苹果果皮中总黄酮的提取方法优化研究
苹果渣总黄酮提取方法的探讨
苹果渣总黄酮提取方法的探讨李伟荣;任爱清【摘要】以苹果渣总黄酮得率为考察指标,对苹果渣总黄酮提取方法及其影响因素作了探讨,获得微波法和水浴法提取黄酮的最佳工艺参数,通过两者比较证明微波法提取为较理想的黄酮提取方法.苹果渣总黄酮水浴提取法的最佳提取条件为水浴温度70 ℃、乙醇浓度 65%、提取时间 2.0 h、固液比1∶25,该条件下测得总黄酮的得率为 6.07%;微波法最佳提取条件为微波低火档位、乙醇浓度 55%、提取时间210 s、固液比1∶25,该条件下测得总黄酮的得率为 5.98%.【期刊名称】《浙江农业科学》【年(卷),期】2010(000)004【总页数】3页(P823-825)【关键词】总黄酮;提取;微波法;水浴法;苹果渣【作者】李伟荣;任爱清【作者单位】浙江省丽水市农业科学研究院,浙江,丽水,323000;浙江省丽水市农业科学研究院,浙江,丽水,323000【正文语种】中文【中图分类】S661.1黄酮类化合物是药用植物的主要活性成分之一，具有调节血脂、消除氧自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒以及雌激素样活性等生理功能［1］。
黄酮类化合物是广泛存在于水果蔬菜中的次生代谢类物质，近年来发现它们具有很强的清除自由基能力，是苹果中主要的抗氧化物质来源。
我国是世界上最大的苹果生产国，年产1 100万t，除鲜食外，其余用于加工。
20世纪80年代以来，从国外引进了一批先进的浓缩果汁生产线，主要集中在陕西、山东、河南3省。
苹果在榨汁的同时产生大量的果渣，而这些果渣一般是当垃圾处理，这不但给企业带来经济负担，还造成物资浪费、场地占用和环境污染。
为了充分利用资源、净化环境、增加经济效益，迫切需要对苹果渣进行二次开发［2］。
苹果渣含水量高、可溶性物质多，极易腐败变质，很难贮存或远距离输送。
所以，果汁生产厂家应对果渣及时烘干处理。
这样既便于贮存输送，也可减小体积，提高产品的商品性。
目前，农户对苹果渣利用的效果及其营养成分还不甚了解，果汁生产厂家缺乏切实可行的开发计划和技术资料。
昭通金帅苹果中总黄酮提取及抗氧化研究
２ ０ １ ５年 ３月
楚
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Ｖｏ １ ． ３０ ＮＯ． ３ Ｍ ａｒ ． ２０ｌ ５
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昭 通 金 帅 苹 果 中 总 黄 酮 提 取 及 抗 氧 化 研 究
李 会 端 ，崔 旭 ，耿 仕 香
（ 楚 雄 师 范 学 院 化 学 与 生 命 科 学 学 院 ，云 南 楚 雄 ６ ７ ５ ０ ０ ０）
摘 要 ：本 论 文选 用 昭通 金 帅 苹 果 为 原 料 ，采 用 乙醇 浸 提 法 提 取 苹 果 果 皮 总 黄 酮 ，设 计 单 因 素 和 正 交
前 言
黄 酮 类 化 合 物 是 植 物 次级 代谢 产 物 ，广 泛 存 在 于 天 然 植 物 中 ， 因其 具 有 消 炎 杀 菌 、抗 氧 化 、 抗 病 毒 、提 高 人 体 免 疫 力 等药 效 ，在 医药 和 临 床 应 用 领 域 具 有 潜 在 应 用 前 景 ¨ 。苹 果 中富 含 类 黄 酮 化 合 物 ，Ｔ ｓ ａ ｏ等采 用 液 相 色 谱 法 测 定 了八 个 苹 果 品种 中 的类 黄 酮 含 量 ，测 定 量 在 ８ ３ ４ ． ２—２ ３ ０ ０ ． ３ ｍ ｇ・ ｋ ｇ ～，而 果 肉 中 的类 黄 酮 含 量 在 １ ５—６ ０ ５ ． ６ ｍｇ・ ｋ ｇ ～，不 难 分 析 得 出苹 果 中 的总 黄 酮 化 合 物 主要 集 中 在 果 皮 部 分 ，果 肉和 果 心 中 的 含 量 远 低 于 果 皮 ｊ 。 由
