正葡萄糖钳夹实验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。
1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。
根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。
高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。
该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。
在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。
2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。
葡萄糖钳夹技术
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高葡萄糖钳夹操作流程 2
4.分别于-30，-15，0分钟留取基础血 样后，一侧上肢置于一温度为50°C， 湿度为70%的恒温箱中以获得动脉化 的静脉血样，另一侧静脉通道用于 输注20%葡萄糖。
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高葡萄糖钳夹操作流程 3
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
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钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
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2
相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病， 目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上
碳水化学物，维持体重稳定。
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主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
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高葡萄糖钳夹操作流程 1
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。
2. 令受试者排空小便后仰卧于床，整个实 验过程中保持清醒安静状态。
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一 原理及应用 1
通过持续输注外源性胰岛素 和葡萄糖，抑制内源性肝糖 产生和胰岛素分泌，达到外 源性胰岛素-葡萄糖代谢平衡 状态后，评价个体内胰岛素 对葡萄糖代谢的作用程度， 也就是胰岛素的敏感性。
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二 实验仪器
1. 输液泵一台。 2. 注射泵一 台。 3. 快速血糖测定仪一台。 4. 温度控制仪一台。 5. 多功能计时秒表两个。
正葡萄糖钳夹技术在胰岛素研究中的运用
高
正
定量检测
胰岛素分泌
来源：外源性 和胰岛素抵抗 的方法
作用：抑制内源性
血 糖
水
抑制肝糖原分解
平
技术特点
技术原理
输注外源性葡萄糖及胰岛素 葡萄糖输注率等于
打破体内葡机萄体糖的-胰葡岛萄素糖的利负用反率馈调控 调节灌注流速控制血糖稳态降低内源性 干扰
胰岛素敏感性评价的金标准
金标准 避免低血糖
评判标准
0.0 2.0
钳夹技术在胰岛素研究中的应用
钳夹的建立 样品的采集
分三步走 指标的检测
钳夹术检测不同胰岛素制剂后平均GIR-T曲线
20
注射 胰 岛 素 口服胰岛素
10
GIR (mg/kg/min)
0 0
120
240
360
480
600
Time/min
生长抑素
生理作用：促进组织生长 对胰岛素有拮抗
作用
高分泌现象：肢端肥大症、 糖尿病
低分泌现象：侏儒症、肝硬 化 脑肿瘤
生理作用：抑制生长激素、 促甲状 腺激素、胰岛素、 胰高 血糖素的分泌
药理作用：减少胰腺的内外 分泌 降低酶活性，对 胰腺细
血糖代谢 血糖稳态
血糖稳态
