扩展高胰岛素_正葡萄糖钳夹技术的建立
高胰岛素-正常血糖钳夹试验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。
1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。
根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。
高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。
该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。
在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。
2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。
葡萄糖钳夹技术
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高葡萄糖钳夹操作流程 2
4.分别于-30，-15，0分钟留取基础血 样后，一侧上肢置于一温度为50°C， 湿度为70%的恒温箱中以获得动脉化 的静脉血样，另一侧静脉通道用于 输注20%葡萄糖。
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高葡萄糖钳夹操作流程 3
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
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钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
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相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病， 目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上
碳水化学物，维持体重稳定。
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主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
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高葡萄糖钳夹操作流程 1
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。
2. 令受试者排空小便后仰卧于床，整个实 验过程中保持清醒安静状态。
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一 原理及应用 1
通过持续输注外源性胰岛素 和葡萄糖，抑制内源性肝糖 产生和胰岛素分泌，达到外 源性胰岛素-葡萄糖代谢平衡 状态后，评价个体内胰岛素 对葡萄糖代谢的作用程度， 也就是胰岛素的敏感性。
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二 实验仪器
1. 输液泵一台。 2. 注射泵一 台。 3. 快速血糖测定仪一台。 4. 温度控制仪一台。 5. 多功能计时秒表两个。
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立-董立厚
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立及应用董立厚，宋海峰*（军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100851）【摘要】目的：在比格犬中建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术。
方法：以5只健康比格犬为实验对象进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验，考察血糖、胰岛素、C 肽及胰高血糖素等指标。
结果：成功将血糖控制在目标水平，变异系数小于5%；实验过程中血清胰岛素最后稳定在40.0 ±3.8 mIU·L-1，显著高于基础胰岛素水平；血清C肽浓度显示内源性胰岛素受到了明显的抑制，胰高血糖素没有显著升高。
结论：在比格犬体内建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术，并将其成功用于胰岛素制剂药效动力学的评价。
【关键词】：高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术；药效动力学；比格犬The euglycemic clamp technique was established in beagle dogs [Abstract] Objective:To establish euglycemic clamp technique in beagle dogs. METHODS:The euglycemic clamp technique was applied in healthy beagle dogs and the blood glucose, insulin, C-peptide, insulin and glucagon were monitored during the clamp period. RESULTS: The blood glucose level was controlled within the basal level, coefficient of variation being less than 5% during the clamp period. The serum insulin concentration finally reached to the level of 40.0 ± 3.8 mIU·L-1 stably and a significant inhibition was showed in endogenous insulin by the determination of C-peptide. But there was not significant increase of serum glucagon compared with basal values. CONCLUSIONS: Methodology confirmed that the euglycemic clamp technique is successful in beagle dogs and can be applied in study of pharmacodynamics of insulin preparations.KEY WORDS: euglycemic clamp technique; pharmacodynamics; beagle dogs高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术[1]由于定量准确、可重复性好、避免低血糖等优点，已成为胰岛素敏感性评价的金标准[2]。