乙醇 浸 提苹 果 皮 中 总 黄 酮 ，设 计 单 因 素 和 正 交 实 验 优 化 浸 提 工 艺 条 件 ， 以芦 丁 为 对 照 ，采 用 紫 外 一分 光 光度 法 测 定 提 取 液 中总 黄 酮 含 量 ，初 步 探 究 苹 果 皮 黄 酮 提 取 液 对 羟 自 由基 的抑 制 活 性 ， 为 苹 果 营 养 成分 的鉴 定 和开 发 利 用 提 供 黄 酮 分 布 和 含量 的基 础 实 验 数 据 参 考 。 １ ．材 料 与 方 法 １ ． １原 料 、试 剂 与 仪 器 昭通金帅苹果 （ 采 自昭通 云南 ）， 采 摘 苹 果一 洗净 苹 果 果 皮 一 自然 阴干 一 粉 碎 一 备 用 。 芦 丁 、盐 酸 、锌 粉 、亚 硝 酸 钠 、三 氯 化 铝 、硼 酸 、硝 酸 铝 、无 水 乙 醇 、氢 氧 化 钠 、Ｂ Ｈ Ｔ等 均 为 分 析 纯 。Ｃ Ｐ ２ １ ４ ｃ电 子 天 平 （ 奥 豪 斯 仪 器 上 海 有 限公 司 ） 、Ｄ Ｆ Ｙ 一５ ０ ０摇 摆 式 高 速 中药 粉 碎 机 、 ＨＨ 一￥ ２ Ｓ水 浴 恒 温 锅 、容 量瓶 、吸量 管 、Ｓ ＨＺ—Ｉ ｌ ｉ Ａ真 空 泵 、分 光 光 度计 、恒 温 干燥 箱 等 。
4种溶剂法提取苹果类黄酮效果比较
4种溶剂法提取苹果类黄酮效果比较4种溶剂法提取苹果类黄酮效果比较摘要：以乙醇为溶剂，采用常温振荡法、液氮冷冻研磨法、匀浆法和超声法提取苹果果实中的类黄酮。
结果表明，超声法最适于提取苹果果实中类黄酮，类黄酮提取率高，方法稳定。
关键词：苹果类黄酮提取方法超声法常温振荡法液氮冷冻研磨法匀浆法类黄酮具有抗菌、抗病毒、消炎、抗过敏、扩张血管等生理功能，是维管植物中一大类多酚物质的总称，属植物次级代谢产物，现已鉴定出4000余种。
苹果含有丰富的类黄酮，其提取方法主要有溶剂法、超临界流体萃取法和大孔吸附树脂法等，以溶剂法应用居多。
提取苹果类黄酮常用的提取剂是甲醇、乙醇、丙酮的水溶液，乙醇较其他两种提取剂毒性小，溶解性能好，对植物细胞的穿透能力较强，不溶解蛋白质、果胶、淀粉和部分多糖等水溶性杂质，且提取液不易发霉变质。
同一溶剂，采取不同的提取方法，其提取效果不同。
我们以乙醇为溶剂，分别采用常温振荡法、液氮冷冻研磨法、匀浆法、超声法4种方法提取苹果类黄酮，以期探索提取苹果类黄酮最佳方法。
同时，对分光光度法测苹果类黄酮含量的标准品、测定波长和显色稳定性进行了探讨。
1、材料与方法1.1 材料及仪器(1)材料辽伏苹果，于2009年7月下旬采自国家果树种质兴城苹果圃，冰箱中4℃下保存15天。
标准品儿茶素、芦丁，购自中国药品生物制品检定所，其他试剂均为分析纯。
(2)仪器设备TU-1800SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，BIOFUGE PRIMO型台式高速离心机(Thermo Electron Corpora-tion)，KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，调速多用振荡器(深圳天南海北实业有限公司)。
1.2 类黄酮的提取取10个大小均匀的辽伏苹果果实，清洗后擦干，将苹果去核，切成小片，混匀，平均分成4份，分别用如下方法提取类黄酮：(1)常温振荡法取1份苹果样，用组织捣碎机匀浆1 min，称取10.00 g，加入80％乙醇30 mL，在往复式振荡器上室温(20℃)提取5 h，过滤，滤液在5300 r／min下离心10 min，上清液35℃减压旋转蒸发3 h，用甲醇移入棕色玻璃瓶中并定容至10 mL，冰箱中20℃下保存。
果皮总黄酮测定方法
果皮总黄酮测定方法
一种常用的果皮总黄酮测定方法是使用分光光度法。
具体步骤如下：
1. 准备样品：将果皮样品研磨成细粉或切碎成细小颗粒。
2. 提取黄酮：取一定量的果皮样品，加入适量的溶剂（如乙醇、甲醇）进行提取，常用的提取方法有浸泡法、超声波提取法等。
3. 过滤：将提取液过滤，去除杂质，得到清澈的提取液。
4. 分光光度测定：取一定量的提取液，将其置于分光光度计中，设置适当的波长（通常为280 nm或其他适当波长），测定吸
光度。
5. 计算浓度：根据测得的吸光度值以及对应的标准曲线，计算出样品中的黄酮浓度。
