《中国药典》微生物新增三个指导原则PPT精选课件
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《中国药典》微生物新增三个指导原则PPT精选课件
29
30
6.数据分析及偏差处理 参考USP(35)
(1)数据分析
应当对日常环境监测的数据进行分析和回顾， 通过收集的数据和趋势分析，总结和评估洁净实验 室是否受控，评估警戒限和纠偏限是否适合，评估 所采取的纠偏措施是否合适。
应当正确评估微生物污染，不仅仅关注微生物 数量，更应关注微生物污染检出的频率， 往往在一 个采样周期内同一环境中多点发现微生物污染，可 能预示着风险增加，应仔细评估。几个位点同时有 污染的现象也可能由不规范的采样操作引起， 所以 在得出环境可能失控的结论之前，应仔细回顾采样 操作过程。在污染后的几天对环境进行重新采样是 没有意义的， 因为采样过程不具有可重复性。
1000以下—药典各论中各种检查法的说明
-制剂通则、鉴别试验、色谱光谱法…
10xx
-1101 无菌检查法（二部 Ⅺ H） -1105/6/7 计数法/控制菌/限度标准（二部 Ⅺ J） -1121抑菌效力检查法（二部 ⅪⅩ N） -其它：异常毒性、热原、抗生素效价测定…
20xx —中药 30xx —生物制品相关测定/实验动物…
检测频次的调整 如果如果出现连续超过纠偏限和警戒限、 关键
区域内发现有污染微生物存在、 空气净化系统进行 任何重大的维修、 消毒规程改变、设备有重大维修 或增加、洁净室（区）结构或区域分布有重大变动、 引起微生物污染的事故、日常操作记录反映出倾向 性的数据时应考虑修改监测频次。
24
25
26
4.监测标准 参考GMP（2010），见表3、4
表3供试品的最少检验量供试品供试品装量每支供试品接入每种培养基的最少量液体制剂1ml1mlv40ml40mlv100mlv100ml全量半量但不得少于1ml20ml10但不少于20ml固体制剂m50mg50mgm300mg300mgm5gm5g全量半量150mg500mg半量生物制品生物制品的原液及半成品半量医疗器具外科用敷料棉花及纱布缝合线一次性医用材料带导管的一次性医疗器具如输液袋其他医疗器具取100mg或1cm3cm整个材料二分之一内表面积整个器具切碎或拆散开
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6.数据分析及偏差处理 参考USP(35)
(1)数据分析
应当对日常环境监测的数据进行分析和回顾， 通过收集的数据和趋势分析，总结和评估洁净实验 室是否受控，评估警戒限和纠偏限是否适合，评估 所采取的纠偏措施是否合适。
应当正确评估微生物污染，不仅仅关注微生物 数量，更应关注微生物污染检出的频率， 往往在一 个采样周期内同一环境中多点发现微生物污染，可 能预示着风险增加，应仔细评估。几个位点同时有 污染的现象也可能由不规范的采样操作引起， 所以 在得出环境可能失控的结论之前，应仔细回顾采样 操作过程。在污染后的几天对环境进行重新采样是 没有意义的， 因为采样过程不具有可重复性。
1000以下—药典各论中各种检查法的说明
-制剂通则、鉴别试验、色谱光谱法…
10xx
-1101 无菌检查法（二部 Ⅺ H） -1105/6/7 计数法/控制菌/限度标准（二部 Ⅺ J） -1121抑菌效力检查法（二部 ⅪⅩ N） -其它：异常毒性、热原、抗生素效价测定…
20xx —中药 30xx —生物制品相关测定/实验动物…
检测频次的调整 如果如果出现连续超过纠偏限和警戒限、 关键
区域内发现有污染微生物存在、 空气净化系统进行 任何重大的维修、 消毒规程改变、设备有重大维修 或增加、洁净室（区）结构或区域分布有重大变动、 引起微生物污染的事故、日常操作记录反映出倾向 性的数据时应考虑修改监测频次。
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4.监测标准 参考GMP（2010），见表3、4
表3供试品的最少检验量供试品供试品装量每支供试品接入每种培养基的最少量液体制剂1ml1mlv40ml40mlv100mlv100ml全量半量但不得少于1ml20ml10但不少于20ml固体制剂m50mg50mgm300mg300mgm5gm5g全量半量150mg500mg半量生物制品生物制品的原液及半成品半量医疗器具外科用敷料棉花及纱布缝合线一次性医用材料带导管的一次性医疗器具如输液袋其他医疗器具取100mg或1cm3cm整个材料二分之一内表面积整个器具切碎或拆散开
最新中国药典版微生物限度检查及发展趋势PPT课件
包括成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均 应检查。 菌种 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中 心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术， 以保证CMCC（B）44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B）26 003〕 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕 黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕
除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温 度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～ 28℃（；控制菌培养温度为35～37℃）。
