微生物实验室操作指导
微生物实验室操作规程【SOP】2024
正文内容：1. 培养基和试剂的制备和保存1.1 培养基的制备- 确保实验室用水质量符合要求，执行水质监测。
- 配制培养基时，按照配方的比例准确称量和混合各种成分。
- 制备后的培养基要经过高温高压灭菌处理，并记录相关信息。
1.2 试剂的准备与保存- 确保试剂的纯度和质量。
- 试剂的保存应遵循相应的储存条件，如低温、干燥、避光等。
2. 微生物实验室的清洁和消毒2.1 实验台面和设备的清洁- 实验结束后，及时清洁实验台面和设备，移除残余的微生物和污渍。
- 使用合适的清洁剂和消毒剂，遵循正确的清洁和消毒程序。
2.2 垃圾处理和废弃物管理- 将实验室生活垃圾与实验废弃物分类投放，遵循垃圾分类和废物管理的要求。
- 在实验室内配备明显的废弃物容器，并定期清理和更换。
3. 生物安全操作和防护3.1 实验室内的个人防护- 实验室工作人员应穿戴实验室指定的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩等。
- 定期检查和更换个人防护装备，确保其完好无损。
3.2 操作台上的生物安全柜使用- 使用生物安全柜操作时，按照正确的使用方法进行操作。
- 养生物安全柜使用后，要及时清洁和消毒。
4. 微生物实验的准备和操作4.1 实验准备- 在进行微生物实验前，要仔细阅读实验方案和相关文献，了解实验目的和操作步骤。
- 准备所需的培养基、试剂、设备等，并确认其完整性和有效期。
4.2 微生物实验操作- 操作前要洗手并戴好手套，保持操作台面的清洁。
- 严格按照实验方案的指导进行操作，确保实验过程的准确性和可重复性。
- 实验过程中注意观察实验样品的变化，并记录相关数据和观察结果。
5. 实验数据记录和结果分析5.1 数据记录- 在实验过程中，实验人员要及时、准确地记录实验数据和观察结果。
- 记录的数据要清晰可辨，并加以正确的标注和注释，以便后续的数据分析和结果验证。
5.2 结果分析与总结- 在实验完成后，仔细整理和分析实验数据，得出结论并进行结果的可靠性评估。
微生物实验室无菌操作技术手册
微生物实验室无菌操作技术手册1. 引言本手册旨在介绍一种常见的微生物实验室中使用的无菌操作技术，以确保实验结果的可靠性和正确性。
正确的无菌操作可以防止微生物污染，保护实验人员的安全，并促进实验的顺利进行。
2. 无菌操作基础无菌操作是指在无菌条件下进行实验操作，避免微生物的污染和传播。
下面是一些无菌操作的基本原则：- 实验器材和培养基应经过严格的消毒和灭菌处理。
- 实验操作需要在洁净的操作台上进行，操作台上的工具和材料要经过消毒处理。
- 实验人员需要穿戴合适的个人防护装备，如实验服、手套、面罩等。
3. 无菌操作步骤3.1 准备工作- 检查实验室中的消毒设备是否正常运作。
- 检查实验器材和培养基的灭菌情况。
- 穿戴个人防护装备。
3.2 操作台准备- 在操作台上放置消毒过的工具和材料。
- 操作台表面用消毒液擦拭，保持干燥。
3.3 实验器材处理- 使用灭菌钳夹取所需的实验器材，在火焰中烧毁细菌和病毒。
- 使用经过灭菌处理的培养基。
3.4 实验操作- 取出所需的实验器材，避免直接接触无菌物品的非无菌表面。
- 操作时尽量避免产生细菌和病毒的飞溅和浮尘。
- 操作完成后，将实验器材进行消毒处理。
4. 操作注意事项- 所有实验操作都需在无菌条件下进行，尽量避免外界微生物的污染。
- 实验人员要对无菌操作的原则和步骤有清楚的了解，并遵循相应的规定和程序。
- 实验室要定期进行环境监测，确保无菌操作条件的可靠性。
5. 总结无菌操作技术是微生物实验室中非常重要的技术之一。
通过正确的无菌操作，可以保证实验结果的准确性和可重复性，并提高实验的成功率。
实验人员需要掌握无菌操作的基本原则和步骤，并严格遵守相关的操作规范和要求。
微生物学实验室中的无菌技术操作指南
微生物学实验室中的无菌技术操作指南无菌技术是微生物学实验室中必不可少的操作技术，能够有效地杜绝外源性微生物的污染，确保实验结果的可靠性和准确性。
本文将介绍微生物学实验室中常用的无菌技术操作指南，包括实验室环境的无菌处理、实验器材的无菌处理和施行操作的无菌技巧。
实验室环境的无菌处理非常重要，它涉及到实验室区域的清洁和消毒。
首先，实验室应保持干净整洁，减少灰尘和杂物的积累。
定期进行彻底的清洁工作，包括桌面、操作台面、柜子里的放置区域等。
其次，实验室应使用有效的消毒剂对实验台面、地板、洗手间和耗材储存区进行消毒处理。
消毒剂的选择应根据实验室需要，例如0.1%次氯酸钠溶液、70%乙醇等。
最后，实验室员工应定期进行个人卫生和手部消毒，并佩戴洁净的实验室衣物和手套。
在实验室中，实验器材的无菌处理至关重要。
首先，所有的器材和耗材应进行必要的消毒。
这包括玻璃制品、培养皿、试管、移液器等。
