高胰岛素-正常血糖钳夹试验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。
1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。
根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。
高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。
该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。
在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。
2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。
胰岛素钳夹实验技巧
胰岛素钳夹实验技巧胰岛素钳夹实验技巧背景介绍胰岛素是一种重要的激素，能够调节血糖水平。
胰岛素钳夹实验是用来研究胰岛素对血糖水平的影响的常用实验方法。
本文将介绍一些胰岛素钳夹实验的技巧，帮助你顺利进行此实验。
实验前准备在进行胰岛素钳夹实验之前，需要做一些准备工作：•动物模型的选择：根据实验的目的和动物种类的特点，选择合适的动物模型（如小鼠或大鼠）。
•实验仪器的准备：确保实验仪器（如钳夹仪、采血针等）处于良好工作状态。
•试剂的准备：准备好胰岛素溶液和其他相关试剂，确保其纯度和浓度符合实验要求。
实验步骤1.动物麻醉：根据实验需要，使用适量的麻醉剂使动物处于麻醉状态，确保操作过程安全无虞。
2.控制血糖水平：在实验开始前，测量动物的空腹血糖水平，并确保其在正常范围内。
如有需要，进行必要的调整（如胰岛素注射或葡萄糖注射等）。
3.建立动脉和静脉通路：使用适当的方法建立动脉和静脉通路，以便进行胰岛素钳夹实验时的血液采样和胰岛素注射。
4.基础血样采集：在实验开始前，收集一定量的基础血样，用于后续血糖测量。
5.胰岛素注射：根据实验设计，进行定量的胰岛素注射，并确保注射技术准确。
6.钳夹实验：在胰岛素注射后，使用钳夹仪逐渐提高血糖水平，监测血糖动态变化，并记录相关数据。
7.血样采集与血糖测量：根据实验设计，在不同时间点采集血样，并使用合适的方法测量血糖水平。
8.数据处理与分析：对实验得到的数据进行统计分析，并根据需要进行图表展示。
实验注意事项在进行胰岛素钳夹实验时，需要注意以下事项：•操作精确：实验过程中的所有操作都需要准确、精细。
特别是胰岛素注射和钳夹操作，都需要严格控制药物和力度的大小。
•实验时间安排：根据实验的需要和动物的特性，合理安排实验的时间和顺序，以减少动物的压力和疲劳。
•安全措施：在实验过程中，严格遵守实验室的安全规范，包括佩戴好防护手套、眼镜等，并妥善处理实验废弃物。
•数据记录：及时、准确地记录实验中得到的数据和观察结果，以备后续分析和讨论。
高胰岛素—正常血糖钳夹技术的护理及改进分析
高胰岛素—正常血糖钳夹技术的护理及改进分析DOI：10.16658/ki.1672-4062.2017.05.007目的分析研究高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进。
方法随机选取该院2016年10月—2017年1月期间收治的60例代谢综合征（MS）患者，按照入院顺序，分为实验组与常规组，各30例。
所有患者，均行高胰岛素-正常血糖钳夹试验，其中，常规组，行常规护理，实验组，实施经改进的护理方式，对比分析护理效果。
结果对比不良反应，实验组发生率为3.3%，常规组为16.7%，实验组显著低于常规组（P＜0.05）。
对比护理满意度，实验组显著高于常规组（P ＜0.05）。
结论高胰岛素-正常血糖钳夹试验中，采用经改进的护理方式，效果显著，值得推广。
标签：高胰岛素；正常血糖钳夹试验；护理；改进Analysis of Nursing and Improvement of Hyperinsulinism-Hyperinsulinemic-Euglycemic ClampZHENG Xiao-yanDepartment of Endocrinology，Jinan Central Hospital，Jinan，Shandong Province，260013 China[Abstract] Objective To analyze the nursing and improvement of hyperinsulinism- hyperinsulinemic-euglycemic clamp. Methods 60 cases of patients with metabolism syndrome admitted and treated in our hospital from October 2016 to January 2017 were randomly selected and divided into two groups with 30 cases in each according to the admission order，and all