临床分子生物学检验复习提纲
临床分子生物学检验技术 教材大纲 前六章
第一节临床标本的处理一.临床标本处理的一般原则(一)标本采集的时间和注意事项(二)标本的类型和数量(三)标本采集部位的准备(四)标本的运送(五)标本的保存(六)标本处理中的生物安全问题二、常见临床标本的处理方法(一)血液标本1.全血标本2.血清(浆)标本3.外周血单个核细胞(二)棉拭子(三)体液标本(四)痰液标本(五)组织标本(六)细胞标本第二节生物样本分离纯化与质量鉴定一、生物样本分离纯化策略二、DNA的分离纯化(一)基因组DNA的纯化(二)吸附柱法提取DNA(三)质粒DNA的分离纯化(四)线粒体DNA的分离纯化(五)血浆中游离DNA的分离纯化三. RNA的分离纯化(一)总RNA的制备(二) mRNA的制备(三)循环miRNA的制备(四)长链非编码RNA的制备四、自动化核酸提取系统五、蛋白质的分离纯化(一)蛋白质的性质与纯化原则(二)从细胞或组织中提取蛋白的常用方法1.根据蛋白分子大小不同分离纯化2.根据蛋白分子溶解度不同分离纯化3.根据蛋白表面电荷不同分离纯化4.采用配体的特异性亲和力分离纯化(三)膜蛋白的分离与纯化六、核酸和蛋白的鉴定(一)核酸的鉴定1.核酸含量测定2.核酸的纯度鉴定3.核酸的完整性检测(二)蛋白质的鉴定第一节临床分子生物学检验技术的发展一.从分子生物学到临床分子生物学检验二.临床分子生物学检验技术的发展第二节临床分子生物学检验技术应用一.病原生物基因组1.菌种鉴定2.确定病毒感染和病毒载量3.病毒分析4.细菌耐药监测和分子流行病学调查二、基因变异1.致病基因的分子缺陷2.线粒体基因突变3.肿瘤相关基因4. DNA重排形成融合基因三、基因多态性1.基因定位和遗传病相关性分析2.药物代谢酶与血药浓度3.疾病诊断和遗传咨询4.多基因病的研究5.器官移植配型和个体识别四、循环游离核酸1.循环游离核酸与肿瘤2.游离核酸与产前诊断3.循环microRNA与肿瘤诊断第三节临床分子生物学检验发展与应用一.临床分子生物学检验与感染性疾病诊断与治疗二、遗传性疾病的临床分子生物学检验三、肿瘤的临床分子生物学检验四、临床分子生物学检验与个体化医学第一节分子生物标志物的概念与分类一、生物标志物的概念与分类二.分子生物标志物的概念与分类(一) DNA生物标志物(二) RNA生物标志物(三)蛋白质生物标志物第二节核酸分子生物标志物一、基因组和基因组特征(一)原核生物基因组1.原核生物基因组特征2.质粒(二)病毒基因组1.基因组的碱基组成2.基因组的核酸类型3.基因组中有基因重叠现象4.基因组中具有操纵子结构5.病毒基因可连续也可间断6.基因组中重复序列少7.基因组中非编码区少8.基因组是单倍体9.相关基因丛集10. 病毒基因组含有不规则结构基因(三)人类基因组1.单一序列2.重复序列3.多基因家族和假基因二、基于基因突变的分子生物标志物(一)点突变1.错义突变2.无义突变3. RNA加工突变(二)插入/缺失突变(三)动态突变三、基于基因多态性的分子生物标志物(一)限制性片段长度多态性(二)小卫星和微卫星多态性(三)单核苷酸多态性(四)拷贝数多态性四、基于DNA甲基化修饰的分子生物标志物五.基于转录产物的分子生物标志物(一) mRNA标志物(二) miRNA标志物(三)长链非编码RNA标志物六、基于线粒体DNA的分子生物标志物七、基于循环核酸的分子生物标志物(一)循环肿瘤细胞DNA(二)母体血清中的胎儿DNA(三)循环DNA的其他应用(四)血浆RNA第三节分子生物标志物的发现与评价一.高通量技术与分子生物标志物的发现(一)基因组学(二)转录组学(三)蛋白质组学(四)代谢组学二、分子生物标志物的特征和评估(一)分子生物标志物的特征(二)分子生物标志物评估的基本统计学方法(三)生物标志物的评价阶段第一节核酸分子杂交的概念一.核酸探针(一)核酸探针的种类1. DNA探针2. RNA探针3.寡核苷酸探针(二)探针的长度1.DNA和RNA探针2.寡核苷酸探针(三)核酸探针的标记1.探针标记物的选择2.探针标记方法的选择二、分子杂交信号检测(一)放射性标记探针检测1.