如需高温消毒，可以将器材置于121℃的高压蒸气灭菌器中，保持20-30分钟。
其次，在进行实验前，应将所需的器材和耗材准备齐全，并妥善保存。
保持器材和耗材在实验操作过程中的洁净。
最后，使用无菌技术进行操作时，应注意消毒操作的严密性，避免菌的重新污染。
使用无菌条或化学指示剂，检测器材和器皿的无菌状况，并遵守实验室的消毒规程。
在实验操作过程中，无菌操作技巧的掌握至关重要。
首先，实施手部无菌操作。
在开始操作前，用洁净的水和肥皂彻底洗手，然后使用无菌擦洗剂彻底清洗手部，再用酒精或其他消毒剂消毒手部。
戴上无菌手套，保证手部无菌状态。
其次，实施操作台面的无菌操作。
在操作前，用消毒剂擦拭台面，然后放置洁净的无菌垫纸或消毒纸。
在进行技术操作时，尽量避免手部直接接触器皿或介质，可使用移液器、酒精灯等工具进行操作。
最后，保持操作过程的环境干净整洁，减少气溶胶的产生，避免筛选鉴定菌株时的污染。
除了上述的无菌技巧之外，实验室还需要制定相关标准操作规程，并培训实验人员，使其严格遵守无菌操作的要求。
微生物SOP
引言概述：微生物实验室操作规范（StandardOperatingProcedures,SOP）是确保实验室工作的安全性、准确性和一致性的关键文件。
本文将针对微生物实验室操作规范（二）进行详细阐述，着重介绍实验室内如何进行微生物实验的准备、操作、结果分析等各个环节，以确保实验室工作的质量和可靠性。
正文内容：一、实验室准备1.质控标准品准备a.选择适当的微生物株b.确保菌种的存储和传递方式c.推荐适当的质控标准品2.实验室设备准备a.准备所需培养基和试剂b.清洁和消毒设备c.校准仪器和设备3.实验室操作环境准备a.调节实验室温度和湿度b.维护实验室通风和清洁c.确保实验室的安全措施二、实验操作1.培养基的制备与贮存a.培养基配制的准确性和灭菌的必要性b.合理选择培养基的pH值和营养成分c.培养基的贮存条件和传递方式2.微生物实验的操作技巧a.无菌操作的重要性和步骤b.培养基接种方法和数量控制c.使用微生物培养箱的技巧与注意事项3.实验室安全与废物处理a.实验室内的安全措施和操作规范b.废物的分类和处理方法c.紧急情况下的应急措施4.实验室记录与数据管理a.实验操作日志的记录要求b.实验结果和数据的保存和整理c.实验数据的分析和报告撰写5.实验结果分析与质量控制a.实验结果的分析和比对b.偏差和异常结果的处理c.质量控制的监督和调整结论：本文详细阐述了微生物实验室操作规范（二）的各个环节，包括实验室准备、实验操作、实验室安全与废物处理、实验记录与数据管理、实验结果分析与质量控制等。
通过按照这些规范进行实验，可以确保实验室工作的质量和可靠性，提高微生物实验的准确性和重复性。
在实验室操作规范的指导下，微生物实验室能够更好地开展工作，为科学研究和生物医药领域的发展做出更大的贡献。
微生物技术操作规范
微生物技术操作规范1. 引言微生物技术是一种应用微生物进行实验以及工业生产的技术。
为了确保操作的准确性和安全性，制定和遵守操作规范非常重要。
本文档旨在提供微生物技术操作规范的指导，以确保操作的顺利进行。
2. 实验室环境要求在进行微生物技术操作前，确保实验室环境符合以下要求：- 实验室应具备良好的通风条件，保持适宜的温度和湿度。
- 实验室应保持整洁和清洁，定期清理工作台、设备和实验器材。
- 实验室应配备必要的安全设备，如消防器材、洗眼器、紧急照明等。
3. 个人防护措施在进行微生物技术操作时，必须采取个人防护措施以确保操作者的安全：- 操作者应佩戴实验室指定的个人防护用品，如实验服、手套、护目镜等。
- 操作者应洗手并戴上手套，避免直接接触微生物菌液。
- 当操作涉及到有毒或有害物质时，操作者应佩戴口罩或呼吸防护设备。
4. 操作流程微生物技术操作应按照以下流程进行：1. 准备工作：检查实验器材的完整性和清洁度，并准备所需的培养基和试剂。
2. 操作操作：根据实验要求进行微生物培养、转移、接种等操作。
3. 监控：定期观察培养物的生长情况，并记录相关观察数据。
4. 环境清理：操作完成后，及时清理工作台、设备和实验器材，妥善处理实验产生的废弃物。
5. 废物处理微生物技术操作产生的废弃物应按照以下要求进行处理：- 固体废弃物应正确分类，使用封闭进行收集，并交由专业机构进行处理。
- 液体废弃物应经过消毒处理后，在指定的污水排放口排放。
6. 安全意识教育为了提高操作者的安全意识和操作技能，应进行定期的安全意识培训和技术培训。
培训内容包括但不限于：- 微生物的基本知识和安全操作要求。
- 个人防护措施和实验室安全设备的正确使用方法。
- 废物处理和环境清理的规范要求。
7. 紧急情况处理在发生紧急情况时，操作者应立即采取适当的措施：- 火灾：立即使用消防器材扑灭火源，并按照应急预案进行疏散。
- 溢漏事故：快速将溢漏物清理，并采取适当防护措施，防止进一步扩散和伤害。