patients were treated with hyperinsulinism-hyperinsulinemic-euglycemic clamp，and the routine group adopted the routine nursing，while the experimental group adopted the improved nursing method，and the nursing effect was compared and analyzed. Results The incidence rate of adverse reactions in the experimental group was obviously lower than that in the routine group（3.3% vs 16.7%）（P＜0.05），and the nursing satisfactory degree in the experimental group was obviously higher than that in the routine group（P＜0.05）. Conclusion The effect of the improved nursing method in the hyperinsulinism-hyperinsulinemic-euglycemic clamp is obvious，which is worth promotion.[Key words] Hyperinsulinism；Hyperinsulinemic-euglycemic clamp；Nursing；Improvement胰岛素抵抗（insulin resistance ，IR）是導致代谢综合征（Metabolic syndrome，MS）的重要病因，目前，就国外内而言，高胰岛素—正常血糖钳夹技术是评价IR公认的“金标准”[1]。
正葡萄糖钳夹实验
一、高胰岛素--正葡萄糖钳夹技术
（一）、历史背景 1966年Andres等根据葡萄糖一胰岛素的负反馈原理，创立了一种可定量分析胰岛
素分泌及作用的方法——葡萄糖钳夹技术。1979年De Fronzo等对该技术从理论上作了
详细的阐述，并给予技术指导，推动了世界范围的广泛应用。萄糖钳夹技术根据研究 目的的不同又划分为高糖钳、正糖钳及低糖钳等不同方法。 （二）、技术原理 1、葡萄糖一胰岛素负反馈体系 血糖升高时，胰岛素分泌增加，并通过增加摄取、储存和利用葡萄糖等方式，下调 血糖；血糖下降，胰岛素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促进代谢分解，加 速糖原分解和葡萄糖异生作用，升高血糖。
升高，而后以较低的速度持续输注维持一定血胰岛素浓度。在静脉通道对侧前肢取血 测量血糖，每隔5min取血测量血糖一次，通过调节葡萄糖输注率以维持血糖水平恒定。 经一段时间后、血糖恒定维持于平衡状态。给胰岛素制剂后,葡萄糖输注率随着胰岛素 产生的作用变化，以此来评价胰岛素制剂的药效动力学特征。
3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。
（三）、特点
Hale Waihona Puke 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰岛素
敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异性。 （四）、缺点 1、不同受试者的应激反应和血管紧张度等诸多因素会对稳态的建立产生一定的影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通
胰岛素钳夹实验技巧
胰岛素钳夹实验技巧实验步骤：1.试样准备：首先准备标准品的稀释溶液和样品的提取液。
将标准品按照一定的比例稀释至所需浓度。
对于样品，首先将胰腺组织等样品切成小块，并添加适量的提取缓冲液，然后使用超声波浸提或者机械粉碎等方法提取样品中的胰岛素。
2. 硝酸银试剂的制备：胰岛素钳夹实验主要是通过硝酸银试剂与胰岛素反应生成沉淀来间接测定胰岛素的含量。
制备硝酸银试剂的方法为：将1mol/L的硝酸银溶液缓慢滴加到相对浓度为0.1mol/L的硝酸铜溶液中，同时不断搅拌，直到沉淀停止产生。
然后将沉淀过滤并用水洗涤。
3. 血浆样品的处理：将标准品溶液和样品溶液分别加入不锈钢板槽内，然后加入硝酸钙溶液，使溶液的钙离子浓度为0.1mol/L。
接着，在实验前通过分光光度计测定样品和标准品的吸光度值。
4.实验操作：将溶液中的胰岛素与硝酸银试剂反应，生成测定物质，沉淀后使用胶体银试剂与捕获剂作用形成测定物，最后使用硫代硫酸钠溶液将测定物还原，产生测定物的比色反应。
根据标准曲线和样品的吸光度值，可以计算出样品中胰岛素的含量。
实验技巧：1.胰岛素钳夹实验需要使用无菌技术，以避免外源性胰岛素的干扰。
在实验操作前，必须充分清洁实验室器材和工作台面，并穿戴好实验手套和口罩等防护措施。
2.样品提取过程要小心轻柔，避免过度振荡或机械破碎。
这样可以避免样品中的酶释放，导致实验结果的偏差。
