑保护作用的研究(一)

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亚低温对脑缺血大鼠VEGF表达及血管生成的影响

To obse rve the effec ts of m ild hypotherm ia on the exp ression of V EGF a nd
angiogenesis in ra ts w ith cereb ral ischem ic disea se. M e thods: 66 ra ts we re divided random ly into 3 groups inc luding sham 2 opera ted group , no r m o the rm ia group and m ild hypo the rm ia group. U sing nylon to e stab lish ce reb ra l ischem ia m ode l of rat s, and ra ts in m ild hypo the r m ia group go t the trea tm ent of hypothe r m ia (33～ 34℃) imm ediate ly a s soon a s the ve ssel w as b locked. T hen the den sity of CD 31 positive2sta in cells, the den sity o f Ki67 po sitive2sta in cells and the exp re ssion of V EGF p rotein w e re m easu red by imm unoh istochem ica l sta in ing in ea ch tim e po in t. Re su lts: T he re w a s little diffe rence in the den sity o f CD 31 po sitive2stain cells be tw een the two group s in each t i m e point. The density of Ki67 po sitive2 sta in ce lls and the exp re ssion of V EGF p ro te in in m ild hypo the rm ia group w ere lowe r than tha t in norm the rm ia group dur ing the p er iod of hypotherm ia, wh ile the difference be tw een the two group sw a s no t obviou s af te r rew arm ing. Conc lusion: M ild hypothe r m ia inhibit s the exp re ssion of V EGF , and sho rt 2te rm m ild hypo the rm ia in ea rly stage of ce rebra l ischem ia ha s no effec t on angiogenesis. It is p resum ed tha t V EGF p rom o te s angiogenesis in 24 hour s late r after ce rebra l ischem ia .

亚低温对鼠脑缺血ICAM-1表达的影响

ｅｐｒｎｏｐｅｅｉｎｆａｔｗｅｔａａｏｎｏｇｏｐＣｎｌｓｎＭｉｙｏｈｒａａｄｃｘｅｍｅｔｕｒｓｉｃｎｌｌｒｈｔｔｆｏｔｌｕｏｃｉｉｒｇｗｇｉｙｏｎｈｃｒｒｕｏｌｈｐｔｅｍｉＣｒｕｅｄｅｎ
ｏａｒｂａｉｃｅａｉｒｔｎｉｃｓｎｈｏｅｔａｃａｉｍｉｅｒｐｏｅｔｖｕｔｏ．ｔｄｆｃｌｅｅｒｌｓｈｍｉａｓａｄｄｓｕｉｇｔｅｐｔｎｉｌｅｈｎｓｓｎｕｏｒｔｃｉｅｆｎｃｉｎＭｅｈｏｓｃｎｍｔＴｈｅｉｈｄｅｃｒｂａｔｒｃｌｓｏｓｃｎｄｃｅｏｓａｌｓｎｇａｒｔｒｇｔｍｉｄｌｅｅｒｌｒｅｙｏｃｕｉｎｗａｏｕｔｄｆｒｅｔｂｉｈｉａｏｅｆｆｃｌｅｅｒｌｓｈｅｉｔａｍｄｌｏａｒｂａｃｍａｗｉｈｏｃｉｔｒａｍｂｌｓ．１ｅｒｔｒａｄｍｌｉｄｄｉｔｑａｒｕｓｅｐｒｍｅｔｏｐｗｅｅｌｉｎｉｅｂｌｎｅ；ｈｅｄｅｏｉｍ１１ａｓｗｅｅｒｎｏｙｄｖｉｅｎｏ２ｅｕｌｏｐ：ｘｅｇｉｎｕｒｄｏａｋｔｒｇａｃｃｎｏｏｐｗｅｅｌｉｎｃｎｒｌｄｓｔｏｍａｅｐｒｔｒ．ＴｈｅｐｒｔｒｆｒｔａＵｅｅｒｍａｎｄｏｔｌｇｕｒａｄｏｏｔｏｅｋｗｉｎｒｌｔｍｅａｕｅｒｒｈｅｔｍｅａｕｅｏａ．ｎＳｗｒｅｉｅ

