2015.3《动物细胞培养技术》复习思考题
《动物细胞培养》思考题
《动物细胞培养》思考题1、细胞培养的一代生长过程如何？答：原代培养的过程就是动物细胞培养的第一代细胞。
原代培养是这样的：取出动物胚胎或者幼龄动物组织或器官后用胰蛋白酶使其分散为单个细胞，然后配置成一定浓度的悬浮液放入培养瓶（其液体培养基含动物血清）中置于培养箱中培养。
2、什么是原代培养、传代培养？答：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。
传代培养是指当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。
3、细胞生长需要满足哪些条件？4、操作人员如何保持无菌？5、无菌操作的要点是什么？6、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？7、器材包装有何要求？8、叙述超净工作台的工作原理？9、正压过滤器为何会除菌？10、配制后液体呈黄色意味着液体的ph发生了什么变化？11、用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D－Hanks液或PBS液配制？Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。
因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
12、L－谷氨酰胺在营养液中有何作用？L－谷氨酰胺属于生长因子的一种，是细胞生长所必需的。
13、营养液配制后为什么要小剂量分装？避免污染后全军覆没。
14、你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
15、培养瓶移入CO2恒温培养时，瓶盖为何要稍松？拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好16、如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？17、细胞培养到一定时间为何要传代？18、你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染？19、你认为组织培养成功需要哪些条件？20、原代细胞和传代细胞培养有哪些区别？。
高考生物一轮复习资料动物细胞培养和核移植技术
开躲市安祥阳光实验学校高考生物一轮复习资料第16讲动物细胞培养和核移植技术【知识要点】1．简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
2．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。
3．比较动物细胞培养与植物组织培养的异同点。
【典型例题】1．动物细胞培养和植物组织培养的主要区别是（）A．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同B．动物细胞培养是培养单个细胞，植物组织培养是培养组织C．动物细胞培养可以传代培养，而植物组织培养不能传代培养D．动物细胞培养过程中可发生遗传物质的改变，而植物组织培养不能2．下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：（1）若A、B细胞为动物细胞，从A 和B细胞到C细胞的过程中，常用作为诱导剂来诱导融合。
A、B 融合为C的过程说明了细胞膜具有特性。
（2）若A 、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了。
这种酶可能是酶，由此生成的A和B细胞称为。
A、B到C细胞的过程中，常用的物理方法是；融合完成的标志是；形成的D细胞还要应用_________ ______技术把D培养成植株。
（3）若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，那么D细胞称为细胞。
由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为过程。
这种细胞既能无限繁殖，又能产生。
（4）若该过程是制备单克隆抗体的过程，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D 细胞应该是。
从中选择出它的方法是培养。
3．世界上第一只克隆绵羊“多利”的培育程序如右图所示。
请看图后回答：（1）写出图中 a 、b 所指的细胞工程名称:a ，b 。
（2）实施细胞工程a 时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。
（3）“多利”面部的毛色是，请根据遗传学原理说明判断的原因是：。
（4）继植物组织培养之后，克隆羊的培育成功，证明动物细胞核也具有。
【当堂反馈】一、单项选择题1．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( )A细胞B细胞C细胞D细胞①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要02，不需要 C02⑥C02能调培养液pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥2．动物细胞培养的特点是( )①细胞贴壁②有丝分裂③分散生长④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传代1～10代A．①②④⑥B．②③④⑤ C．①③④⑥ D．③④⑤⑥3．在动物细胞培养过程中下面哪种物质不是必需的（）A．单糖B．核苷酸C．氨基酸D．无机盐4．试管婴儿、试管苗和克隆羊三者均属于生物工程技术的杰出成果，下面叙述正确的是A．都属于无性生殖能保持母本性状B．都是细胞工程的技术范围C．都充分体现了体细胞的全能性D．都不会发生基因重组和变异5．英国生物学家首次用羊的体细胞成功地克隆出小羊“多莉”。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养，简单来说，就是在体外模拟体内的环境，让动物细胞生长、繁殖和发挥功能的技术。