需要注意的是，这种方法只能测定总黄酮的含量，不能确定具体的黄酮类化合物。
此外，还可以使用高效液相色谱法（HPLC）等方法对具体的黄酮类化合物进行分离和测定。
黄皮中黄酮类化合物的结构及生物活性研究进展
中国果菜China Fruit &Vegetable第44卷,第2期2024年2月精深加工Deep Processing黄皮中黄酮类化合物的结构及生物活性研究进展邹波1，钟思彦1，林锦波2，余元善1，傅曼琴1，卓晓群2，李俊1，卜智斌1，徐玉娟1*（1.广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，农业农村部功能食品重点实验室，广东省农产品加工重点实验室，广东广州510610；2.郁南县富赢田田圈生态农业有限公司，广东云浮527199）摘要:黄皮是我国华南地区特色优稀水果，风味独特，深受广大消费者喜爱。
黄酮类物质是黄皮果实中主要的活性成分之一，具有多种生物活性。
目前关于黄皮中黄酮类化合物的研究较为零散，结论缺乏系统性。
本文全面综述了黄皮中黄酮类化合物的组成、提取方法，系统阐述了其抗氧化、抗肿瘤、保护心血管、增强认知、抗炎、降糖和抑制黑色素生成等功效及作用机制，以期为黄皮中黄酮类化合物的科学研究、黄皮产品的开发和品牌创建提供理论依据。
关键词:黄皮；黄酮类化合物；结构；提取；生物活性中图分类号：TS255.1文献标志码：A文章编号：1008-1038(2024)02-0047-07DOI：10.19590/ki.1008-1038.2024.02.009Research Progress of the Structure and Biological Activityof Flavonoids in WampeeZOU Bo 1,ZHONG Siyan 1,LIN Jinbo 2,YU Yuanshan 1,FU Manqin 1,ZHUO Xiaoqun 2,LI Jun 1,BU Zhibin 1,XU Yujuan 1*(1.Sericultural &Agri-Food Research Institute,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Functional Foods,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Guangdong Key Laboratory of Agricultural Products Processing,Guangzhou 510610,China;2.Yunan County Fuying Tiantianquan EcologicalAgriculture Co.,LTD,Yunfu 527199,China)Abstract:Wampee ((Lour.)Skeels)is a special fruit in South China,which is loved by the majorityof consumers with its unique flavor.Flavonoids are one of the main active components in the fruit,and have various收稿日期:2023-07-27基金项目:广东省重点领域研发计划项目（2022B020*******）；“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目（2023SDZG04）；广东省现代农业产业技术体系优稀水果创新团队项目（2023KJ116）；云浮市科技计划项目（S2021020104）；广东省农业科学院学科团队建设项目（202109TD ）；云浮市郁南县无核黄皮产业园加工科技支撑项目第一作者简介:邹波（1986—），男，研究员，博士，主要从事果蔬加工方面的研究工作*通信作者简介:徐玉娟（1974—），女，研究员，博士，主要从事农产品加工方面的研究工作黄皮（(Lour.)Skeels）是芸香科黄皮属乔木植物的果实，主要分布在广东、广西、福建、海南等我国南方地区及东南亚、非洲等热带亚热带地区[1-2]，其中，广东省云浮市郁南县为著名的“中国无核黄皮之乡”，2022年产值约32亿元。
