实验报告-从牛奶中分离酪蛋白
酪蛋白的制备
一、实验目的
学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪 蛋白就沉淀出来 用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白 离心技术是物质分离的一个重要手段，它是利用物质在离心力 的作用下，按其沉降系数不同而分离 离心机可分为工业用离心机和实验用离心机，实验用离心机又 可分为制备性离心机和分析性离心机 制备性离心机分为三类：普通离心机，高速冷冻离心机和超速 离心机
三、实验器材
离心机 精密pH试纸 温度计 电炉 布氏漏斗及抽滤瓶
四、实验材料与试剂
牛奶 95％乙醇 无水乙醚 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 乙醇-乙醚混合液
五、实验操作
将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃ 将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋 酸钠缓冲液 用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液 待悬浮液冷却至室温，3000rpm离心15min，弃上清，得酪蛋白粗制品 用6mL水洗脱沉淀1次，3000rpm离心10min，弃上清 在沉淀中加入6mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽 滤 用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀1次，最后用乙醚洗涤沉淀1次，抽干 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品 准确称量，计算含量和得率 含量＝
离心机使用注意点：
使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平 衡时重量之差不得超过离心机说明书上所规定的范围 离心机的转头中绝对不能装载单数的离心管，当转头只是部分装载时，离 心管必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围 离心管中装载溶液时，根据待离心液体的性质和体积选用适合的离心管 若要在低于室温的温度下离心时，转头在使用前应放置在冰箱或置于离心 机的转头室内预冷 离心机在运行过程中，操作人员不得随意离开，应随时观察离心机上的仪 表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障 每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，不得过速使用
生物分离实验案例
氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为 35g/L，比较稳定，利 水中。两液混匀后，在搅拌下加入 10%NaOH300mL，后用水稀释至 1000mL，
用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
贮存于塑料瓶中。此液可长期保存，若瓶底出现黑色沉淀则需重新配制。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消逝，
弃上清液，收集沉淀。一份沉淀用于“除杂〞步骤，另一份沉淀用 0.1MNaOH 温下反应 30min，测定 540nm 波
溶液溶解并定容至 100mL，用于“酪蛋白含量测定〞步骤。
长处吸光度，查标准曲线，求得酪蛋白质量。平行测定 3 次，求其平
2、除杂
均值，并计算 25mL 牛乳中酪蛋白的质量〔m2〕。
试验一：牛乳中酪蛋白的提取
液中可与铜离子形成紫红色化合物，在 540nm 波长处有最大汲取，其颜色
一、试验目的
深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关。
1、把握等电点法提取蛋白的基本原理及基本操作；2、把握双缩脲法
三、材料与试剂
测定蛋白含量的基本原理及基本操作。
市售牛奶
二、试验原理
10mg/mL 酪蛋白标准溶液〔用 0.1MNaOH 配制〕0.1MNaOH 溶液、
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然后在 5000r/min 下，离心 15min，收集上清液得提取液。
自氧化过程中产生有色中间物和 O2-自由基，反应开始后溶液渐渐变成黄
留出 1mL 备用，剩余提取液精确量取体积后进行下步试验。3、除杂 色，在有超氧化物歧化酶存在时，由于它能催化 O2-自由基与+H 结合生成
2、酪蛋白提取得率的计算
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白是一种重要的乳制品蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，掌握蛋白质的提取和分离技术，以及相关的实验操作技能。
首先，我们准备了酪蛋白的原料——牛奶。