机体消耗葡萄糖5 g/h，是血液中含有的全部葡 萄糖的总量
10
20
GIR
血糖
8
15
6
10
4
5
2
0
0 0
-5
20
40
60
80
100
120
t (h)
钳夹建立过程中平均胰岛素及C肽的浓度-时间曲线
胰 岛 素 浓 度 （mIU. -L1） C肽 （μg.L-1）
葡萄糖钳夹操作程序
葡萄糖钳夹试验操作程序试验准备1.开机、定标2.取50ml注射器，配葡萄糖组：10%GS 390ml+50%GS 130ml = 20%GS 520ml3.注射器：1ml 25个、5ml 6个、10ml 3个4.微量泵管1个、输液器2个、套管针2个、三通2个、贴膜2个、纱布、消毒棉签5.生化管（红管）7个：起始抽血3管（10ml）、输胰岛素10min后抽血1管（3ml）、稳态期（21、23、25）分别抽血1管（3ml）6.生理盐水500ml7.诺和灵R 10ml（400U） 1支8.葡萄糖组：接输液器、排气、接三通；接感应器、置软管；开电源、起始9.生理盐水组：从NS500ml中抽NS49ml + 血1ml + INS量；10.点击葡萄糖钳夹软件11.输入：Name；Weight；Euglycaemic；G-Infusion Solution 200mg/ml；G-Pump Max500ml/h；I Max 4；I Start 4；G Utilation 4；BG-End 5；Duration180min；I h12.抽血10ml（3管），测血糖，request，计算胰岛素量13.配置生理盐水组，1ml = 40U， = 4U；排气，接三通；开电源、起始14.确定输液管道通畅，先葡萄糖组，再生理盐水组15.建立双侧静脉通道：右侧输入葡萄糖、胰岛素；左侧抽血（T60-65℃）试验开始1.点击confirm开始⑴2.输注胰岛素10min整，测血糖，改胰岛素用量为h ⑵3.每5分钟测血糖1次，调整葡萄糖输注量，胰岛素用量固定⑶~⒅4.维持血糖在~h5.第19起进入稳态，第21、23、25分别抽血3ml试验结束1.点击结束试验，打开葡萄糖组500ml/h单独输注10min2.保存数据，Save as …；保存图表，Save as …3.计算M值 =（G25-G19）/（Weight×Time）mg/4.带上剩余50%葡萄糖120ml，提醒患者注意进食填写胰岛素管标签，带血清管7个；生化管离心5min，倒出血清，保存至冰箱5.。
智能化葡萄糖钳夹技术评价及护理_余桂芳
＊广东省科技计划项目(编号:2007B 080701021) ■通讯作者。
E-m a i l :r o s z @m e d m a i l .c o m .c n智能化葡萄糖钳夹技术评价及护理＊余桂芳 文玉琼 陈重■ 邝建 杨华章广东省人民医院内分泌科(广州510080) 【摘要】 目的 探讨和评价智能化高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的临床实用性和重复性;总结护理配合经验,提高实验成功率。
方法 应用智能化葡萄糖钳夹技术对20例观察对象(正常糖耐量16例,糖耐量异常(I G T )4例,其中合并多囊卵巢综合征(P C O S )各2例)行正糖钳夹试验,其中3例正常糖耐量者在1个月内重复测定。
结果 ①23例次钳夹实验进入稳态期时间平均为(105.57±26.72)m i n ;②稳态期平均血糖离散值为(0.10±0.06)m m o l /L ;血清胰岛素水平(94.64±13.72)p m o l /L ;③3例正常个体重复试验稳态葡萄糖利用率(G u )差值为(-0.19±0.91)m g /(k g ·m i n )(t =0.385,P =0.754);④正糖钳夹测定的G u 与H O M A 1-I R 的线性相关系数r =0.614(P=0.011),与H O M A 2-I R 线性相关系数r =0.593(P=0.02);医护配合默契,顺利完成。
结论 智能化葡萄糖钳夹操作相对简捷,较快进入稳态,血糖钳夹精确性高,稳定性和重复性好。
H O M A-I R 指数与钳夹技术测定的G u 有显著的线性关系;护理配合在各环节衔接良好,确保结果准确、可靠。
【关键词】 葡萄糖钳夹技术 胰岛素抵抗 护理 智能化 胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷是糖尿病主要发病机制,临床上缺乏理想的检测评价手段,葡萄糖钳夹技术是评价机体胰岛素敏感性的金标准[1-2],目前此技术在国内大多采用手工操作,费时烦琐、精确性不足,我院在国内率先引进德国E K F 半闭环智能化葡萄糖钳夹技术系统作为胰岛素抵抗基础研究与临床评价的重点试验平台,2006年10月至2008年1月对20例个体进行智能化高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验,探讨和评价该试验的临床实用性和重复性,现将操作要点及护理经验报告如下。