头部亚低温对大鼠全脑缺血再灌注血脑屏障损伤的作用

脑组织含水量明显增高（尺Ｏ．０５）；与Ｒ组相比，Ｈ组脑组织含水量明显降低（Ｐ＞Ｏ．０５）。
５大鼠每克脑组织内伊文思蓝含量的测定Ｓ组脑组织内伊文思蓝含量为（３．５１±Ｏ．１７）ｕｇ／ｇ，Ｒ组为（４．１１±０．３５）ｕｇ／ｇ，Ｈ组为（３．８３±０．１５）ｕｇ／ｇ。与Ｓ
组相比，Ｒ组每克脑组织内伊文思蓝含量明显增高（Ｐ＜Ｏ．０５）；
１００％。
２．３大鼠每克脑组织内伊文思蓝含量的测定每组其余８只雄性ＳＤ大鼠于再灌注１２ｈ用１０％水合氯醛再次麻醉大鼠，经股静脉注入２％ＥＢ生理盐水溶液（４ｍｌ／ｋｇ）ｌｈ后开胸，通过左心室灌注室温生理盐水（灌注压为１１０ｍｍＨｇ），直到右心房流出的液体无色为止断头取脑。去除小脑及脑垂体留取双侧大脑组织剥离干净软脑膜、血凝块，称重，匀浆，放入其４倍体积甲酰胺的离心管中，加上橡皮塞
５０℃水浴４８ｈ，以３０００ｒ／ｍｉｎ转速离心１５ｍｉｎ，取上清液待
测。
２．４光镜观察皮质的病理学改变取右侧大脑额叶同一部位，切取３ｒａｍ×３ｍｍ的组织块，
中文摘要
冷盐水冲洗后置于４％多聚甲醛中浸泡过夜，在１０Ｘ４０倍光镜下观察皮质的病理学改变。同一位置按照“快、小、轻、
准”原则在冰盘上切取ＩｍｍＸ
薹查塑墨
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｆｏｃａｌｍｉｌｄｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａｏｎｔｈｅ
ｍｉｎ
后再开放。Ｈ组：采用３血管阻断法阻断双侧颈总动脉，基
底动脉ｉ０ｍｉｎ后开放，再灌注前即刻经股静脉输注１０℃ ３．５ｍｌ生理盐水，同时冰袋冷敷头部，用６０ｗ白炽灯距离大
鼠约３７ｃｍ高度直接照射身体，通过调节灯至身体的距离及
头部冰块的数量和面积使鼓膜温度在ｌｍｉｎ内降至３２～３４ ℃，直肠温度同时降低，２０ｍｉｎ内恢复并维持在３６．５～３７．５ ℃。低温持续时间为３ｈ，３ｈ后仍用白炽灯照射身体缓慢复温。除低温组外，其余各组于相应时间点腹腔内注射等量的室温生理盐水。脑缺血前５ｍｉｎ（Ｔ，）、脑缺血１０ｒａｉｎ（Ｒ）、再灌注后ｌＯｍｉｎ（Ｔ。）采集股动脉血监测动脉血氧分压和二

亚低温治疗对心肺复苏后大鼠脑保护作用的研究

亚低温治疗对心肺复苏后大鼠脑保护作用的研究目的研究亚低温治疗对窒息大鼠心肺复苏（CPR）后脑组织的保护作用。

方法建立心肺复苏大鼠模型，将60只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、常温组（B组）、保存性低温组（C组）、复苏性低温组（D组），除A组外，其余各组均为心肺复苏组。

心肺复苏组组内按心跳骤停的时间再分为3个亚组：4min 组、5.5min组、7min组（n=6）。

C组和D组分别在心B切开及血管穿刺操作，不进行心肺复苏，其余措施相同。

各组于相应时间点取血和脑组织标本，分别观察各组脑组织病理学改变及脑组织含水量。

结果与A组相比，B、C、D组脑组织含水量及病理学评分均有明显的增加（P＜0.05），与B组相比，C、D脑组织含水量有所下降，无显著性差异（P>0.05），病理学评分有明显的降低（P＜0.05），C组脑组织含水量及量病理学评分较D组仅有数值上的降低，并无显著差异性（P>0.05）。