正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较
上海第二医科大学硕士学位论文正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较姓名：***申请学位级别：硕士专业：内分泌与代谢病指导教师：***2002.4.1高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较中文摘要目的：高胰岛素正葡萄糖钳夹技术是国际上公认的评价胰岛素敏感性的“金标准”。
微小模型技术是又～个国际公认的判断胰岛素敏感性的指标。
建立此两种表示胰岛素敏感性的方法并用他们评价许多简易指标有重要的临床价值。
因此本研究的目的旨在建立高胰岛素正葡萄糖钳夹试验及微小模型技术，并用以评价简易相关指数。
／对象：本研究共入选正常志愿者２。
人，单纯性肥胖者８人，Ｔ２一。
Ｍ患者１。
人。
其中男性２４人，女性１４人。
正常志愿者及单纯性非肥胖者均经ＯＧＴＴ及体检，排除其他疾病。
Ｔ２－ＤＭ为血糖控制良好，ＦＢＧ＜８ｍｍｏｌ／Ｌ，ＨｂＡｌＣ＜８％，单纯口服磺脲类降糖药，并排除服用其他影响胰岛素敏感性的药物。
所有受试者分成４组。
分别为：组１，正常ＢＭＩ，年龄２６．７±２．１６；组２，正常ＢＭＩ，年龄５２３０±５７９组３，单纯性肥胖，年龄５３．２５±５．０３；组４，Ｔ２．ＤＭ，年龄６１１１±８．０７。
组２、３、４中的女性受试者均为绝经后妇女。
方法：每个受试者均测定ＯＧＴＴ、微小模型和正葡萄糖钳夹。
每次测试间隔一周，组１的女性受试者在月经第６或第７天测试。
测试前３天Ｔ２一ＤＭ患者停药。
测试前三天保持每天２００克以上的碳水化合物饮食，晚８时后禁食。
第二天早上８时开始试验。
ＯＧＴＩ＂为口服７５克葡萄糖粉，在０’、３０’、６０’、１２０’、１８０’抽血测血糖和胰岛素。
微小模型试验为在０时推注２５％葡萄糖０．３９／ｋｇ，在２０’时推注人胰岛素（优泌灵Ｒ）０．０３ＩＵ／ｋｇ，分别在０’、２’、４’、８’、１９’、２２’、３０’、４０’、５０’、７０’、９０’、１８０’抽血测定血糖和胰岛素。
将测定值输入计算机，应用Ｂｅｒｇｍａｎ减少样本数的微小模型统计软件包得到胰岛素敏感指数ＳＩ。
高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析
高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析
郑晓岩
【期刊名称】《糖尿病新世界》
【年(卷),期】2017(020)005
【摘要】目的分析研究高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进.方法随机选取该院2016年10月—2017年1月期间收治的60例代谢综合征(MS)患者,按照入院顺序,分为实验组与常规组,各30例.所有患者,均行高胰岛素-正常血糖钳夹试验,其中,常规组,行常规护理,实验组,实施经改进的护理方式,对比分析护理效果.结果对比不良反应,实验组发生率为3.3%,常规组为16.7%,实验组显著低于常规组
(P<0.05).对比护理满意度,实验组显著高于常规组(P<0.05).结论高胰岛素-正常血糖钳夹试验中,采用经改进的护理方式,效果显著,值得推广.
【总页数】2页(P7-8)
【作者】郑晓岩
【作者单位】济南市中心医院内分泌科,山东济南 250013
【正文语种】中文
【中图分类】R473
【相关文献】
1.高胰岛素-正常血糖钳夹技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价 [J], 曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉
2.高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的护理 [J], 向桂珍;罗涌;江玉蓉
3.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽
4.Wistar大鼠的正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术 [J], 李晨钟;张素华;舒昌达;任伟
5.清醒状态大鼠高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立及其意义 [J], 罗四川;李启富;刘红梅
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正葡萄糖钳夹实验课件
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（一）放射免疫分析(RIA)方法 放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体
反应的特异性相结合的体外测定超微量物质的新技术。应用放射性同位素标记的 抗原或抗体，通过免疫反应测定的技术，都可称为放射免疫技术，经典的放射免 疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量的抗体，然后通过测定标记抗原抗体复 合物中放射性强度的改变，测定出未标记抗原量。它可以分为两类：竞争性RIA 和非竞争性RIA，也称为免疫放射分析。
（三）、特点 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰 岛素敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异 性。 （四）、缺点 1、不同受一定的 影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通 管、带延长的三通管、静脉留置针依次串连在一起，2个三通管的侧孔分别接上注射
