常见的通用引物序列
载体通用引物序列
5'-GGC AAC TAG AAG GCA CAG TC-3'
PCDNA3.1F
5'-CTA GAG AAC CCA CTG CTT AC-3’
PCDNA3.1R
5'-TAG AAG GCA CAG TCG AGG-3’
pCEP Frorward
5'-AGC AGA GCT CGT TTA GTG AAC CG-3'
P31430
5'-CGT TTT AAAACCTAAGAGTCAC-3'
P12584
5'-TTT TCA GTA TCT ACG AT-3’
P17110
5'-TAC CAC TAC AAT GGA TG-3’
PAS2-1F
5'-TCA TCG GAA GCG AGT AG-3'
PAS2-1R
5'-CGT TTT AAA ACC TAA GAG TCA C-3'
PQE30R
5'-GTT CTG AGG TCA TTA CTG G-3'
pTARGET-SEQ
5'-TTA CGC CAA GTT ATT TAG GTG ACA-3’
PTRC99C-F
5'-TTG CGC CGA CAT CAT AAC-3’
PTRC99C-R
5'-CTG CGT TCT GAT TTA ATC TG-3’
PEGFP-C-3’
5'-TAT GGC TGA TTA TGA TCA GT-3'
PEGFP-C-5’
5'-CAT GGT CCT GCT GGA GTT CGT G-3'
犬瘟热鉴定pcr引物标准
犬瘟热鉴定pcr引物标准一、概述犬瘟热是一种常见的犬类传染病，严重影响犬类的健康和生命。
为了更好地进行犬瘟热的诊断和治疗，我们制定了这个PCR引物标准。
本标准规定了PCR检测所需的引物，以保证犬瘟热检测的准确性和可靠性。
二、引物选择犬瘟热PCR检测需要选择合适的引物，以保证检测的准确性和特异性。
本标准引物选择的原则是：根据犬瘟热病毒的基因组序列，选择特异性高、灵敏度好的引物。
引物长度、GC含量、Tm值等参数也需要符合要求。
三、引物序列本标准引物序列如下：正向引物：5’-GCG AGT GAT CCT TTC ACG TTC-3’反向引物：5’-TGG CTT CCC TGA GAT CCG GTA-3’四、PCR反应体系本标准推荐的PCR反应体系为25μL，包括以下成分：1. 正向引物（μM）：0.52. 反向引物（μM）：0.53. dNTPs（各mol/L）：0.24. MgCl2（mmol/L）：25. PCR缓冲液（10×）：2.56. 模板DNA（ng/μL）：50-1007. 无菌水：18.75μL五、PCR反应条件本标准推荐的PCR反应条件为：95℃预变性5分钟；95℃变性30秒，60℃复性30秒，72℃延伸30秒，共进行40个循环；最后在72℃延伸5分钟。
具体条件可以根据实际情况进行调整。
六、结果判定PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。
当出现清晰的目标条带，且与预期大小一致，可判定为阳性。
若未出现目标条带，可判定为阴性。
若需进一步确认，可进行克隆和测序。
七、质量控制为了保证PCR检测的准确性和可靠性，需要进行严格的质量控制。
包括但不限于以下措施：选择合适的试剂和耗材、进行室内和室间质量评价、定期对仪器设备进行校准和检测等。
八、注意事项1. 引物浓度和退火温度需要根据具体情况进行调整，以保证最佳检测效果。
2. 样品需要经过适当的前处理，以保证最佳的PCR反应效果。
3. 避免非特异性扩增，可以通过增加退火温度、延长循环时间等方法来减少非特异性产物。
基因测序(一代测序和二代测序)-用于临床疑难病原体鉴定精选全文
（一）难鉴定细菌真菌一代测序方法
细菌核糖体基因结构特征
➢ 16S rRNA编码基因约1500 bp，包含约50个功能域。 ➢ 为细菌分类的金标准，由可变区和保守区组成。 ➢ 保守区为细菌共有，可变区有属或种特异性。
真菌核糖体基因结构特征
➢ 18S RNA基因、5.8S rDNA、28S RNA基因较保守， 不适合区分不同属种。
➢诊断不清、治疗 无效、束手无策
二代测序案例分析
➢48小时 ➢完成脑脊液标本二代测序
➢ 提示钩端螺旋体感染 ➢475条序列，占比0.016% ➢改用青霉素治疗
➢32天 ➢男孩痊愈出院
二代测序案例分析
共得到序列数 3,063,784
二代测序过程 PCR扩增选择 性，可丢失大 量病原体片段
二代测序案例分析
➢ 1个样品3000元以上。
二代测序流程
样本收集 保存转运
RNA病毒 也可建库
二代测序 百万序列
7000种病 原体分析
区分致病 菌污染菌