结论亚低温治疗能减轻窒息大鼠心肺复苏后脑损伤，具有脑保护效应。

标签：亚低温；窒息心跳骤停；心肺复苏；脑保护心跳骤停（cardiac arrest，CA）后为全脑缺血状态，脑损伤机制复杂不仅要渡过急性期的各种并发症，还要面对未来长期病残所带来的巨大物质和经济负担，因而对脑缺血进行积极有效的脑保护和脑复苏有着非常重要的理论和实践意义。

近年脑复苏已经成为研究热点，低温是目前国内外公认的最有效的神经保护方法[1，2]，较多研究亦表明亚低温对复苏后脑组织有保护作用[3]，但其应用具体时机仍不明确。

本文采用心脏停搏加心肺复苏术来模拟心肺复苏后大鼠的脑损伤，以复苏及复苏后30min行亚低温治疗，研究其对心肺复苏后大鼠脑组织的保护作用，为其临床应用提供理论依据。

1资料与方法1.1一般资料1.1.1动物分组选用健康成年SD大鼠（第三军医大学大坪医院野战外科研究所医学实验动物中心提供，动物生产许可证号SCXK（渝）2011～0006）60只，雌雄不限，体重310g～350g。

亚低温联合乌司他丁对大鼠局灶性脑缺血保护作用的实验研究

均显著低于 IN 组 ( P 值均 < 0. 05) , IH U 组又显著低于 IN U 组和 IH 组 ( P 值均 < 0. 01) 。
组的脑组织 M DA 、 NO 含量显著升高 ( P 值均 < 0. 01) , SO D 含量显著降低 ( P < 0. 01) ; 与 IN 组比较 , IH 组和 INU 组的脑组织 M DA 、 NO 含量显著降低 ( P 值均 < 0. 05) , SO D 含量显著升高 ( P 值均 < 0. 05) ; 与 IH 组和 INU 组比较 , I HU 组的脑组织 M DA 、 N O 含量显著降低 ( P 值均 < 0. 05) , SO D 含量显著升高 ( P < 0. 05) 。 IH 组和 IN U 组的缺血侧海马凋亡细胞计数显著少于 IN 组 ( P 值均 < 0. 05) , IHU 组又显著少于 I H 组和 I NU 组( P 值均 < 0. 05) 。结论关键词脑缺血缺氧后即刻实施亚低温或腹腔注射乌司他丁均不同程度减轻大鼠脑损伤 , 两者联合应用则具有增强作用。脑缺血 ; 脑缺氧 ; 凋亡 ; 亚低温 ; 乌司他丁
Intraperitoneal
administration of ulinastatin or sub - hypother mia can both r educe HI brain damage to different ex tents, and a co mbina tion of both has even stronger protectiv e effect against brain damage. ( Shang hai M ed J, 2008, 31: 812 - 815) Key words Cerebral ano xia; Cerebral ischemia; A po pt osis; U linastatin; M o der ate hypothermia