检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2 为单位 报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
中国药品生物制品检定所
11
2010年版微生物限度检查法修订
2、附录107页，检验量 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；
中国药品生物制品检定所
5
1、方法和标准的修订与完善
对供试品的前处理和一些检验方法进行了完善；
具有明显的中国特色，与国际差距显著。
计数测定体系的差异：
难以操作，检验繁琐
需气菌总数=细菌数+霉菌及酵母菌？
1000
1000 100
参见：《美英欧药典微生物限度标准的浅析》，苏德模、胡昌 勤、马越，《中国药品标准》，2005年第3期
4
总需气菌、霉菌及酵母菌计数
样品10g或10ml+缓冲液至100ml 取1ml样品液
总需氧菌TSA, 35℃ ,48-72h
真菌SDA(PDA), 20-25℃ ,5-7d
除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温 度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～ 28℃（；控制菌培养温度为35～37℃）。
检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2 为单位 报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
中国药品生物制品检定所
11
2010年版微生物限度检查法修订
2、附录107页，检验量 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；
中国药品生物制品检定所
5
1、方法和标准的修订与完善
对供试品的前处理和一些检验方法进行了完善；
具有明显的中国特色，与国际差距显著。
计数测定体系的差异：
难以操作，检验繁琐
需气菌总数=细菌数+霉菌及酵母菌？
1000
1000 100
参见：《美英欧药典微生物限度标准的浅析》，苏德模、胡昌 勤、马越，《中国药品标准》，2005年第3期
4
总需气菌、霉菌及酵母菌计数
样品10g或10ml+缓冲液至100ml 取1ml样品液
总需氧菌TSA, 35℃ ,48-72h
真菌SDA(PDA), 20-25℃ ,5-7d
中国药典微生物限度PPT课件
微生物限度检查法
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
1
整体概述
概况一
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概况二
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5
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
9
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
6
1.1 Байду номын сангаас则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
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整体概述
概况一
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概况二
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1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
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1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
6
1.1 Байду номын сангаас则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
中国药典微生物检验主要增修订内容PPT课件共90页
20
方法验证
删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌 ——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰 氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中 对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革 兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好
21
方法验证
明确了验证试验所需样品量是供试品的检验量 而不是供试品的检验数量 删除了原：“ 将规定量供试品按… ” 修订为：
19
稀释液、冲洗液及其制备方法部分
在 原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