放射自显影2.液体闪烁计数法.(二)非放射性标记探针的杂交检测1.酶促显色检测2.荧光检测3.化学发光检测4.多探针检测第二节经典的核酸分子杂交技术一、固相杂交(一)反向点杂交1.反向点杂交的原理2.反向点杂交法的应用(二) Southern印迹杂交1.Southerm印迹杂交的原理2.Southern印迹杂交的应用(三) Northem印迹杂交1.Northerm印迹杂交的原理2.Northem印迹杂交的应用二、液相杂交三、原位杂交第三节DNA芯片技术一. DNA芯片的概念二、DNA芯片原理三，DNA芯片技术(一)芯片制备1.探针的设计2.载体选择与预处理3. DNA芯片制备(二)样品的制备四、杂交与结果分析1.杂交反应2.杂交信号的检测3.数据分析五、DNA芯片在医学中的应用1.基因表达分析2.基因型、基因突变和多态性分析3.疾病诊断4.药物筛选5.指导用药及治疗方案6.预防医学第四节影响杂交信号检测的因素一.探针的选择二、探针的标记方法三.探针的浓度四、杂交率五、杂交温度六，杂交的严谨性七、杂交反应时间八、杂交促进剂第一节靶序列扩增一. PCR扩增技术(一) PCR技术原理及基本过程(二) PCR反应体系及扩增参数1.反应体系2.扩增参数二、其他PCR技术，(一)多重PCR(二)序列特异PCR(三)逆转录PCR(四)巢式PCR(五)转录依赖扩增系统(六)随机引物PCR(七)全基因组扩增(八)微乳液扩增(九)锚定扩增(十)长片段PCR三、PCR产物分析(一) PCR-限制性片段长度多态性(二) PCR-等位基因特异性寡核苷酸(三) PCR-单链构象多态性(四)变性梯度凝胶电泳(五)熔点曲线分析第二节探针序列扩增一.连接酶链反应二、链置换扩增三. Qβ复制酶第三节信号扩增一、分支DNA二、杂交捕获法三、酶切依赖的扩增四、循环探针。
分子生物学 复习提纲
分子生物学复习提纲免责声明：本资料仅供临床医学10级学习交流使用，基本覆盖上课重点。
由于课程的特殊性，特列成专题形式，个专题中重复部分在相应专题中都会覆盖。
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第一讲基因表达调控（转录水平的调节是基因表达调控的关键）分子生物学：是以生物大分子为研究对象，从分子水平去研究并解释一切生物学现象并在分子水平上改造和利用生物的一门新兴科学。
基因：编码RNA或蛋白质的全部核苷酸序列，包括结构基因和调控基因。
基因组：细胞或生物体中一套完整单倍体的遗传物质的总和，包括所有的基因和基因间区。
结构基因：编码RNA或蛋白质的核苷酸序列。
（原核：多顺反子、无内含子；真核：单顺反子、有内含子）转录单位：从启动子到转录终止子之间的DNA节段。
基因表达：是指DNA携带的遗传信息通过转录传递给RNA，mRNA通过翻译将基因的遗传信息在细胞内得以表达，合成具有生物功能的各种蛋白质的过程。
基因表达调控：是指对基因组中某一基因或一些功能相近的基因表达开启、关闭和表达强度的直接调节。
遗传密码：mRNA上按5’到3’方向排列的每三个核苷酸称遗传密码。
内含子：DNA或RNA中的非编码序列。
外显子：DNA或RNA中的编码序列。
多顺反子：一个结构基因转录产生一条mRNA ,编码几条功能相关的多肽链。
单顺反子：一个结构基因转录产生一条mRNA ,编码一条多肽链的生成。
启动子：是转录开始时RNA聚合酶识别、结合并开始转录起始所需的一段DNA序列。
终止子：提供转录终止信号的一段DNA序列。
增强子：能加强其上游或下游基因转录的DNA序列。
SD序列：mRNA5’端在起始密码子AUG 上游3～11bP处，含A-G 短序列，容易与16S r RNA3’-端含U-C 序列互补配对，称为SD 序列，它对mRNA与核糖体的有效结合并翻译至关重要。
开放阅读框ORF：始于起始密码子并终于终止密码子的一串密码子所组成的核苷酸序列。
分子生物学2020复习提纲
分⼦⽣物学2020复习提纲现代分⼦⽣物学复习提纲第⼀章绪论1.确⽴DNA是遗传物质的实验；证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在⽼⿏体内的毒性和T2噬菌体感染⼤肠杆菌。
