牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备
牛奶中酪蛋白的提取
实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25~1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中，隔水水浴小火加热，不断搅拌，加热至沸腾时停止搅拌和加热。
在牛奶中加入少量盐，并慢慢加入白醋，并轻轻搅拌，观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后，停止搅拌和加醋，静置10min。
待上述悬浮液冷却至室温，用滤纸过滤，得到滤渣。
用水清洗滤渣3次，每次都过滤得滤渣。
滤渣再用白酒清洗3次，每次都过滤得滤渣。
将滤渣摊在滤纸上风干，得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白（g/100ml）=（酪蛋白（g）/200ml或250ml ）*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=（13.3g/200ml）*100=6.65 g/ml
结论：闻起来有较大的奶香味和酒精味。
在过滤的过程中，粘在滤纸上跟纱布，抠不下来，所以数据应该会偏小了。
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酪蛋白和乳蛋白素的制备
产品简介
二、酪蛋白素简介 乳蛋白素（α-lactalbumin）广泛存在于乳品中，是乳
糖合成所需要的重要蛋白质。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白 （casein），酪蛋白在左右会沉淀析出。而乳蛋白素在pH3左 右才会沉淀。利用这一性质，可先将pH降至，或是在加热至 40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于 乙醇，这个性质被利用从酪蛋白粗制剂中出去脂类杂质。将 去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出， 部分杂质可随澄清液除去。再经过一次pH沉淀后，即可得到 粗乳蛋白素。
酪蛋白和乳蛋白素的制备
酪蛋白和乳蛋白素的制备
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产品简介
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实训目标
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实训原理
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实训试剂与设备
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生产实训
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产品检测酪蛋白和乳蛋白素源自制备产品简介2、检一查检、测记酪录等蛋文件白简介
（2）设定离心机转速为6000r/min，离心15min，倒掉上清液。
酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，占乳蛋白的 脱脂或低脂奶粉，无水硫酸钠，，，碳酸氢铵，滤纸，pH试纸，浓盐酸，乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH为），乙醇。
酪蛋白和乳蛋白素的制备
可以检测牛乳中是否掺假。 将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质可随澄清液除去。 酪蛋白在其等电点时由于静电和为零，同种电荷间的排斥作 用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调到，酪蛋白 就可从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被用 来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂志除去。
乳蛋白素（α-lactalbumin）广泛存在于乳品中，是乳糖合成所需要的重要蛋白质。
酪蛋白它和乳还蛋白含素的有制备胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨
牛奶中酪蛋白和乳蛋白素提取项目报告 (1)
搅拌10min
抽滤
取 沉 淀
干燥，称重
抽滤
悬浮30ml乙醇
等电点沉淀法制备乳蛋白素
酪蛋白
离心后的上层液 倒入50ml烧杯中 ，置于磁搅拌加 热板上，一边搅 拌一边用0.1mol/L 的盐酸调PH值 将上个实验所得的 酪蛋白置于100ml 烧杯中，以浓盐酸 调PH值至3±0.1。 倒入离心管中
调PH值
称重
倒掉上层液，Байду номын сангаас出 沉淀，干燥
我们的收获
离心后无沉淀
离心机的正确使用
抽滤
调整PH值时判断 误差，使得离心后 得不到产物，无法 进行。
①离心物一定要对 称 平衡（一样重） ②离心时，要等待 离心机转数稳定 ③离心结束要等待 转数归零时，再打 开机盖
调 P H 值 时觉得 颜 色接近时，如果无 法判断，请询问老 师，谢谢！
①抽滤时防 止漏气同时 要注意不要 把滤纸戳破 ②倾倒滤液 时，要先截 去塑胶管防 止倒抽
通过本次实验我们收获到了小组织的团结精神，实验成功的做出了酪蛋 白。由于PH值的判断误差使得离心无产物，从而无法获得乳蛋白素。
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牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 实验总结报告
FOR—A02
组员：李敏蕊 陈晓霞 王宇航 欧汉阳
实验日期：2011年11月9日 实验地点：生物实训楼2-1
实验目的： ①掌握盐析法的原理和操作 ②掌握等电点沉淀法的原理和基本操作
盐析沉淀法制备酪氨酸
操作步骤：
50ml牛乳
40℃，分两次加入
10g无水硫酸钠
HCl 2.9≤PH≤3.1
将溶液倒入 离心管中
再离心
6000r/min· 10min
牛奶中提取酪蛋白
牛奶中提取酪蛋白[目的与要求]1、了解等电点沉淀法2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法3、加深对蛋白质等电点性质的理解[原理]蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。
另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。
但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。
等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。
但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。
生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。
本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从中加深对蛋白质等电点性质的理解。
[方法和步骤]1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3 000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40℃左右，在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，此时混浊液中有大量絮状物沉下。
冷至室温，3 000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。
2、用蒸馏水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min离心10min，弃去上清液。
3、将沉淀置研钵中，研碎后，渐加5mL 95%乙醇，静置片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用无水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。
4、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白制品（称重，记录）。
实验5酪蛋白的制备
实验5酪蛋白的制备
酪蛋白的制备方法：
(1)新鲜牛奶脱脂，加酸(乳酸、乙酸、盐酸或硫酸)，将pH调至4.8，使干酪素微胶粒失去电荷而凝固沉淀。
用这种方法得到的干酪素称为酸酪蛋白，加酸的种类不同得到的酸酪蛋白却几乎毫无区别。
酸酪蛋白是白色至淡黄色粉末或颗粒，稍有奶臭和酸味。
在水中只是溶胀，若加入氨、碱及其盐时，则可分散溶解于水中。
可溶于强酸、二乙醇胺、吗啉、尿素、甲酰胺、热苯酚和土耳其红油。
(2)将牛奶与粗制凝乳酶作用，形成凝固沉淀物，称为粗制凝乳酶酪蛋白，呈白色粒状，几乎无味无臭，加热灼烧会产生特有的臭味。
凝乳酶酪蛋白比酸酪蛋白的灰分含量高。
酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，对酸敏感，pH较低时会沉淀。
酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质，又称：干酪素、酪朊、乳酪素。
α-酪蛋白是哺乳动物的主要蛋白，人乳中没有α-酪蛋白，以β-酪蛋白为主要酪蛋白形式。
酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源，也是钙和磷的来源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。
实验一 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
[制备酪蛋白+双缩脲溶液（1%CuSO4+酒石酸加纳+1%KOH）=？]
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五、实验结果、计算与分析
结果一：酪蛋白的制备： 1、酪蛋白含量（g/mL）=酪蛋白g/10mL
2、酪蛋白得率=测定含量/理论含量×100%
牛乳酪蛋白理论含量为3.5g/100mL
结果二：酪蛋白的溶解度鉴定：
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二、实验原理
1.牛乳中酪蛋白制备 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电 点为4.7-4.8。利用等电点时溶解度最低的原理，将 牛乳的pH调至4.7-4.8时，酪蛋白就沉淀出来。用 乙醇洗涤沉淀物，乙醚除去脂类杂质后便可得到 纯的酪蛋白。
二、实验原理
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1.酪蛋白溶于哪些溶液？
蒸馏水、10%氯化钠、0.5%碳酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸及 饱和氢氧化钙（表格形式，状态：不溶解，部分溶解，全部溶解）
结果三：酪蛋白的双缩脲反应：
4、酪蛋白的双缩脲反应分析。（颜色描述并分析）
（为何酪蛋白与双缩脲试剂反应呈现紫红色？）
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六、思考题
1、为什么调整溶液的pH值可以将酪蛋白沉淀出来？ 2、氨基酸是否能发生双缩脲反应？为什么？
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四、实验步骤
1、酪蛋白的制备：
（3）往沉淀物中加入5mL蒸馏水，混匀后2000r/min 离心5min， 弃去上清液。
（ 4 ） 将 洗 净 的 沉 淀 物 加 入 3mL无 水 乙 醇 ， 混 匀 后 2000r/min离心5min， 弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。
（5）将沉淀物全部摊开在已称过重的滤纸上，置于 25℃烘箱中烘干。
酪蛋白的制备
酪蛋白的制备
酪蛋白的制备
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
材料：新鲜牛奶
试剂：
95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液
0.2mol/L pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液配置
A：0.2mol/L醋酸钠溶液，称量醋酸钠54.44g，定容至2000ml B：0.2mol/L醋酸溶液，称量纯醋酸12.0g，定容至1000ml
取A液1770ml，B液1230ml混合即得pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml 乙醇乙醚混合液：95%乙醇：无水乙醚=1：1（V/V）器具：
离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、酸度计操作步骤：
（一）酪蛋白的粗提
10mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密
pH试纸或酸度计调pH至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心8-10分钟(3500-4000 r /min)。
弃去清液，得酩蛋白粗制品。
(二）酪蛋白的纯化
1、用水洗涤沉淀3次，离心5分钟（3500-4000 r /min)，弃去上清液。
2、在沉淀中加入20mL 95%乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇一
乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用无水乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面皿上，风干;得酪蛋白纯品。
(三）准确称重，计算含量和得率。
含量=酪蛋白g/10mL牛乳（g%)
得率=（测得含量/理论含量〕X100% 式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
从牛奶中提取酪蛋白
实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。
2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。
二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。
四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。
B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。
取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。
4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。
五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。
观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。
2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。
3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。
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2008～2009学年第二学期
实训一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备（6学时）
一、目的和要求
1、掌握盐析法的原理和操作；
2、掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白
不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液除去。
再经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验材料
1、材料
脱脂牛乳或低脂牛乳（50ml）、蒸馏水
2、器材
100ml量筒、100ml烧杯（2个）、250ml烧杯、水浴锅、玻璃棒、布氏漏斗、滤纸、抽滤瓶、真空泵、pH计、pH试纸、离心机、离心管、磁力搅拌器
3、试剂
无水硫酸钠、无水乙醇、浓HCl、NaOH
0.1mol/L HCl溶液配制：用洁净的量杯（或量筒）量取9mL浓盐酸，注入盛有1000mL水的试剂瓶中，盖上玻璃塞，摇匀。
（一般来讲最浓的浓盐酸质量分数是37.5%，量浓度约是12mol/L，密度1.183g/cm³左右。
）
0.1mol/L NaOH溶液配制：称取4克氢氧化钠固体，用少量蒸馏水溶解，将溶液转移到1L的容量瓶中，定容，摇匀。
四、实验步骤
1、盐析沉淀法制备酪氨酸
（1）将50ml牛乳倒入100ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min。
（或者是书中所讲述的部分----------）
（3）将溶液用布氏漏斗过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中过滤除去乙醇溶液，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。
准确称重。
2、等电点沉淀法制备乳蛋白素
（1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。
（2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。
（3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0，此时大部分蛋白质均会溶解。
（4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。
（5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mol/L盐酸调整pH至3±0.1。
（6）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心10min，倒掉上层液。
取出沉淀干燥，并称重。
五、注意事项
离心机的使用安全：
1、使用前，离心管和离心物一定要对称平衡；
2、离心开始时，设置好了转速和时间，一定要等到转速稳定了后，人才能离开；
3、离心结束，只有仪器报警了，且转速完全为零后，才能打开离心机盖。
六、结果与讨论
1、计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量（3.5g）相比较。
求出实际获得率（%）。
2、计算出100ml牛乳所制备出的乳蛋白素数量。
课后体会：。