的基础上增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的适 宜的溶液作为稀释液、冲洗液。” ----扩大了稀释液、冲洗液的选择范围：满足供 试品的充分溶解或调节供试品的pH使适宜微生 物的生长、有利消除供试品的抑菌性，提高方 法检出率。
抑菌剂效力检查法指导原则 药品微生物实验室规范指导原则 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物检验替代方法验证指导原则
8
各论标准化
微生物限度检查各论
富马酸酮替芬滴鼻液 【微生物限度】 取本品10ml，用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成1：10的供试液。 细菌数、霉菌和酵母菌数：取供试液，采用培养基 稀释法（0.2ml/皿），依法检查（附录XI J），应符 合规定。 控制菌：取规定量供试液，依法检查（附录XI J）， 应符合规定。
复方庚酸炔诺酮注射液 【无菌】 取本品，加含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯
化钠－蛋白胨缓冲液稀释，经薄膜过滤法处理，用 pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液冲洗（每膜不少于 100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检 查（附录XI H），应符合规定。
11
各论标准化
甲硝唑注射液 【无菌】 取本品，经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠 －蛋白胨缓冲液分次冲洗（每膜不少于500ml），以生孢梭 菌为阳性对照菌，依法检查（附录XI H），应符合规定。 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠 【无菌】 取本品，加0.9%无菌氯化钠溶液溶解并制成每
方法验证
删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌 ——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰 氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中 对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革 兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好
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方法验证
明确了验证试验所需样品量是供试品的检验量 而不是供试品的检验数量 删除了原：“ 将规定量供试品按… ” 修订为：
19
稀释液、冲洗液及其制备方法部分
在 原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
的基础上增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的适 宜的溶液作为稀释液、冲洗液。” ----扩大了稀释液、冲洗液的选择范围：满足供 试品的充分溶解或调节供试品的pH使适宜微生 物的生长、有利消除供试品的抑菌性，提高方 法检出率。
抑菌剂效力检查法指导原则 药品微生物实验室规范指导原则 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物检验替代方法验证指导原则
8
各论标准化
微生物限度检查各论
富马酸酮替芬滴鼻液 【微生物限度】 取本品10ml，用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成1：10的供试液。 细菌数、霉菌和酵母菌数：取供试液，采用培养基 稀释法（0.2ml/皿），依法检查（附录XI J），应符 合规定。 控制菌：取规定量供试液，依法检查（附录XI J）， 应符合规定。
复方庚酸炔诺酮注射液 【无菌】 取本品，加含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯
化钠－蛋白胨缓冲液稀释，经薄膜过滤法处理，用 pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液冲洗（每膜不少于 100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检 查（附录XI H），应符合规定。
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各论标准化
甲硝唑注射液 【无菌】 取本品，经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠 －蛋白胨缓冲液分次冲洗（每膜不少于500ml），以生孢梭 菌为阳性对照菌，依法检查（附录XI H），应符合规定。 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠 【无菌】 取本品，加0.9%无菌氯化钠溶液溶解并制成每
最新中国药典版药品微生物检查ppt课件
中国药典2010版药品微生 物检查
我国微生物检查发展概况 抑菌剂效力检查法指导原则 药品微生物检验替代方法验证指导原则 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物实验室规范指导原则