果树类黄酮的提取、分离纯化及检测方法
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
类黄酮（ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ），是 一 类 结 构 中 有 ２－ 苯 基 色 原 酮 的 特 殊 化 合 物［１］，泛 指 通 过 中 央 三 碳 链 与 两 个芳香环（Ａ 环 和 Ｂ 环）相 互 连 接 而 成 的 多 元 酚 类 化合 物，即 类 黄 酮 都 具 有 Ｃ６－Ｃ３－Ｃ６ 的 基 本 结 构 。 ［２－３］ 类黄酮 在 植 物 中 多 与 糖 结 合 以 苷 元 （结 合 态）的形式存在，仅 有 一 少 部 分 以 自 由 态 形 式 存 在。 依据其芳香环的氧 化 状 态 不 同，可 将 类 黄 酮 化 合 物 分为黄 酮 醇 （ｆａｌｖｏｎｏｌｓ）、查 尔 酮 （ｃｈａｌｃｏｎｅｓ）、黄 酮 （ｆａｖｏｎｅｓ）、异 黄 酮 （ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ）、花 色 素 （ａｎｔｈｏｃｙａ ｎｉｎｓ）、原 花 色 素 （ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ）、黄 烷 酮 （ｆｌａｖａ ｎｏｎｅｓ）、黄 烷 醇 （ｆｌａｖａｎｏｌｓ 或 儿 茶 素 ｃａｔｅｃｈｉｎｓ） 等 。 ［４］ 目前为止，已报道的类 黄 酮 化 合 物 多 达９０００ 种 。 ［５］ 近年来，由于类黄酮化合物具有抗氧化、抗 肿 瘤、抗炎 症 等 医 疗 保 健 功 能 而 受 到 人 们 的 日 益 关 注 。 ［６］ 类黄酮是 果 树 的 一 类 重 要 的 次 生 代 谢 产 物，
微波辅助下无患子果皮中总黄酮提取条件的优化
苏教版一年级语文下说课稿《这儿真好》说课稿这儿真好【说教材】一、教材简析《这儿真好》是义务教育课程标准试验教材语文一班级(下册)中的一篇课文。
这是一篇发人深思、情境性很强的童话故事，描写了居住荒岛的小熊感到孤独，查找伙伴，在天上云朵的启示下营造树林，究竟迎来很多伙伴的故事，生动地表现了需要制造美妙的生态环境、建设可爱的绿色家园的思想感情。
告知我们改善环境、爱护环境的重要性。
课文共6个自然段，可分为三段。
第一段(第1自然段)写小熊住在荒岛上很孤独。
第二段(第2、3自然段)写小熊向云儿请教后，开始在岛上种树。
第三段(第4～6自然段)写小熊找到了伙伴。
二、教学目标依据《语文课程标准》，教材及学段要求和同学认知特点，第二教时的教学目标为：⒈能正确、流利、有感情地朗读课文。
⒉了解小熊是怎样找到伙伴的，知道"这儿'好在哪里。
使同学懂得制造美妙的生态环境、建设可爱的绿色家园的重要。
⒊学会7个生字，绿线内的字只识不写，理解由生字组成的词语;认识两个偏旁部首。
教学重点：⒈读书感悟小熊是怎样找到伙伴的，知道"这儿'好在哪里。
⒉写好"象'、"空'二字。
教学难点：让同学通过读书感悟到找伙伴和种树之间的联系，明白爱护环境的重要性。
【说教法、学法】一、情境教学法苏教版学校语文一班级下册说课稿《这儿真好》：借助现代化的教学手段，用画面再现情境，用音乐渲染情境，用语言描绘情境，使同学入情入境，由境生情。
这种教学方法尤其相宜运用在低班级教学中。
一方面，低班级儿童形象思维占有明显优势，用此方法，让儿童从感觉形象入手，以情激情，符合同学的年龄特点。
另一方面，《语文新课程标准》指出:同学是语文学习的主人。
语文教学应激发同学的学习爱好，着重培育同学自主学习的意识和习惯，为同学创设良好的自主学习情境。
依据低班级同学的认知规律及教材充斥童趣这一特点，在教学中，老师创设了"小熊找伙伴'、"小熊种树'、"小动物来做客'等同学乐于接受的、能享受其间的情境，激发同学的积极心情和深厚爱好，营造鲜活的课堂氛围，让每个同学积极主动地参加到语文学习活动中，点燃思维的火花，开启心灵的聪慧，感受胜利的欢乐。
