总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。
超声波提取植物总黄酮
实验一植物材料中总黄酮分离提取--超声波提取植物总黄酮一、实验目的为充分利用天然植物资源，避免资源的浪费，探讨植物总黄酮的提取及鉴别方法。
二、实验原理采用超声波乙醇浸提法从植物材料（黄芩、银杏叶、枇杷叶）中提取黄酮类物质，并用分光光度法测定含量。
利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。
三、实验材料原料：黄芩、银杏叶、枇杷叶试剂：95%乙醇AR；无水乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；芦丁标准品、蒸馏水其它：滤纸、吸管、容量瓶、漏斗、试管四、实验仪器超声波清洗器（超声工作频率40kHz）；紫外可见分光光度计；抽滤机电炉子水浴锅五、实验步骤（一）试剂配制a.硝酸铝（10%）：称取20 g硝酸铝溶于蒸馏水中，定容至200 mL，混匀，贴标签备用。
b.亚硝酸钠（5%）：称取10 g亚硝酸钠溶于蒸馏水中，定容至200 mL，混匀，贴标签备用。
c.芦丁标准溶液（2 mg/ml）：称取芦丁2 g于1000 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，混匀，贴标签备用。
d.乙醇溶液（60%）：600ml无水乙醇，溶于蒸馏水，定容至1000 ml容量瓶中，混匀，贴标签备用。
e.氢氧化钠溶液（4%）：40 g氢氧化钠溶于水，定容至1000 ml容量瓶中，混匀，贴标签备用。
（二）总黄酮成分提取取干燥植物材料（黄芩、银杏叶、香樟叶），粉碎。
称取约5 g，加80 ml 95%乙醇，浸泡20min，超声波提取30 min，抽滤。
滤渣再加80 ml 95 %乙醇，浸泡20min，再次超声波提取30 min，抽滤，合并两次滤液，减压回收（水浴加热）乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
（三）定量实验-总黄酮的含量测定1. 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
黄酮的提取 三种方法
黄酮的提取三种方法黄酮的提取三种方法辣木叶中黄酮的提取具体操作流程1.1材料与试剂辣木叶，老师提供；芦丁标准品、分析纯无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝，氢氧化钠等。
1.2仪器与设备kq-300de型数控超声波清洗器；电子分析天平；anketdl-5-a离心机；紫外/可见分光光度计。
1.3辣木叶总黄酮的抽取方法取干燥的辣木叶，粉碎过40目筛。
准确称取辣木叶粉1.0g，置于100ml烧杯中，加入体积分数为80%的乙醇溶液超声提取，提取液离心分离，测定总黄酮的含量。
具体操作流程：辣木叶→潮湿→磨粉→过40目筛→超音波抽取→Vergt→上清液→测量总黄酮含量。
1.4总黄酮的测定方法1.4.1芦丁标准曲线的绘制精确称取潮湿至恒重的芦丁标准品20mg，用体积分数为80%的乙醇溶液熔化，定容至25ml，酿制获得质量浓度为0.80mg/ml的芦丁标准溶液。
精确汲取崭新酿制的芦丁标准溶液0、125、250、500、625、750、1500μl于10ml的比色管中，重新加入体积分数80%的乙醇溶液至9ml，重新加入5%的na-no2溶液300μl，容器，置放6min。
重新加入10%的al（no3）3溶液300μl，容器，置放6min，再重新加入1mol/l的naoh溶液500μl，容器，静置10～15min。
以80%的乙醇溶液为试剂空白作参比液，于510nm波长处测量吸光值。
以芦丁浓度（mg/ml）为横坐标，喷光度值a为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y=ax-b，r2=x，得线性关系。
1.4.2辣木叶总黄酮含量的测定精确汲取适度辣木叶黄酮提取液，按照芦丁标准曲线制作方法测量喷光度。
由喷光度根据回归方程排序出来原提取液中总黄酮的质量浓度（c），测量获得辣木提取液体积（v），然后排序出来辣木叶中总黄酮的抽取率为。
辣木叶中总黄酮抽取率为（以芦丁计）%=c×vm×100其中：c为样液经喷光度求出的原提取液中总黄酮的质量浓度（g/ml）；v为提取液的总体积（ml）；m为称取的辣木叶粉质量（mg）。
艾叶中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究
艾叶中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究艾叶是常用的中药材之一，其具有多种药理活性，如抗氧化、抗肿瘤、治疗高血压等。
其中，艾叶中的总黄酮是一种重要的活性成分，具有较强的抗氧化活性。
因此，提取艾叶中的总黄酮，并研究其抗氧化活性，对于探索艾叶的药理作用具有重要意义。
