透射电镜样品制作
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。
2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。
3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
透射电镜制样流程
透射电镜制样流程透射电镜（Transmission Electron Microscopy，TEM）制样是指通过一系列的化学和物理方法来制取透射电镜所需的样品。
透射电镜是一种高分辨率的显微镜，可以在纳米尺度下观察材料的原子结构和微观形态。
为了获取高质量的TEM图像，制样过程非常关键。
下面将详细介绍透射电镜制样的流程。
1.样品制备：样品可以是纳米颗粒、薄膜、纤维或生物样品等。
首先，准备适宜的基底材料，如碳膜覆盖的铜网格或碳膜覆盖的铜刀片。
样品通常需要制成非常薄的切片，通常在50到100纳米的厚度范围内。
制备方法包括机械切割、电解石蠟切片、离子切割或电离蚀刻等。
2.固定和固化：对于生物样品，需要先进行固定处理，以保持样品的形态和结构。
常用的固定剂包括戊二醛、酸性醛或重金属盐。
然后，固定的样品需要进一步处理以固化，如用过氧化物、树脂或聚合物进行浸渍，以增加样品的稳定性。
3.切割和悬浮：将固化的样品切割成适当的尺寸和形状。
使用超微切割机、离子切割仪或其他切割工具进行切割。
切割后，样品通常会悬浮在水或有机溶液中，以便进一步处理。
4.脱水和对比染色：脱水是将样品从水中逐渐转移到有机溶剂中的过程。
这种处理可以控制样品的体积，以减少对比染色和观察中的伪影。
脱水通常通过渗透固定液逐渐转移，然后通过有机溶剂（如醋酸乙酯、丙酮或丙二醇）进行交换。
5.嵌入：将样品嵌入到透明的聚合物或树脂中。
嵌入过程中，通常采用逐渐增加浓度的树脂混合物，以确保样品得到完全浸透。
然后，将样品与树脂进行硬化，通常在高温下进行。
6.超薄切片：将固化的样品切割成非常薄的切片。
使用超薄切片机和钻磨刀片进行切割。
切割后的切片应尽快收集并转移到透明的铜网格或铜刀片上。
7.超薄切片处理：超薄切片通常需要进行后继处理以增强对比度和解决其他问题。
这可能包括染色、胶层增强或薄膜剥离等方法。
8.观察：将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。
在观察前，样品需要在真空中或过氮气中去除气泡和其他杂质。
透射电镜制样步骤以及注意事项
透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。
制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。
制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。
第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。
例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。
第二步是固定与固化。
对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。
第三步是切片。
将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。
第四步是薄化。
将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。
常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。
第五步是网格制备。
将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。
最后一步是贴膜。
将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。
在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。
2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。
3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。
4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。
5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。
6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。