微生物实验室安全操作指导书
5.1.6 应以移液器吸取液体，禁止口吸。
5.1.7 尽量避免使用尖锐器具，如需使用时，应在有充分防护措施下进行。
5.1.8 按照实验室安全规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。
5.1.9 每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒。
5.2.4 将本规定向所有本室工作人员提供，告知工作人员实验室的特殊危险，工作人员要阅读并按照规定的要求操作。
5.2.5 实验室及其辅助工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。
5.2.6 在进入实验室之前，实验室负责人有责任向所有工作人员提供标准微生物学操作规范和技术，仪器操作规范。并不定期组织培训，以接受最新生物安全知识。
5.1.10所有培养物、废弃物在运出实验室之前必须进行灭活，如高压灭活（121℃，30min）。需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。
5.1.11 制定有效的防鼠防虫措施。
5.1.12 实验室入口处须贴上生物危险标志,内部显著位置须贴上有关的生物危险信息,包括使用传染性材料的名称,负责人姓名和电话号码。
3.2微生物检测人员负责执行本规定，并积极学习和提高生物安全知识。
4概念
气溶胶：悬浮于气体介质中粒径一般为0.001μm-1000μm的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态分散体系。
5内容
5.1微生物实验室应合理设置清洁区、半污染区和污染区；
b）非实验有关人员和物品不得进入实验室；
5.2.10 培养基、组织、体液及其他废弃物必须放在防漏的容器中储存及运输。
5.2.11 感染性实验结束后，尤其在感染性物质溢出和溅出后，应由专业人员或经过正规培训的人员进行如下消毒和清理。
病原微生物实验室操作规程
病原微生物实验室操作规程一、实验室准入制度病原微生物实验室是进行病原微生物研究和检测的重要场所，为了确保实验室的安全和实验结果的准确性，必须建立严格的准入制度。
1、实验室人员：只有经过专业培训、具备相关知识和技能，并通过考核的人员才能进入实验室工作。
2、培训内容：包括实验室安全知识、微生物操作技术、个人防护措施等。
3、健康状况：进入实验室前，人员需进行健康检查，确保身体状况良好，无感染性疾病。
4、登记制度：进入实验室的人员需进行详细登记，包括姓名、进入时间、工作内容等。
二、实验室布局与设施1、合理分区：实验室应分为清洁区、缓冲区和污染区，各区之间应有明显的分隔和标识，以防止交叉污染。
2、通风系统：具备良好的通风设备，保证空气流通，排出可能存在的有害气体和微生物。
3、消毒设施：配备齐全的消毒设备，如高压灭菌器、紫外线灯等，用于实验器具和环境的消毒。
4、储存设施：有专门的储存空间，用于存放病原微生物样本、试剂和药品，且应符合相应的温度、湿度等条件要求。
三、个人防护装备1、工作服：进入实验室必须穿着专用工作服，离开实验室时应脱下并妥善存放。
2、手套：根据实验操作的需要，选择合适材质和规格的手套，如乳胶手套、丁腈手套等。
3、口罩：佩戴能有效过滤微生物的口罩，如 N95 口罩。
4、护目镜：进行可能产生飞沫或溅出物的操作时，佩戴护目镜保护眼睛。
5、防护鞋：防止污染物接触脚部。
四、样本采集与运输1、采集规范：严格按照相关标准和操作规程采集样本，确保样本的质量和代表性。
2、采集器具：使用无菌、无热原的采集器具，并在使用前进行严格的消毒处理。
3、样本标识：清晰准确地标识样本的来源、种类、采集时间等信息。
4、运输条件：根据样本的特性，选择合适的运输容器和温度条件，保证样本在运输过程中的稳定性和安全性。
5、运输记录：详细记录样本的运输过程，包括运输人员、运输时间、运输路线等。
五、实验操作规范1、无菌操作：在进行微生物培养、分离等操作时，严格遵守无菌操作原则，防止外界微生物的污染。
微生物操作规程
微生物操作规程
《微生物操作规程》
微生物操作是实验室中常见的操作，但由于微生物具有一定的危害性，因此对微生物操作有严格的规程。
以下是对微生物操作规程的一些要点：
1. 穿着适当的防护装备：在进行微生物操作时，实验人员应该穿着适当的防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜等。
这可以有效预防微生物和其代谢产物对皮肤和呼吸系统造成危害。
2. 操作实验室的卫生消毒：在进行微生物操作前，需要对实验室进行必要的卫生消毒，确保操作环境的清洁与无菌环境。