华大基因二代测序可检测病原体近 7000种
可检测病原种类 细菌 真菌 病毒
寄生虫 分枝杆菌（结核和非结核）
支原体/衣原体
种类数量/种 2328 199 4189 135 83 41
病毒有DNA病毒和RNA病毒之分，如怀疑流感病毒、呼吸道合 胞病毒、冠状病毒等RNA病毒，需要注意送检RNA检测流程。
迅敏康IngeniGen公司二代测序可检 测病原体14000多种
可检测病原种类 细菌 真菌 病毒
寄生虫 分枝杆菌（结核和非结核）
衣原体 支原体 立克次氏体
种类数量/种 5682 812 7098 138 94 85 96 90
➢ 间隔区ITSl、5.8S rDNA和间隔区ITS2 在不同真 菌属及种间表现出较高的差异，目前已用于真菌 分类鉴定和分子检测，以ITS2应用最广泛。
常见的通用引物序列
5’TGCTAGTTATTGCTCAGCGG3'
S.TAG
5’CGAACGCCAGCACATGGACA3’
T3
5'ATTAACCCTCACTAAAGGGA3’
M13F（47）
5'CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC3’
M13R（48)
5'AGCGGATAACAATTTCACACAGGA3'
TGC GTA CTG CGG TGA TCA AC
P3'
CTG CAA GGC GAT TAA GTT GG
DuetDOWN1
5’-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3'
PET Upstream
ATG CGT CCG GCG TAG AGG AT
DuetUP2
5'-TTGTACACGGCCGCATAATC-3’
PTRCHISAF
5’CAT GGT ATG GCT AGC ATG AC3’
PTRCHISAR
5'CAG GCT GAA AAT CTT CTC TC3'
pDC316 F
5’ —TAA CTT GTT TAT TGC AGC —3'
pDC316 A
5' -TAT GCT TAC CGT AAC TTG -3'
PEFF
5' TCA AGC CTC AGA CAG TGG TTC3’
PCEPF
5’ AGA GCT CGT TTA GTG AAC CG3’
EBVR
5’ GTG GTT TGT CCA AAC TCA TC3’
CMVF
5'CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG3'
pet28a通用引物序列
pet28a通用引物序列
Pet28a 是一种常用的原核高效表达载体，通常用于大肠杆菌中表达融合蛋白。
为了在大肠杆菌中克隆 Pet28a 载体上的特定基因，需要使用 Pet28a 的通用引物。
Pet28a 的通用引物是 T7 正向和反向引物。
T7 正向引物通常位于基因的上游区域，用于向载体的 DNA 序列中引入 T7 启动子，以便在宿主细胞中的表达。
T7 反向引物通常位于基因的下游区域，用于向 DNA 序列中引入终止子，以便在表达过程中产生合适的肽链。
Pet28a 通用引物的序列如下:
- T7 正向引物:5"-CTAAGTAACATAAGGAGAAGGAGAA-3"
- T7 反向引物:5"-CTAAGGAAAAAAGAAAAACTGA-3"
请注意，这些引物只能在特定的细菌中使用，并且应该在进行克隆之前进行优化。
通用引物的名词解释
通用引物的名词解释导语：在现代生物学研究中，通用引物是一种常用的实验方法，用于特定基因或DNA区域的扩增和分析。
本文将对通用引物进行详细的名词解释，探讨其在研究中的应用，并讨论其发展和未来的潜力。
一、引物的概念和作用引物是指在DNA复制和扩增过程中的一对短片段，通常为20-30个碱基，用于在特定DNA序列的两端进行扩增。
引物可以与目标DNA互补配对，从而引导DNA聚合酶生成新的DNA链。
在分子生物学研究中，引物是重要的试剂，其作用主要有两方面：1. 扩增特定DNA区域：引物通过与目标DNA互补配对，在聚合酶的作用下，使目标DNA区域的复制倍增。
这为后续的测序、基因突变检测、DNA指纹分析等提供了基础。
2. 分析目标DNA序列：通用引物可与多个物种中保守的DNA区域结合，从而用来鉴定、分析不同物种间的亲缘关系、分类等问题。
二、通用引物的定义通用引物是能够与多个物种中保守的基因或DNA区域结合的引物。
它们在分子生物学领域被广泛使用，以解决不同物种、不同遗传变异情况下的DNA扩增和分析难题。
通用引物一般是设计基于已知基因序列的，以确保高特异性和敏感性。