一、艾叶中总黄酮的提取方法1. Sohxlet提取法将粉碎的艾叶样品放入芦笼中，加入乙醇和水的混合溶液，进行Sohxlet提取，直至提取液中没有可见的黄色物质为止。
然后进行浓缩和溶剂去除，得到艾叶总黄酮。
2. 超声波提取法将粉碎的艾叶样品放入贝克瓶中，加入乙醇和水的混合溶液，进行超声波提取，直至提取液中没有可见的黄色物质为止。
然后进行浓缩和溶剂去除，得到艾叶总黄酮。
二、艾叶中总黄酮的抗氧化活性研究方法1. DPPH自由基清除法将一定量的DPPH溶液与一定量的样品溶液混合，放置一段时间后，测量混合液的吸光度，并将其与DPPH自由基的吸光度进行比较，计算出样品对DPPH自由基的清除率，从而评估其抗氧化活性。
2. 过氧化氢清除法将一定量的过氧化氢溶液与一定量的样品溶液混合，放置一段时间后，测量混合液的吸光度，并将其与过氧化氢的吸光度进行比较，计算出样品对过氧化氢的清除率，从而评估其抗氧化活性。
三、艾叶中总黄酮的研究结果通过Sohxlet提取法和超声波提取法分别提取艾叶中的总黄酮，并将两种提取方法得到的总黄酮进行比较，结果表明超声波提取法的提取效率更高，提取得到的总黄酮含量也更高。
通过DPPH自由基清除法和过氧化氢清除法对艾叶总黄酮的抗氧化活性进行了研究，结果表明艾叶总黄酮具有较强的抗氧化活性，可以清除自由基并保护细胞免受氧化损伤。
综上所述，艾叶中的总黄酮是一种重要的抗氧化成分，具有良好的应用前景。
本研究通过比较不同提取方法和不同抗氧化活性测定方法，为深入探索艾叶的药理作用提供了一定的基础。
总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法总黄酮是一类在植物中广泛存在的生物活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性。
总黄酮的提取方法主要分为常规提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、超临界流体提取法等。
下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。
1. 常规提取法：常规提取法是最常用的总黄酮提取方法之一。
该方法的原理是将植物样品与某种适合的溶剂进行浸提，溶剂中的总黄酮溶解出来，然后通过过滤和浓缩得到黄酮提取物。
操作步骤：(1) 将研磨后的植物样品与适量的溶剂加入烧瓶中，一般常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
(2) 将烧瓶放入提取装置中，加热浸提，提取时间一般为1-3小时，提取温度根据溶解度可在25-60之间选择。
(3) 提取结束后，使用滤纸、膜过滤或离心等方式分离固液，将液相收集到锥形瓶中。
(4) 将液相进行浓缩，可采用旋转蒸发、真空浓缩或减压浓缩等方法。
(5) 最后得到的黄酮提取物可在低温下保存或进行进一步的分离和纯化。
2. 超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是在常规提取法的基础上结合超声波技术进行提取。
超声波的作用可以通过物理振荡和微压力变化，促使溶剂渗透进入植物细胞中，增加提取效率。
操作步骤：(1) 将样品与适量的溶剂放入超声波提取仪中，超声波输出频率一般在20-100 kHz之间。
(2) 开始超声波处理，提取时间一般较短，通常为10-30分钟。
(3) 提取完成后，进行过滤和浓缩等步骤，得到黄酮提取物。
3. 微波辅助提取法：微波辅助提取法是一种利用微波辐射能量加热样品，从而促进溶质的溶解和渗透的方法。
操作步骤：(1) 将植物样品与适量的溶剂放入微波辅助提取系统中。
(2) 设置合适的微波功率和时间，一般微波功率选取在200-1000 W之间，时间一般为5-20分钟。
(3) 提取完成后，进行过滤和浓缩等步骤，得到黄酮提取物。
4. 超临界流体提取法：超临界流体提取法是在超临界温度和压力条件下利用超临界流体作为溶剂进行提取的方法。
总黄酮提取流程
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总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法
总黄酮是一种天然活性物质，广泛存在于植物中，常用于药物和保健品的制备。
目前常见的总黄酮提取方法包括以下几种：
1. 溶剂提取法：将原料粉碎后，使用有机溶剂（如乙醇、丙酮、乙酸乙酯等）进行浸提，振荡或浸泡一段时间，然后过滤、蒸发溶剂，得到纯化的总黄酮。
2. 超声波提取法：将原料与溶剂混合，通过超声波振荡破碎细胞壁，促进活性成分的释放，并加速提取过程。
该方法具有提取效率高、时间短等优点。
3. 超临界流体提取法：使用超临界流体（如二氧化碳）作为溶剂进行提取，利用其高渗透性和脱溶性能，能够高效提取总黄酮，并且溶剂易回收。
4. 水煎膏提取法：将原料与适量的水一起煎煮一段时间，提取活性物质。
该方法适用于一些水溶性总黄酮的提取。
5. 微波辅助提取法：将原料与溶剂混合，置于微波辐射区域，利用微波加热和共振效应，提高提取速度和效率。
