罗氏cobas h 232检测原理-Wu
荧光免疫法与免疫层析法检测血清N末端脑钠肽前体的方法学比较及偏倚评估
荧光免疫法与免疫层析法检测血清N末端脑钠肽前体的方法学比较及偏倚评估作者：王卓周言言王雅琳佟凤芝来源：《医学信息》2016年第20期摘要：目的通过mini-VIDAS荧光免疫分析仪和Roche cobas h 232心脏标志物检测仪测定N末端脑钠肽前体的方法比对，探讨两种方法检测结果的偏差是否在允许的范围内，检测结果是否具有可比性。
方法以mini-VIDAS荧光免疫分析仪作为参考仪器，Roche cobas h 232心脏标志物检测仪作为实验仪器，依据美国临床和实验室标准化协会（CLSI）EP9-A2文件的要求设计比对方案，以采集自临床患者的空腹新鲜血清标本作为待测标本，以美国临床实验室修正法规1988（CLIA，88）允许总误差的1/2作为标准，对2台仪器检测结果间偏差进行评估。
结果荧光免疫法与免疫层析法比较，r2>0.95，2台仪器的相关性好，在医学决定水平x=300，x=450，x=900时，免疫层析法的预期相对偏倚分别是29.75%，18.47%，7.18%，在x=300，两种方法存在统计学差异，偏倚不可被临床接受。
结论临床实验室内同一检测项目同时在两套系统检测时，应进行比对实验和偏倚评估，以确保检测结果具有可比性。
关键词：N末端脑钠肽前体；方法比对；偏倚评估N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）作为一种良好的心脏标志物，在心血管领域应用广泛，特别对急诊呼吸困难患者鉴别原因具有重要意义。
快速免疫分析仪在急诊检验工作中具有无法比拟的优越性，但也必须满足快速、准确、精密等要求[1]。
为确保快速分析仪的性能，医学实验室认可国家标准ISO15189要求检测系统在工作前进行分析评价，证实其能够满足预期用途[2]。
方法学不同的检测系统间在测定患者样品结果上具有可比性，在临床检验工作中是很重要的。
本实验按照临床实验室管理要求和美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP9-A2文件的要求[3]，对两台仪器检测NT-proBNP的结果进行比对分析，并判断其临床可接受性，旨在为不同检测仪检测结果的可比性提供依据。
cobas liat pcr原理
cobas liat pcr原理一、cobas liat系统简介1. cobas liat系统是罗氏诊断公司研发的一种新型核酸检测评台，旨在快速、准确地进行临床诊断。
2. 该系统采用了实时聚合酶链式反应（PCR）技术，能够对各种病原体进行检测，包括病毒、细菌和真菌等。
3. cobas liat系统的最大特点是可以在30分钟内完成一次检测，大大缩短了临床诊断的时间。
二、PCR技术原理1. PCR技术是一种能够放大DNA片段的生物技术方法，主要包括三个步骤：变性、引物结合和延伸。
2. 变性步骤：将DNA双链分解成两条单链。
3. 引物结合步骤：引物与目标DNA序列特异性结合。
4. 延伸步骤：通过DNA聚合酶酶活性，使引物延伸合成新的DNA链。
三、cobas liat系统PCR技术应用1. cobas liat系统采用实时PCR技术，可以同时进行变性、引物结合和延伸步骤，并实时监测PCR产物。
2. 采用荧光探针技术，将目标DNA序列与荧光探针结合，当PCR产物逐渐累积时，荧光信号强度也会增加。
3. cobas liat系统通过检测荧光信号强度，可以定量测定目标DNA序列的含量，从而快速准确地得出检测结果。
四、cobas liat系统的优势1. 高灵敏度：cobas liat系统可以检测非常低浓度的病原体DNA，因此对病原体的检测具有高度的灵敏度和准确性。
2. 快速性：cobas liat系统可以在30分钟内完成一次检测，大大缩短了临床诊断的时间，为临床医生提供了更快捷、更及时的诊断信息。
3. 多重检测：cobas liat系统可以同时对多种病原体进行检测，满足了临床上对同时检测多种病原体的需求。
五、结语通过以上对cobas liat系统PCR技术原理及其应用的介绍，我们可以看到，该系统在临床诊断中具有巨大的优势，为医生提供了一个快速、准确的临床诊断工具。
随着医学技术的不断进步，相信cobas liat系统在未来会有更广泛的应用，为临床医生带来更多的帮助和便利。
心梗检测仪Cobas h 232
医院的有效性
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地址：中国 北京市朝阳区东直门外大街28号港湾国际大厦1208室
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Roche的床边诊断产品
对心血管疾病早期的诊断和管理
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• 房颤病人的抗凝治疗 • 心血管疾病危险因素分层 • 监测和治疗慢性心衰 Lipids
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床边诊断致力于: 现场的心血管疾病管理 病人的医从性
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cobas h 232 心脏标志物检测仪
结果显示
不同的显示
• “0.03 – 0.1 ng/mL” 代替 “low” • “< 0.03 ng/mL”代替“negative” • ACS 重新定义基于肌钙蛋白作为重要的评判项目 • 第5代肌钙蛋白T将0.01 ng/mL作为临界值。 • 所有的测试结果均用 >/< 表示
Cardiac reader TNT阳性时会出 现红灯。而cobas h 232无红灯 显示，只是显示数值
• 注意: Cardiac reader 显示“negative” 只是说明无法检测到信号 线，并不说明AMI的诊断是阴性。– 就其本身来说，– 无论 是哪个测试平台– 并不能充分地排除ACS
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cobas h 232 心脏标志物检测仪
多界面 & PoCT1A 连接到 IT– 可连打印机
稳定的连接方法 (红外线)
罗氏心脏标志物检测仪cobas h 232使用方法
实际操作中有时候会出现2个问题 1.抽取150ul血量后拔出针头，在此过程中因为试管有负压， 针栓会回缩，血量减少，如果没有注意到就直接滴加血样的 话可能会因为血量不足而显示Aborted，不能得出结果，重 做的话就浪费试剂了。
解决方法：先固定好针栓尾部，再拔出针头，则不会回缩。 2.拔出针头时有血液滴到台面或仪器上，造成污染，原因是 试管倒转过来了。 解决方法：拔针头前把试管帽朝上。
数据传输故障的解决方法
如果仪器显示出结果，但接在基座上1分钟后刷新查不到结 果，可做以下几步看能否解决。 1.查看基座有无亮绿灯，如亮红灯，则查看电脑有无打开“罗 氏单机版即时检验系统”程序，如未打开，则双击打开、登录， 约数秒后基座会亮绿灯，如超过10秒仍未亮绿灯，则重启仪 器。如已打开，则重启仪器。 2.重启仪器后仍不能传输，也有可能是网线接触不好，拔掉 基座后面的网线，再重新插好，再试。 3.还不行，则试着重启电脑，打开该程序。 4.可能有时候网络传输故障，试了所有办法都传输不了，则 手动输入结果。
手动添加结果2
最近传输经常出问题，问了厂家，厂家也说传输容易出状况， 试过传不了就直接手动添加，因为本来就要输入病人信息， 顺手就能点击“添加结果”把结果输进去，比自动传输更方便 一点，不用等待仪器上传，不过要注意再次审核，核对结果， 保证准确输入结果。
手动添加结果3
左侧的就是一个空白的样本号，所 以的信息都要手动输入。 注意采样时间、送检时间： 自动上传结果的会自动带入当时检 测的时间，但是手动上传结果的话 新建样本号时显示的时间是新建时 的时间，不是实际采样和送检的时 间，要修改成实际时间，如果不是 很确定时间就往前推13分钟（肌钙 蛋白T、BNP）或9分钟（D-二聚 体）。
仪器的取下与装上：
N-ProBNP以及罗氏cobas h 232
三、实验室检查
血常规、尿常规、血电解质、肾功能、肝功能、 心肌标志物检查(常用心梗三项，心肌酶谱等)、心衰检查 （N-ProBNP）
心衰的定义
心力衰竭： 是一种复杂的临床综合征，是在各种致病因 素的作用下，发生心脏收缩和（或）舒张功能
障碍，从而导致组织、器官血液灌注不足，同
时伴有肺循环和（或）体循环淤血的表现。
心脏方面的疾病
心肌病 心肌炎 心包炎 成人先天性心脏病 外周血管病 肺动脉栓塞、肺动脉高压 其他
心脏疾病中的诊断方法
一、心脏影像诊断
心脏X线检查、心脏CT检查、心脏MRI检查、 心血管核医学检查、超声心动图
二、心血管常用的无创诊断
心电图、运动试验、24小时动态心电图、 24小时动态血压监测
产品知识
脑钠肽的演变
产品知识
产品知识
------N-ProBNP生理学知识
作用于参与钠调节、维持血压动态平衡的组织。 促进尿钠排泄和利尿的作用。 扩张血管
拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）。
充血性/慢性心衰患者血中NP含量增高。
N-ProBNP无生理活性
在BNP分泌时按1:1的比例同时进入血液
NT-proBNP水平与心衰的严重程度相关性
NT-proBNP的临床意义
临床应用
心衰的诊断 NT-proBNP是良好的排除试验： ---普通科室设定：判断限=125pg/ml ---急症科设定： 判断限=300pg/ml 心衰预后与监视的评估 --- NT-proBNP是短期-长期心脏病问题的强烈指标 ---住院期间NT-proBNP水平的相对变化，是判断预后的独立并最敏感的指标 急性冠状动脉综合征的危险分类 --- NT-proBNP是死亡率的最有用的预示指标，也对TIMI（心肌梗死溶栓治疗） 危险计分与ACC/AHA（美国心脏病/心脏协会）分类增加了实质性信息。 早期/轻度心脏功能不全
罗氏cobas h 232检测原理-Wu精选 课件
分离
施加电压 启动化学 发光反应
信号检测
酶联免疫荧光标记技术
梅里埃 Vidas
化学发光分析技术
双抗体夹心法
Beckman Access 2
时间分辨荧光法
AQT90 FLEX快速免疫分析仪采用时间分辨荧光法检测捕捉抗体、铕 螯合物标记的荧光示踪剂抗体及有关抗原间形成的三明治复合体
AQT90 FLEX快速免疫分析仪光电倍增管可计算铕螯合物射出的光量 子（光粒子）的数量。血液中抗原的浓度与标记示踪抗体产生的荧 光水平成正比。
NACB指南指出：样本周转时间需要快速，建议实c际ar样di本ac检TA测T时60
min，最好是30min或更少。检验人员估计时间
间
医生期待时间
6
POCT带来了哪些优点？
7
POCT的检测技术
POCT的基本原理是：把传统方法中的相关试剂浸润于试纸和各种微孔膜的吸水材料 中，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质基质上。成为各种形式的诊断试 剂条；或把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的设 备，或将上述两种整合为统一的系统。
synth. petide
质控线 膜
streptavidin
信号线
醋酸纤维膜层
双抗体夹心的抗原抗体复 合物 与信号线结合 信号线显色
没有结合的抗体 与信号线结合 信号线不显色
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
影响抗原抗体反应的因素
外部因素 •温度：18°C 至32°C室温下 •湿度：10%至85%的相对湿度 •环境：是否处于水平、无震的平面
样本类型 自动探测 操作界面
电化学发光免疫检测技术
H232_操作步骤
罗氏cobas h232操作指南IQC测试条用途：IQC测试条用于cobas h232仪器光学检测系统的核准。
摘要：IQC测试条包含两根可反复使用的控制测试条，用于确保仪器的正常工作。
IQC低值测试条用于检测范围低值的检查；IQC 高值则确保相应高值检测范围的准确。
因此，宜每日进行光学系统的核准。
Cobas h232 必须根据当地或国家相关规定使用罗氏CARDIAC IQC测试条进行核准。
测试条活性成分：金标抗-HSA抗体IQC低值：85ngIQC高值：126ng批号:每个包装的测试条均包含批特异的编码芯片。
仪器会提示用户插入芯片。
可以对仪器提示插入的编号和编码芯片上的编号进行比对，以确保编码芯片与测试条批号匹配。
如果芯片不匹配，仪器将显示错误信息。
注意事项：-供体外诊断使用-使用日常防护工具-根据当地守则合理处理废弃物-请勿触摸或擦拭测试条信号线区域-请勿加入任何样品至测试条上-注意避光，避免太阳光直射-测试完毕后立即将试纸条取出，并迅速放入IQC盒中，盖盖，避免灰尘和潮湿。
IQC操作步骤：将测试条从袋中取出至室温。
1)将IQC盒放置到室温2)开机3)取出相应的IQC试纸条，立即将除湿盖盖好4)按下QC Test键5)仪器提示插入IQC试纸条，插入IQC试纸条6)仪器提示插入IQC芯片，插入IQC芯片，选择测试水平，耐心等待结果显示（20秒）。
7)在倒计时结束时，在窗口显示结果。
结果将传入打印机（可选件）。
8)测试完毕后将试纸条取出，迅速放入IQC盒中，盖盖。
储存与稳定性：有效期内请储藏于2-30 ℃开封： 6 个月建议记录开启时间结果的显示：在反应倒计时结束时（20秒），仪器的窗口将显示Pass/ Fail。
“Pass”表明仪器光学系统工作正常。
“Fail”则说明，测量值超出可信范围。
当测量值超出可信范围时：-使用同一盒中的另一IQC测试条重复测量一次。
-如果第二根测试条测量值位于可信范围内，说明第一根测试条失效，不宜再次使用。
cobas HPV检测介绍
HPV检测的临床应用
HPV检测联合细胞学筛查（2012年ASCCP/ACS/ASCP ）
HPV & Pap*
Cobas HPV一次检测，即可 完成指南推荐的两个步骤： 高危型筛查+HPV16/18分流
Pap ≥ LSIL
HPV- & Pap间隔5年筛查
HPV- & ASCUS
间隔3年筛查
HPV+ & Pap-
/Article/xshy/hylw/388050440.html
避免假阴性
防止了低危型的交 叉反应
防止PCR反应中遗 留的扩因子可能产 生的污染
主要内容
宫颈癌简介
1
Cobas HPV实 验性能
Cobas HPV检 测的临床应用
HPV检测的临床应用
ASCUS人群管理（ 2013 ASCCP ）
意义不明的非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）的管理 重复细胞学，间隔 1年（可接受） HPV检测（首选）
cobas HPV检测介绍
费茂贵 2014-7-24 IVD Molecular Roche
主要内容
宫颈癌简介
1
Cobas HPV实 验性能
Cobas HPV检 测的临床应用
宫颈癌的临床背景
•
卵巢
宫颈癌在全球妇女的癌症死因中高居第二 位。全球每年新产生约 51万病例，死于宫 颈癌的妇女约有20万。 在中国近13万例，约占世界新发病例的 1/4、占亚洲1/2 。 在中国每年约有2—3万的妇女死于宫颈癌。
• 历时：4年，2008-2009年横断面研究（~47000人）及2009-2012年纵 观研究（~8600人） • 耗资：1亿美金 • 已发表文献：12篇
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常用的免疫胶体金检测技术
（1）免疫胶体金光镜染色法
细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以 银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的 敏感性。免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切 片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。
cobas h 232 检测原理及操作培训
上海亦扬医疗器械有限公司 罗氏血气分析仪
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Contents
1 2 2
POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
主要竞争对手及检测原理介绍
“在中心实验室以外进行的检验"
POCT 特点
中心实验室
商业实验室 检验科 监护室 手术室 急诊 时间：即时 地点：在患者床边 人物：医护人员，患者本人及家属等
COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche
This presentation is our intellectual property. Without our written consent, it shall neither be copied in any manner, nor used for manufacturing, nor communicated to third parties.
内部因素
•测试条性能：芯片、条码和保存条件 保存2-8℃/室温下1周/撕开15min
•环境：是否处于水平、无震的平面
•机内反应温度：一般37℃
•机内检测光源 •反应时间
cobas h 232检测原理
操作步骤
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Contents
1 2 2
POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
POCT的主要技术包括： •简单显色（干化学法）技术 •多层涂膜（干化学法）技术 •免疫金标记技术
•免疫荧光技术
•生物传感器技术 •生物芯片技术 •红外和远红外分光光度技术
•2 2
POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
主要竞争对手及检测原理介绍
废液池
免疫荧光法
Response 瑞普
胶体金法/双向侧流免疫法
深圳瑞莱
免疫胶体金法
免疫荧光法
美德声 德帕斯
深圳 微点
南京 普朗
广州 万孚
Thank you for your attention
Roche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031 China
信号线显色
免疫胶体金抗体 结合质控线
质控线显色
synth. petide
质控线
streptavidin
没有结合的抗体 与信号线结合
信号线不显色
信号线
膜
醋酸纤维膜层
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
影响抗原抗体反应的因素
外部因素
•温度：18° C 至32° C室温下 •湿度：10%至85%的相对湿度
转移至 电极;标 结合 记后免疫 电化学发光技术 复合物与 磁珠 游离组分 分离
施加电压 启动化学 发光反应
信号检测
酶联免疫荧光标记技术
梅里埃 Vidas
化学发光分析技术
Beckman Access 2
双抗体夹心法
时间分辨荧光法
AQT90 FLEX快速免疫分析仪采用时间分辨荧光法检测捕捉抗体、 铕螯合物标记的荧光示踪剂抗体及有关抗原间形成的三明治复合体
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
以NT-proBNP为例
反应
识别NT-proBNP的抗体
玻璃纤维膜
免疫胶体金抗体 双抗体夹心复合物
血浆
血浆
双抗体夹心复合物随 血浆过滤到下一层
玻璃纤维膜层
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
以NT-proBNP为例
检测
双抗体夹心的抗原抗体复 合物 与信号线结合
医生期待时间
6
POCT带来了哪些优点？
7
POCT的检测技术
POCT的基本原理是：把传统方法中的相关试剂浸润于试纸和各种微孔膜的吸水材 料中，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质基质上。成为各种形式的诊断 试剂条；或把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的 设备，或将上述两种整合为统一的系统。
• 即时报告
• 结果稳定具有可比性
• 成本低
• 采血量少
TAT (Turn Around Time) 的现状
危重疾病需要快速的测试结果，以便减少治疗的延误
ESC指南建议：POCT可缩短TAT，60min内中心实验室无法获 得检测结果的，建议使用POCT。
NACB指南指出：样本周转时间需要快速，建议 cardiac TAT 60 实际样本检测时 间 min，最好是30min或更少。 检验人员估计时间
检测原理
测试速度 试剂通道 定标类型 样本位 样本类型 自动探测 操作界面
电化学发光免疫检测技术
86个测试/小时 18个 二维码定标、2点定标 30个样本位（盘式系统） 75个样本位（架式系统） 血清、血浆、尿液、其他 液面、气泡、凝块 中文操作界面
架式
盘式
电化学发光检测原理
结合 Ruthenium
胶体金免疫层析法
相关概念
胶体金标记物
抗原抗体反应： 每个抗体结合特定抗原
双抗体夹心法
cobas h 232检测原理
以NT-proBNP为例
加样
全血
proBNP
含有NT-proBNP的血样
测试片
识别NT-proBNP的抗体
M7 biotin biotin
gold
M117
gold
免疫胶体金抗体
包被好抗体反应膜层
POC
医生诊所 社区诊所
家庭
医院
医生 / 社区 诊所
家庭
快速诊断
有效诊断
便捷诊断
实验医学向“两极”发展的趋势
中心实验室-高大上
• 高分析速度
• 高自动化程度
• 高智能化水平
• 高精密度分析结果
• 大型化
• 上档次
4
实验医学向“两极”发展的趋势
POCT—小快简
• 仪器小型便捷
• 非专业人员简单操作
（2）斑点免疫金渗滤法
应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体 金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。
（3）胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结 合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的 胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合 物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察或者仪器光源检测得到 显色结果，从而得到待测物的检测值。
主要竞争对手及检测原理介绍
心机标志物市场分布
自动化检测设备采用的技术
酶联免疫 荧光免疫 化学发光
电化学发光
放射免疫
1960‘S
1970~80‘S
2000‘S
免疫检测原理未变，依旧利用抗原与抗体的特异性结合；改变的只是标记物的种 类以及相应的检测方法和手段。
cobas e 411电化学发光全自动免疫分析仪
AQT90 FLEX快速免疫分析仪光电倍增管可计算铕螯合物射出的光 量子（光粒子）的数量。血液中抗原的浓度与标记示踪抗体产生的 荧光水平成正比。
雷杜 AQT90
免疫荧光法
Biosite Triage 诊断仪测试板条原理平面图
加样孔 滤膜 反应池 第二次包被 （第一次 抗原抗体包被） （荧光信号产生 ）