2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察 (2)
实验四微生物菌落的观察和细菌的运动性观察21页PPT
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
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29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
动性观察
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
实验四 鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
一、实验目的及要求
1、了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色 的方法； 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。
二、实验原理
细菌的鞭毛很纤细，直径一般为0.1-0.2μm， 只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用 特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看 到它。 鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染 剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗， 然后再进行染色。 常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等 配制而成。
四、实验方法
（一）鞭毛染色（硝酸银染色法）
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中（洗 衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取 出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在 火焰上烧去酒精。
2.菌液的制备：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前 应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上连续移 接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中 培养12-16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌 液数环，移至盛有1-2mL无菌水的试管中，使菌液呈轻度混 浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜 太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。
3.制片：吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾 斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。 涂片放空气中自然干燥。 4.染色： ①滴加A液，染3-5min； ②用蒸馏水充分洗净 A 液； ③用B液冲去残水，再加 B 液于玻片上覆盖染色 数秒至1min，必要时在酒精灯微火加热直至显 褐色，立即用蒸馏水洗，自然干燥。 5.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜 检查。结果：菌体呈深褐色， 鞭毛呈浅褐色。
细菌鞭毛染色及运动性观察
细菌鞭毛染色及运动性观察摘要：实验包括用压滴法制片对细菌的运动性观察；用硝酸银染色法对细菌鞭毛进行染色及观察。
学习用压滴法观察细菌的运动性，掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征关键词：压滴法运动性硝酸银染色法鞭毛前言：鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。
鞭毛的有无，数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
它是原核生物实现其趋性的最有效方式，具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向的泳动。
鞭毛的直径一般20—30nm，只有用电镜才能直接观察到。
若用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用适合的方法进行染色。
1材料和方法1.1材料1.1.1菌种枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1.2 溶液和试剂无菌水稀释美兰95%乙醇硝酸银鞭毛染液香柏油二甲苯1.1.3 仪器和其他用品普通光学显微镜擦镜纸载玻片酒精灯双层瓶接种环滴管试管夹1.2方法1.2.1压滴法（1）制片：取一个干净的载玻片，中央滴加一滴无菌水，无菌条件下取适量菌种进行涂片。
加一滴稀释美兰与之混合均匀，将盖玻片一边与菌液接触，慢慢放下盖玻片。
（2）镜检：迅速用油镜镜检。
1.2.2鞭毛染色（1）载玻片的准备：将干净的载玻片置于95 ％乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。
（2）制片：在载玻片的一端滴一滴蒸馏水,用接种环挑取少许备用的菌种（注意不要挑上培养基）,在载玻片的水滴中轻沾几下。
将载玻片稍倾斜,使菌液随水滴缓慢流到另一端,然后平放在空气中自然干燥。
（3）染色：涂片干燥后滴加A液染5分钟,用蒸馏水冲洗,用B液冲去残水。
洗净A液滴加B液覆盖1min （其间可将玻片在酒精灯上稍加热）然后用蒸馏水冲洗,自然干燥。
（4）镜检：油镜镜检。
2结果与分析2.1 实验结果压滴法观察细菌运动性时可以看到菌体不规则快速运动，有些为转动。
鞭毛染色的两个片子油镜镜检时，找到一处菌体聚集的地方。
实验四_细菌的鞭毛染色
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
基体
L环
P环
S环 M环ຫໍສະໝຸດ 鞭毛钩 鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察
鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm
光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
细菌的鞭毛染色实验要求了解细菌鞭毛染色的应用鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛周生鞭毛鞭毛的结构及其运动机制基体鞭毛钩鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法电子显微镜直接观察鞭毛长度
细菌的鞭毛染色
实验要求
• 掌握细菌鞭毛染色的一般过程 • 了解细菌鞭毛染色的应用
单端鞭毛
端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
细菌运动性的观察2
三、实验器材 1、菌种 培养24~36h的枯草芽孢杆菌菌悬液。 2、仪器或其他用具 载玻片、盖玻片、滴管、显微镜、 擦镜纸。
四、实验步骤 1、制片 用滴管取菌悬液一小滴，置于干净的载玻片中央， 以倾斜法加上盖玻片（勿使产生气泡） 2、镜检 将载玻片置显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察细菌 运动的情况。
实验三 细菌运动性的观察
一、目的要求 1、学习水浸片的制作方法。 2、观察细菌的运动性。