总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。
合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。
透射电镜细胞样品制备流程
透射电镜细胞样品制备流程透射电镜细胞样品制备流程概述透射电镜（TEM）是一种常用于观察细胞结构和超微结构的高分辨率显微镜。
样品制备是进行TEM观察的关键步骤，正确的制备流程能够保证样品的质量和结构完整性。
流程步骤1.选择适合的细胞样品–根据研究目的选择不同类型的细胞样品，如培养细胞、动物细胞组织或植物细胞等。
–样品选择要考虑细胞生长状态、形态和结构的要求。
2.采集样品–从培养皿中取出细胞，或从动物或植物组织中切取适当大小的样品。
–注意避免样品受到污染或损坏。
3.固定样品–使用适当的固定剂，如戊二醛、冰醋酸或凝胶固定剂，对样品进行固定处理。
–固定剂的选择要根据样品类型和所需观察结构的特点。
4.去除固定剂–使用缓冲液或盐水洗涤样品，去除多余的固定剂。
–洗涤时间和次数需根据固定剂的种类和浓度进行调整。
5.后续处理–为了进一步增强对样品的对比度和分辨率，可以对样品进行染色处理。
–常用的染色剂包括重质金属盐、乙酸铀和铅染色剂等。
6.样品包埋–涂覆样品表面的浸渍剂，如环氧树脂或丙烯酸树脂。
–用于支撑样品的网格可以放置在浸渍剂中。
7.制备超薄切片–使用超薄切片机将包埋的样品切割成透明的超薄切片。
–切片的厚度通常控制在70-100纳米之间。
8.将切片转移到网格上–使用特殊工具将切片转移到电子显微镜用的网格上。
–要小心操作，避免切片受到损坏或污染。
9.干燥和稳定–将转移到网格上的切片进行脱水和干燥处理，以提高稳定性。
–常见的方法包括用醇溶液进行脱水，然后使用气体吹干。
10.开始透射电镜观察–将处理完的样品装入透射电镜，调整参数和放大倍数。
–进行细胞结构和超微结构的观察和拍摄。
结论透射电镜细胞样品制备是进行TEM观察的关键步骤。
通过选择合适的细胞样品、适当的固定、去固定剂和染色处理，以及正确的样品包埋和超薄切片制备，可以确保样品的质量和结构完整性。
准确无误的制备流程能够为细胞学研究提供可靠的数据支持。
注意事项1.样品的选择要根据研究目的和所需观察结构的特点进行。
透射电镜样品制备步骤
透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术，它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。
为了能够使用透射电镜观察样品，首先需要对样品进行制备。
透射电镜样品制备步骤如下：1.选择合适的样品：透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。
根据研究目的和样品性质选择合适的样品。
2.样品预处理：根据样品性质的不同，进行必要的预处理。
例如，对于固体样品，可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。
3.样品固定：将样品固定到透射电镜样品架上。
不同的样品有不同的固定方法。
例如，对于固体样品，可以使用导电胶将其固定在样品架上。
4.薄层制备：对于厚度过大的样品，需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。
常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。
5.样品清洁：将样品放入超声波清洗机中进行清洗，以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。
6.特殊处理：如果需要对样品进行特殊处理，例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等，根据需要进行相应的处理。
7.样品干燥：将样品放入真空或氮气环境中，以确保样品干燥。
避免样品受到水汽的污染。
8.获得薄片：使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。
为了获得高质量的薄片，可以选择特殊的切片工具和技术，例如离子束切片或低速钻磨切片。
9.薄片形状整理：使用不同的研磨和抛光方法，将薄片的形状和表面进行调整，以确保样品的平滑度和一致性。
10.网格制备：将薄片粘贴在透射电镜网格上。
网格可以增强样品的稳定性和保护，同时提供用于定位和标识的标记。
11.后续处理：根据研究目的和透射电镜分析的要求，可以对样品进行进一步处理。
例如，可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。
以上是透射电镜样品制备的一般步骤。
不同样品和研究目的可能会有所不同。