3. 严格的操作流程：在进行微生物操作时，需要严格按照规程进行操作，避免出现操作失误导致微生物泄漏或污染的情况发生。
4. 正确处理微生物废弃物：在微生物操作结束后，实验人员需要将微生物废弃物进行正确处理，避免对环境和人体造成危害。
5. 定期进行培训和检查：对从事微生物操作的实验人员需要进行定期的培训和检查，以提高其微生物操作的安全性和准确性。
总之，微生物操作规程是保证微生物操作安全的基础，严格遵
守微生物操作规程可以有效预防微生物的危害，并保障实验人员和环境的安全。
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微生物实验室操作指导微生物实验室操作指导书目录（一）安全守则（二）检验总则（三）基本技术要求（四）食品平板菌落计数（五）食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法（六）沙门氏菌检验（七）金黄色葡萄球菌检验（八）霉菌计数（九）革兰氏染色（十）空气中微生物的检验（十一）水中微生物的检验（十二）食品接触面的微生物检验（十三）蔬菜农残的快速检测1微生物实验室操作指导书（受控）审核：编制：（一）安全守则1进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。
2在进行高压、干燥、消毒等工作时，工作人员不得擅自离开现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。
3严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方能离开现场。
4工作完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用（杀菌剂）新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。
5实验完毕，及时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理，并填写日常工作记录。
6每日下班，认真检查水、相关电源是否关闭和正在使用的设备运转是否正常，并认真记录。
下班前关好门窗，方可离去。
01－09－ 2006 1 修订．2微生物实验室操作指导书（受控）（二）检验总则1主题内容与适用范围本文规定了微生物检验一般规则。
本文适用于食品中微生物学检验的采样、检验及结果报告。
2样品的采集2.1采样目的确保采集的样品能代表全部被检验的物质，使检验分析更具代表性。
2.2采样原则2.2.1采集的样品要有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在，同时能反映全部被检食品的组成、质量和卫生状况。
2.2.2应设法保持样品原有微生物状况，在进行检验前不得污染，不发生变化。
2.2.3采样必须遵循无菌操作程，容器必须灭菌，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新洁尔灭、酒精等消毒物灭菌，更不能含有此类消毒药物，以避免杀掉样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可使用。
2.3采样数量取样数量的确定，应考虑分析项目的要求、分析方法的要求及被检物的均匀程度三个因素。
样品应一式三份，分别供检验、复检及备查使用，每份样品数量一般不少于200g。
根据不同种类采样数量略有不同，实验室检验样品一般为25克。
2.4采样方法01－09－ 2006 1 修订．3微生物实验室操作指导书（受控）2.4.1采取随机抽样的方式。
2.4.2直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。
2.4.3如为非冷藏易腐食品，应迅速将所采样品冷却至0－4℃。
2.4.4不要使样品过度潮湿，以防食品中固有的细菌增殖。
2.4.5在将冷冻食品送到实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态。
样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。
2.5样品的保存和运送2.5.1样品采集完后，应迅速送往实验室检验，送检过程中一般不超过3h，如路程较远，可保存在1－5℃环境中，如需冷冻者，则在冷冻状态下送检。
2.5.2冷冻样品应存放在－15℃以下冰箱内；冷却和易腐食品应存放在0－5℃冰箱或冷却库内；其它食品可放在常温冷暗处。
2.5.3运送冷冻和易腐食品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂。
保证途中样品不升温或不融化。
2.5.4待检样品存放时间一般不应超过36小时。