2010-03
2
2010版药典起草的指导思想
一、以科学发展观为统领，服务于资源节约
型社会、环境友好型社会的要求；落实科学监 管理念，着力解决发展中的问题。
2010版中国药典，我国药品无菌、微生物限 度检查方法和标准在科学性、合理性以及与国际接 轨方面均有了长足进展，使我国药品无菌和微生物 限度检查步入了一个崭新的时期。
2010-03
9
抑菌剂效力检查法指导原则
2010-03
10
如果药物本身无足够的抗菌力，在正常储存和
使用过程中（尤其是多剂量制剂）可能发生微生物 污染和大量繁殖，对患者造成感染或引起药物变质。 最近我国白内障病人感染铜绿假单胞菌事件，以及 目前国外尚在调查的博士伦护理液的问题，足以提 醒我们此类制剂微生物污染的严重后果。在生产过 程中添加适合的抑菌剂可以保证药品在正常储存和 使用过程中的质量。
二、坚持继承、发展、创新的原则 三、坚持科学、实用、规范的原则 四、坚持质量可控性原则 五、坚持标准先进性原则 六、坚持标准发展的国际化原则
205版的基础上增订了白色念珠 菌的检查，规定眼用制剂按无菌制剂要求，明确用 于烧伤或严重创伤的外用剂型均按无菌要求。中药 橡胶膏剂首次提出不得检出致病菌检查要求。新增 抑菌效力检查法指导原则、药品微生物检验替代方 法验证指导原则、微生物限度检查法应用指导原则、 药品微生物实验室规范指导原则等，以缩小附录在 微生物检查方面与国外药典的差距。
2010-03
13
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂
我国微生物检查发展概况 抑菌剂效力检查法指导原则 药品微生物检验替代方法验证指导原则 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物实验室规范指导原则
2010-03
2
2010版药典起草的指导思想
一、以科学发展观为统领，服务于资源节约
型社会、环境友好型社会的要求；落实科学监 管理念，着力解决发展中的问题。
2010版中国药典，我国药品无菌、微生物限 度检查方法和标准在科学性、合理性以及与国际接 轨方面均有了长足进展，使我国药品无菌和微生物 限度检查步入了一个崭新的时期。
2010-03
9
抑菌剂效力检查法指导原则
2010-03
10
如果药物本身无足够的抗菌力，在正常储存和
使用过程中（尤其是多剂量制剂）可能发生微生物 污染和大量繁殖，对患者造成感染或引起药物变质。 最近我国白内障病人感染铜绿假单胞菌事件，以及 目前国外尚在调查的博士伦护理液的问题，足以提 醒我们此类制剂微生物污染的严重后果。在生产过 程中添加适合的抑菌剂可以保证药品在正常储存和 使用过程中的质量。
二、坚持继承、发展、创新的原则 三、坚持科学、实用、规范的原则 四、坚持质量可控性原则 五、坚持标准先进性原则 六、坚持标准发展的国际化原则
205版的基础上增订了白色念珠 菌的检查，规定眼用制剂按无菌制剂要求，明确用 于烧伤或严重创伤的外用剂型均按无菌要求。中药 橡胶膏剂首次提出不得检出致病菌检查要求。新增 抑菌效力检查法指导原则、药品微生物检验替代方 法验证指导原则、微生物限度检查法应用指导原则、 药品微生物实验室规范指导原则等，以缩小附录在 微生物检查方面与国外药典的差距。
2010-03
13
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂
中国药典2010版药品微生物检查指导原则
抑菌剂效力的测定可为生产过程中添加 抑菌剂提供指导，随着科学发展，新型抑 菌剂大量出现，抑菌剂效力的测定更为重 要；使生产者正确掌握产品中添加抑菌剂 的效力，有助于选择合适的抑菌剂，也可 对抑菌剂使用的正确性给予评价 。
12
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制 剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力， 同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌 剂的确定。
1980年版《药品卫生检验方法》中收载了破伤风梭 菌检查法，并对用于深部组织、创伤、溃疡及阴道用药开 始检查破伤风梭菌。至此形成了我国药品微生物限度检查 法及限度标准的基本框架。
5
中国药典1990年版第二增补本收栽20个化 学药品种的微生物限度标准。中国药典1995年版 收载了微生物限度检查法，对少数剂型收载了微生 物限度。按剂型制订微生物限度标准，是根据我国 国情决定的。从发展看，以品种来制定标准较为合 理。
我国药品微生物限度检查起步较 晚，始于1972年。
4
1972年我国开展药品微生物污染检查工作，经几年 的调查研究，1978卫生、化工、商业三部联合颁发了我国 第一个“药品卫生标准”。该标准主要为中药、化学药， 按丸、片、散、冲及糖浆、合剂、水剂等剂型规定了微生 物限度。包括细菌总数、霉菌总数；口服药品1g或1ml不 得检出大肠埃希菌、沙门菌，外用药品1g或1ml不得检出 铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌；口服药品不得检出活螨。
7
2010版药典起草的基本原则
一、坚持保障药品质量、维护人民 健康的原则
二、坚持继承、发展、创新的原则 三、坚持科学、实用、规范的原则 四、坚持质量可控性原则 五、坚持标准先进性原则 六、坚持标准发展的国际化原则
8