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测原发性高血压患者胰岛素敏感性的护理
关键词 ： 原发 性 高血 压 ； 糖 尿 病 ； 高胰 岛 素一 葡 萄 糖钳 夹技 术 ； 胰 岛素 抵 抗 ； 护 理 正
中 图分 类 号 ： ７ 。 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ： ０ ｌ １ ２ ２ ０ ） ７ ０ １ —０ Ｄ ： ０ ３ ７ ／ ｌｚ． ０ ９ ０ ． １ Ｒ４ ３ ５ Ｂ １ ０ 一４ ５ （ ０ ９ Ｏ — ０ ８ ２ ＯＩ １ ． ８ ０ ｈ ｘｚ ２ ０ ． ７ ０ ８
者 的心理 疏导 ， 检测 前 ， 检测 目的 、 将 意义 及 可 能产 生
２ 护 理
１ １ 一般 资料 ．
２ ４例 中男 １ ４例 、 １ 女 ０例 ， 年龄 ３ ～ ５
６ （ ０ １ － ． ５ 岁 ， 质 指数 ２ ． ５ ０ ６ ， ０ ４． ７－ ３ ） 体 ＿８ ４ １ ７ １ ． １ 空腹 血 糖 （．８ ４ ９ ±０ １ ） ． １ ｍｍｏ／ ｌＬ。２ ４例 患 者 均 确 诊 为 原 发 性 高血 压 ， 即收缩 压≥ １ ０ｍｍＨｇ和 （ ） 张 压≥ ９ ４ 或 舒 Ｏ
的量 和速度 ， 血糖 钳 夹 在 一 个 预 定 的水 平 ； 使 同时 通
检 测 相关项 目。检测 开始 １ ｉ ０ｒ ｎ内快 速 输 入 人胰 岛 ａ 素 溶 液（ 分钟 体表 面积 ８ 每 ＯｍＵ） 将 血糖钳 夹 在一个 ， 预 先设 计 的稳定 水平 ［ 血糖 值 （ ． ０ ． ８ ｍｍｏ／ 靶 ５ Ｏ ±０ ２ ） ｌ Ｌ， ］ 然后 以每 分 钟 体 表 面积 ４ ０ ｍＵ 的 速 度维 持 至检 测结 束 。所得 数 据 通 过 计 算 机 专 用 软件 计 算 ＧＤＲ，
ｔ ｉ ／ Ｐ ａ ｍ ｉ Ｌ ｉｕ ｎ． ｉ ｔ ／ ＡＮ Ｘｉｏ ｅ ， １ ｊａ ＸＵ ｎ ｅ ｖｙ Ｌ Ａ ｆｎ
葡萄糖钳夹试验注意事项
葡萄糖钳夹试验注意事项葡萄糖钳夹试验是一种用于测量血糖水平的标准化测试方法。
以下是关于葡萄糖钳夹试验的10条注意事项以及详细描述：1. 必须空腹测试：葡萄糖钳夹试验需要在空腹状态下进行，通常是早晨最早起床后至少8-10小时内没有进食或饮水。
2. 严格遵守禁食规定：在进行试验前的前夜，受试者需遵守相关限制，如停止高糖、高脂肪和高蛋白摄入的食物。
3. 停止药物干扰：某些药物（如胰岛素、口服降糖药物）会干扰葡萄糖钳夹试验的结果，因此在试验前应咨询医生并停用相关药物。
4. 试验需要临床监控：葡萄糖钳夹试验涉及血液抽取和胰岛素注射，因此通常需要在临床医生或合格的医学专业人员监护下进行。
5. 试验过程中需保持稳定：在试验过程中，受试者需要保持休息状态，避免剧烈运动或其他身体活动，以确保结果的准确性。
6. 准备好试验用具：进行葡萄糖钳夹试验需要一些专用器具，如血糖仪、针头、葡萄糖溶液和胰岛素溶液。
在进行试验前，确保所有必要的试验用具都已准备好。
7. 注意采集血液样本：葡萄糖钳夹试验需要抽取多次血液样本以测量血糖和胰岛素水平。
确保在采集血液时使用无菌器具，并妥善保存样本，以免污染或失误影响结果。
8. 严格按照试验方案进行：葡萄糖钳夹试验涉及多个步骤，包括葡萄糖注射、胰岛素注射和血液采集。
按照试验方案的指示进行，避免操作失误。
9. 注意副作用：葡萄糖钳夹试验中使用的胰岛素注射可引起低血糖反应，如头晕、恶心和出汗等。
如果出现不适症状，应立即告诉医生并接受合适的处理。
10. 结束后的观察和监测：葡萄糖钳夹试验结束后，需要进行一段时间的观察和监测。
医生会根据结果评估受试者的血糖调节功能，并根据需要提供进一步的建议和治疗方案。
葡萄糖钳夹技术的建立