3检验样品的制备3.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
3.2检验冷冻样品前应先使其融化。
可在0－4℃融化，时间不超过18小时，也可在温度不超过45℃的环境中融化，时间不超过15分钟。
3.3检验液体或半固体样品前应先将其充分摇匀。
如容器已装满，可迅速翻转25次；如未装满，可于7s内以30cm的幅度摇动25次。
从混样到检验间隔时间不应超过3分钟。
3.4开启样品包装前，先将表面擦干净，然后用75％乙醇消毒开启部位及其周围。
3.5非粘性液体样品可用吸管吸取一定量，然后加入适量的稀释液或培养基内，吸管插入样品内的深度不应超过2.5cm,也不得将吸有样品的吸管浸入稀释液或培养基内。
3.6粘性液体样品可用灭菌容器称取一定量，然后加入适量的稀释液或培养基。
01－09－ 2006 1 修订．4微生物实验室操作指导书（受控）3.7固体或半固体样品可用灭菌的均质杯称取一定量，再加适量的稀释液或培养基进行均质，从样品的均质到稀释和接种，相隔时间不应超过15分钟。
4检验4.1实验室收到样品后，首先进行外观检验，及时按照国家标准检验方法进行检验，检验过程中要认真、负责，严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。
4.2检验所使用的稀释液、试剂、培养基接触的一切器皿必须经过有效的灭菌。
4.3实验室所用仪器、设备的性能应定期检查和校正。
4.4制备试剂和培养基所用的水，应为无离子水或用玻璃器皿蒸馏的蒸馏水。
4.5检验结束后，所有带菌的培养基、试剂、稀释液和器皿必须尽快灭菌和洗刷。
清洗过的器皿不应残留洗涤剂的痕迹。
5检验记录和结果的报告5.1经检验的每份样品都应有完整的检验记录。
样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验记录，以作为对结果分析、判定的依据，记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。
5.2检验结束后，根据检验结果，及时填写检验报告书，签字并经负责人审核签字后发出。
01－09－ 2006 1 修订．5微生物实验室操作指导书（受控）（三）基本技术要求1无菌操作要求微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多实验要求在无菌的条件下进行，主要原因，一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。
要求如下：1.1接种细菌时必须穿工作服、带工作帽；1.2进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用；1.3接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球将手擦干净；1.4进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用酒精点燃烧灼三次后使用；1.5从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及试管或平皿边；1.6接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌活样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；1.7接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到针和环与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼；1.8吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
2无菌间使用要求2.1无菌间应密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及门，另尽量设有的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
01－09－ 2006 1 修订．6微生物实验室操作指导书（受控）2.2无菌间应保持清洁，工作后用煤酚皂液溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与试验无关的物品。