2010版药典在2005版的基础上增订了白色念珠 菌的检查，规定眼用制剂按无菌制剂要求，明确用 于烧伤或严重创伤的外用剂型均按无菌要求。中药 橡胶膏剂首次提出不得检出致病菌检查要求。新增 抑菌效力检查法指导原则、药品微生物检验替代方 法验证指导原则、微生物限度检查法应用指导原则、 药品微生物实验室规范指导原则等，以缩小附录在 微生物检查方面与国外药典的差距。
12
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制 剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力， 同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌 剂的确定。
1980年版《药品卫生检验方法》中收载了破伤风梭 菌检查法，并对用于深部组织、创伤、溃疡及阴道用药开 始检查破伤风梭菌。至此形成了我国药品微生物限度检查 法及限度标准的基本框架。
5
中国药典1990年版第二增补本收栽20个化 学药品种的微生物限度标准。中国药典1995年版 收载了微生物限度检查法，对少数剂型收载了微生 物限度。按剂型制订微生物限度标准，是根据我国 国情决定的。从发展看，以品种来制定标准较为合 理。
我国药品微生物限度检查起步较 晚，始于1972年。
4
1972年我国开展药品微生物污染检查工作，经几年 的调查研究，1978卫生、化工、商业三部联合颁发了我国 第一个“药品卫生标准”。该标准主要为中药、化学药， 按丸、片、散、冲及糖浆、合剂、水剂等剂型规定了微生 物限度。包括细菌总数、霉菌总数；口服药品1g或1ml不 得检出大肠埃希菌、沙门菌，外用药品1g或1ml不得检出 铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌；口服药品不得检出活螨。
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2010版药典起草的基本原则
一、坚持保障药品质量、维护人民 健康的原则
二、坚持继承、发展、创新的原则 三、坚持科学、实用、规范的原则 四、坚持质量可控性原则 五、坚持标准先进性原则 六、坚持标准发展的国际化原则
8
2010版药典在2005版的基础上增订了白色念珠 菌的检查，规定眼用制剂按无菌制剂要求，明确用 于烧伤或严重创伤的外用剂型均按无菌要求。中药 橡胶膏剂首次提出不得检出致病菌检查要求。新增 抑菌效力检查法指导原则、药品微生物检验替代方 法验证指导原则、微生物限度检查法应用指导原则、 药品微生物实验室规范指导原则等，以缩小附录在 微生物检查方面与国外药典的差距。
《中国药典》2010年版附录通用检测方法和指导原则主要增修订内容
LC/MS 2、农药品种 由24种（其中有机氯9、拟除虫菊酯3和有机
磷12）扩充为色谱法124种（其中有机氯和拟除虫菊57、 有机磷54和氨基甲酸酯13），按色-质联用法统计则为 128种。 3、测定方法分两个层次： 一为色谱法（GC、HPLC）
方法包括样品前处理（提取、净化）、色谱测定、 色谱验证和质谱确证 二为色-质联机法（GC/MS、LC/MS） 方法包括样品前处理（提取、净化）、色-质联机测定
要求
四、主要增订项目内容
a、能区分水中的有机碳与无机碳，并能排除无机碳的 干扰
b、应满足系统适用性试验要求 85%＜ （rss-rw）/（rs-rw）×100＜115%
c、具有足够的灵敏度（0.05mg/L） （3）TOC测量的意义 控制化学污染与微生物污染
A TOC measurement is not a replacement test for endotoxin or microbiological control.While there can be a qualitative relationship between a food souce (TOC) and microbiological activity.there is no direct numerical correlation.
四、主要增订项目内容
❖ 制药用水 1、生产工艺 纯化水 饮用水经蒸馏、离子交换、反渗透等方法 注射用水 纯化水经蒸馏 灭菌注射用水 注射用水按注射剂生产工艺制备 2、修订后质量标准增二项检查 电导率检查 新增附录用于检查各种阴阳离子的污染程度 总有机碳检查 控制有机污染（有机小分子、微生物）
修订附录： （1）除控制水中TOC外，增加了对制水系统的流程监控作用 （2）对TOC测量的各种原理和方法不作任何褒贬，只强调技术
磷12）扩充为色谱法124种（其中有机氯和拟除虫菊57、 有机磷54和氨基甲酸酯13），按色-质联用法统计则为 128种。 3、测定方法分两个层次： 一为色谱法（GC、HPLC）
方法包括样品前处理（提取、净化）、色谱测定、 色谱验证和质谱确证 二为色-质联机法（GC/MS、LC/MS） 方法包括样品前处理（提取、净化）、色-质联机测定
要求
四、主要增订项目内容
a、能区分水中的有机碳与无机碳，并能排除无机碳的 干扰
b、应满足系统适用性试验要求 85%＜ （rss-rw）/（rs-rw）×100＜115%
c、具有足够的灵敏度（0.05mg/L） （3）TOC测量的意义 控制化学污染与微生物污染
A TOC measurement is not a replacement test for endotoxin or microbiological control.While there can be a qualitative relationship between a food souce (TOC) and microbiological activity.there is no direct numerical correlation.