这两个实验中主要的论点证据是⽣物体吸收的外源DNA(⽽并⾮蛋⽩质)改变了其遗传潜能。
2.对课本上列的诺贝尔奖有印象；2006 Kornberg 揭⽰了真核细胞的转录机制；同年，Fire and Mello因揭⽰了RNA⼲扰机制⽽获得了诺贝尔⽣理学奖。
1961年，Monod和Jacob提出操纵⼦模型，获1965年诺贝尔⽣理学和医学奖第⼆章染⾊体与DNA 参看之前的复习题1.在真核细胞中DNA的三级结构为（核⼩体）结构，它由140bp的DNA缠绕于由（H2A、H2B、H3、H4）组成的⼋聚体外，⼜依60bp的DNA及（组蛋⽩）形成的细丝相连组成念珠状结构。
2.真核⽣物的组蛋⽩其保守程度由弱到强的排列顺序为（H2A、H2B、H3、H4 ）3.A-DNA B-DNA Z-DNA每个螺旋所含的碱基数分别为（11、10、12 ）4.⼀个两股链都带放射性的DNA分⼦，在⽆放射性标记物的体系中，经过两次复制，产⽣的⼦代DNA分⼦中，有（2）个DNA 分⼦不带放射性。
5.复制起始点及复制⽅向，原核⽣物多为（单起点双向复制）⽽真核⽣物中多为（多起点双向复制）6.腺病毒作为显性DNA分⼦，复制时通过（DNA链取代法）来解决末端复制问题。
7.线粒体DNA的复制⽅式为（双向复制），⼤肠杆菌的复制⽅式为（θ型），ΦX174 的双链环状DNA分⼦的复制⽅式为（滚环式）。
8.⼤肠杆菌的复制起始点序列的结构特点有两个，分别为（富含AT）和（含有多个短的重复序列）9.⼤肠杆菌的复制起始因⼦dnaA dnaB dnaC dnaG的作⽤分别为（与4×9bp区域结合、解链酶蛋⽩、辅助dnaB 结合蛋⽩、引物酶）10.原核⽣物DNA复制的主要复制酶是（DNA聚合酶Ⅲ），⽽真核⽣物主要的复制酶是（DNA聚合酶δ）11.⼤肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ经酶切后得到⼤⼩两个⽚段，其中⼤⽚段称为（Klenow），功能是（具有DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性），⼩⽚段的功能是（5’→3’核酸外切酶的活性）12.⼤肠杆菌后随链的复制是通过不断更换（）完成的，⽽真核⽣物中是通过结合或释放（）完成的。
临床分子生物学检验复习提纲
临床分子生物学检验复习提纲临床分子生物学是现代医学中非常重要的一个领域，它涉及到了分子生物学和临床医学的结合，以及各种分子生物学技术在临床诊断和治疗中的应用。
以下是一个临床分子生物学检验的复习提纲，希望能够帮助你更好地准备考试。
一、分子生物学基础知识复习1.DNA结构和功能-核苷酸的组成和结构-DNA链的方向性-DNA的雙螺旋结构-DNA复制的过程2.RNA结构和功能-mRNA、tRNA和rRNA的结构和功能-转录和翻译的过程3.基因组和染色体-基因组的组成和结构-染色体结构和功能-遗传密码子表4.基因表达调控-转录调控的机制-翻译调控的机制-转录后调控的机制5.基因突变和遗传变异-突变的类型和机制-染色体缺失、重复和易位等遗传变异二、临床分子生物学技术复习1.PCR技术-PCR的原理和步骤-PCR引物设计和优化-PCR产物的检测和分析2.DNA测序技术- Sanger测序法的原理和步骤-高通量测序技术的原理和应用3.基因组学研究技术-基因芯片技术的原理和应用-下一代测序技术在基因组学研究中的应用4.基因突变检测技术-PCR-RFLP分析-聚合酶链反应单链构象多态性分析-测序检测技术在基因突变检测中的应用5.基因表达分析技术-实时荧光定量PCR- Northern blotting-基因芯片技术在基因表达分析中的应用三、临床分子诊断和治疗复习1.临床遗传病的分子诊断-基因突变检测在临床遗传病诊断中的应用-基因芯片技术在临床遗传病诊断中的应用-高通量测序技术在临床遗传病诊断中的应用2.分子病理学的应用-分子病理学技术在肿瘤诊断中的应用-微卫星不稳定性的检测和分析-液体活检技术在肿瘤诊断中的应用3.分子靶向治疗技术-靶向药物的分子设计原理-靶向药物的应用和限制-基因突变检测在靶向治疗中的应用4.群体遗传学和个体化医疗-群体遗传学研究的意义和方法-个体化医疗的概念和发展-药物基因组学在个体化医疗中的应用。