将牛奶倒入一个干净的容器中，加
入适量的酸，如柠檬酸或醋酸，搅拌均匀后静置一段时间，待牛奶凝结成块状物质。
接下来，我们使用过滤纸和漏斗将凝结后的牛奶过滤，将固体和液体分离。
过
滤后的液体即为含有酪蛋白的乳清，而固体则是乳清中的酪蛋白。
然后，我们将得到的固体酪蛋白进行洗涤和纯化。
将酪蛋白固体放入洁净的容
器中，加入适量的蒸馏水，轻轻搅拌后静置，使酪蛋白充分溶解。
然后，用过滤纸和漏斗将酪蛋白溶液过滤，去除杂质。
过滤后的酪蛋白溶液即为纯化后的酪蛋白。
最后，我们对酪蛋白进行干燥和凝固。
将酪蛋白溶液倒入浅盘中，放置在通风
干燥的环境中，待其自然干燥凝固。
干燥凝固后的酪蛋白即可得到。
通过本次实验，我们成功地制备了酪蛋白，并掌握了相关的实验操作技能。
酪
蛋白在食品工业、生物工程等领域有着广泛的应用，本实验的成功对我们今后的学习和科研工作具有重要意义。
希望通过不断的实践和探索，能够进一步提高我们的实验技能，为将来的科研工作打下坚实的基础。
牛奶中酪蛋白的提取实验报告
实验报告的格式和内容可以根据具体实验的目的和方法进行调整，下面是一个关于牛奶中酪蛋白提取的实验报告的基本结构和内容示例：实验目的：本实验旨在通过对牛奶的处理和分离，提取酪蛋白并观察其性质和特点。
实验原理：牛奶中含有丰富的酪蛋白，可以通过酸性条件下的凝乳反应来提取。
酸性条件会导致酪蛋白失去带电性而凝聚成固体，可以通过离心等分离技术获得酪蛋白沉淀。
实验材料和仪器：牛奶样品稀盐酸（HCl）离心机试管、移液器、滤纸等常用实验器材实验步骤：取适量牛奶样品，加入少量稀盐酸，使其呈微酸性。
缓慢搅拌牛奶样品，观察是否出现凝块现象。
将混合物放入离心机，以适当的速度和时间离心。
倒掉上清液，收集酪蛋白沉淀。
用纯净水洗涤酪蛋白沉淀，去除杂质。
通过滤纸将酪蛋白沉淀转移到干净的容器中。
对提取的酪蛋白进行性质观察和测试，如溶解性、凝固性等。
实验结果与分析：观察到牛奶样品在酸性条件下发生凝块现象，表明酪蛋白成功被提取。
经离心分离、洗涤和滤纸转移后，获得了纯净的酪蛋白沉淀。
酪蛋白在水中具有良好的溶解性，且可以通过加热使其凝固。
实验结论：本实验成功提取了牛奶中的酪蛋白，并验证了其在酸性条件下的凝乳性质。
酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质成分，具有重要的营养和功能特点。
实验中可能存在的误差和改进：实验过程中的温度、酸度和离心条件等参数对结果可能产生影响，可以进一步优化和控制实验条件。
酪蛋白的提取效率和纯度可以通过其他方法和技术进行定量和定性分析，以获得更准确的结果。
以上是关于牛奶中酪蛋白提取实验的一个示例报告，具体报告内容和格式可以根据实验的具体要求和实验室的规范进行调整。
牛奶酪蛋白实验报告
一、实验目的1. 学习从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的操作步骤。
3. 了解蛋白质的颜色反应及其原理。
4. 鉴定提取的酪蛋白。
二、实验原理牛奶是一种复杂的胶体溶液，其中含有多种蛋白质，其中酪蛋白是其主要成分之一。
酪蛋白是一种含磷蛋白质，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至等电点，使酪蛋白沉淀出来。
此外，蛋白质具有多种颜色反应，如缩二脲反应、蛋白黄色反应和茚三酮反应等，可以通过这些反应来鉴定蛋白质。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜牛奶、脱脂牛奶、离心机、烧杯、温度计、pH计、精密pH试纸等。
2. 实验试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、稀醋酸溶液、硝酸等。
四、实验步骤1. 酪蛋白的提取（1）取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中。
（2）用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入稀醋酸溶液约2mL，观察现象。
（3）继续搅拌并使悬浊液冷却至室温。
（4）将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
（5）离心完毕后，弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白的纯化（1）将酪蛋白粗制品用水洗涤3次，离心10min，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌。
（3）将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
（4）用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
（5）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
3. 酪蛋白的鉴定（1）缩二脲反应：取少量酪蛋白沉淀，加入适量的Cu2+溶液，观察颜色变化。
（2）蛋白黄色反应：取少量酪蛋白沉淀，加入适量的硝酸，加热，观察颜色变化。