葡萄糖钳夹技术的建立葡萄糖钳夹技术的建立【摘要】目的：建立能精确测定胰岛素敏感性的高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术. 方法：应用高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术对10名正常体质量、正常糖耐量的健康志愿者进行方法学研究. 结果：钳夹试验开始后，血浆胰岛素浓度迅速上升并维持在100 mU/L左右，空腹血糖维持在正常水平(5.0 mmol/ L)，试验过程中内源性胰岛素和肝糖源输出得到完全抑制，血液升糖激素浓度 (包括皮质醇和生长激素) 与基础值相比无明显上升. 钳夹稳态期，葡萄糖输注率为(11.56±1.74) mg/(kg·min). 结论：高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术已成功建立. 在高胰岛素?正常葡萄糖稳态条件下，葡萄糖输注率等于机体的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率可以作为评价组织对外源性胰岛素敏感性的指标.【关键词】胰岛素葡萄糖钳制技术胰岛素抗药性胰岛素敏感性引言高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术 (hyperinsulinemic?euglycemic clamp) 是目前世界上公认评价机体胰岛素敏感性的金标准，已在基础及临床医学研究领域中得到广泛应用，并且已扩展应用于许多病理状态、药物或非药物防治措施的机制研究中. 建立和开展高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术对于糖尿病基础和临床研究具有重要意义，但由于此方法操作复杂、价格昂贵且费时，国内仅有数家医院开展此技术. 我院内分泌科自2006年引进葡萄糖钳夹系统以来，根据DeFronzo等[1]所建立经典钳夹技术的原理并结合国内外近年来的研究进展，成功建立了高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术.1对象和方法1.1对象10 (男5，女5)名正常健康志愿者，年龄27.0 ± 4.4 (23~37)岁，体质量指数20.3 ± 1.2 (19.2~23.2) kg/m2，无糖尿病、高血压病家族史，血脂谱正常，肝、肾功能及血尿酸浓度均在正常范围，未服用任何可能影响胰岛素敏感性的`药物，口服75 g葡萄糖耐量试验均为正常糖耐量者 (按2003年ADA标准). 试验前3 d受试者每日碳水化合物饮食不少于200 g，体质量保持稳定. 试验前向受试者解释试验的性质、目的及可能发生的不良反应，所有受试者均自愿参加试验并签署知情同意书.1.2方法受试者检查前空腹12 h，早8:00到达检查室，测量身高、体质量，排空小便后清醒静卧于检查床30 min后开始试验. 先分别于受试者双侧前臂行静脉穿刺，利用三通管组成2条静脉通道. 一侧用于输注胰岛素及200 mL/L葡萄糖液 (连接于Injectomat C?IS和INCA?ST容积泵，德国Fresenius公司);另一侧用于试验中采血 (将此侧前臂置于60℃恒温仪中，以保证静脉血动脉化[2])，不采血时缓慢静滴生理盐水，采血前临时关闭输液器.钳夹开始10 min内以4 mU/(kg·min)速率输注人胰岛素溶液 (诺和灵R，40000 U/L，丹麦Novo Nordisk公司) 使血液胰岛素浓度迅速升高，随后110 min内以2 mU/(kg·min)速率持续输注. 在此期间每5 min测一次静脉血糖值(BIOSEN5030血糖分析仪，葡萄糖氧化酶电极法，德国)，根据血糖值调整200mL/L葡萄糖液输注率，使受试者血糖值维持在5.0 mmol/L左右. 每10 min采静脉血测定血清胰岛素浓度，每30 min测定血清C肽、皮质醇和生长激素浓度 (化学发光法，药盒购自天津德普诊断产品有限公司). 试验结束时收集试验期间尿标本，测定尿糖值 (测定方法同血糖测定). 所有血标本均经离心分离血清，-80℃冰箱保存至同批测定.统计学处理：试验结束后计算各受试者试验中血糖值均数(x)、标准差(s)及变异系数(CV)，计算试验中每10 min的平均葡萄糖输注率(glucose infusion rate, GIR)、机体总葡萄糖利用率 (钳夹开始 20~120 min内平均GIR) 和最大葡萄糖利用率 (钳夹稳态期最后30 min平均GIR). 全部数据均采用SPSS 13.0软件处理，计量资料以x±s表示，不同性别之间比较采用两独立样本t检验.2结果全部受试者均成功完成钳夹试验，检查结束后均未发生低血糖反应及其他异常反应，静脉穿刺部位未发生感染及静脉血栓形成. 结果显示高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术成功建立.2.1外源性胰岛素?葡萄糖代谢稳态形成基础血浆葡萄糖浓度为(4.26±0.39) mmol/L，在高胰岛素?