二、基本原理 具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向 的泳动。幼龄菌运动活泼，老龄菌运动性差或失去鞭毛不能 运动。观察细菌的运动性可采用水浸片法。在显微镜下观察 时，应减弱光照强度，并注意区分是细菌的真运动，还是因 液体流动引起细菌随水流而动，或呈现无规则、原位颤动的 布朗运动
五、实验察细菌运动时，为何应减弱光线 （2） 细菌的运动与布朗运动有何区别
实验三__鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
三、实验器材
1. 活材料：培养 活材料：培养12-16h小时的普通变形杆菌）。 小时的普通变形杆菌）。 小时的普通变形杆菌 2. 标本片：单鞭毛（绿脓杆菌），周鞭毛（伤寒 标本片：单鞭毛（绿脓杆菌），周鞭毛（ ），周鞭毛 杆菌）） 杆菌）） 3. 试剂：生理盐水、香柏油、二甲苯。 试剂：生理盐水、香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、 水纸、接种环，显微镜等。 水纸、接种环，显微镜等
五、实验作业： 实验作业：
1. 绘出鞭毛菌（绿脓和伤寒杆菌）的形态图 绘出鞭毛菌（绿脓和伤寒杆菌）的形态图. 2. 用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌菌是否具 有鞭毛，要注意哪些环节？ 有鞭毛，要注意哪些环节？ 3. 悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？如 悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？ 果发现显微镜视野内大量细菌向一个方向 流动，你认为是什么原因造成的？ 流动，你认为是什么原因造成的？
A染液（媒染剂）染色4-6分钟→蒸馏水洗→ 再 染液（媒染剂）染色 分钟→ 染液 分钟 蒸馏水洗→ 染液（ 用B染液（硝酸银）冲洗残水→ 然后使 液充满 染液 硝酸银）冲洗残水→ 然后使B液充满 载片→ 酒精灯加热至冒气（微热） 载片→ 酒精灯加热至冒气（微热），30-60秒 秒 加热时应随时补充蒸发掉的染料， （ 加热时应随时补充蒸发掉的染料 ， 不可使玻 片出现干涸区） 蒸馏水洗、自然干燥→ 镜检. 片出现干涸区）→蒸馏水洗、自然干燥→ 镜检
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开； 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 易脱落，造成染色失败。 鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干， ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 影响观察。 染液染完后用蒸馏水（ ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 、 染液染完后用蒸馏水 自来水效果差） 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到， 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 效果。 染液后， ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 染液后 将玻片稍加热（但不能太热， 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察(2)
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭 毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。
2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥；
2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。
在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面）
2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。
2、运动性的观察 （1）、压滴法
a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍）
（2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征
细菌运动性的观察
实验四细菌运动性的观察姓名：贾晓霖学号：201000140032班级：生科10.1同组成员：李江湲程子修洪钧烨一、实验目的1、学习压滴法观察细菌运动性。
2、学习鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。
二、实验原理鞭毛是细菌的纤细丝状“运动”器官。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能直接观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛的着生方式多样，有一端单生，如铜绿假单胞菌；两端单生；一端丛生，如荧光假单胞菌；两端丛生，如蔓延螺菌以及周生，如大肠杆菌等。
三、实验器材1、所需菌种枯草芽孢杆菌（周生）铜绿假单胞菌（端生）2、溶液和试剂0.01%美蓝染液，95%乙醇溶液，鞭毛染色液A，鞭毛染色液B。
3、仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，烧杯，试管架，镊子等。
四、实验内容a)压滴法（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、涂片在载玻片中央滴一小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀。
3、染色、镜检加0.01%美蓝染液染色，之后加盖玻片放于油镜下观察。
附：实验照片b)鞭毛染色（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、浸泡将适量95%乙醇倒入烧杯，将洗净晾干的载玻片放入有乙醇的烧杯中，浸泡5min。
3、干燥将载玻片用镊子夹出，点燃酒精灯，将载玻片在酒精灯上小心过火干燥。
4、涂片将一小滴蒸馏水滴在载玻片一端，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，将载玻片有水滴的一端微微竖起，使有菌种的水滴自然从载玻片一端流到另一端，在载玻片上形成一条菌带。
5、干燥自然干燥。
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四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥； 2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。 在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面） 2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。 3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
2、运动性的观察 （1）、压滴法 a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍） （2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征 2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
实验四、细菌鞭毛染色法 及运动性观察
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。