四、主要增订项目内容
❖ 制药用水 1、生产工艺 纯化水 饮用水经蒸馏、离子交换、反渗透等方法 注射用水 纯化水经蒸馏 灭菌注射用水 注射用水按注射剂生产工艺制备 2、修订后质量标准增二项检查 电导率检查 新增附录用于检查各种阴阳离子的污染程度 总有机碳检查 控制有机污染（有机小分子、微生物）
修订附录： （1）除控制水中TOC外，增加了对制水系统的流程监控作用 （2）对TOC测量的各种原理和方法不作任何褒贬，只强调技术
《中国药典》2015版微生物新增三个指导原则PPT参考课件
1、计数结果
2、控制菌检 查结果
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一、概述
1000以下—药典各论中各种检查法的说明
-制剂通则、鉴别试验、色谱光谱法…
10xx
-1101 无菌检查法（二部 Ⅺ H） -1105/6/7 计数法/控制菌/限度标准（二部 Ⅺ J） -1121抑菌效力检查法（二部 ⅪⅩ N） -其它：异常毒性、热原、抗生素效价测定…
《中国药典》2015版 微生物新增指导原则
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主要内容
一、概述 二、微生物新增三个指导原则 三、小结
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一、概述
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样品
检验
结果 判断
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一、概述
检查 标准
检测 方法
结果 判断
相互关联，相互影响，不可分割
1、新版变化 2、标准比较
1、方法变化 2、方法验证
（4）人员档案
所有人员的培训、考核内容和结果均应记录归档。
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确认
确认目的：确保操作顺畅，保证设备系统的运行能 力和可靠性。
确认时间：初次使用的洁净实验室应进行参数确认， 物理参数的测试应当在微生物监测方案实施之前。
确认参数：物理参数、空气悬浮粒子和微生物 --物理参数：高效空气过滤器完整性，气流组织、空
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三、9205 药品洁净实验室微生物监测和控 制指导原则
本指导原则是用于指导药品微生物检验用的洁净室 等受控环境微生物污染情况的监测和控制。
药品洁净实验室的洁净级别按空气悬浮粒子大小和 数量的不同参考现行 “药品生产质量管理规范”分 为 A、B、C、D 4 个级别。
《中国药典》2020版微生物增修订内容 教学PPT课件
• 制备过程：
选择替代
增大稀释
•
取
普
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营匀速养浆 破琼仪 碎脂高 ，培
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3
3
g
加
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5
3
8
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m L ， p H机=7械，破加碎热煮 沸 3次，分装热试水管，内但， 121℃ 灭菌1了5 m1:i6n0。的枯
草 芽 孢 杆化菌学菌结种构在营 养琼脂培养热基水活会化一培养 3代以 上，再供划试线液接进种
灭菌用生物指示剂指导原则 生物指示剂耐受性检查指导原则
DNA序列技术指导原则 标准核酸序列建立指导原则
灭菌法 药品洁净实验室微生物检测和控制指导原则
无菌检查用隔离系统验证指导原则 无菌检查法
非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 非无菌产品微生物限度标准 抑菌效力检查法
药品微生物实验室质量管理指导原则 微生物鉴定指导原则
试验。
2008年， 在《中 国药典》 2010年 版的增 修订
存在争 议
4:培养基适用性检查中的对照
经过第九届药典委员会微 生物专业委员会的反复讨论， 提出以统一的、经过充分评价 和验证过的对照培养基替代需 要由每个实验室分散评价的 “之前验证过的培养基”，微 生物实验室以对照培养基进行 培养基适用性比较试验，中国 食品药品检定研究院承担对照 培养基的研制任务。
1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
3供试品检查——检验量
中国药典 CP
ICH其他成员 国USP/JP/EP
微生物计数法区别
1微生物检验替代方法； 2菌悬液稀释剂； 3孢子悬浮液制备； 4培养基适用性检查中的对照； 5 0.1%聚山梨酯80的制备； 6平皿法计数原则
《中国药典》2015版微生物新增三个指导原则
一、概述
80xx —试剂和标准物质 90xx —指导原则（二部附录 ⅪⅩ…）