正常葡萄糖钳夹过程中，血糖稳定在(4.99±0.15)mmol/L，稳态期血糖CV为(3.09±1.29)%. 基础血清胰岛素浓度为(3.81±2.20) mU/L，钳夹试验开始后血清胰岛素浓度迅速升高，于10 min时达到高峰(133.70±21.91)mU/L，随后维持在(91.57±13.86)mU/L 至试验结束. 基础血清C肽浓度为(1.92±0.34)μg/L，整个钳夹过程中C肽浓度为(1.32±0.35)μg/L，各个时点的C肽浓度与基础状态相比呈逐渐下降趋势 (图1). 钳夹稳态期与基础状态相比较，升糖激素如血皮质醇、生长激素的浓度无明显上升，且均呈逐渐下降的趋势 (图2).2. 2高胰岛素?正常葡萄糖钳夹过程中的血糖及葡萄糖输注率变化钳夹试验过程中受试者血糖浓度稳定在(4.99±0.15)mmol/L，试验开始40 min内GIR上升较快，达到 (9.45±3.17)mg/(kg·min)，此后上升趋于平缓，在90~120 min时均保持在稳态 (图3). 钳夹开始20~120 min内GIR为(10.75±2.38)mg/(kg·min)，稳态期GIR为(11.56±1.74)mg/(kg·min)，不同性别之间GIR [男(10.53±1.57)mg/(kg·min)，女(12.25±1.59)mg/(kg·min)] 差异无统计学意义(P=0.12).3讨论1966年Andres依据糖代谢特点设计了高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术，1979年DeFronzo等[1]对该技术作了详细研究并应用于人体，从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用，成为目前公认评价机体胰岛素敏感性的“金标准”. 本研究按照DeFronzo等[1]的方法进行设计，结果显示形成稳定高胰岛素状态，达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;血糖钳夹在正常水平，变异系数小于5%;试验中内源性胰岛素分泌被抑制，升糖激素无明显释放，符合高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术成功建立的标准[1]. 正常人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被完全抑制，故钳夹试验中当达到高胰岛素稳态时外源性葡萄糖输注率 (GIR) 等于外周组织的葡萄糖利用率 (M值)，此时GIR可作为评价机体胰岛素敏感性的指标[1]. 贾伟平等[3]建立扩展高胰岛素?正常葡萄糖钳夹技术时稳态期胰岛素浓度为(63.00±4.86) mU/L时肝糖产生为0，故计算M值时可忽略肝糖的产生. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，经典试验中采用的胰岛素输注率所达到的稳态期胰岛素浓度并不能完全抑制肝糖输出[4].。
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一、高胰岛素--正葡萄糖钳夹技术
（一）、历史背景 1966年Andres等根据葡萄糖一胰岛素的负反馈原理，创立了一种可定量分析胰岛
素分泌及作用的方法——葡萄糖钳夹技术。1979年De Fronzo等对该技术从理论上作了
详细的阐述，并给予技术指导，推动了世界范围的广泛应用。萄糖钳夹技术根据研究 目的的不同又划分为高糖钳、正糖钳及低糖钳等不同方法。 （二）、技术原理 1、葡萄糖一胰岛素负反馈体系 血糖升高时，胰岛素分泌增加，并通过增加摄取、储存和利用葡萄糖等方式，下调 血糖；血糖下降，胰岛素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促进代谢分解，加 速糖原分解和葡萄糖异生作用，升高血糖。
升高，而后以较低的速度持续输注维持一定血胰岛素浓度。在静脉通道对侧前肢取血 测量血糖，每隔5min取血测量血糖一次，通过调节葡萄糖输注率以维持血糖水平恒定。 经一段时间后、血糖恒定维持于平衡状态。给胰岛素制剂后,葡萄糖输注率随着胰岛素 产生的作用变化，以此来评价胰岛素制剂的药效动力学特征。
3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。
（三）、特点
Hale Waihona Puke 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰岛素
敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异性。 （四）、缺点 1、不同受试者的应激反应和血管紧张度等诸多因素会对稳态的建立产生一定的影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通
三、相关分析技术
（一）放射免疫分析(RIA)方法 放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体 反应的特异性相结合的体外测定超微量物质的新技术。应用放射性同位素标记的 抗原或抗体，通过免疫反应测定的技术，都可称为放射免疫技术，经典的放射免 疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量的抗体，然后通过测定标记抗原抗体复 合物中放射性强度的改变，测定出未标记抗原量。它可以分为两类：竞争性RIA 和非竞争性RIA，也称为免疫放射分析。
125I-Insulin，然后各管(除Total
count tubes与NSB管)加入100ml猪胰岛素抗体，混合均匀，
封闭，4oC过夜。20小时以后各管加1ml的冷冻沉淀剂，涡旋，孵育20min，4oC。离心 30min，立即倾出上清，于γ 计数仪上计数各管。各批分别设置猪胰岛素标准校正曲线， 用以计算该批所测未知样品浓度。
（三）结果计算 用MicroCal公司Origin5.0对浓度对数和各管放射计数与总计数的比值对数绘制 标准曲线，四参数Logistic拟合：
（四）PKPD参数的计算和统计分析 用MierosoftExee1XP软件采用统计矩方法计算各药效动力学与药代动力学参数。 PK或PD曲线下面积用梯形法进行计算。达峰时间与峰浓度均为实测值。比格大自 身交叉对照组数据比较用Student‘S配对t一检验法进行统计判断,其它处理组组间t一 检验进行统计学判断。用Origin软件对实验结果进行线性回归求回归方程及相关统计 参数，并作图。
样均于凝固后离心获得血清，血清样品于-20℃保存。采用RIA方法检测其中的猪胰
岛素抗原浓度，用于胰岛素血清药代动力学的计算。
2、测定 NSB管(非特异性结合管)加300ml分析液，Bo管(参比管)加200ml分析液，其他管加100ml 分析液。在其它分析管中加100oL标准品、质控样品或待测血清样品，各管加入100μl
（二）统计矩方法 1、应用药物动力学研究的统计矩分析，是一种非隔室的分析方法，它不需要对 药物设定专门的 隔室，也不必考虑药物的体内隔室模型特征。
2、目前这种分析方法主要适用于体内过程符合线性动力学的药物。
（三）t一检验 1、t-检验主要用于样本含量较小（例如n<30），总体标准差σ未知的正态分布资 料。 是用于小样本（样本容量小于30）的两个平均值差异程度的检验方法。它是 用t分布理论来推断差异发生的概率，从而判定两个平均数的差异是否显著。 2、 适用条件：正态分布资料。
④ 稳态葡萄糖输注速率(SSGIR)：SSGIR等于外周组织的葡萄糖利用率，可用来评价
外周组织(主要是肌肉组织)胰岛素作用，反映机体组织的胰岛素敏感性。 ⑤ 内源性胰岛素分泌：c肽水平可评估内源性胰岛素分泌，粗略判断内源性胰岛素分 泌的抑制程度。
二、RIA方法测定血清样品中胰岛素抗 原浓度
（一）原理 将一定量的胰岛素标记示踪物和待测样品混合，加入猪胰岛素抗体,通过标记 示踪物和待测样品与抗体的特异性竞争结合。加入沉淀剂后,与抗体结合的标记示 踪物在沉淀中，结合的标记示踪物与待测胰岛素样品的量成反比。γ 计数仪计数越 高，对应的胰岛素样品的浓度越低。 （二）实验方法 1、采样 各组动物于给予胰岛素制剂前及给药后每隔30min取血,直至钳夹结束。全部血
2、钳夹技术原理 正糖钳技术通过同时输注可控浓度及速率的外源性胰岛素和葡萄糖，打破体内葡萄 糖一胰岛素的负反馈调控，使血浆外源性胰岛素维持在较高浓度水平，而血糖维持在
基础稳态水平。由于血浆外源性胰岛素的优势浓度，抑制了内源性葡萄糖(肝糖分解和
糖异生)和内源性胰岛素分泌，此时外源性葡萄糖输注速率等于外周组织的葡萄糖利用 率，从而评价葡萄糖、胰岛素以及其他相关物质的代谢过程。
管、带延长的三通管、静脉留置针依次串连在一起，2个三通管的侧孔分别接上注射
器，并保持管道通畅。
2、钳夹实验 试验前比格犬禁食12h，试验时用巴甫洛夫吊带将比格犬固定于实验台上。在动 物一侧前肢建立静脉通道，该通道连接三通管，一端连接胰岛素注射泵，一端连接葡
萄糖输注泵。钳夹开始后10min内以较快的速度输注胰岛素，以使血胰岛素水平快速