（3）茚三酮反应：取少量酪蛋白沉淀，加入适量的茚三酮，共热，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白的提取：在实验过程中，观察到牛奶中加入稀醋酸溶液后，出现白色沉淀，表明酪蛋白已经沉淀出来。
2. 酪蛋白的纯化：通过乙醇洗涤、抽滤和乙醚洗涤，得到较为纯净的酪蛋白沉淀。
实验10 从牛奶中分离酪蛋白
四、实验操作步骤
1. 酪蛋白的粗提 在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入40℃，pH=4.7的醋 酸-醋酸钠缓冲溶液40ml，用pH精密试纸检验液体的pH值。 将上述悬浮液冷却至室温。离心5 min （3000 r /min）。弃 去清液，得酪蛋白粗制品。 2.酪蛋白的纯化 (1)用水洗涤沉淀 2次：离心管中加入5ml蒸馏水，用玻棒充分 搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及 残留的缓冲溶液），离心5min（3 000r/min），弃去上清液。 (2)在沉淀中加入5ml95%乙醇，搅拌片刻，用乙醇洗涤主要是 除去磷脂类物质。将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用 乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用5ml乙醚洗沉淀2次以 除去脂肪类物质，抽干。
三、实验用品
材料：脱脂乳或脱脂奶粉。 仪器用具：离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、 温度计、电子天平 试剂： 1、95%乙醇 2、无水乙醚 3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液 先配A液与B液：A液：0.2mol/L醋酸钠溶液 称NaAC· 3H2O 54.44g，定容至2000ml；B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优 纯 醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。取A液1770ml， B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液。 4、乙醇——乙醚混合液：乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）
搅拌均匀后加热至沸。加CaCO3的目的一方面是中
和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另方面又能
使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入
1～2粒沸石，加热浓缩至3～5ml，加入10ml 95% 乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后 在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。 加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
从牛奶中提取酪蛋白实验报告
从牛奶中提取酪蛋白实验报告实验目的：通过牛奶中的酪蛋白提取实验，学习酪蛋白的结构、性质和提取方法，掌握酪蛋白的分离技术和纯化技术，进一步了解蛋白质的基本研究方法。
实验原理：酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质成分，它具有重要的营养和功能作用。
酪蛋白是一种具有多种构象和功能的复合蛋白质，在水溶液中可形成多种不同类型的聚集体，如微胶粒、聚集和凝胶，这些聚集类型与酪蛋白的结构和功能密切相关。
酪蛋白具有一定的疏水性，分子内具有四个疏水和一个亲水的疏水环和亲水链结构，酪蛋白还含有大量的氨基酸残基，其中包括5%左右的带电氨基酸。
牛奶中的酪蛋白可以通过离心、酸沉淀、盐析和凝胶过滤等方法进行分离和纯化。
酸沉淀法是目前常用的分离和提取方法，其原理是在酸性条件下，酪蛋白分子失去电荷平衡，发生凝固，形成凝胶状物，从而与其他物质分离。
实验步骤：1、准备工作(1) 将所有试剂和设备准备好，并洗涤干净。
(2) 将牛奶样品加热至80℃，进行杀菌处理。
2、酸沉淀法提取酪蛋白(1) 取适量的牛奶样品置于容器中，加入适量的盐酸调节至pH值为4.6，搅拌均匀。
(2) 加入同等体积的乙醇，混合均匀。
(3) 离心分离出沉淀，用纯净水洗涤数次，使沉淀中的酸性物质除去。
(4) 将沉淀转移到干燥皿，放置于低温干燥箱中干燥。
(5) 称取干燥后的酪蛋白样品重量，计算得到收率。
3、检测酪蛋白的含量和纯度(1) 构建标准曲线，按照酪蛋白样品体积一定比例浓度溶液进行稀释，分别取10μl、20μl、30μl、40μl、50μl的样品，加入PBS缓冲液中，浓度从高到低依次用Bradford 法进行检测吸光度，并通过标准曲线计算出待测样品的酪蛋白含量。
(2) 通过SDS-PAGE方法检测酪蛋白的纯度和电泳图谱。
将待测样品和已知浓度的酪蛋白标准品一同进行SDS-PAGE电泳，经过染色和脱色处理后，观察分离出的蛋白条带，利用比色、图像分析软件等工具进行定量测定，并计算出待测样品中酪蛋白的纯度和分子大小。