-9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则 -9202 非无菌药品微生物限度检查法指导原则 -9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 -9204 微生物鉴定指导原则（new） -9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（new） -9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（new）
பைடு நூலகம்
汽化过氧化氢发生器
无菌传递舱
隔离器安装位置的选择
无菌检查用隔离器安装环境的洁净度要求 建议 不低 于我国现行GMP 中 D 级空气洁净度要求，安装隔离 器的房间应限制无关人员出入。 应保证隔离器安装 地点周围有足够的空间， 以便于隔离器的移动、物 品的输送和正常维护。
隔离系统验证
1 ．操作验证 2 ．隔离器完整性验证 3 ．灭菌验证 4 ．灭菌循环验证 5. 隔离器内部洁净度验证 6. 仪器仪表的验证
培养基：一般采用胰酪大豆胨琼脂培养基 （TSA） ， 必要时可加入适宜的中和剂 ，当监测结 果有疑似真菌或考虑季节因素影响时， 可增加沙氏 葡萄糖琼脂培养基(SDA)。
培养时间： TSA: SDA：
ChP(2015) 3-5天 5-7天
GB/T16293-2010 不少于2天 不少于5天
3.监测频次及监测项目 参考GMP（2010）及GB50073-2013，见表2 检测频次的调整 如果如果出现连续超过纠偏限和警戒限、 关键 区域内发现有污染微生物存在、 空气净化系统进行 任何重大的维修、 消毒规程改变、设备有重大维修 或增加、洁净室（区）结构或区域分布有重大变动、 引起微生物污染的事故、日常操作记录反映出倾向 性的数据时应考虑修改监测频次。
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-检验技术培训（无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、 注平板、菌落计数、菌种的转种、传代和保藏、微 生物检查方法和鉴定基本技术等）
-生物安全培训
-继续教育培训
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（3）人员技能
检验人员：必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的 和结果评价。
管理者：专业技能和经验水平应与他们的职责范围相 符，如：管理技能、实验室安全、试验安排、预算、 实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调查、技 术报告书写等。
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物理参数测试方法参照《洁净室施工及验收规范》 的现行国家标准（GB50591-2010）中附录方法 --高效空气过滤器完整性： 附录 D3 高效空气过滤器现场扫描检漏方法 --气流组织：附录 E12 气流的检测 --平均风速：附录 E1 风量和风速的检测 --压差：附录 E2 静压差的检测 --温度、相对湿度：附录 E5 温湿度的检测
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2、监测方法： 悬浮粒子： 《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测 试方法》 （GB/T16292-2010） 浮游菌： 《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方 法》(GB/T16293-2010) 沉降菌： 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方 法》(GB/T16294-2010)
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2.监测方法 表面微生物（环境、设备和人员） 接触碟法：将充满规定的琼脂培养基的接触碟对规则表面或平面
1000以下—药典各论中各种检查法的说明
-制剂通则、鉴别试验、色谱光谱法…
10xx
-1101 无菌检查法（二部 Ⅺ H） -1105/6/7 计数法/控制菌/限度标准（二部 Ⅺ J） -1121抑菌效力检查法（二部 ⅪⅩ N） -其它：异常毒性、热原、抗生素效价测定…
20xx —中药 30xx —生物制品相关测定/实验动物…
确认时间：初次使用的洁净实验室应进行参数确认， 物理参数的测试应当在微生物监测方案实施之前。
确认参数：物理参数、空气悬浮粒子和微生物 --物理参数：高效空气过滤器完整性，气流组织、空
气流速（平均风速） ，换气次数、压差、温度和相 对湿度等。 --微生物：浮游菌、沉降菌、表面微生物 测试条件：模拟正常检测条件
三、9205 药品洁净实验室微生物监测和控 制指导原则
