实验室常用缓冲液 常用引物序列汇总

实验常用试剂、缓冲液的配制方法Na2HPO4，2 mM KH2PO4 1 M Tris-HCl 、11M Tris-HCl □组份浓度□配制量□配制量1L 1L （pH7.4，7.6，8.0）□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。

烧杯中。

□配置方法1. 称量121.1gTris置于1LNaCl 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

8 g 2.KCl 0.2g3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

Na2HPO4 1.42 g 浓值HCl pHKH2PO4 0.27g 7.4约70mL2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。

7.6 约60mL3. 滴加HCl将pH42mL 8.0约值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4. 将溶解定容至1L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中pH注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的值大约降低6、10 M醋酸铵0.03个单位。

□组份浓度10 M醋酸铵□配制量100mL 1.5 M Tris-HCl 2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度□配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～配制量pH8.8 （）□1L 200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。

1L1. □配置方法称取181.7gTris置于烧杯中。

2. 加入约800mL2.加去离子水将溶液定容至100mL。

的去离子水，充分搅拌溶解。

3.使用8.8pH3. 用浓盐酸调值至。

0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

1L 4. 将溶液定容至5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris- HCl平衡苯酚□溶液的注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris配置方法1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，pH值大约无需重蒸馏℃，溶液的值随温度的变化差异很大，温度每升高pH1便可用于分子生物学实验。

0.03降低个单位。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其，□TE Buffer、310×组份浓度100 mM Tris-HCl10 mM EDTA这些氧化产物可引起磷酸二酯进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，1L 配制量），，（pH 7.47.68.0 □、苯酚的质量对DNADNA的交联等。

因此，键的断裂或导致1L1. 配置方法□量取下列溶液，置于烧杯中。

RNA 和的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物8.07.6pH7.4 1 MTris-HCl Buffer（，，）100mL RNA ）20mL 学实验。

pH8.0500 mM EDTA （操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时向烧杯中加入约 2. 800mL2. 的去离子水，均匀混合。

与苯酚接触1L将溶液定至3. 后，高温高压灭菌。

所有操作均应在通风橱中进行，应戴手套及防护镜等。

4. 室温保存。

过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

分配于有机相，因4条件下醋酸钠组份浓度□醋酸钠、3 M 3 M pHDNA 3. 苯酚平衡：因为在酸性以上，苯酚）pH5.2（值达到100mL 7.8此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH □配制量～100置于称取1. □配置方法40.8gNaOAc?3H2O200mL烧杯平衡操作方法如下：℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从40mL中，加入约的去离子水搅拌溶解。

-20①液化苯酚应贮存于℃加入冰乙酸调节 2. 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68 5.2值至pH。

100mL加入去离子水将溶液定容至3. 。

水浴中使苯酚充分溶解。

％。

该化合物0.1 高温高压灭菌后，室温保存。

4. ）至终浓度加入羟基喹啉（②8-Quinolinol 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，RNA是一种还原剂、10 mM，2.7mM KCl，137 mM NaCl 组份浓度□PBS Buffer、5．同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

EDTA，50mM Glucose（质粒提取用）），使用磁力搅拌器搅□配制量1L ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。

拌15 ④重复操作步骤③。

1M Tris-HCl（pH8.0）25mL0.5 M EDTA（pH8.0⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器）20mL20％Glucose（1.11M）15搅拌分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

45mLdH2O 910mL ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的℃避光保存。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4RNase A（20mg/mL）。

15、Solution II/8、苯酚/氯仿异戊醇□配置方法□组份浓度250mM NaOH，1％（W/V）SDS（质粒提取用）□配制量500mL 异 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/ □配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。

125 1）。

氯仿可使蛋白（：24 ：）质变性并有戊醇（25：24：10而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现％SDS 50mL 助于液相与有机相的分离，的气泡。

2N NaOH 50mL2. 加灭菌水定容至异戊醇500mL，充分混匀。

Tris-HCl 2. 配置方法：将平衡苯酚与等体积的氯仿/3. 室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中：14℃保存。