局部亚低温对大鼠脑缺血后神经元保护的实验研究

局部亚低温对大鼠脑缺血后神经元保护的实验研究
赖建斌;曾广翘
【期刊名称】《实用医学杂志》
【年(卷),期】2006(22)15
【摘要】目的:探讨局部亚低温治疗对脑神经元的保护作用.方法:观察比较假手术组、常温缺血组、亚低温缺血组大鼠采取亚低温措施后细胞内多巴胺与ATP含量,总结亚低温治疗的作用.结果:假手术组、常温缺血组、亚低温缺血组多巴胺含量分别为(6 357±715)、(1 836±403)、(5 235±674)μg/g;ATP含量为(0.92±0.12)、(0.16±0.03)、(0.87±0.21)mmol/L,P＜0.05.结论:局部亚低温抑制脑局部缺血再灌注后神经元损害,达到脑保护效果.
【总页数】2页(P1727-1728)
【作者】赖建斌;曾广翘
【作者单位】518101,广东省深圳市宝安区人民医院神经内科;510120,广州医学院第一附属医院
【正文语种】中文
【中图分类】R74
【相关文献】
1.局部亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注后β淀粉样蛋白表达及梗死体积的影响 [J], 李宗敏;张婉婧;边虹;李艳丽;陈立君;赵瑞波
2.红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后神经元保护作用 [J], 何娅;冯建军;马琳;陈
松盛;王辉
3.局部亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后血清S100B蛋白的影响 [J], 马淑敏;薄立军;吴文浩;董振明;王娟;张析哲;孙义;周琪
4.加减地黄饮子对局灶性脑缺血大鼠神经元保护作用的实验研究 [J], 段新芬;李文英;谢宁
5.局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡相关因子的影响 [J], 张丽;苏志强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

亚低温对新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤保护机制探讨

ＡＢＴＳＲＡＣＴ：ＯｂｅｔｅＴｏｓｕｙｔｅｅｆｃｓｏｌｙｏｈｒａｏｙｏｉ—ｓｈｍｉｂａｎｄｍ— ｊｃｉｖｔｄｈｆｅｔｆｍｉｈｐｔｅｍｉｎｈｐｘｃｉｃｅａｒｉａｄ
ａ（ＢＤ）ａｃｉｉｙｏａｐｓ一ａｏｉｅｔｇａｅｔｐｔｍｕｔｍｐｅａｕｒｏｉｙｐ — ｇｅＨＩｎｄａｔｖｔｆｃｓａｅ３，ｎｄｔｎｖｓｉｔｈｅｏｉｍｅｒｔｅｆｒｍｌｈｏｄ
ＨｙｘｃｉｃｅｉａｎＤａａｅｉｔｐｏｉ —ｓｈｍａＢｒｉｍｇｎＲａｓ
ＳＵＮｅｇｓ，Ｕ。ＵｉｎＭｎ —ｉＨＮａＷＪａ
（．ｐａｔｎｆＰｅｉｔｉｓｔｅＦｉｓＡｆｆｌａｅｏｐｉａＮａｃａｇＵｎｖｒｉ１Ｄｅｒｍｅｔｄａｒｃ，ｈｒｔｏｉｉｔｄＨｓｔｌ，ｎｈｎｉｅｓｔｙ，
孙梦思，胡娜，吴俭
（．昌大学第一附属医院儿科，１南南昌３００；．州市中西医结合医院儿科，州５０３）３０６广２广１１０
摘要：目的研究亚低温对缺氧缺血性脑损伤（ｙｏｉｉｈｍｉｂａａｇ，Ｂ）鼠的保护作用，ｈｐｘａｓｅａｒｉｄｍａｅＨＩＤ大 —ｃｎ探讨亚低
ｔｒｉｒａｍｅｉｎｏｔｌｒｔ，ＭｅｈｏＥｉｈｔ７ｄｙｏｄＳｐｒｇ～ｗｌｙａｓｅｅａ — ｈｅｍａｔｅｔｎｔｎｅｎａａａｓｔｄｓｇｙ－ａ～ｌａｕｅＤａｅｒｔｗｒｒｎｄｏｍｌｉｉｄｉｔｏｓ：ｓａｐｅａｉｎｇｒｕｐ，ｏｒｏｈｅｍｉＩｙｄｖｄｅｎｏ４ｇｒｕｐｈｍｏｒｔｏｏｎｍｔｒａＨＢＤｒｐ，。ｇｏｕ３１Ｃｍｉｄｈｏｌｙｐ — ｔｒｉＩｈｅｍａＨＢＤｏｎ４。ｇｒｕｐａｄ３ＣｍｉｄｈｙｏｔｅｍｉＩｌｐｈｅｇｏｕｔＯａｓｉａｈｇｏｕＴ