生物分子学复习提纲
分子生物学复习提纲（附考试原题）一、了解基因工程的主要研究成就。
（一）植物基因工程当前已鉴定和克隆化的植物基因有数百种，重组植物的野外试验已达千余宗。
与农业中的除草剂、抗昆虫、抗病（抗真菌、抗病毒）、抗不良环境因素、提高产量的光合作用、以及提高蛋白质有关。
（二）动物基因工程最突出——转基因动物及其发展。
1983年美国将生长激素基因注入小鼠受精卵——超级鼠。
缺点在于其盲目性。
外源性DNA引入受体细胞后可随机地插入受体细胞基因组中的任意位置，容易导致内源性有利基因的破坏和识货或激活有害基因。
表达水平难以预料。
目标：提高基因正常转化的效率，实现基因的定位整合。
（三）基因工程多肽药物与疫苗多肽药物：人胰岛素、人生长激素、干扰素、白细胞介素、组织血纤维蛋白溶酶原激活剂、肿瘤坏死因子、集落刺激因子……疫苗：细菌疫苗：麻风杆菌、百日咳杆菌、淋球菌……病毒疫苗：乙肝、甲肝、带疱、巨细胞病毒……寄生虫疫苗：疟原虫、利什曼虫、血吸虫……（四）基因诊断与基因治疗原指遗传性疾病的诊断，主要利用DNA探针（单链DNA小片段用核素、酶、荧光分子或化学催化剂等标记，之后同被检测的DNA中的同源互补杂交，从而检出所要查明的DNA）技术。
如诊断镰贫、地贫，也可诊断传染性疾病如结核。
多聚酶链反应PCR是一种体外扩增特异性DNA片段的技术。
基因治疗一般指将正常外源基因导入生物体靶细胞内以弥补所缺失的基因、关闭或降低异常表达的基因，以达到治疗遗传性疾病的目的。
方法普片采用逆转录病毒作为载体的基因导入法。
作为载体的逆转录病毒已缺失功能蛋白基因。
目前研究多属于单基因缺陷引起的遗传疾病基因治疗，如血友病，贫血等。
肿瘤和传染病也在研究。
（五）环境检测与净化环境监测：可用基因探针或PCR技术检测水中微生物。
环境净化：重组质粒导入细菌，降解有机物、农药等——超级菌；促进酶工业进步，提升经济效益等。
*二、掌握分子生物学的中心法则。
*三、掌握核酸的基本组成成分、基本性质。
分子生物学复习提要(精)
分子生物学复习提要一、名词解释：1、分子生物学（Molecular Biology）:从分子水平研究生命现象的科学，通过生物的物质基础—核酸、蛋白质、酶等生物大分子的结构、功能及其相互作用等运动规律的研究来阐明生命分子基础，从而探索生命的奥秘。
2、核酸（nucleic acid）:是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。
3、DNA的一级结构：DNA中核苷酸的排列顺序称作DNA的一级结构。
4、DNA的二级结构：即双螺旋结构，是指两条脱氧多核苷酸链反向平行盘绕所形成的双螺旋结构。
5、DNA的变性：在某些理化因素的作用下，DNA双链解开成单链的过程。
6、DNA的复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补链恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。
7、核酸分子杂交：序列互补单链的RNA和DNA，或DNA和DNA，或RNA 和RNA，根据碱基配对原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程。
8、基因（gene）：是核酸中贮存遗传信息的遗传单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列9：基因组（genome）:细胞或生物中，一套完整单倍体遗传特质的总和（包括一种生物所需的全套基因及间隔序列）称为基因组10.质粒（plasmid）:是独立于许多细菌及某些真核细胞染色体外共价闭合环状的DNA分子（covalant closed circnlar,cccDNA），能独立复制的最小遗传单位11.质粒的不相容性：当某种质粒在宿主细胞内存在时，将阻止其他质粒进入细胞寄宿，这种细菌质粒不能在相同细胞中同时存在的现象称为质粒的不相容性。