苹果渣中总黄酮的提取及其抑菌活性研究
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关键词 苹果渣 ； 总黄酮 ； 菌作用 抑 中图分类号 Ｑ ４ ． ９ ９ ８ 文献标识码 ６ ８
Ａ
文章编号
０ １ — ６ １ ｏ８２ — １ １ ０ ５７ ６ １（ ０ ） １６ — １ ２ ７ ３
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苹果果皮中总黄酮的提取方法优化研究摘要：我们以控制变量的方法，以苹果果皮总黄酮得率为考察指标，对影响苹果皮总黄酮提取方法的因素进行了探讨，通过从苹果皮中提取出来的黄酮的吸光度描绘出的曲线判断其含量得出了苹果皮总黄酮提取的优化条件，从而找出它的优化方法并测定了苹果果皮中总黄酮的含量。
结果表明，苹果果皮总黄酮提取的最佳实验条件为：水浴温度为65℃，乙醇浓度为65%，提取时间为2h，pH=10，总黄酮得率为1.272%。
关键词：苹果、总黄酮、提取方法前言黄酮类（英语：Flavones）是一类基于2-苯基色圆酮-4-酮（2-苯基-1-苯并吡喃-4-酮）骨架的黄酮类化合物。
果中的重要抗氧化物质来源。
苹果皮的营养与经济价值：黄酮化合物是广泛存在水果和蔬菜中的一类次生代谢类物质，近来发现它们具有很强的清除自由基能力，是苹苹果皮中含有很多生物活性物质，例如：酚类物质，黄酮类物质，以及二十八烷醇等，这些活性物质可以抑制引起血压升高的血管紧张素转化酶，有助于预防慢性疾病，如心血管疾病、冠心病，降低其发病率。
此外，苹果皮的摄入可以降低肺癌的发病率。
国外研究表明，苹果皮较果肉具有更强的抗氧化性，苹果皮的抗氧化作用较其它水果蔬菜都高。
普通大小苹果的果皮抗氧化能力相当于800mg维生素C的抗氧化能力。
苹果皮中的二十八烷醇还具有抗疲劳和增强体力的功效。
苹果皮可以抑制齿垢的酶活性及口腔内细菌的生长，具有抗蚀作用，可以保护牙齿。
还可以使皮肤白嫩，防止黑色素的生成，有美容功效。
苹果皮含丰富的膳食纤维，能帮助消化。
苹果中将近一半的维生素C也在紧贴果皮的部位。
苹果皮比果肉抗氧化性更强。
目前已经有很多厂家通过从苹果皮中提取生物活性物质来开发功能食品。
苹果皮粉作为一种很有价值的食品添加剂，可以用其生产强化食品，少量地添加苹果皮粉就能够增加食品中的多酚类物质、黄酮类物质的含量。
1实验目的（1）学习分光光度计的原理，加深掌握和熟悉了分光光度计的原理和使用操作。
（2）了解了黄铜的结构和化学性质，学会了如何鉴定黄酮类化合物和学习植物中黄酮化合物的提取的一般方法，同时也了解了黄酮类化合物的药性功效。
（3）掌握标准曲线法测定原料药含量的方法及锻炼自己的实验操作技能。
2材料的选择研究表明，苹果果实中含有丰富的黄酮类物质，主要集中在果皮部分，果肉和果心中的含量远远小于果皮的黄酮含量。
但是由于农药的残留、空气污染等诸多不利因素，人们在食用苹果时多将果皮弃去，却没有认识到在去除果皮的同时却丢弃了苹果最有营养价值的部分。
而且，黄酮化合物是广泛存在于水果和蔬菜中的一类次生代谢类物质,近来研究发现,它们具有很强的清除自由基能力,是苹果中的重要抗氧化物质来源。
苹果果实中含有丰富的黄酮类物质,且主要集中在果皮部分,果肉和果心中的黄酮含量远远小于果皮，苹果皮中的总多酚含量达307mg/100g，总黄酮为184mg/100g，原花青素为105mg/100g，这些数据是果肉所望尘莫及的。
所以在本次实验中我们挑选皮果皮来做实验原料。
若存在一种科学有效的提取方法将苹果皮中的总黄酮等抗氧化物质提取分离，加以充分利用，为食品加工业、化妆品工业以及医药业提供天然抗氧化剂资源，将为苹果的加工业开辟新的出路。
目前提取分离苹果中黄酮类物质还没有一个完善的方法，本研究旨在找到一个苹果果皮中总黄酮提取的最佳方法，为苹果的营养鉴定提供一个确切的黄酮含量测定标准，并为苹果的开发利用提供一个科学有效的理论依据。
3实验原理3.1结构黄酮类化合物(Flavonoids)，又称物黄酮(Bioflavonoids)或植物黄酮。