亚低温联合复方丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

收稿日期:2003-11-10作者简介:孙梦思(1969-),男,医学硕士,主治医师,研究方向:新生儿疾病。

亚低温联合复方丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用孙梦思,赵玲(江西医学院第一附属医院儿科,江西南昌330006)摘要:目的研究亚低温联合复方丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(H IBD)的保护作用。

方法新生7d 的12窝SD 大鼠60只,每窝5只,按随机区组设计,随机分配到实验各组,假手术组、缺氧缺血组(HI)、复方丹参治疗组(SM B)、亚低温组、亚低温联合复方丹参组(以后简称联合组)等5个处理组,作M DA 、SOD 、NO 的测定。

结果亚低温组、复方丹参组与缺氧缺血组比较,M DA 、N O 值降低,SOD 值升高,P <0.01,联合组与亚低温组、复方丹参组相比,M DA 、NO 值降低,SOD 值增高,P <0.05。

结论亚低温、复方丹参单独使用均对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)有神经元保护作用;而两者联合应用,对于神经元的保护效果更佳。

关键词:亚低温;复方丹参;新生大鼠;缺氧缺血;脑损伤中图分类号:R-332 文献标识码:A 文章编号:1000-2294(2004)02-0026-04Neuroprotection of Hypothermia Combined with Salvia Miltiorrhiza Bunge on Brain Damage in the Immature RatSUN Meng -si,ZHAO Ling(Dep ar tment of Pediatr ics,T he First Af f iliated H osp ital,Jiangxi Medical University ,Nanchang Jiangx i 330006,China)ABSTRAC T:Objective To investigate neuroprotection of hy pothermia combined w ith salvia miltior -rhiza bunge on brain damage in the imm ature rat.Methods Six ty newborn Sprague -Daw ley rats of seven -day -old w ere random ized to 5g roups:1.Sham operation.2.hypoxic -ischemic.3.salvia miltior -rhiza bunge(SMB).4.hypothermia.5.hypotherm ia combined w ith salvia miltiorrhiza bunge (HCS).Each group contained 12rat pups.Randomly choose 2from each group for pathologic section and the rest for determining Maleic Dialdehyde(MDA),Superox ide Dismutase(SOD),nitric oxide(NO).Re -sults MDA 、NO decreased sig nificantly in the hypothermia group and SMB w hile SOD increased com -pared w ith H I,P <0.01;M DA 、NO decreased in H CS and SOD increased compared w ith hy pothermia g roup or SMB,P <0.05.Conclusion Both hypotherm ia and salvia miltiorrhiza bunge therapy have protective effect on neuron and HCS has better neuroprotection.KEY W ORDS:neonate rat;hypoxic -ischemic;brain damage;hypothermia;salvia miltiorrhiza bunge新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic en -cephalopathy,H IE)是围产期各种因素引起缺氧和缺血导致的脑部病变,足月儿多见,是导致儿童神经系统伤残的常见原因之一[1]。

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亚低温对大鼠急性缺血脑保护作用的研究(一)
【关键词】亚低温
〔关键词〕亚低温;缺血性脑血管病;脑保护
脑缺血性疾病由于高致死率，高致残率成为神经科医生研究的热点，缺血性脑卒中治疗的中心环节是如何在实现脑保护基础上恢复血流，挽救半暗带。

而亚低温对脑外伤的脑保护作用已为临床所证实并广泛应用于临床〔1-3〕，为此，我们采用亚低温方法通过改良的不开颅栓塞法来观测脑缺血不同时间段缺血局部兴奋氨基酸，脑水肿，梗死体积及其光镜下形态的变化。