（24 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

SDS W/V）10 ％（9、10W/V）SDS□组份浓度％（16、Solution III□组份浓度3M KOAc，5M CH3COOH 配制量□100mL（质粒提取用）□配制量500mL 200mLSDS1. 称量10g高纯度的置于100～烧杯中，□配置方法□配置方法1. 的去离子水，加入约80mL68℃加热溶解。

量取下列溶液置于500mL烧杯中。

7.22. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至。

KOAc147gCH3COOH 57.5mL3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。

2. 10、加入300mL去离子水后搅拌溶解。

2 N NaOH □组份浓度2N NaOH3. 加去离子水将溶液定容至100mL 500mL。

□配制量4. □高温高压灭菌后，4 ℃保存。

配置方法17、0.5M EDTA□组份浓度塑料烧杯中（～去离子水置于1.量取80mL100200mLNaOH 0.5 M EDTA(pH8.0) □配制量溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

1L□配置方法小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

称取 2. 8g NaOH 1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O，置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL。

用去离子水将溶液体积定容至NaOH3. 待完全溶解后，100mL的去离子水，充分搅拌。

）。

（约pH值值8.020g NaOH 3. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

4. 用NaOH调节8.0时，EDTA才能完全溶解。

注意：pH2.5 N HCl 组份浓度、112.5 N HCl□值至 4. 100mL 配制量□加去离子水将溶液定容至1L。

78.4mL1. 配置方法□在21.6mL的去离子水中加入的浓盐酸5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

（11.6N6. ），均匀混合。

室温保存。

室温保存。

2. 组份浓度1 M DTT □18、1 M DTT组份浓度□、125 M NaCl 5 M NaCl 配制量20mL □塑料离心管内。

称取1. 3.09g DTT 1L □配制量，加入到50mL □配置方法，溶解烧杯中，加入约置于292.2g NaCl称取1. 1L）（0.01 M 的NaOAcpH5.2800mL 2. 加20mL的□配置方法的去离子水后搅拌溶解。

后使用0.22μm滤器过滤除菌。

适量分成小份后，-20 后，适量分成小份。

1L2. 加去离子水将溶液定容至℃保存。

3.组份浓度10mM A TP 19 ℃保存。

43. 高温高压灭菌后，、10mM A TP □组份浓度□Glucose ）W/V％（）W/V％（20 Glucose 20mL □配制量20、13塑料离心50mL称取121mg Na2A TP?3H2O，加入到配置方法□1. 100mL配制量□管内。

加入约烧杯中，～100置于20g Glucose称取1. □配置方法200mL 25mM Tris-HCl的（pH8.0），搅拌溶解。

20mL 的去离子水后，搅拌溶解。

80mL 2. 加℃保存。

适量分成小份，。

100mL加去离子水将溶液定容至 2. 3. -20高温高压灭菌后， 3. ℃保存。

4 分子生物学实验常用培养基的配制方法10mM，）pH8.0（25 mM Tris-HCl 组份浓度□Solution I 、14．1、Ampicillin □组份浓度100mg/ml Ampicillin K2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

（100mg/ml）□配制量50mLTryptone 12g 5g Ampicillin置于50mL离心管中。

□配置方法1. 称量Yeast Extract 。

24g 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL Glycerol 4mL 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。

3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

℃保存。

4. 小份分装（1mL/份）后，-20 4. □组份浓度24mg/mL IPTG 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

2、IPTG5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL（24mg/mL）□配制量50mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

50mL离心管中。

置于配置方法1. 称量1.2g IPTG6. 4℃保存。

加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

2.7、TB/Apm培养基□组份浓度3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。

1.2％（W/V）Tryptone2.4℃保存。

％（W/V）Yeast Extract 份）后，4. 小份分装（1mL/-20 0.4 3、X- Gal □组份浓度20mg/mL X- Gal ％（V/V）Glycerol□配制量50mL 17mM KH2PO420mg/mL（）72mM K2HPO4 置于□配置方法1. 称取1g X-Gal50mL离心管中。