黄酮类化合物泛指拥有15个碳原子的多元酚化合物，其中两个芳环(A环、B环)之间以一个三碳链相连，其骨架可用C6-C3-C6表示[1]。
基本结构如图1-1。
A B图1-1 黄酮（A）和异黄酮（B）的分子结构根据中央三碳链的氧化程度、B环连接的位置（2-位或3-位）以及三碳链是否构成环等特点，可将黄酮类化合物进行不同分类。
3.2性质游离的黄酮类化合物一般难溶或不溶于水，可溶于乙醇、乙酸乙脂、甲醇、乙醚等有机溶剂或稀碱中。
其中黄酮醇、黄酮、查耳酮等，因为分子中存在交叉共扼体系，所以是一类平面型化合物，平面型分子堆砌得比较紧密，分子间引力较大，故很难溶于水。
黄酮类化合物分子中有多个酚羟基，显酸性，可溶于乙醇.碱水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。
3.3分光光度当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的透光率T为: 根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律: A=abc式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm^3)，a为吸光系数。
其中吸光系数与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。
溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。
由上式可知，当固定溶液层厚度l和吸光系数时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。
在定量分析时，首先需要测定溶液对不同波长光的吸收情况（吸收光谱），从中确定最大吸收波长，然后以此波长的光为光源，测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲线。
在分析未知溶液时，根据测量的吸光度A，查工作曲线即可确定出相应的浓度。
3.4显色反应在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色，在510nm波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律，一般以芦丁标准品定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮，然后加入硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2''''羟基查耳酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时不显色4实验材料实验所用苹果样品为甘肃天水花牛苹果生产基地4.1仪器4.2药品：5实验步骤5.1溶液配制（1）5%NaNO2溶液：准确称取5g NaNO2放置于烧杯中溶解，移至100mL容量瓶中并定容至刻线。
（2）10% Al(NO3)3溶液：准确称取10g Al(NO3)3放置于烧杯中溶解，移至100mL容量瓶中并定容至刻线。
（3）4%NaOH溶液：准确称取4gNaOH放置于烧杯中溶解，移至100mL容量瓶中并定容至刻线。
（4）55%乙醇：称取无水乙醇150g，加入水122.7g，配制成55%的乙醇（5）65%乙醇：称取无水乙醇150g，加入水80.77g，配制成65%的乙醇（6）75%乙醇：称取无水乙醇150g，加入水80.77g，配制成75%的乙醇5.2标准曲线的制作本研究以芦丁作为苹果总黄酮含量测定的标准品。
（1）波长的选择取样品液适量，在0.5mL5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在450～550nm波长范围测定络合物的吸光度,并找出最大吸收波长。