3.在实验过程中，注意各个试剂的储存和保护，要避免与空气长时间接触，以防止试剂变质。
4.实验操作时要严格按照实验步骤进行，在加入试剂时注意滴加的速度和剂量。
尤其是硝酸银试剂的滴加要缓慢并加入到硝酸铜溶液中，以避免出现不必要的反应。
5.在读取吸光度值时，应在相同的光路和条件下进行测量，并使用去离子水或提取液进行基线校准。
6.在计算胰岛素含量时，需要根据实验所用的标准曲线进行插值，以减少误差。
同时，注意将标准曲线的线性范围内的吸光度值与样品的吸光度值进行比较。
高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析
高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析
郑晓岩
【期刊名称】《糖尿病新世界》
【年(卷),期】2017(020)005
【摘要】目的分析研究高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进.方法随机选取该院2016年10月—2017年1月期间收治的60例代谢综合征(MS)患者,按照入院顺序,分为实验组与常规组,各30例.所有患者,均行高胰岛素-正常血糖钳夹试验,其中,常规组,行常规护理,实验组,实施经改进的护理方式,对比分析护理效果.结果对比不良反应,实验组发生率为3.3%,常规组为16.7%,实验组显著低于常规组
(P<0.05).对比护理满意度,实验组显著高于常规组(P<0.05).结论高胰岛素-正常血糖钳夹试验中,采用经改进的护理方式,效果显著,值得推广.
【总页数】2页(P7-8)
【作者】郑晓岩
【作者单位】济南市中心医院内分泌科,山东济南 250013
【正文语种】中文
【中图分类】R473
【相关文献】
1.高胰岛素-正常血糖钳夹技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价 [J], 曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉
2.高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的护理 [J], 向桂珍;罗涌;江玉蓉
3.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽
4.Wistar大鼠的正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术 [J], 李晨钟;张素华;舒昌达;任伟
5.清醒状态大鼠高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立及其意义 [J], 罗四川;李启富;刘红梅
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正葡萄糖钳夹技术在胰岛素研究中的运用
高
正
定量检测
胰岛素分泌
来源：外源性 和胰岛素抵抗 的方法
作用：抑制内源性
血 糖
水
抑制肝糖原分解
平
技术特点
技术原理
输注外源性葡萄糖及胰岛素 葡萄糖输注率等于
打破体内葡机萄体糖的-胰葡岛萄素糖的利负用反率馈调控 调节灌注流速控制血糖稳态降低内源性 干扰
胰岛素敏感性评价的金标准
金标准 避免低血糖
评判标准
0.0 2.0
钳夹技术在胰岛素研究中的应用
钳夹的建立 样品的采集
分三步走 指标的检测
钳夹术检测不同胰岛素制剂后平均GIR-T曲线
20
注射 胰 岛 素 口服胰岛素
10
GIR (mg/kg/min)
0 0
120
240
360
480
600
Time/min
生长抑素
生理作用：促进组织生长 对胰岛素有拮抗
作用
高分泌现象：肢端肥大症、 糖尿病
低分泌现象：侏儒症、肝硬 化 脑肿瘤
生理作用：抑制生长激素、 促甲状 腺激素、胰岛素、 胰高 血糖素的分泌
药理作用：减少胰腺的内外 分泌 降低酶活性，对 胰腺细
血糖代谢 血糖稳态
血糖稳态
机体消耗葡萄糖5 g/h，是血液中含有的全部葡 萄糖的总量
10
20
GIR
血糖
8
15
6
10
4
5
2
0
0 0
-5
20
40
60
80
100
120
t (h)
钳夹建立过程中平均胰岛素及C肽的浓度-时间曲线
胰 岛 素 浓 度 （mIU. -L1） C肽 （μg.L-1）
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测原发性高血压患者胰岛素敏感性的护理
关键词 ： 原发 性 高血 压 ； 糖 尿 病 ； 高胰 岛 素一 葡 萄 糖钳 夹技 术 ； 胰 岛素 抵 抗 ； 护 理 正
中 图分 类 号 ： ７ 。 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ： ０ ｌ １ ２ ２ ０ ） ７ ０ １ —０ Ｄ ： ０ ３ ７ ／ ｌｚ． ０ ９ ０ ． １ Ｒ４ ３ ５ Ｂ １ ０ 一４ ５ （ ０ ９ Ｏ — ０ ８ ２ ＯＩ １ ． ８ ０ ｈ ｘｚ ２ ０ ． ７ ０ ８