6. 酶法提取：使用适当的酶（如纤维素酶、葡萄糖苷酶等）对原料进行酶解处理，使得总黄酮释放。
该方法能够提高总黄酮的提取率和纯度。
需要根据具体的实际情况选择合适的提取方法，因为不同的原料和需求可能对提取方法有不同的要求。
同时，提取方法的参数（如温度、时间、溶剂比例等）也需要进行优化，以提高提取效果。
黄酮提取方法
总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。
超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。
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总黄酮的提取方法
1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法
2、 2.1 微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单
3、 2.2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
4、 2.3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
5、 2.4 酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。
黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。
王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是1.43%，0.94% 和0.79%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。
6、2.5 双水相提取法双水相提取技术是瑞典Per Albersson首先发现并研究的一种技术，双水相萃取法属于液- 液萃取，当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力的作用，溶液环境的影响，其在上、下相中的浓度不同，即各成分在两相间选择性分配，从而达到萃取的目的。
由于双水相体系分相快、使用温度低、容易操作、无污染、提取率高，因此成为黄酮化合物富集分离的一种有效方法。
张春秀等[24]取一定量的银杏叶浸提液，加到PEG1500/ 磷酸盐体系双水相系统中，则黄酮类化合物进入上相PEG，从而将黄酮类化合物分离，提取率可达98.2%。
7、 2.6 半仿生提取法半仿生提取法是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，模拟口服给药后药物经胃肠道转运的环境，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。
这种提取方法的特点是可以提取和保留更多的有效
成分，能缩短生产周期、降低成本。
2.7 膜分离法膜分离法主要有超滤、微滤、纳滤和反渗透等，其中超滤法是膜分离的代表，它是唯一能用于分子分离的过滤方法，是以多孔性半透膜为分离介质，依靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离溶液中不同分子量的物质。
由于大多数黄酮类化合物的分子量在1000 以下，而非有效成分如大多数的多糖、蛋白质等分子量多在50000 以上，因而使用超滤能有效去除蛋白质、多肽、大分子色素、淀粉等，达到除菌、除热原、提高药液澄明度以
及提高有效成分含量等目的。
这种方法操作简便、不需要加热、不损坏黄酮类化合物，提取效果好、超滤装置可反复使用。
于涛等[26]研究了银杏叶中黄酮类化合物的提取过程及工艺，使用超滤技术对粗提的产品进行精制，对影响超滤的工艺条件进行了考察，超滤后产品中黄酮质量分数达到33.99%。
2.8 热压流体萃取法热压流体萃取法是一种快速、环保、便宜、有效地萃取生物活性物质的方法。
Chaorui Chen等[27]采用热压流体萃取法从巴西蜂胶中提取了7种黄酮类化合物，结果表明，通过热压水萃取的样品中当存在表面活性剂时萃取物的固体含量更高，当使用热压脂溶萃取时，7种黄酮类化合物的含量在脂溶萃取中超过了水溶萃取。
KairHartonen等[28]用热压水萃取法从白杨中萃取了黄酮类化合物，考察了萃取时间、温度和压力等因素的影响，并与超声波萃取、高速逆流色谱做了比较，结果表明用热压水萃取法在150℃萃取35min效果最好。
2.9 高压液相提取法Ying Zhang等[29]通过高压液相萃取法从鱼腥草中萃取了黄酮类化合物，研究了乙醇浓度、流速、温度和压强等因素的影响，并与热浸法和超声波辅助萃取法进行对比，发现高压液相萃取法提取效果较好，当使用50% 乙醇，溶剂流速为1.8mL/min，温度为70℃，压强为8MPa 时，黄酮类化合物的得率和浓度可以达到
3.152% 和23.962%。