因此，根据具体的研究需求和样品特点，制备过程可以做相应的调整和优化。
透射电镜制样方法
透射电镜制样方法
透射电镜制样方法主要包括以下步骤：
1. 样品制备：首先需要选择合适的样品，并进行必要的前处理。
根据需要，可以使用传统的金相方法，如切片、打磨和腐蚀等来制备样品；也可以使用更先进的方法，如离子切片、聚焦离子束等来制备样品。
2. 高真空处理：将样品置于高真空环境下进行处理，以去除气体和水分的影响。
这可以通过在真空槽中加热样品、通入惰性气体等方法来实现。
3. 制备薄片：将制备好的样品制备成足够薄的薄片，通常厚度要求在几十纳米至几百纳米之间。
这可以通过使用超薄切片机或聚焦离子束来实现。
4. 电导涂层：为了提高样品的导电性，可以在样品表面涂上金薄层或碳薄层。
这可以通过蒸镀、溅射、离子镀等方法来实现。
5. 透射电镜成像：将制备好的样品放入透射电镜中，调整仪器参数，如加速电压、透镜聚焦等，进行成像。
可以使用像差校正技术、电子衍射等方法来提高成像质量。
需要注意的是，不同样品的制备方法会有一定差异，制备薄片时要注意避免样品的破裂和变形，电导涂层要均匀且致密，成像时要注意样品与探针的相对位置等
细节问题。
此外，透射电镜制样方法还包括一些先进的技术，如原位制备、低温制备、离子减薄等，可以根据需要选择适合的方法进行制备。
透射电镜制样方法
透射电镜制样方法
透射电镜制样是实验室中极为重要的一项技术操作，它将不同结构和尺寸的样品细粒度地进行分离，使之适应望远镜进行观察。
目前实验室高等学校科研都广泛运用透射电镜进行材料研究。
透射电镜制样大致可分为以下步骤：
1.准备样品：将细分的材料（如金属、碳、化学物质等）放在石英板上，以保证材料表面光滑。
2.制备标本：用刮子将样品按一定密度均匀地刮到石英板上制备出一个标本，再在标本表面进行抛光，使标本表面光滑，并保证其大小和厚度圆滑兼容。
3.金相分析：将抛光的标本放在金相检测仪上，通过金相范式素材库，自动检测标本的组成成分，较快准确得出有关分析结果。
4.涂覆镜片：将样品夹在两个玻璃挡板间，倒入特殊的样品涂覆液，将两片玻璃挡板缓慢压缩，使涂覆液平稳均匀地涂覆到样品表面，以形成镜片。
5.放入电镜：将涂覆后的样品放入透射电镜，并用调节电源选择对应的廓线调节器，即可通过连续的廓线选择实现不同的形状的样品的聚焦。
6.观察分析：在放大可视屏上观察样品，然后拍照或录制，以便进一步分析。
以上就是透射电镜制样的大致步骤，制备一个完美样品需要仔细操作，技术人员必须熟悉此项技术操作，并结合实际材料和实验步骤多次实践，以达到良好的实验效果。
透射电镜样品制备方法及优缺点
透射电镜样品制备方法及优缺点
透射电镜样品制备主要分为两步，即液体/固体样品处理和超薄切片制备。
1、液体/固体样品处理
第一种方法是基于普通电镜样品制备的双步处理法，即第一步用电子束处理样品表面，使其导电，再经过透射电子束进行处理。
在这种方法下，样品表面层只有几百到几千纳米厚，因此，只有比较薄的样品才能够得到满意的结果。
另一种方法是采用高真空下的固态电子涂覆，即将样品表面涂覆上薄层特殊金属。
例
如可以用铱、金、铂或其它金属的熔合物作为涂层，以获得特殊的涂层电导能力，从而保
证样品的电子图像分辨率和可视深度。
2、超薄切片制备
超薄切片制备分为超声切片和非超声切片两类。
超声切片通常是采用高能量超声波振
荡使容易被劈开的液体/固体样品形成自发非规则薄片，有时还可以加入一定量的碎薄片，从而使超声对样品的透射变的更容易，提高了结果的准确性。
非超声切片制备则采用比较稳定的技术来实现，如钻石刀片切割、钝型刀制备和原子
力显微镜焦点束来制备，具有薄层切片准确厚度的特点，且可以满足多层次数据获取。
优点：
1、透射电镜样品制备要求低，可以在常规实验室条件下完成，便于实验和分析；
2、采用精确远离样品表面的电子束，使放大比例高，且能够获得更高的分辨率和更
深的可视深度；
3、三维结构复杂的物质可以藉由采用不同的金属包覆来进行分析；
1、制备过程繁琐复杂，容易出现样品分析结果不精确的情况；
2、物质表面多层次结构信息分析难度大，可能会影响分析结果准确性；
3、结构深度较大时，获取信息较困难，分析效果受到影响。
简述透射电镜中样品制备的常用方法
简述透射电镜中样品制备的常用方法一、引言透射电镜是一种非常重要的材料表征工具，可以用来观察材料的微观结构和成分。
在进行透射电镜实验时，样品制备是非常关键的一步。
本文将介绍透射电镜中样品制备的常用方法。
二、样品制备前的准备工作在进行透射电镜实验之前，需要进行一些准备工作。
首先，需要选择合适的样品，通常需要具有高度纯度、均匀性和结晶度。
其次，需要选择合适的切片方法和切片仪器。
最后，在进行样品制备之前，需要对仪器进行检查和校准。
三、传统切片法传统切片法是最常见的一种样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用细针将金属网格放置在相应位置。