这可不是一件简单的事情，需要精心创造一系列适宜的条件。
细胞从生物体中取出后，要放在特制的培养基中。
培养基就像是细胞的“美食”，包含了细胞生长所需的各种营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
同时，还得调节好环境的温度、pH 值、氧气和二氧化碳的浓度，给细胞一个舒适的“家”。
二、动物细胞培养的基本流程1、取材首先得从动物体内获取要培养的细胞。
这可以是从胚胎、幼体组织，也可以是成体的某些器官。
但取材的过程得小心翼翼，不能损伤细胞，还要保证细胞的活性。
2、原代培养将取得的细胞放入培养瓶或培养皿中，这就是原代培养的开始。
在这个阶段，细胞会慢慢适应新的环境，开始生长和分裂。
3、传代培养当原代培养的细胞长满了培养容器的表面，就需要把它们分成小份，转移到新的容器中继续培养，这就是传代培养。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，会把细胞放在低温下冻存。
等到需要的时候，再通过特定的方法让它们复苏，恢复活性。
三、动物细胞培养所需的条件1、无菌环境这是至关重要的一点，任何细菌、真菌或病毒的污染都可能导致细胞培养的失败。
所以，实验操作要在无菌的超净工作台中进行，培养基和培养用具也要经过严格的灭菌处理。
2、合适的培养基培养基的成分要精心调配，既要满足细胞的营养需求，又要维持合适的渗透压和 pH 值。
3、温度和气体环境一般来说，细胞培养的温度在 37℃左右，同时要提供适量的氧气和二氧化碳。
氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则有助于维持培养基的 pH 稳定。
4、贴壁和悬浮培养有些细胞需要附着在培养容器的表面才能生长，称为贴壁细胞；而有些细胞可以在培养基中自由悬浮生长。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产比如疫苗、抗体、生长因子等。
通过大规模培养动物细胞，可以高效地生产这些生物制品，满足医疗和预防疾病的需求。
安立国第二版动物细胞工程思考题参考答案
哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核移植。
第一章绪论课后习题答案1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。
2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。
第二章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。
离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。
有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。
动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。
从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。
贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。
按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。
由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。
动物细胞培养练习题PPT课件
精品课件
11
第六次
补5.1.胚胎干细胞（embryonic stem cell， ES）是从早期胚胎内细胞团分离出来的， 能在体外培养的一种高度未分化的多能干细 胞
补5.2.细胞融合（cell fusion)，又称体细 胞杂交（somatic hybridiazation），是 指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合 形成单个细胞的过程
精品课件
15
第八次：
补8.1. 培养基中可能含有血清的是：A A动物细胞培养基 B植物细胞培养基 C愈伤
组织培养基 D微生物培养基 补8.2. 植物细胞的组织培养条件要求含有
全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、 无菌环境、略高的PH以及适时的光照。×
精品课件
16
补8.3电融合法的优点：
精品课件
12
补5.3. 干细胞可连续分裂几代，但是难以 在较长时间内处于静止状态。×
补5.4．细胞融合的常用方法:仙台病毒法、 聚乙二醇（PEG）法、电融合法
精品课件
13
第七次：
补7.1．已知显微镜分辨率的公式为: R=0.61λ /N．A． 其中 N．A．＝ｎsinα/2
（n=介质折射率；α=镜口角；N.A.=镜口率； λ＝入射光波长）
精品课件
8
补4.4．一般把目的片段在器官或组织中表 达的转基因动物叫动物生物反应器 （bioreactor）.
