水质_粪大肠菌群测定
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复
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【实用版】
目录
一、引言
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与标准
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的测定方法
四、结果报出问题的解决办法
五、结论
正文
一、引言
近期，关于地表水和地下水中粪大肠菌群及总大肠菌群检出限及结果报出的问题引起了广泛关注。
针对这一问题，本文将提供一些解答，以期为相关工作者提供参考。
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与标准
粪大肠菌群和总大肠菌群是评价水质卫生安全的重要指标。
在我国，粪大肠菌群及总大肠菌群的检出限标准如下：
1.地表水：粪大肠菌群检出限为 200 MPN/L，总大肠菌群检出限为100 MPN/L；
2.地下水：粪大肠菌群检出限为 100 MPN/L，总大肠菌群检出限为
50 MPN/L。
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的测定方法
目前，常用的粪大肠菌群及总大肠菌群检出限测定方法有多管发酵法和滤膜法。
其中，多管发酵法的检出限是根据统计学方法计算出来的MPN(最可能数) 值，而非试验方法直接得出的结果。
四、结果报出问题的解决办法
在实际监测过程中，可能会出现检出限附近的结果。
针对此类情况，建议采取以下措施：
1.重复试验：对疑似检出限附近的结果进行重复试验，以确认是否为误差导致的误报；
2.采用多种方法：同时使用多管发酵法和滤膜法等不同方法进行检测，以提高结果的可靠性；
3.参考国家标准：按照国家标准进行检测，确保结果的准确性。
五、结论
粪大肠菌群及总大肠菌群检出限和结果报出问题是水质监测中常见
的问题。
酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证
酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证摘要：本文对《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》HJ1001 -2018、《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750-2006进行了方法验证，以评价该两种检测方法是否适用于水中粪大肠菌群的检测工作，以确保该方法能够满足水中粪大肠菌群的测定。
关键词：粪大肠菌群；质控样品。
引言：试样与固定底物酶底物法（DST）采用大肠菌群能产生β—半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色的原理，来判断水样中是否含耐热大肠菌群，大肠菌群的培养温度是44.5℃。
1.测定方法与参数（注：方法为酶底物法法，参数为质控样品）2.仪器与设备2.1恒温培养箱2.2冰箱2.3高压蒸汽灭菌锅2.4烘箱2.5量筒2.6吸管2.7程控定量封口机2.8 51孔或97孔定量盘2.9无菌水样瓶（100mL）2.10阳性比色盘2.11干热灭菌器3培养基和试剂3.1无菌水3.2科立德（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基。
4.样品的采集和保存4.1采样前准备：4.1.1采样瓶：高压灭菌瓶。
4.2样品采样及注意事项4.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样时，均要小心开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。
4.2.2在采集江，河湖，库，地表水时，可握住瓶子底部直接将采样瓶插入水中，约距水面10-15厘米时，瓶口朝来水方向，使水样灌入瓶内。
如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直至充满水样为止。
采样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。
采样后，采样瓶内上不应留有一些空隙，一边检验前充分混匀水样。
4.2.3从自来水龙头采集样品时，不要选用漏水的水龙头，采水前可先将水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌或用75﹪酒精溶液消毒水龙头，然后将水龙头打开，放水数分钟后除去水管中的滞流杂质。
采水时控制水流速度小心接入瓶内。
4.2.4在同一采样点进行分层采样时，应自上向下进行，以免不同层次的干扰；同一采样点与理化检测项目同时采样时，应先采集细菌等检验样品，否则样品可能被污染，采样前，不得用水样刷洗采样瓶。
多管发酵法测定水质中粪大肠菌群 方法验证11
检测分析方法验证报告报告编号:xxxxxxxx方法名称：xxxxxxxxx验证人员：xxx xxx审核人员：xxx验证日期：xxxx年xx月xx日xxxxxx有限公司水质粪大肠菌群的测定多管发酵法一、方法依据本方法依据《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》（HJ 347.2-2018）用多管发酵法测定水中粪大肠菌群，适用于地表水、地下水、生活污水以及工业废水的粪大肠菌群测定。
本方法的检出限为，12管法为3CFU/L；15管法为20MPN/L。
二、方法原理将待测样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产酸能够使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产气则由倒管指示。
将初发酵中产酸产气的试管进行复发酵接种，44.5℃复发酵培养，复发酵培养基中的胆盐三号能够抑制革兰氏阳性菌生长，最后产气的细菌确定为粪大肠菌群。
通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
样品采集时可加入硫代硫酸钠溶液消除活性氯对样品的干扰，或加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除重金属离子对样品的干扰。
参加验证的人员情况登记表使用仪器情况登记表使用试剂及溶剂登记表三、分析步骤3.1样品稀释及接种3.1.1 15管法3.1.1.1本次15管法选用的待检样品为xx水源水，其接种量分别为10mL、1mL、0.1mL、,在5支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入样品10mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入样品1mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入1：10稀释样品1mL。
在做10倍梯度稀释时，按无菌操作吸取10mL充分混匀的待稀释样品，加入到盛有90mL 无菌水的三角瓶中。
3.1.1.2阳性试验：挑取一粒大肠埃希氏菌（ATCC 25922）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数监测技术规范
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数监测技术规范1 范围本文件规定了水中总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数的术语和定义、采样技术要求、分析技术要求、质量控制要求、监测记录、注意事项等技术内容。