4.使用玻璃棒将金属网格压入薄膜中，并使其平整。
5.使用细针或玻璃棒将薄膜剪成小块。
6.使用切片机将薄膜切成适当大小的样品。
7.将样品放置在透射电镜上进行观察。
四、离子切割法离子切割法是一种比传统切片法更先进的样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用离子束磨削仪对样品进行加工处理，得到一块平整的样品表面。
4.使用离子束切割仪对样品进行切割，得到纳米级别的薄片。
5.将薄片放置在透射电镜上进行观察。
五、焦电流加工法焦电流加工法是一种新型的样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用焦电流加工仪对样品进行加工处理，得到高质量的薄片。
4.将薄片放置在透射电镜上进行观察。
六、结论样品制备是透射电镜实验中非常关键的一步。
传统切片法、离子切割法和焦电流加工法是常用的样品制备方法。
在进行样品制备之前，需要进行充分的准备工作，选择合适的样品和切片仪器，并对仪器进行检查和校准。
通过合理选择样品制备方法，可以得到高质量的样品，并为后续实验提供可靠的数据支持。
透射电镜样品制备流程及注意事项
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透射电镜样品包埋块制作原理步骤
一、取材：
1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入4℃戊二醇固定液中，使组织细胞尽可能保持原来的生活状态。
2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织。
3、组织块大小：取材医生可先切成长条形，然后再修成约1mm3大小。
二、固定：
固定目的是把细胞在活体状态时的超微结构细节尽可能完整地保存下来，避免自身酶的分解而出现自溶，或因外界微生物的入侵繁殖而产生腐败，致使细胞的超微结构遭受破坏。
同时也使细胞内的各种成分固定下来，避免以后的冲洗和脱水时溶解和流失。
理想的固定剂应具备以下特点：能够迅速又均匀地渗透到组织结构内；能够稳定细胞各种结构成分，使之在以后处理过程中不致溶解和丢失；对细胞超微结构没有损伤；能供细胞化学测定并能增强图像反差。
当然，满足所有要求的固定剂是不存在的，目前常用固定剂有锇酸和戊二醇。
1.使用锇酸的注意事项：
锇酸即四氧化锇，它能和细胞内绝大多部分成分反应，且能够保护脂肪，但对碳水化合物、糖类和核酸保护作用差，锇酸渗透差，分子密度大，经锇酸固定的组织在电镜下能获得较好反差。
锇酸为剧毒、极易挥发的试剂，对呼吸道有强烈刺激作用，必须在通风橱中操作，废液必须收集在密闭容器中。
常用的锇酸溶液为2%的储备液，使用之前需用0.2MPBS稀释成1%的锇酸溶液。
2.戊二醇
戊二醇能够稳定糖原，同时保存某些锇酸保护作用差的蛋白质结构，对酶活性破坏小。
对微管、滑面内质网等固定较好，对脂肪保护差，且反差小，因此必须和锇酸配合使用，即“双重固定法”。
3.固定方法：
样本先用2.5%戊二醇在4℃下固定2h，经PBS缓冲液多次清洗后再用1%锇酸固定2h。
根据不同组织，可适当延长固定时间。
由于戊二醇能够和锇酸反应产生电子致密的还原锇沉淀，组织经戊二醇固定后，必须将戊二醇清洗干净才能转入锇酸。
此外，锇酸又能和乙醇作用生成沉淀，因此锇酸固定后也应用PBS清洗液进行清洗干净方能进行脱水处理。
一般清洗3次，每次15min左右(或过夜)。
三、脱水：脱水是将组织中的游离水彻底清除的过程。
由于常用的包埋剂，如环氧树脂，大多都是非水溶性树脂，只
有将生物组织中的游离水清除干净，包埋剂才能浸入组织，常用脱水剂是乙醇和丙酮。
乙醇对细胞物质抽提少，组织收缩也少，但它和环氧树脂互溶性差，因此使用乙醇脱水时须用环氧丙烷作为中间溶剂。
丙酮和酒精、环氧丙烷互溶，所以通常先用乙醇后再用丙酮的脱水方法。
急剧脱水会引起细胞收缩，因此应采用逐级脱水
(50%-70%-90%-100%乙醇)而不能急剧脱水。
更换溶液时动作要快，特别是不要让组织离开溶液，否则会在组织内外产生气泡；脱水过程中若要长时间停留或过夜，应放在70%乙醇或丙酮中，并在4℃保存。
四、包埋
1.渗透：渗透就是用包埋剂逐渐取代组织中的脱水剂，使细胞内外空隙被包埋剂所填充。
一般可先用环氧丙烷对半稀释的包埋剂浸透1-2h，再用纯包埋剂37℃烤箱渗透2h左右。
包埋剂通常由树脂、硬化剂、增塑剂及催化剂4种试剂按一定比例配制而成。
2.包埋：目的是以包埋剂完全浸透到组织内部，经加温逐渐聚合成坚硬固体。
理想包埋剂应具备的条件：黏稠适中，有良好切割性；能经受电子轰击；透明度较好；对人体无害。
目前常用国产环氧树脂618、Epon812环氧树脂、及低黏度包埋剂Spurr。
3.环氧树脂：环氧树脂为热塑性树脂，主要有两种化学反应基团，即环氧基和羟基。