本指导原则是用于指导药品微生物检验用的洁净室 等受控环境微生物污染情况的监测和控制。
药品洁净实验室的洁净级别按空气悬浮粒子大小和 数量的不同参考现行 “药品生产质量管理规范”分 为 A、B、要求、 初次使用的洁净实验室参数确认、 微生物监测方法、 监测频次及监测项目、 监测标准、 警戒限和纠偏限、 数据分析及偏差处理、 微生物鉴定和微生物控制。
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空气悬浮粒子和微生物的确认： 见“监测”项下。
物理参数建议标准： 参照GMP(2010)、FDA(ISPE，换气次数)
最长监测周期： 参照GB,详见表1
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监测
1、监测内容 空气悬浮粒子数（非生物活性） 微生物（有生物活性） --环境浮游菌 --环境沉降菌 --表面微生物（关键检测台面、人员操作服及 5指手套等）
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人员
从事药品洁净实验室微生物监测和控制的人员应符 合现行《中国药典》通则中“药品微生物实验室质 量管理指导原则（通则 9203）”的相关要求。
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(9203)药品微生物实验室质量管理指导原则
（1）人员专业背景
应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。
（2）人员培训
-岗位和职责培训
-设备操作培训
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微生物的鉴定程序
微生物鉴定的基本程序包括分离纯化和鉴定，鉴定 时，一般先将待检菌进行初步的分类。 1、待检菌的分离纯化 微生物鉴定的第一步是待检培养物的分离纯化。 2、初筛试验 3、表型微生物鉴定 4、基因型微生物鉴定
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微生物鉴定方法的确认 系统发育的相关内容 溯源分析
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实验室：应通过参加内部质量控制、 能力验证或使用 标准菌株等方法客观评估检验人员的能力，必要时 对其进行再培训并重新评估。当使用一种非经常使 用的方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检 测人员的操作技能。
（4）人员档案
所有人员的培训、考核内容和结果均应记录归档。
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确认
确认目的：确保操作顺畅，保证设备系统的运行能 力和可靠性。
《中国药典》2015版 微生物新增指导原则
1
主要内容
一、概述 二、微生物新增三个指导原则 三、小结
2
一、概述
样品
检验
结果 判断
3
一、概述
检查 标准
检测 方法
结果 判断
相互关联，相互影响，不可分割
1、新版变化 2、标准比较
1、方法变化 2、方法验证
1、计数结果
2、控制菌检 查结果
4
一、概述
5
一、概述
80xx —试剂和标准物质 90xx —指导原则（二部附录 ⅪⅩ…）
-9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则 -9202 非无菌药品微生物限度检查法指导原则 -9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 -9204 微生物鉴定指导原则（new） -9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（new） -9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（new）
进行取样， 然后置合适的温度下培养一定时间并计数，每碟取 样面积约为 25 cm2 ，微生物计数结果以 cfu/碟报告； 擦拭法：用于不规则表面的微生物监测，特别是设备的不规则表 面。擦拭法是采用合适尺寸的无菌模板或标尺确定擦拭的面积， 取样后，将拭子置合适的缓冲液或培养基中，充分振荡，然后 采用适宜的方法计数，每个拭子取样面积为约 25 cm2 ，微生 物计数结果以 cfu/拭子报告。 表面微生物测定应在实验结束后进行。
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二、9204微生物鉴定指导原则
本指导原则为非无菌产品微生物限度控制菌检查中 疑似菌的鉴定， 以及药物原料、辅料、制药用水、 中间体、终产品和环境中检出微生物的鉴定提供指 导。当微生物的鉴定结果有争议时， 以 《伯杰氏系 统细菌学手册》 ( 《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》)现行版的鉴定结果为准。