12、假基因：不能转录或转录后生成无功能蛋白质的基因称为假基因。
13、结构基因（structural gene）指能转录成为mRNA、rRNA或tRNA的DNA 顺序。
14、外显子（extron）：真核生物的结构基因是不连续的，其中的编码序列称为外显子。
分子生物学复习提纲
分子生物学一、名词解释1. 中心法则是指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。
也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程。
2. 半保留复制是亲代的两条链解开，每条链作为新链的模板，从而形成两个子代DNA分子，每一个子代DNA分子包含一条亲代链和一条新合成的链。
3. 重组除了被复制之外，细胞DNA还能发生重排，产生具有不同架设甚至新基因的新分子。
这一性质被泛称为重组。
4. 突变DNA序列中可遗传的改变称为突变。
5. 等位基因同源染色体含有以相同顺序出现的相同基因，这些基因不一定完全相同，他们在序列和功能上可能有少许差异，这些基因被称为等位基因6. 同源染色体在二倍体生物中对等的染色体叫做同源体或同源染色体。
二、选择题1. RNA聚合酶核心酶α、β和β’ 亚基一起构成了RNA聚合酶核心。
2. 碱基比例计算①双链DNA分子中,两互补碱基相等；任意两个不互补碱基之和恒等,各占碱基总数的50%,且不互补碱基之和的比值等于1．②双链DNA分子中A+T/G+C等于其中任何一条链的A+T/G+C③双链DNA分子中,互补的两条链中A+G/T+C互为倒数.即两不互补碱基之和的比值等于另一互补链中这一比值的倒数.④双链的DNA分子中,A+T占整个DNA分子碱基总数的百分比等于其中任何一条链中A+T 占该链碱基总数的比例3. PCR程序设定长的引物，非常容易引起发夹结构，或者其他互补情况，最后形成二聚体，引物CG含量到55%会稳定很多。
PCR聚合酶链式反应，用于体外扩增所需要的目的片段。
①DNA一般为双链。
首先，我们需要把它进行解链，从而产生两条单链，让引物结合上去。
达到复制的目的。
一开始我们设置的高温，刚好能够使得DNA双链解体。
约94~98℃，用3到5min即可。
此反应中我们用的TAQ酶，嗜热杆菌中提取的DNA聚合酶，也是高温启动的，初始的高温适合其开始在体系中的活性，但是约15分钟的高温会导致其半衰期，从而失去活性，使得反应效率降低，所以高温的时间不宜过长。
分子生物学复习题纲
下列关于 DNA 复制的说法不正确的有（ A ）。 按 3′ → 5′方向进行 需要 4 种 dNTP 的参与 需要 DNA 连接酶的作用 涉及 RNA 引物的形成 有关滚环复制不正确是（ B ） 可以使复制子大量扩增 产生的复制子总是双链环状 是噬菌体 DNA 在细菌中最通常的一种复制方式 复制子中编码切口蛋白的基因的表达是自动调节的
2．一个复制子是（ ）。 A．细胞分裂期间复制产物被分离之后的 DNA 片段 B．复制的 DNA 片段和在此过程中所需的酶和蛋白质 C．任何自发复制的 DNA 序列（它与复制起点相连） D．任何给定的复制机制的产物（如单环） E．复制起点和复制叉之间的 DNA 片段
13．一个复制子是（ C ）。 A．细胞分裂期间复制产物被分离之后的 DNA 片段 B．复制的 DNA 片段和在此过程中所需的酶和蛋白质 C．任何自发复制的 DNA 序列（它与复制起点相连） D．任何给定的复制机制的产物（如单环） E．复制起点和复制叉之间的 DNA 片段 14．下述特征不是所有（原核生物、真核生物和病毒）复制起始位点都共有的是（ B ）。 A．起始位点是包括多个短重复序列的独特 DNA 片段 B．起始位点是形成稳定二级结构的回文序列 C．多聚体 DNA 结合蛋白专一性识别这些短的重复序列 D．起始位点旁侧序列是 A-T 丰富的，能使 DNA 螺旋解开