结果表明亚低温具有脑保护作用。

现将研究报告介绍如下。

1 材料与方法
1.1 动物分组
90只雄性Wistar大鼠，体重250～300g，随机分成三组:①假手术组30只;②常温脑缺血组30只;③亚低温缺血组30只。

每组动物又随机分成3h、
6h、24h共3个组，每小组内动物数等分。

根据Koizumi方法制备栓线路，市售单股尼龙线（直径0.16mm）准确选取2.5cm头端涂硅胶，涂胶标准:长5mm，直径0.25～0.30mm。

将大鼠以10%水合氯醛3ml（3.6mg/kg体重）腹腔注射麻醉，颈部正中切口，分离颈内动脉颅外的唯一分支翼腭动脉，在分叉处结扎翼腭动脉。

电凝颈总动脉及颈外动脉，在颈外动脉残端插入尼龙丝，直到尼龙丝在动脉内头端距离颈总动脉分叉处长度为17～19mm，将颈外动脉结扎以固定尼龙丝。

阻断大脑中动脉的血流。

假手术组除不插入尼龙丝外，其他操作与手术组相同。

评分标准参照Longa〔5〕的5分评分法。

1.2 氨基酸浓度测定
各实验组大鼠到预定时间断头处死，迅速取缺血侧脑组织100mg，在121MB 型氨基酸分析仪上进行氨基酸定量分析，分别测量谷氨酸、甘氨酸和GABA浓度。

按Globus等提出的方法计算“兴奋性毒性指数”:（谷氨酸浓度）×（甘氨酸浓度）/（GA-BA浓度）。

1.3 大鼠脑组织含水量测定
各实验组大鼠到预定时间随机选取2只大鼠，取右脑，将脑组织在电烤箱（100℃）内放置1d，称其干重，并按公式计算脑组织含水量:脑组织含水量=｛（湿重-干重）/湿重｝×100%。

1.4 光镜组织学检查
各实验组大鼠到预定时间动物处死，取脑，石蜡切片，HE染色，光镜观察组织细胞学变化，组织损伤程度的定量。

1.5 梗死面积测定
于各时相点在清醒状态下将大鼠断头处死，将大脑标本移置于4%多聚甲醛液中固定。

经图像分析系统处理后计算梗死面积。

1.6 统计学处理
采用SPSS统计软件，全部数据以均数ˉx±s标准差表示，采用单因数方差分析。

2 结果与讨论
本实验采用改良Koizumi方法，手术后大鼠清醒，全部出现不同程度的神经功能缺失症状且TTC染色可见梗塞灶，表明其成功率达98%。

氨基酸测定:亚低温减少兴奋性氨基酸释放在低温脑保护作用中起重要作用。

本实验也证明了亚低温对脑缺血后兴奋氨基酸谷氨酸、甘氨酸的释放有明显的抑制作用，对抑制性氨基酸γ-氨基丁酸（GABA）的释放有促进作用，降低了兴奋性氨基酸毒性指数（EPl），对脑缺血有抑制性保护作用。

梗塞面积测定:MCAO成功后TTC 染色肉眼可见缺血区呈白色，脑血流正常处被染成红色。

假手术组切片呈均一对称红色，常温缺血组:3h组TTC染色呈白色区域主要位于右侧基底节区，6h 组TTC染色呈白色区域主要位于右侧基底节区及大脑背外侧面额顶部的皮层区，24h组TTC染色缺血区除了上述区域外还累及了右侧海马。

亚低温缺血组:3h组肉眼看不见白色缺血区，6h组可见右侧基底节区有小部分白色缺血区。

24h组白色缺血区主要集中在右侧基底节区及小部分大脑背外侧面额顶部的皮层区。

以上结果说明了亚低温能抑制缺血区炎症级联反应，促进闭塞血管再通，促进半暗带向正常的神经组织转化，从而缩小梗塞面积，起到了缺血脑保护作用。

光镜:本实验通过亚低温同常温缺血组脑水肿程度、缺血区坏死神经元及光镜下对缺血区神经元形态的对比也证明亚低温能保护血脑屏障和稳定血管通透性，降低脑缺血引起的颅内压增高。

〔参考文献〕
〔1〕Astrup J，Siesjo BK，Symon L.Thresholds in cerebral ischemia-the ischemic penumbra〔J〕.Stroke，1981，12（6）:723-725.
〔2〕 Hossmann KA.Viability thresholds and the penumbra of focal ischemia〔J〕.Ann Neurol，1994，36（4）:557-565.
〔3〕 Hakim AM.Ischemic penumbra:the therapeutic window 〔J〕.Neurology，1998，51（3Suppl3）:S44-S46.。