（2）准确称取芦丁标准品20mg，用95%的乙醇溶解，定容到100mL的容量瓶中，再精确从中量取25mL至50mL的容量瓶中，用95%的乙醇稀释定容，得到浓度为100μg/mL的芦丁标准溶液。
准确吸取该溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0mL，分别置于25mL试管中，加入5%的NaNO2溶液0.5mL，混匀后放置6min，然后加入0.5mL的10%的Al(NO3)３溶液，摇匀后放置6min。
最后加入4%的NaOH溶液4mL，用95%乙醇定容至25mL, 摇匀，放置15～20min，以上述8种溶液为标准品溶液，在510nm测定不同浓度的标准品的吸光值。
5.3 条件实验（1）温度对总黄酮提取的影响：设定温度为：55℃、 65℃、 75℃乙醇浓度为：65% ；提取时间为：2h（2）乙醇浓度对总黄酮提取的影响：设定乙醇浓度为：55% 、 65% 、 75%温度为： 65℃；提取时间为：2h（3）提取时间对总黄酮提取的影响：设定提取时间为：1h 、 2h 、 3h温度为：65℃；乙醇浓度为：65%（4）pH对总黄酮提取的影响：设定pH为 8、9、10、11温度为65℃、乙醇浓度65%、时间2h取出样品进行过滤，过滤完后，再进行一次过滤，收集滤液试管中，移取2.5ml于50ml 的容量瓶中并定容至50ml,摇匀，用移液管移取5mL于试管中，加入5%的NaNO2溶液0.5ml，混匀后放置4-6min，然后加入0.5mL的10%的Al(NO3)３溶液，摇匀后放置4-6min。
最后加入4%的NaOH溶液4mL，摇匀，放置15～20min，测其吸光度。
按上述标准的显色方法测定总黄酮含量，按下式计算总黄酮得率。
总黄酮得率%=【量取液浓度（mg/mL ）*体积（mL ）*稀释倍数】/[称去样品干重（g ）*1000]6实验结果表一：不同波长对吸光度的影响结果表二：不同波长对吸光度的影响曲线表 三：溶液分光光度测量结果表四：芦丁标准曲线的绘制标准品溶液浓度ug/ml0 10 20 30 40由表一数据，根据标准曲线的制作方法，以浓度（c ，ug/ml ）为横坐标，吸光值（A722）为横坐标，进行线性回归，得到回归方程：y=0.01002x+0.0348 r 2= 0.9898表 五：温度对黄酮提取量的影响（乙醇浓度设为65% 2h ）A)表六：乙醇浓度对黄酮提取量的影响（温度设为65℃时间h）表七：提取时间对黄酮提取量的影响（温度设为65℃乙醇浓度65%）表七：提取时间对黄酮提取量的影响（温度设为65℃乙醇浓度65% 时间2h）7实验讨论(1)由所得数据得到络合物于510nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
(2)用最小二乘法做线性回归，得到芦丁标准溶液吸光度A与浓度C的关系曲线的回归方程为：Y=0.01002X+0.0348 r2 =0.9898比色溶液显色后，在5小时内的吸光度的变化小于5%，黄酮类物质与铝盐生成的络合物显色稳定，说明分光光度法以芦丁为标准样品测定总黄酮含量稳定可靠，且简单易行。
(3)由图表知浴温度对总黄酮得率的影响：黄酮提取量先随温度升高而升高，当达到65℃以后又开始降低，所以低温和较高温度都不利于总黄酮的提取。
温度过低降低了黄酮的溶解度低，而不能充分地把果皮中总黄酮完全提取，而温度较高时，黄酮类化合物的稳定性差，易发生氧化作用而失效，造成总黄酮得率降低。
(3) 由图表知乙醇浓度对总黄酮提取的影响：黄酮提取量先随乙醇浓度升高而升高，当达到65%以后又开始降低，乙醇的浓度较大和较低时，总黄酮的得率都比较低，表明苹果中的黄酮类化合物具有一定的水溶性。
65%的乙醇兼有极性、非极性和中等极性的特点，适合提取混合物成分。
另外，与甲醇相比，用乙醇作溶剂具有无毒、无异味、无残留、安全性好等优点。
(4) 由图表知提取时间对总黄酮提取的影响：黄酮提取量先随时间升高而升高，当达到2h以后又开始降低，所以并非时间越久越好，提取2个小时与提取3个小时差异不是很明显，而且时间较久时提取量还有下降的趋势，原因可能是因为黄酮的稳定性较差，时间较长时易发生氧化反应，在高温提取过程中分解变性，致使黄酮的率降低。