在DNA修复过程中除了需要DNA聚合酶外，还需要DNA连接酶
3
，其作用是将DNA中相邻的碱基链接起来，原核生物DNA聚合酶
4
具有两种外切酶活性，分别从5’→3’和3’→5’降解DNA
5
DNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ只有3’→5’外切酶活性。
6
DNA修复包括三个步骤： DNA修复核酸酶 对 DNA链上不正
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临床分子生物学检验1.DV A的一级结构是由哪种化学键连接两条单链间：碱基氢键；相邻碱基间：范德华力；脱氧核苷酸间：3’-5’磷酸二酯键2.可以出现在人体循环系统中的游离核苷酸是脱氧核苷酸，核糖核酸3.原核生物DNA的复制方式是θ型半保留复制4.核小体结构中的组蛋白是哪些蛋白各自的作用有H2A、H2B、H3、H4：核心颗粒，形成核小体。
H1：连接线上，锁定核小体、参与包装5.PCR体系中抑制Taq酶活性的物质有哪些过量加入什么会减少Mg2+浓度导致Taq酶活性降低游离的Mg2+浓度；dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基团，螯合剂如EDTA均可与镁离子结合减少Mg2+浓度。
6.PCR扩增时，链的延伸从什么地方开始对于引物是哪一端模板链呢从引物的3’端开始，方向5’到3’；模板DNA序列的3’端；3’端7.在波长260nm的紫外线下，A值=1时双链DNA的浓度大约相当于50ug/ml的双链DNA。
（40ug/ml的单链DNA或单链RNA ，33ug/ml的单链寡聚核苷酸）（紫外分光光度法，核酸浓度的鉴定）计算公式：双链DNA ＝50×A260样本×稀释倍数÷1000（ug/ul）单链DNA／RNA ＝40×A260样本×稀释倍数÷1000（ug/ul）单链寡聚核苷酸DNA ＝33×A260样本×稀释倍数／1000（ug/ul）8.关于基因的定义正确的是能编码有功能的蛋白质多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能单位。
是遗传的结构和功能单位。
一个基因大都包括编码蛋白质多肽链或RNA的编码序列，保证转录和加工所必须的调控序列（启动子，增强子），5’端、3’端非编码序列。
9.β—地中海贫血患者的基因缺陷主要是基因突变中的点突变酶的特性有有很高的耐热稳定性酶量增加使反应特异性下降，酶量过少影响反应产量；Taq DNA聚合酶无3′→5′外切酶活性，因而无校正功能，在复制新链的过程中会发生碱基错配；Taq DNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，因此扩增的片段越长，错配的机率越高。
11.实时荧光定量PCR技术中非特异性荧光染色技术SYBR Green I12.人类基因组DNA多态性的形式限制性片段长度多态性（RFLP）；短序列重复序列（STR）;单核苷酸多态性（SNP）13.常用于菌种鉴定的分子标志物是16sRNA14.真核生物染色体的DNA三级结构不是闭环双链超螺旋结构的是15.原核生物RNA聚合酶的特性有原核生物细胞中只有1种RNA聚合酶，可参与合成mRNA、tRNA和rRNA。
RNA聚合酶催化聚合反应时需要Mg2+或Mn2+。
该酶无校正功能。
16.PCR反应的特异性取决于引物17.DNA的变性是指在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。
变性后其它理化性质变化：增色效应粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸碱滴定曲线改变生物活性丧失18.参与DNA复制的酶有哪些（1）DNA聚合酶（2）拓扑异构酶：:兼具内切酶和连接酶活力，能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张状态变成松驰状态，便于解链。