补4.5．细胞直接摄取外源DNA的过程叫： B
A.转导 B.转化 C.转移 D.转入
精品课件
9
第五次：
补5.1．下列细胞不具全能性的是：D
动物细胞培养
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
加培养液
细胞悬液
转入
培养瓶内培养 （原代培养）
（ 细胞贴壁长成单层细胞,有接触抑制现象）
1.取动物组织 （1）取材:一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。 （2）取材原因: 细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养
2.制成细胞悬液
（1）将组织分散成单个细胞
①方法: 机械法 用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能 力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反。所以，一般来 说，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样，分化 程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
2.动物细胞培养和植物组织培养有什么相同和不同之处？
思考-讨论:
（1）培养前为什么分散成单个细胞？
②原因: Ⅰ.从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼 此限制了生长和增殖； Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
去掉组织
（一）
动 物
动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
间蛋白 胰蛋白酶
单个细胞
剪碎
加培养液
细胞 悬浮液
细
分化程度低， 增殖能力强
胞
①成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与增殖 ②利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。
细胞培养复习题
细胞培养复习题名称解释细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。
组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。
有时泛指所有的体外培养。
器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。
无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。
完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。
接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。
无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。
注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。
但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。
不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。
原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。
2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。
兽医细胞生物学章节思考题及答案
第一章细胞概述8.请简述病毒的生活史。
答：病毒的生活史分为5个基本过程:吸附(absorption): 病毒对细胞的感染起始于病毒蛋白外壳同宿主细胞表面特殊的受体结合，受体分子是宿主细胞膜或细胞壁的正常成分。
因此，病毒的感染具有特异性。
侵入(penetration): 病毒吸附到宿主细胞表面之后，将它的核酸注入到宿主细胞内。
病毒感染细菌时，用酶将细菌的细胞壁穿孔后注入病毒核酸；对动物细胞的感染，则是通过胞吞作用，病毒完全被吞入。
复制(replication): 病毒核酸进入细胞后有两种去向，一是病毒的遗传物质整合到宿主的基因组中，形成溶原性病毒；第二种情况是病毒DNA(或RNA)利用宿主的酶系进行复制和表达。
成熟(maturation): 一旦病毒的基因进行表达就可合成病毒装配所需的外壳蛋白，并将病毒的遗传物质包裹起来，形成成熟的病毒颗粒。
释放(release): 病毒颗粒装配之后，它们就可从被感染的细胞中释放出来进入细胞外，并感染新的细胞。
有些病毒释放时要将被感染的细胞裂解，有些则是通过分泌的方式进入到细胞外。
第二章细胞生物学研究方法1．举例（3～5个）说明研究方法的突破对细胞生物学发展的推动作用。
答：①细胞培养技术，②离心分离技术，③流式细胞分离技术，④基因敲除技术，⑤干细胞培养技术，⑥……7．什么是细胞培养?答：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
第三章细胞质膜与跨膜运输14. 膜的流动性的生理意义何在？答：①细胞质膜适宜的流动性是生物膜正常功能的必要条件。
②酶活性与流动性有极大的关系，流动性大活性高。
③如果没有膜的流动性，细胞外的营养物质无法进入，细胞内合成的胞外物质及细胞废物也不能运到细胞外，这样细胞就要停止新陈代谢而死亡。
④膜流动性与信息传递有着极大的关系。
⑤如果没有流动性，能量转换是不可能的。
⑥膜的流动性与发育和衰老过程都有相当大的关系。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
《动物细胞培养技术》复习思考题
1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果
器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？
2.叙述超净工作台的工作原理
鼓风机驱动空气通过高效过滤器得到净化，净化的空气徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，是工作区形成无菌环境。
3.正压过滤器为何会除菌
4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。
你认为精确配制各种溶液？
5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？
6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制
7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？
8.HEPES溶液与胰蛋白酶液的作用机理
9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？
10.营养液制备后为什么要小剂量分装？
11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法
12.细胞培养过程中对无菌的要求很高，你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污
染？请详细阐述。
13.你认为组织块培养成功需哪些条件？你们小组为了实验成功采取了哪些具体的措施？
你在本次实验中做了什么工作？
14.组织块培养的基本原理如何？
15.何时须更换培养基进行传代？可否使用与原先培养条件不同之血清种类来进行后期的
培养？
16.培养细胞时不用CO2或使用5 % 或10% CO2是否都可以？说明原因？
17.你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？你在其中参与了什么操作？有什么体
会？
18.培养瓶移入CO2恒温箱培养时，瓶盖为何要稍松？又如何避免细胞污染？如果细胞污
染有何挽救措施？
19.胰蛋白酶的消化原理如何？如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？
20.细胞培养到一定时间为何要进行传代？能一直传代下去吗？阐述其机理。