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实验报告
一、实验名称：从牛奶中分离酪蛋白
二、实验目的：
1.学习从胶体中提取某一类物质的方法。
2.学习蛋白质的各种颜色反应及其原理。
三、实验原理：
1.蛋白质是两性化合物，溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。
当调节牛奶
的pH值达到酪蛋白的等电点（pl）4.8左右时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电
中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会以沉淀形式从牛奶中析出。
2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生
成红紫色的络合物。
所有的蛋白质均有此显色反应。
3.蛋白黄色反应原理：硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，在加热状态下产生了黄色硝
基苯衍生物，再加碱颜色加深呈橙黄色。
这是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸
和色氨酸的蛋白质所特有的颜色反应。
4.茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的
缩合物。
此反应为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。
四、实验步骤及现象：
1.取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌
边加稀醋酸（1：9）溶液约2mL——有白色沉淀析出。
2.继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心
15min。
3.离心完毕后，上清液倒入乳糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用
布氏漏斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉淀2次，每次约10ml，最
后用5ml乙醚洗涤沉淀一次，减压过滤至干——得到干燥的白色固体。
4.将干粉铺于表面皿上，称量并计算牛奶中酪蛋白含量。
5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠溶液的生理盐水（5mL）中，然后滴加3-4
滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色。
五、实验数据：
空表面皿的质量m0 =28.15g
表面皿与酪蛋白的总质量m1 =31.78g
牛奶中酪蛋白的质量m= m1 - m0 =3.63g
六、讨论与感想：
1.牛奶是一种胶体，在正常情况下是均一稳定的，要想分离出其中的某一成分，就应
该想办法使这种成分变成沉淀析出。
通过本次实验，我知道了可以通过调节胶体的
酸碱性，来改变蛋白质分子所带电荷，使其达到等电点。
此时蛋白质分子间的电荷
作用力最小，分子间没有了间隙，浮力减小，蛋白质就会沉淀。
而实验中50ml牛
奶和2ml稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白质的
等电点，从而可以使最多的酪蛋白沉淀析出。
2.加入的醋酸不能过量，过量酸会促使牛奶中的乳糖水解为半乳糖和葡萄糖，难以将
酪蛋白分离。
3.析出的酪蛋白沉淀是絮状物，直接过滤会堵塞漏斗孔，所以要先对悬浊液进行离心
操作，使得絮状物富集，便于过滤。
4.用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀的原因是因为酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，而脂质溶于
其中，可以用来洗涤除去酪蛋白粗制品中的脂质。
5.理论上最终得到的酪蛋白应该是纯白色的，但是实际得到的酪蛋白表面会有一些黄
色物质，这些黄色物质是没有洗净的残留脂质。
其原因可能是在用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀的时候，没有充分搅拌，使得洗涤不彻底。
6.通过查找资料得知，蛋白质的颜色反应是不同物质与蛋白质中的特定结构（例如肽
键、苯环、氨基酸等）的反应，因为反应能产生特定的颜色，所以可以用来鉴定蛋白质。
但是也要注意，颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定性和定量测定的依据。
7.离心仪是本次实验中第一次接触到的器械，它的使用也有注意事项：处于相对位置
的两个离心杯要保证质量相同，因为高速转动需要很大的向心力，如果相对位置的两个离心杯质量不同，会使得转轴受力不均匀，可能导致转轴弯曲。
所以，在放入离心机之前，要用天平比较两个离心杯和其中液体的质量，并进行适当调整。