(3）DNA解链酶（4）单链结合蛋白(SSB)：结合在解开的DNA单链上，防止重新形成双螺旋。
(5）引物酶和引发体：启动RNA引物链的合成。
(6）DNA连接酶19.第一个分离到的抑癌基因是视网膜母细胞瘤基因（Rb基因）年简悦威采用Southen分子杂交技术检测出了什么疾病镰状细胞贫血症21.核酸的分离和纯化中，沉淀DNA的常用试剂是常用的有机溶剂有：乙醇、异丙醇、聚乙二醇常用的盐类有：醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾、氯化镁等。
22.通过紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，怎么鉴定反过来是否成立否通过A260与A280的比值来判断有无蛋白质的污染。
在TE缓冲液中：纯DNA的A260／A280比值为；纯RNA的A260／A280比值为【注意事项：（1）蛋白质及酚的污染均可使比值下降，可通过蛋白质在280nm的高吸收峰与酚在270nm的高吸收峰来鉴别。
（2）RNA污染可致DNA样品的比值高于。
（3）比值为的DNA溶液不一定是纯DNA溶液，可能兼有蛋白质、酚、RNA的污染。
（4）是高质量的RNA的标志，但由于RNA二级结构的不同，其读数可能会在～之间波动。
（5）RNA溶液的pH值会影响A260／A280的读数，在水溶液中A260／A280的比值比在Tris缓冲液（）的读数低～。
因此，精确测定RNA的浓度应使用水溶液，精确测定RNA的纯度应使用Tris10mmol/L（）溶液。
】23.对于等位基因突变位点已被阐明的一些遗传病，可以采用基因诊断的方法是直接诊断：Southern 印迹技术多重PCR技术PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）等位基因特异性寡核苷酸（ASO）DNA芯片技术（DNA chip）单链构象多态性（SSCP）变性梯度凝胶电泳（DGGE）DNA序列分析（DNA sequencing）24.限制性内切酶的（通常指Ⅱ类）特点是（Ⅱ类限制性核酸内切酶识别序列特点）回文结构CCTAGG切口：平端切口-- 平末端粘端切口-- 粘性末端【同功异源酶：GGTACC来源不同的限制酶，能识别和切割同一位点。
同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后产生相同的粘性末端】例如:淀粉液化芽胞杆菌（Bacillus amyloliguefaciens）H株第1种限制性内切酶，命名为Bam HⅠ25以mRNA为模板合成cDNA的酶是（RT—PCR内容）逆转录酶法DNA测序时ddNTP（双脱氧核苷酸，少一个羟基）的作用是ddNTPs 是反应终止剂，可以当作正常碱基参与复制，一旦链入DNA中，其后就不能再继续连接。
27Southern印迹法的步骤有①待测核酸样品的制备②琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品③电泳凝胶预处理④转膜⑤探针标记⑥预杂交⑦Southern杂交⑧洗膜⑨放射性自显影检测芯片技术的本质核酸分子杂交技术29.影响限制性内切酶活性的物质有乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和Mg2+等某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.30.大肠杆菌（原核生物）基因组的特点DNA较小；基因数目较少；通常为一条环状双链DNA（dsDNA）；只有一个DNA复制起始点；GC 含量差异很大；基因组DNA位于细胞中央的核区，无核膜，形成类核结构；结构基因中无内含子；多数为单拷贝基因，编码rRNA、tRNA的基因为多拷贝；具有编码同功酶的基因。
31.乙肝病毒（病毒）基因组特点①分子较小，基因数少；②双链DNA病毒（逆转录：是一类特殊类型的单链正链RNA病毒，含有RNA指导的DNA聚合酶，能使RNA反转录生成DNA。