2.3无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬掉紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离工作台1m处，照射时间不少于30分钟，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精球轻轻擦拭，除去上面的灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
2.4处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
2.5在无菌间需用安装空调时，则应有过滤装置。
3消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
3.1灭菌前准备3.1.1所有需经灭菌的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面气孔打开。
3.1.2装培养基的三角瓶塞好棉塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
3.2装放3.2.1大型高压蒸气锅：放置灭菌物品不应超过锅内容积的80%，物品应放置锅内搁架上或铁丝筐中。
3.2.2手提式高压锅：将物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。
3.3设备检查3.3.1检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。
3.3.2压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，01－09－ 2006 1 修订．7微生物实验室操作指导书（受控）压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。
3.3.3对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。
3.4灭菌处理手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：3.4.1手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需要更换）。
3.4.2手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。
3.4.3盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放出冷气（水沸腾后排气10～15min）。
3.4.4关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。
3.4.5达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再打开盖取物，以防止突然减压液体剧烈沸腾活容器爆破。
3.5灭菌温度与时间3.5.1压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见下表：灭菌时间，min物品115℃ 121℃15不含糖等耐热培养基15～含糖类等耐热培养基 2030染菌培养物01－09－ 2006 1 修订．8微生物实验室操作指导书（受控）3.6灭菌处理：灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查，以免再度污染。
3.6.1物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用。
3.6.2取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用。
3.6.3培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃。
3.6.4取出的物品掉落在地或误放不洁之处，或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无菌物品使用。
3.6.5取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放。
3.6.6凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。
3.6.7每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。
4有毒有菌污物处理要求微生物实验室所用实验器材、培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室。
4.1经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌。