医学微生物学实验一
微生物学实验
溶血链球菌（Streptomyces microflavus）：形态
链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短 不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的 种类及生长环境有关。该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的 碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬 后，转为革兰氏阴性。向一个方向分裂，若没有完全分开
自主设计实验：40%，包括设计实验方案、实验操作，总结， 汇报交流 实验考试10%：理论、实验操作
2. 细菌形态观察（装片） 基本概念： 细菌（Bacteria, Bacterium） 芽孢（spore） 鞭毛（flagella）：所有弧菌、螺菌类普遍着
生鞭毛和假单胞菌都长有端生鞭毛，约半数杆菌 和少数球菌有鞭毛。
1.6. 安全 常规：水、电、门、窗等 微生物与化学试剂 仪器使用：高压灭菌器、离心机 废弃物
1.7、微生物实验安排与考核
5个综合模块，共14次实验：50%
一、综合模块1-细胞水平：个体形态观察（9学时） 二、综合模块2-群体水平：目的微生物的分离筛选及纯化技术（9学时） 三、综合模块3-生理生化水平：生理生化测定、理化因素对微生物生长 的影响（9学时） 四、综合模块4-遗传水平、免疫水平：细菌转导、菌种保藏方法、血清 学反应（6学时） 五、综合模块5-分子水平：微生物系统发育学分析（9学时）
苏云金芽孢杆菌（Bacillus thruingiensis）：芽孢、伴胞晶体
芽孢在一端、易观察。形态与生理特征和蜡状芽孢杆菌相似，所不同的是在适合条件下 能产生伴孢晶体，晶体为菱形，因此被认为是蜡状芽孢杆菌的致病变种，最早由国外引 进，后在国内各地也陆续分离到很多相似的亚种，例如青虫菌、杀螟杆菌等。 存在于土壤及生病的鳞翅目昆虫上。 能使鳞翅目昆虫染病致死，广泛应用于生物防治，做生物杀虫剂。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
医学微生物学实验
医学微生物学实验在医学领域中，微生物学实验扮演着至关重要的角色。
它们为研究人员提供了了解微生物的生长、传播和致病机制的机会。
本文将探讨医学微生物学实验的不同类型和其在医学研究中的应用。
一、培养实验培养实验是最基本的微生物学实验之一。
通过将微生物接种到特定培养基上，并为其提供适宜的环境条件，可以促进微生物的生长和增殖。
培养实验还可用于鉴定微生物的种类和性质。
例如，革兰氏染色法可以帮助鉴定细菌是否为革兰氏阳性或革兰氏阴性。
此外，培养实验也可以用于测试微生物对不同药物的敏感性。
二、抗生素敏感性实验抗生素敏感性实验是评估微生物对抗生素的敏感性的重要方法。
这些实验可以帮助医生选择最合适的抗生素治疗方案，以对抗细菌感染。
一种常用的抗生素敏感性实验是纸片扩散法，它通过在琼脂平板上置放含有不同抗生素的纸片来观察微生物对抗生素的反应。
根据纸片周围形成的抑制区域大小，可以推测微生物对抗生素的敏感性。
三、酶活性实验酶活性实验用于评估微生物代谢过程中酶的活性和效率。
这些实验可以帮助我们了解微生物对特定底物的降解能力以及其在生物合成中所起的作用。
例如，过氧化氢酶活性实验可以检测细菌的生产氢过氧化物的能力，这对于了解某些微生物的致病机制非常重要。
四、PCR实验聚合酶链反应（PCR）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增和检测微生物DNA的特定片段。
这种实验可以快速、准确地鉴定微生物的种类和亚型。
PCR实验在病毒检测、感染病原体鉴定以及基因突变的检测上有着广泛的应用。
五、流式细胞术流式细胞术是一种用于分析和分离微生物细胞的高级技术。
它通过将微生物细胞与荧光染料结合，以区分不同类型的细胞，并通过流式细胞术仪对其进行计数和分类。
这种实验可以帮助研究人员迅速而准确地了解微生物种群的组成和动态变化。
六、抗体检测实验抗体检测实验用于检测微生物感染引起的免疫反应。
这些实验可以检测患者体内的特定抗体是否存在，并确定感染的类型和程度。
例如，ELISA实验可以检测人体内是否存在病毒抗体，从而判断是否感染了某种病毒。
医学微生物学实验：细菌的分布
一、实验题目：细菌的分布
二、实验目的：
1.熟悉细菌分布的常用检查方法。
2.了解细菌分布的广泛性，树立“有菌”观念，认识“无菌操作”对于微生物学及医学实践的重要意义。
3.了解常规消毒方法
三、实验原理
通过不同途径，采集各种状态下的细菌标本，经过培养观察，证明细菌的分布状态。
四、实验材料
1.自来水、土壤悬液、碘液
2.无菌普通琼脂平板培养基、血平板、酒精灯、接种环、恒温培养箱
五、实验方法及步骤
1.空气中细菌的分布：采用暴皿沉降法，取5个无菌普通琼脂平板培养基，分别置于实验室、办公室、无菌室、卫生间、走廊，在空气中暴露30min后盖上盖子，37℃恒温培养48h。
2.水中细菌的分布：采用划线法。
①取1个无菌普通琼脂平板培养基，在培养皿底部用记号笔划线将培养皿平均分成两部分。
②用酒精灯外焰灼烧接种环杀菌，用接种环接取中段自来水，在培养基一侧表面划线。
③再次灼烧接种环，用接种环取土壤悬液，在培养基另一侧表面划线，再次灼烧接种环。
④盖上盖子，37℃恒温培养48h。
3.手上细菌的分布：采用涂抹法。
取1个无菌普通琼脂平板培养基，在皿底将其平均分为3个部分。
①用手指在第一个区域内轻轻压涂两下；②用自来水简单冲洗手，在第二个区域内轻轻压涂两下；③用碘液将手指消毒，风干后在第三个区域内轻轻压涂两下。
④盖上盖子，37℃恒温培养48h。
4.咽喉部细菌的分布：取1个血平板，近皿咳嗽4-6次，确保有飞沫进入培养皿。
盖上盖子，37℃恒温培养48h。
六、实验结果及分析。
医学微生物学实验
（2）伤寒杆菌
生物学特性: G镜下为杆状,有菌毛，除个 别外都有周鞭毛，一般无荚 膜，均无芽孢。 兼性厌氧，营养要求不高, 不发酵乳糖或者蔗糖，对葡 萄糖，麦芽糖，甘露糖发酵， 产酸不产气，其他沙门菌产 酸产气，可在普通琼脂培养 基上生长 最适宜温度为37度,最适宜 pH为7.4
菌落特点: 圆形,凸起,无色，细小，半透明,表面光滑, 湿润,直径2-3mm.
紫外线对细菌的影响 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养 皿中，然后按图所示揭开平皿盖，臵于紫外线 下照射30分钟，然后盖好盖子，臵37℃培养 24h后取出观察结果。
1.2.2化学消毒剂对细菌的影响
1 促进菌体蛋白质变性或凝固。
2 干扰细菌酶系统和代谢。 3 损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成，物理 结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒至灭菌作用。
方法： （每4个人一组，两支鲎试剂，一支实验一支对照） 1.取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂 溶解水，使之溶解 2.其中一支加入0.1ml内毒素，标记上实验组， 另一支加入0.1ml溶解水，作为对照 3.垂直放入37℃温箱，20--30分钟观察结果 结果： 实验组出现凝固，对照组不出现凝固
⊕
-
痢疾杆菌
伤寒杆菌
-/+
分离培养方法
将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板） (接种好后，做好标记，用胶布按班绑好) 放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰 箱中保存备用。
三、消毒灭菌（2学时）
1. 细菌在Байду номын сангаас然界的分布及理化因素 对细菌的影响
2. 高压蒸汽灭菌法
医学微生物实验报告
医学微生物实验报告引言：微生物是一类以细胞为基本单位的生物体，包括细菌、真菌、病毒等，在医学领域具有重要的研究与应用价值。
本实验旨在通过对微生物的分离、鉴定及对其功能的评估，了解微生物在医学领域中的重要性。
实验方法：1. 细菌和真菌的分离与培养我们通过从患者样本中采集细菌和真菌，并将其接种于不同的培养基中。
培养基的选择根据不同的微生物需求进行，如营养琼脂平板、血琼脂平板、丙酮酸琼脂平板等。
然后将培养皿放置在适宜的温度和氧气条件下进行培养。
2. 微生物的鉴定与鉴定方法通过观察微生物的形态特征、生长特性以及进行生化试验等，我们可以对其进行初步鉴定。
进一步，可以使用分子生物学的方法，如PCR、测序等，对微生物进行准确的鉴定。
还可以利用培养物对微生物进行进一步的药敏试验，以确定其对不同抗生素的敏感性。
3. 微生物在医学中的应用微生物在医学中具有广泛的应用。
例如，在感染病的诊断中，微生物的鉴定对于选择合适的抗生素非常重要。
此外，微生物还可以应用于生物制药工业，如利用细菌生产抗生素、利用真菌生产泌尿生殖系统药物等。
微生物还可以应用于食品工业，如利用益生菌制造发酵食品。
实验结果：在我们的实验中，我们成功分离了多种不同的细菌和真菌。
通过观察它们的形态特征，我们发现它们具有不同的形状、颜色和大小。
通过进行生化试验，我们确定了它们的一些特性，如氧化酶、内切酶等。
在进一步的鉴定中，我们使用了PCR技术，并与数据库中的标准菌株进行比对，以确保鉴定的准确性。
讨论：微生物的鉴定对于诊断和治疗感染病非常重要。
通过对已知的微生物菌株进行鉴定，我们可以提前做出合适的治疗方案，从而避免病情的进一步恶化。
同时，对微生物的鉴定也有助于预防疾病的传播，提高公共卫生水平。
此外，在医学领域以外，微生物还有其他的应用价值。
例如，微生物在生物制药工业中的应用，可以大大提高抗生素等药物的生产效率，从而满足人们对于药物的需求。
微生物还可以应用于环境保护中，如通过微生物的降解能力来处理废水和废弃物，减少对环境的污染。
《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验
《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验[目的]1．掌握皮肤消毒方法。
2．掌握标准纸片扩散法(K-B法)的原理、操作方法、结果的判读与解释及其临床意义。
3．掌握纸片扩散法的质量控制方法。
了解空气、水中细菌的检查方法。
4．熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法。
5．熟悉紫外线灭菌方法。
6．了解高压蒸汽灭菌方法一、细菌的分布检查[材料]普通琼脂平板，1％高层琼脂，无菌试管，1毫升无菌吸管，无菌平皿。
[方法]1．空气中的细菌检查取琼脂平板一个，打开皿盖，暴露于空气中10分钟，然后盖好，在平皿底面注明地点、班组，放入37℃温箱内培养24小时后观察结果，计算菌落数，并观察不同的菌落形态。
2．污水和净水中细菌数的检查（1）用无菌试管分别采取自来水和未经净化消毒处理的污水各一管。
取自来水样时，须先将水龙头用酒精灯烧灼灭菌，再将龙头完全开放，放水5分钟，然后用无菌试管以无菌操作采集水样。
（2）用无菌吸管吸取自来水及经适当稀释的污水各1毫升，分别放入两个无菌平皿内。
（3）将已溶化并冷至约45℃（手握琼脂管感觉热而不烫手）的高层琼脂1支，倾注入平皿内，盖好平皿，立即将皿底贴桌面轻轻摇动，使琼脂与水样均匀混合后（但勿溢出于皿外），静置桌面，待琼脂凝固。
（4）标记，皿底向上置于37℃培养24小时，取出观察结果。
比较自来水及污水内生长的菌落数。
3．皮肤及飞沫中的细菌检查材料：普通琼脂平板，血琼脂平板。
方法：（1）皮肤细菌检查取普通琼脂平板一块，用手指轻轻涂抹培养基表面，置37℃温箱中培养24小时，观察结果。
（2）飞沫中的细菌检查取血琼脂平板一个，打开皿盖，将培养基面置于口腔前约10厘米处，用力咳嗽数次，约30秒钟，然后盖上皿盖，置37℃温箱培养24小时，观察结果。
二、外界因素对细菌的影响（一）高压蒸汽灭菌法（示教）[材料] 手提式高压蒸汽灭菌器、电炉等构造：手提式高压蒸汽灭菌器是一双层金属圆桶，外层坚厚，顶端有厚盖，盖边有翅状螺旋，借此紧闭此盖，防止蒸汽外溢。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告医学微生物学实验报告引言：微生物是一类无法看见的微小生物体，它们存在于我们周围的环境中，包括我们自己的身体内。
微生物在医学领域中起着重要的作用，既可以是疾病的致病因子，也可以是药物的生产者。
本实验旨在通过实验方法和观察结果，探索微生物在医学领域中的应用。
实验一：细菌培养和鉴定在实验室中，我们首先收集了一些样本，包括空气、水、土壤和人体表面的皮肤。
然后，我们将这些样本分别接种在不同的培养基上，培养一段时间后观察结果。
结果显示，空气中存在大量的微生物，其中细菌是最常见的。
而水中的微生物数量相对较少，主要是一些单细胞的微生物。
土壤样本中的微生物种类丰富，包括细菌、真菌和寄生虫。
人体表面的皮肤样本中的微生物主要是细菌，这些细菌通常是人体的正常微生物群落的一部分。
通过鉴定这些细菌，我们发现了一些常见的致病菌，如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
这些细菌在人体中可能引发感染和疾病。
另一方面，我们也发现了一些有益的细菌，如乳酸菌和酵母菌。
这些细菌被广泛应用于食品加工和制药工业中。
实验二：药敏试验药敏试验是一种常用的方法，用于评估细菌对不同抗生素的敏感性。
在本实验中，我们选择了几种常用的抗生素，并将它们分别加入到含有细菌的培养基中。
然后观察细菌在不同抗生素浓度下的生长情况。
结果显示，不同细菌对抗生素的敏感性有所不同。
有些细菌对某种抗生素高度敏感，而对另一种抗生素则不敏感。
这表明了不同抗生素对不同细菌的杀菌效果不同。
药敏试验的结果可以帮助医生选择合适的抗生素治疗感染病例，以提高治疗效果。
实验三：微生物的环境适应能力微生物具有很强的环境适应能力，可以在各种极端条件下生存和繁殖。
在本实验中，我们将细菌分别暴露在高温、低温、酸性和碱性环境中，观察其生长情况。
结果显示，有些细菌对高温和低温环境具有较高的耐受性，而对酸性和碱性环境则较为敏感。
这可能是因为细菌在不同环境下具有不同的生理和代谢特性。
了解细菌的环境适应能力有助于我们预测和控制细菌在不同环境中的生长和传播。
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注意 油镜头须浸入油中
不使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转，否则可压 碎玻片及损坏物镜头
光圈需开至最大 聚光器须上升至最高
4.玻片处理 5.镜头擦拭：限取3张擦镜纸
注意
---如香柏Байду номын сангаас不慎玷污非油浸镜头应立即直接拭去 （勿用二甲苯） ---擦拭时沿一个方向，禁止旋转
6.还原各部分 7.填写显微镜使用登记表