）【每种病毒只含一种核酸（RNA或DNA），可为双链或单链、环状或线性】③基因组中有基因重叠现象；④有操纵子结构和相关基因丛集；⑤少或无重复序列；⑥基因组中编码序列占90%以上；⑦含有不规则结构基因。
32检测目标是RNA的杂交技术是Northern印迹杂交32.检测目标是DNA的杂交技术是Southern印迹杂交、反向点杂交（RDB）、原位杂交33.细胞内寿命最短的RNA是mRNA34.细胞内含量最多的RNA是rRNA35.细胞内具有调控功能的RNA是miRNA37.PCR结果电泳图的阅读，各个条带分别代表的意义哪些是marker, 哪些是有效条带38.哪些是非特异扩增哪些是引物二聚体产生这些条带的原因①DNA模板浓度过高引物浓度过高，形成引物二聚体Taq DNA聚合酶酶量过多dNTP浓度过高Mg2+浓度过高退火温度过低延伸时间过长C+G碱基含量在引物中比例过高②【引物二聚体是在PCR反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，这种聚合体出现了，就相当于原本可以扩增的原料链减少了，即会导致扩增的效率降低。
】●其中很重要的一个就是引物自身的原因，也就是设计的引物特异性不好，不能有效的和模板进行结合，而出现引物自身配对结合的情况●其次还可能是PCR体系及反应条件的问题，如果PCR体系中引物、镁离子以及酶浓度过高，模板量过低，退火时间过长等，都容易产生二聚体39.根据碱基互补原则计算DNA中ATGC各种的含量40.和人类线粒体基因组有关的疾病有哪些（了解）耳聋，糖尿病链的合成方向5’→3’42.抑癌基因的作用（存在于正常细胞内的一类可抑制细胞过度生长与增殖的基因，从而有潜在抑癌作用，当这类基因发生突变、缺失或失活时，可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。
）①诱导终末分化②维持基因稳定③触发衰老，诱导细胞程序性死亡④抑制蛋白酶活性或改变DNA甲基化酶活性⑤调节血管形成⑥促进细胞间联系43.参与原核生物转录终止的因子是ρ因子【原核生物转录的终止有两种主要机制.一种机制是需要蛋白质因子ρ（Rho）的参与,称为依赖ρ因子(ρfactor)的转录终止机制,另一种机制是在离体系统中观察到,纯化的RNA聚合酶不需要其他蛋白质因子参与,可使转录终止,称为不依赖ρ因子的转录终止机制.】44.原核生物DNA聚合酶Ⅰ具有的酶活性有主要用于修复DNA5’→3’聚合酶活性与延伸能力3’→5’外切酶活性与校对功能（保真性）5’→3’外切酶活性与切口平移45.编码血红蛋白β链第六位谷氨酸的密码由GAG突变为GTG所引起的血红蛋白病为镰刀状红细胞贫血46.PCR反应中的污染最主要的来自于污染主要来自于：扩增产物的污染（为最主要的来源）、试剂及器材污染、标本间的交叉污染、实验人员的污染等。
【污染是导致PCR假阳性的主要原因。
】47.翻译的基本方式（基本过程/进位、转钛、移位）成为什么循环核糖体循环48.核酸的分离与纯化的步骤有哪些第一步是什么①核酸的释放②核酸的纯化③核酸的浓缩和沉淀④核酸的鉴定与贮存49.基因诊断的方法对感染性疾病进行诊断的主要优点是快速、灵敏、特异等优点50.原核生物DNA聚合酶具有的酶活性有5’→3’聚合酶活性与延伸能力3’→5’外切酶活性与校对功能（保真性）5’→3’外切酶活性与切口平移51.影响融解温度（Tm值）的因素/影响DNA变性的因素有①Tm值取决于核酸分子的G-C含量②温度；溶液PH值；变性剂（如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等）52.基因诊断的间接诊断策略中的不确定性的原因是●遗传标志所带的信息有限●新突变●基因重组●家系成员不够完整53.在基因组DNA的提取过程中为了保护DNA一级结构的完整性而应该采取的措施有苯酚的使用：（1）使用还原酚：氧化酚可使DNA断裂。
重蒸酚并加入8-羟基喹啉（2）使用水饱和酚：酚可溶解5～10%水，从而溶解一定的核酸。