三、通用引物的设计方法通用引物的设计主要基于以下几个原则：1. 保守性：引物要选择在多个物种中高度保守的基因区域或DNA序列。
这样可以确保引物在不同物种中的特异性扩增。
2. 特异性：引物在目标DNA中的互补序列应尽可能唯一，以避免与非目标DNA区域结合。
这样可以消除杂交反应，提高扩增的特异性。
3. 长度和碱基组成：一般来说，通用引物的长度应在20-30个碱基之间，而碱基组成应平衡，避免G-C含量过高或过低。
四、通用引物的应用通用引物在科研和实验室研究中有广泛的应用，涵盖了生命科学的各个领域，如遗传学、进化生物学以及种群生态学等。
1. 物种鉴定和分类：通用引物广泛应用于物种鉴定和分类，通过特定引物扩增保守的DNA区域，可以鉴定物种间的亲缘关系和进化关系。
2. 突变检测和基因分型：通用引物在疾病和遗传变异研究中起着重要作用。
常用引物序列
常用引物序列引言引物序列是指在分子生物学实验中用来特异性引导DNA或RNA复制和扩增的短链核酸序列。
常用的引物序列在科研和实验室工作中起着重要作用。
本文将介绍几种常用引物序列及其在实验中的应用。
1. 通用引物序列通用引物序列是指适用于多种物种的引物序列。
常见的通用引物序列包括16S rRNA引物序列用于细菌和古细菌的分析，18S rRNA引物序列用于真核生物的分析，以及ITS引物序列用于真菌的分析。
这些通用引物序列具有高度保守性，可以用于不同物种的物种鉴定和进化分析。
2. 物种特异引物序列物种特异引物序列是指只在特定物种中存在的引物序列。
这些引物序列通常用于物种鉴定和种群遗传分析。
例如，人类特异引物序列可以用于人类DNA的特异扩增，从而进行人类个体的鉴定。
物种特异引物序列的选择和设计需要根据目标物种的基因组序列进行。
3. 定量引物序列定量引物序列是指用于定量PCR实验的引物序列。
这些引物序列通常与目标基因的外显子区域相结合，可以通过PCR扩增目标基因的特定片段，并通过实时荧光定量PCR技术进行定量分析。
定量引物序列的设计需要考虑引物的特异性和扩增效率，以确保准确的定量结果。
4. 荧光标记引物序列荧光标记引物序列是指在引物序列上加入荧光标记分子，用于检测和定量特定基因的表达水平。
常用的荧光标记引物序列包括荧光探针和荧光引物。
荧光标记引物序列可以通过荧光定量PCR或原位杂交等技术进行检测。
5. 反向引物序列反向引物序列是指用于反转录PCR实验的引物序列。
反转录PCR是一种将RNA转录成cDNA的技术，常用于研究基因的表达调控和mRNA的定量分析。
反向引物序列通常与反向转录酶结合，将RNA逆转录成cDNA，并通过PCR扩增特定基因的cDNA片段。
6. 基因特异引物序列基因特异引物序列是指用于特定基因扩增的引物序列。
这些引物序列通常与目标基因的外显子区域相结合，可以选择性地扩增目标基因，从而进行基因型鉴定和基因表达分析。
RT-PCR常用引物序列
RT-PCR常用引物序列RT-PCR引物序列基因来源引物序列产物大小（kb）β-actin 人有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kbβ-actin* 大鼠有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kbβ-actin 小鼠有意义链GTCGT ACCAC AGGCA TTGTG ATGG反义链GCAAT GCCTG GGTAC ATGGT GG 0.49 kbGAPDH 人有意义链 GGTGA AGGTC GGAGT CAACG反义链CAAAG TTGTC ATGGA TGHACC 0.50kbGAPDH 大鼠有意义链GATGC TGGTG CTGAG TATGR CG反义链GTGGT GCAGG ATGCA TTGCT CTGA 0.20 kbDynein 小鼠有意义链 GCGGG CGCTG GAGGA GAA反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 12.3 kbPolymerase ε人有意义链CGCCA AATTT CTCCC CTGAAA反义链CCGTA GTGCT GGGCA ATGTT C 6.8 kbPolymerase ε人有意义链 AAGGC TGGCG GATTA CTGCC反义链GATGC TGCTG GTGAT GTACT C 3.5 kbTuberous Sclerosis 人有意义链GGAGT TTATC ATCAC CGCGG AAATA CTGAG AG反义链TATTT CACTG ACAGG CAATA CCGTC CAAGG 5.3 kb18S rRNA 大豆有意义链CTTTC GATGG TAGGA TAGTG GCCT反义链CAATG ATCCT TCCGC AGGTT CACCT AC 1.5 kb*引物不会扩增假基因PCR引物序列基因来源引物序列产物大小（kb）HIV gag region 病毒 SK 38ATTAAT CACTA TCCAG TAGGA GAAATSK 39TTTGG TCCTG TCTTA TGTCC AGAAT GC 0.11kbβ-globin 人 (29923)GGTGT TCCCT TGATG TAGCA CA(34016)CCAGG ATTTT TGATG GGACA CG 4.1kbβ-globin 人 (31194)GCTGC TCTGT GCATC CGAGT GG(34016)CCAGG ATTTT TGATG GGACA CG 2.8kb序列来源：nvitrogen 公司大家用什么稀释引物?引物应该用TE稀释。
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5'TAC TAT TGC CAG CAT TGC TGC3'
M13(96)
5'CCCTCATAGTTAGCGTAACG3'
PCMVF-BD
5'TCTAAAAGCTGCGGAATTGT3'
PCMVR
5'TCCAAACTCATCAATGTATC3'
P17110
5’TACCACTACAATGGATG3’
P12584
5’TTTTCAGTATCTACGAT3’
PAS21F
5' TCATCGGAAGCGAGTAG3'
PAS21R
5' CGTTTTAAAACCTAAGAGTCAC3'
3'AD
5' AGA TGG TGC ACG ATG CAC AG3'
3'BD
5'TAA GAG TCA CTT TAA AAT TTG TAT C3'
T7TER
5'TGCTAGTTATTGCTCAGCGG3'
S.TAG
5'CGAACGCCAGCACATGGACA3'
T3
5'ATTAACCCTCACTAAAGGGA3'
M13F（47）
5'CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC3'
M13R（48）
5'AGCGGATAACAATTTCACACAGGA3'
5’TGC GTA CTG CGG TGA TCA AC3’
pMALC2XR
5’CTG CAA GGC GAT TAA GTT GG3’
pbdgal4f
5'GCCTCTAACATTGAGACAGC3'
pbdgal4r
5'AAGAGTTACTCAAGAACAAGAA3'
pbi121(35s)
5'GACGCACAATCCCACTATCC3'
奥科公司测序部通用引物合成
引物名称
引物序列
T7
TAATACGACTCACTATAGGG
SP6
5'ATTTAGGTGACACTATAG3'
M13F
5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'
M13R
5'CAGGAAACAGCTATGACC3'
T7（17BASE）
5'ACATCCACTTTGCCTTTCTC3'
AAT ACC ACT ACA ATG GAT GAT G
N-CMV-30
ATA ACC CCG CCC CGT TG
C-CMV-24
TTA GGA CAA GGC TGG TGG
pBABE_5'
ctt tat cca gcc ctc ac
pBABE_3'
accctaactgacacacattcc
P5'
5'-gTg gTA Tgg CTg ATT ATg ATC Ag-3'
GAL4BD
5'TCA TCG GAA GAG AGT AG 3'
TADH
5'GTA AAT TTC TGG CAA GGT AGA C 3'
pDsRed-n5'
GACTTTCCAAAATGTCGTAA
T7-EEV
5'AAG GCT AGA GTA CTT AAT ACG A 3'
PGEX5’
5'GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'
PGEX3’
5'CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG3'
PEGFPC5’
5'CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG3'
PEGFPC3’
5'TATGGCTGATTATGATCAGT3'
PEGFPN5’
5'TGGGAGGTCTATATAAGCAGAG3'
PTRCHISAF