者 的心理 疏导 ， 检测 前 ， 检测 目的 、 将 意义 及 可 能产 生
２ 护 理
１ １ 一般 资料 ．
２ ４例 中男 １ ４例 、 １ 女 ０例 ， 年龄 ３ ～ ５
６ （ ０ １ － ． ５ 岁 ， 质 指数 ２ ． ５ ０ ６ ， ０ ４． ７－ ３ ） 体 ＿８ ４ １ ７ １ ． １ 空腹 血 糖 （．８ ４ ９ ±０ １ ） ． １ ｍｍｏ／ ｌＬ。２ ４例 患 者 均 确 诊 为 原 发 性 高血 压 ， 即收缩 压≥ １ ０ｍｍＨｇ和 （ ） 张 压≥ ９ ４ 或 舒 Ｏ
的量 和速度 ， 血糖 钳 夹 在 一 个 预 定 的水 平 ； 使 同时 通
检 测 相关项 目。检测 开始 １ ｉ ０ｒ ｎ内快 速 输 入 人胰 岛 ａ 素 溶 液（ 分钟 体表 面积 ８ 每 ＯｍＵ） 将 血糖钳 夹 在一个 ， 预 先设 计 的稳定 水平 ［ 血糖 值 （ ． ０ ． ８ ｍｍｏ／ 靶 ５ Ｏ ±０ ２ ） ｌ Ｌ， ］ 然后 以每 分 钟 体 表 面积 ４ ０ ｍＵ 的 速 度维 持 至检 测结 束 。所得 数 据 通 过 计 算 机 专 用 软件 计 算 ＧＤＲ，
ｔ ｉ ／ Ｐ ａ ｍ ｉ Ｌ ｉｕ ｎ． ｉ ｔ ／ ＡＮ Ｘｉｏ ｅ ， １ ｊａ ＸＵ ｎ ｅ ｖｙ Ｌ Ａ ｆｎ
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高胰岛素-正常血糖钳夹试验
1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。
1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。
根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。
高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。
该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。
在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。
2、关注要点
2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：
(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;
(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;
(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：
2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出
在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
2.2.2 监测血糖间隔时间
每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。
目标血糖需控制在正常空腹血糖±10%范围内。
监测血糖的间隔时间如果过长，很难将平台稳定好，易造成血糖波动，引起内源性胰岛素和升糖激素的变化。
2.2.3 充分抑制内源性胰岛素的分泌
C肽的测定反映了内源胰岛素的分泌情况，对平台的稳定尤为重要，稳态后C肽应抑制为＜基础水平的60%。
2.2.4 控制各种干扰因素
选择女性受试者时，需要考虑月经周期对胰岛素敏感性进而对GIR造成影响。
消除患者紧张和顾虑，稳定患者的情绪，以避免对胰岛素敏感性的影响，才不会对实验结果有影响。
整个试验过程,要求患者保持清醒状态,不能入睡。
因为清醒和入睡时下丘脑、垂体、靶腺所分泌的各种激素可能有差异,因此,使受试者基础状态一致,减少试验误差。
2.2.5 预防低血糖
试验完毕继续输入葡萄糖液30分钟,给病人喝葡萄糖水和进食饼干、面包或糕点,防止低血糖的发生,并密切观察患者情况。
【参考文献】
1、高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立，程时武、陆菊明等，第四军医大学学报，28（22），
2007.
2、Oral insulin: A Comparison With Subcutaneous Regular Human Insulin in Patients With Type 2 Diabetes, CHRISTOPH KAPITZA etc, Diabetes Care, Vol. 33, No. 6, 2010.
3、高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的研究进展，董立厚、宋海峰，中国新药杂志，Vol. 16, No. 19, 2007.
4、葡萄糖钳夹技术在糖尿病研究中的应用，陈蕾、贾伟平等，中华内分泌代谢杂志，Vol. 19, No. 1, 2003.
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