末端环氧基易与其他含活性氢原子化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚合物。
单体中羟基能与酸酐结合，形成分子间横桥连接。
因此，把环氧树脂单体、胺类、酸酐等三者按一定比例混合，加上适当温度，可形成稳定的交链状聚合物。
包埋剂配制及使用过程中的注意事项：
1. 所有容器及玻璃棒等应是清洁和干燥的；
2.配制过程中应搅拌均匀，使用过程中应避免异物，特别是水、乙醇、丙酮等混入包埋剂；
3.配制好的包埋剂应密封保存，避免受潮。
剩余包埋剂可密封并储存在-10—-20℃冰箱中，延长其使用期。
4.常用树脂制方
国产树脂618：
Epon812环氧树脂：
低黏度包埋剂Spurr ：
5.包埋方法
Spurr70℃烤箱内8h 即可固化，60℃时间要相应延长，减少DER-736量可增加硬度。
国产树脂618、Epon812环氧树脂需37℃过夜，经45℃12h 、60℃24h 可固化，干燥存放。
五、切片 1.修快
首先粗修把多余树脂磨掉，然后在双筒镜下把端面修平，使组织面暴露，然后再修成45℃四面锥体。
顶端面可修成长方形或梯形，注意上下面平行。
半薄切片顶端面积以1-2mm 2
左右为宜，修成直角梯形便于定位。
2.切片操作
固定好组织块，调整刀的高低、角度和刀刃位置，调整刀槽内的液面，调整组织块与刀的距离，选择切片速度及厚度。
可根据干涉色判断切片厚度：灰色40-50nm ；银白色50-70 nm ； 金黄色70-90 nm ； 紫色90 nm 以上。
灰色、银色较薄，但反差小，金色分辨率低，反差好，紫色太厚，一般不能观察。
六、染色
1.醋酸铀：是目前应用最广泛染色剂，能和大多数成分相结合，对核酸、核蛋白、结缔组织纤维、糖原、分泌颗粒、溶酶体均可染色，但对膜结构染色效果较差。
醋酸铀在水和乙醇中溶解度较差，一般用50%或70%乙醇或丙酮配制成2%-3%的溶液。
组织块染色1-2h ，切片染色30min 即可。
长时间染色可引起糖原抽提和组织变形。
2.枸橼酸铅：铅染色其应用也很普遍，它具有很高的电子密度，对细胞超微结构均有广泛亲和力，能提高细胞膜系统及脂类反差。
铅染液易与空气中二氧化碳接触形成碳酸铅沉淀，污染切片。
一般染10-20min 即可，长时间染色可使反差全部增强，不利于观察。
枸橼酸铅染液配制： 附表
表1 戊二醛溶液的配制
表2 0.2M 磷酸缓冲液（PBS ）的配制
按下表比
例混合A 、B 液后，配成0.2mol/L 的母液，其中pH7.0为常用配方
pH 值 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 A 液 8.0 12.3 18.5 26.5 37.5 49.0 61.0 72.0 81.0 87.0 91.5 94.7 B 液
92.0 87.7 81.6 73.5 62.5 51.0 39.0 28.0 19.0 13.0 8.50 5.30
在缓冲液中加入葡萄糖，蔗糖或氯化钠等均能改变渗透压。
表3 多聚甲醛-戊二醛固定液的配制
透射电镜样本制备
1.登记好需要制备样本数量及相应位置顺序。
2.摆放好脱水盒，加入适量PBS,依次按顺序转移组织块至脱水盒内。
3.先穿一个空盒作为上盖，再依次把脱水盒穿起来，放入脱水瓶内，加入10mlPBS,4℃存放，过夜，每天换液一次，换液两次。
4.配制脱水剂：PBS 、1%锇酸（PBS 对半稀释）、双蒸水、50%酒精、70%酒精、90%酒精、100%酒精、50%丙酮、70%丙酮、90%丙酮、100%丙酮（4℃）、100%丙酮（常温）、50%环氧丙烷，共13个，其中第一个PBS 直接用原瓶即可。
5.脱水程序：锇酸1.5h ，水1min ，其它每步6min 。
6.把组织块放入预先环氧丙烷稀释好的包埋树脂中浸透1h 。
7.取出脱水盒，先旋转几下，防止组织块贴壁（注意动作要快，如果组织块较多，中间应多次湿润组织快）。
8.把组织依次块放入包埋模具中，过夜浸透。
9.牙签轻轻调整组织块位置，尽量贴边。
10.聚合器中加热聚合：37℃12h 、48℃24h 、60℃48h 。
A 液：0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液
B 液：0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液 Na 2HPO 4 28.4g 或Na 2HPO 4.H 2O 31.61g 或Na 2HPO 4.2H 2O 35.6g 或Na 2HPO 4.7H 2O 53.63g 或Na 2HPO 4.12H 2O 71.64g
加双蒸水至1000mL
NaH 2PO 4 24.0g 或NaH 2PO 4.H 2O 27.6g 或NaH 2PO 4.2H 2O 31.21g
加双蒸水至1000mL。