5’CAT GGT ATG GCT AGC ATG AC3’
PTRCHISAR
5’CAG GCT GAA AAT CTT CTC TC3’
pDC316 F
5' -TAA CTT GTT TAT TGC AGC -3'
pDC316 A
5' -TAT GCT TAC CGT AAC TTG -3'
pSR 5' Primer
ggaagccttggcttttg
SV40 PolyA
5' TAAGATACATTGATGAGTTTGGAC 3'
pCMV5R
ATTATAgAggACACCTAgTC
pCMV5F
TTCCAAAATgTCgTAATAAC
BGH
5'TAG AAG GCA CAG TCG AGG3'
pDC316F
5' acg tgg gta taa gag gcg 3'
pDC316R
5' cga tgc tag acg atc cag 3'
pshuttle-cmv F
5'-ggT CTA TAT AAg CAg AgC Tg-3'
pshuttle-cmv R
PB42ADR
5'AAGCCGACAACCTTGATTGGAG3'
TRXF
5'CATATGAGCGATAAAATTATTCAC3'
TRXR
5'GGATCCCTTGTCATCGTCATCACCA3'
pTARGETSEQ
5’ TTA CGC CAA GTT ATT TAG GTG ACA3’
pMALC2XF
5' TGT ATC TTA TGG TAC TGT AAC TG3'
GLP2
5' CTT TAT GTT TTT GGC GTC TTC CA3'
RVP3
5' CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC3'
RVP4
5'GAC GAT AGT CAT GCC CCG CG3'
PTRC99CF
PQE30F
5' TGA GCG GAT AAC AAT TTC AC3'
PQE30R
5' GTT CTG AGG TCA TTA CTG G3'
S1
5’CAA CGT GAA AAA ATT ATT ATT CGC3’
S6
5’GTA AAT GAA TTT TCT GTA TGA GG3’
GLP1
PEFF
5' TCA AGC CTC AGA CAG TGG TTC3'
PCEPF
5' AGA GCT CGT TTA GTG AAC CG3'
EBVR
5' GTG GTT TGT CCA AAC TCA TC3'
CMVF
5'CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG3'
CMVR
5'GTTCACGGTGCCCTCC3'
TGC GTA CTG CGG TGA TCA AC
P3'
CTG CAA GGC GAT TAA GTT GG
DuetDOWN1
5'-GATTATGCGGCCGTGTห้องสมุดไป่ตู้CAA-3'
PET Upstream
ATG CGT CCG GCG TAG AGG AT
DuetUP2
5'-TTGTACACGGCCGCATAATC-3'
PEGFPN3’
5'CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG3'
PBV220F
5'AAGAAGGGCAGCATTCAAAG3'
PBV220R
5'CTG CGT TCT GAT TTA ATC TG3'
5’AOX
5'GACTGGTTCCAATTGACAAGC3'
3’AOX
5'GGCAAATGGCATTCTGACAT3'
pfastBac-5'
GTC CGA AAC CAT GTC GTA C
pfastBac-3'
CTG ATT ATG ATC CTC TAG TAC TTC
PBAD5'
TAT CGC AAC TCT CTA CTG TT
PBAD3'
5' AGC CAA GCT GGA GAC CGT TT 3'
5'AD
5’TTG CGC CGA CAT CAT AAC3’
PTRC99CR
5’CTG CGT TCT GAT TTA ATC TG3’
PIRES2EGFPF
5'GTA GGC GTG TAC GGT GGG AG3'
PIRES3EGFPR
5'AAC GCA CAC CGG CCT TAT TC3'
PCDNA3.0F2
5'CTC TGG CTA ACT AGA GAA CC3'
PCDNA3.0R2
5'GGC AAC TAG AAG GCA CAG TC3'
BAC1
5'AAC CAT CTC GCA AAT AAA TA 3'