本文件适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中总大肠菌群、粪大肠菌群和细菌总数的监测。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 14848 地下水质量标准GB 3838 地表水环境质量标准HJ 1000 水质细菌总数的测定平皿计数法HJ 1001 水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法HJ 164 地下水环境监测技术规范HJ 347.1 水质粪大肠菌群的测定滤膜法HJ 347.2 水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 630 环境监测质量管理技术导则HJ 755 水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范HJ 91.1 污水监测技术规范3 术语和定义3.1 总大肠菌群 total coliforms参照HJ 755定义为：37℃培养，24 h内能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌。
3.2 粪大肠菌群 fecal coliforms又称耐热大肠菌群（thermmotolerant coliforms ），参照HJ 755定义为：44.5℃培养24 h，能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽抱杆菌。
3.3 细菌总数 total bacteria参照HJ 1000定义为：36℃培养48 h，样品在营养琼脂上所生长的需氧菌和兼性厌氧菌菌落总数。
4 采样技术要求14.1 样品采集4.1.1 地表水附近有桥梁的河流断面宜在桥上采样，湖库点位和水体较深的河流断面宜采用船只采样，水深较浅的河流断面宜涉水采样，按照HJ/T 91的相关规定执行。
方法验证水质的粪大肠菌群
方法验证报告测试方法：HJ 347.2-2018测试项目：水质粪大肠菌群编写：日期：审核：日期：批准：日期：水质粪大肠菌群的方法验证1.目的确认所采用的方法适合于在本实验室进行对水质的粪大肠菌群的测定，照此方法检测和检验条件进行水样的粪大肠菌群检测，能保证检验结果的准确、可靠。
2.原理和范围2.1原理将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。
44℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。
通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
2.2范围本法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
3.主要仪器3.1 净化工作台。
3.2 立式高压蒸汽灭菌器。
3.3恒温恒湿培养箱。
3.4电热恒温鼓风干燥箱。
3.5电子天平。
3.6酒精灯、试管架、试管（带塞子）、平皿、小倒管、三角烧瓶（带塞子）、刻度吸管、采样瓶、接种环。
4.主要试剂乳糖蛋白胨培养液、EC培养液。
5.检验步骤5.1样品稀释与接种5.1.1 15管法将样品充分混匀后，在5支装有已灭菌5ml三倍乳糖蛋白胨培养液的大试管中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品0.1ml。
对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml 、1ml 、0.1ml 。
当样品接种量小于1ml 时，应将样品制成稀释样品后使用。
按无菌操作要求方式吸取10ml 充分混匀的样品，注入盛有90ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成1：10稀释样品。
多管发酵法测定水质 粪大肠菌群应注意的问题
LOW CARBON WORLD2020/12节能环保多管发酵法测定水质粪大肠菌群应注意的问题庄小玲（漳州市漳浦环境监测站，福建漳州363200）【摘要】《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法渊HJ347.2—2018）》是检测粪大肠菌群的常用标准方法。
本文从恒温培养箱校准确认、培养基制备、样品采集、样品保存和样品分析等实验全过程中应注意的问题提出个人的几点体会,供大家探讨。
【关键词】粪大肠菌群；多管发酵法；实验分析【中图分类号】X832【文献标识码】A【文章编号］2095-2066（2020）12-0019-02粪大肠菌群是指在44.5益下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群，主要来源于人畜的粪便。
通过对粪大肠菌群的测定，可以了解水体受粪便污染的程度。
粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法、滤膜法、酶底物法、纸片快速法。
目前环境监测机构一般主要采用行业标准《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法（HJ347.2—2018）》多管发酵法测定粪大肠菌群，该标准方法于2018年12月26日通过生态环境部批准，自2019年6月1日起实施叫本文从恒温培养箱校准确认、培养基制备、样品采集、样品保存和样品分析等实验全过程中应注意的问题提出个人的几点体会,供大家探讨。
1恒温培养箱校准确认多管发酵法测定粪大肠菌群标准方法中仪器设备规定恒温培养箱的允许温度偏差37±0.5益、44±0.5益。
笔者实验室委托市计量所对恒温培养箱37.0益、44.5益两个温度进行校准（依据国家质量监督检验检疫总局发布的JJF1101—2003 环境试验设备温度、湿度校准规范）,校准结果如表1所示，计量所对恒温培养箱9个校准点进行校准，校准证书给出温度偏差和温度均匀度两个参数。
温度偏差反映的是恒温培养箱设备显示温度与中心点n次测量的平均值的差值，可以通过改变设定值温度,使之被修正;均匀度反映的是各校准点测得的最高温度和最低温度之差的算术平均值，可以对恒温培养箱局部限制使用。
水质检测用粪大肠菌群定量标准菌株介绍
水质检测用粪大肠菌群定量标准菌株
根据2019年6月1日正式实施的HJ/T 347.2-2018《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》标准要求，实验室在样品检测和培养基验证过程中，均需使用阳性对照菌和阴性对照菌，即浓度为300～3000MPN/L的粪大肠菌群阳性菌株(如大肠埃希氏菌Escherichia coli)和阴性菌株(如产气肠杆菌Enterobacter aerogenes)。
以上提到的对照菌，可直接使用国家级菌种中心生产加工的定量标准菌株产品。
《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》标准菌株和质控样品大肠埃希氏菌定量标准菌株CICC 10389-HQA和产气肠杆菌定量标准菌株CICC 10293-HQA产品，浓度范围300～3000MPN/L，附带证书，实验室水化溶解后即可使用。
定量标准菌株产品和产品证书封面。
水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 多管发酵法
水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定多管发酵法1. 原理总大肠菌群和粪大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。
试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2. 仪器(1)高压蒸气灭菌器。
(2)恒温培养箱、冰箱。
(3)生物显微镜、载玻片。
(4)酒精灯、3mm接种环。
(5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶、移液枪。
3. 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。
3.3伊红美蓝培养基：①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解。
再加2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL 水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。