4、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室 仪器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元/张；
5、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负 责关门、关窗、关水、关电。
一、显微镜的使用操作及注意事项
二、 显 微 镜 的 使 用
（一）观察前准备
1. 显微镜拿取
2. 调节通光量
使用油镜时，为使通光量最大，可采用： 1）光圈开到最大； 2）聚光器上升到最高； 3）低倍（10×）物镜下，转动凹面反光镜，使视野的 光照达到最明亮 均匀。
水洗，甩干
媒染：卢戈氏碘液染1min
染
水洗，甩干
色
脱色： 酒精脱色约30s 关键步骤！
水洗，甩干
复染： 复红染液染1min
水洗，甩干
印干
油镜观检
【结果】
革兰阳性球菌
革兰染色结果 取材：培养混合菌液 放大倍数：100X10
革兰阴性杆菌
作业
1、细菌特殊结构绘图 2、革兰染色法的完全实验报告（实验名称、目的、
（二）低倍镜观察
操作要点 粗旋钮调节：物像出现
细旋钮调节：物像清晰 为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察？
（三）高倍镜观察
操作要点
在低倍镜转换高倍镜（40x ）
适当调节细螺旋即可看到物像
注意 忌使用粗螺旋，否则极易压碎标本．甚 至损坏物镜。
（四）油镜观察
1.滴油（不要抹开） 2.转换为油镜头，使其浸入香柏油 3.调节细螺旋即可找到物像
三、革兰染色法（自做）
实验室规则
微生物学实验要求 1、微生物无处不在：故要树立有菌观念，实验过程要无菌操
作; 2、实验材料为病原微生物，具有感染性
1）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他 个人用品不得带入实验室；
2）实验室禁止饮食，未经许可严禁将实验材料带出实验室
3、按照实验要求，认真积极的完成实验，有些实验需第二 天观察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完 成实验报告；
二、细菌的形态和特殊结构观察
（一） 细菌的基本形态
1．球菌： 葡萄球菌(葡萄状排列) 链球菌 (链状排列) 脑膜炎奈瑟菌(成双排列)
2．杆菌： 大肠杆菌、枯草杆菌等
3．螺形菌： 霍乱弧菌等
（二）细菌的特殊结构
1. 荚 膜
• 荚膜与微荚膜概念 • 化学成分 • 变异 • 医学意义
肺炎链球菌（示荚膜）
如革兰染色法和抗酸染色法。
【原理】
渗透性学说：两类细菌的细胞壁成分和结构差异
G+菌：
肽聚糖多 交联度大
类脂质少
结晶紫 卢戈碘液液
酒精 复红
G-菌： 类脂质多 肽聚糖少
【材料】
1. 葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。 2. 革兰染色液。
【步骤】
涂片：注意无菌操作
干燥 固定 染色
初染：结晶紫染液染 lmin
《医学微生物学》实验课件
南华大学病原学实验教学中心 Etiology Experimental Teaching Center
of University of South China
实验内容
一、显微镜的使用操作及注意事项 二、细菌的形态和特殊结构观察：
1.自阅片：破伤风杆菌（示芽胞）、变形杆菌（示鞭毛） 2. 示教片：肺炎链球菌（示荚膜）
芽胞 菌体
破伤风梭菌（示芽胞）
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
4. 菌 毛
• 概念 • 在光镜下看不见，使用电镜才能观察到 • 分类：普通菌毛和性菌毛 • 医学意义
三、革兰氏染色法
常用染色方法
单染法： 一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；
复染法： 两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
荚膜 菌体
2. 鞭 毛（Flagllum）
• 概念 • 数目、位置和排列可不同 • 鞭毛是细菌的运动器官 • 医学意义：
变形杆菌（示鞭毛）
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
鞭毛 菌体
3. 芽 胞
• 概念 • 形状、直径、位置随菌种而不同 • 形成条件 • 非细菌的繁殖体 • 抵抗力强 • 医学意义：