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3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。 ④ 稳态葡萄糖输注速率(SSGIR)：SSGIR等于外周组织的葡萄糖利用率，可用来评价 外周组织(主要是肌肉组织)胰岛素作用，反映机体组织的胰岛素敏感性。 ⑤ 内源性胰岛素分泌：c肽水平可评估内源性胰岛素分泌，粗略判断内源性胰岛素分 泌的抑制程度。
正葡萄糖钳夹技术在胰岛素研究中的运用
高
正
定量检测
胰岛素分泌
来源：外源性 和胰岛素抵抗 的方法
作用：抑制内源性
血 糖
水
抑制肝糖原分解
平
技术特点
技术原理
输注外源性葡萄糖及胰岛素 葡萄糖输注率等于
打破体内葡机萄体糖的-胰葡岛萄素糖的利负用反率馈调控 调节灌注流速控制血糖稳态降低内源性 干扰
胰岛素敏感性评价的金标准
金标准 避免低血糖
评判标准
0.0 2.0
钳夹技术在胰岛素研究中的应用
钳夹的建立 样品的采集
分三步走 指标的检测
钳夹术检测不同胰岛素制剂后平均GIR-T曲线
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注射 胰 岛 素 口服胰岛素
10
GIR (mg/kg/min)
0 0
120
240
360
480
600
Time/min
生长抑素
生理作用：促进组织生长 对胰岛素有拮抗
作用
高分泌现象：肢端肥大症、 糖尿病
低分泌现象：侏儒症、肝硬 化 脑肿瘤
生理作用：抑制生长激素、 促甲状 腺激素、胰岛素、 胰高 血糖素的分泌
药理作用：减少胰腺的内外 分泌 降低酶活性，对 胰腺细
血糖代谢 血糖稳态
血糖稳态
机体消耗葡萄糖5 g/h，是血液中含有的全部葡 萄糖的总量
10
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GIR
血糖
8
15
6
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4
5
2
0
0 0
-5
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80
100
120
t (h)
钳夹建立过程中平均胰岛素及C肽的浓度-时间曲线
胰 岛 素 浓 度 （mIU. -L1） C肽 （μg.L-1）
高葡萄糖钳夹技术的建立
高葡萄糖钳夹技术的建立朱敏;贾伟平;包玉倩;陆俊茜;项坤三【期刊名称】《中国糖尿病杂志》【年(卷),期】2004(12)1【摘要】目的在国内建立检测胰岛素(Ins)分泌功能的精确方法:高葡萄糖钳制技术. 方法对25名居住上海地区的正常中国人(男16名,女9名)进行高葡萄糖钳夹实验.空腹平卧后两侧上肢静脉埋管.一侧持续输注20%葡萄糖溶液,通过负反馈调节机制使血糖始终维持在较基础血糖升高7.9 mmol/L的水平.另一侧静脉定时取血测定Ins水平,以获得双相Ins分泌值,评价胰岛β细胞功能. 结果 (1)受试者血浆葡萄糖浓度在钳夹开始后的指定时间内(14 min)能达到实验所要求的高糖平台[(12.86±0.11) mmol/L],并能维持此水平至实验结束;(2)在维持高糖平台期间,每5 min检测的血糖变异系数为4.2%;(3)可观察到持续高糖水平下双相Ins的分泌形态,第一时相Ins分泌为(247.8±23.5)mU/L,第二时相为(72.8±6.1)mU/L.(4)高糖钳夹可同时获得个体的Ins敏感性(ISI) 19.9±2.4,但较正糖钳夹值为高. 结论 (1)成功建立了高葡萄糖钳夹技术,评价了正常个体的双相Ins分泌及最大Ins分泌.(2) 高葡萄糖钳夹能同时了解机体的胰岛素抵抗(IR)情况,反映不同人群ISI的差异.【总页数】5页(P23-27)【作者】朱敏;贾伟平;包玉倩;陆俊茜;项坤三【作者单位】200233,上海,交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所;200233,上海,交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所;200233,上海,交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所;200233,上海,交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所;200233,上海,交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所【正文语种】中文【中图分类】R587【相关文献】1.高葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 汪志红;龚莉琳;张素华;李启富;刘秀容;何军2.两步法高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 罗四川;李启富;黄健康;汪志红;刘秀容;张素华;舒昌达3.高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 程时武;陆菊明;杨国庆;李一君;潘长玉;翟淮伟4.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽5.高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 汪志红;李启富;张素华;刘秀容;刘智萍;罗四川;黄健康;何军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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・胰岛素抵抗・基金项目:上海市科技发展基金资助项目(974119026);上海市“医学领先专业重点学科”基金资助项目(993024)作者单位:200233上海市第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病研究所扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹技术的建立贾伟平 陈蕾 项坤三 陆俊茜 包玉倩 薛凤仙 陆蔚 【摘要】 目的 建立扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹技术。
方法 应用扩展葡萄糖钳夹技术(即联合葡萄糖钳夹、323H 标记葡萄糖示踪技术及间接测热技术)对9例正常体重、正常糖耐量者进行方法学研究。
结果 (1)在优势浓度胰岛素、血浆葡萄糖稳定在正常水平状态下肝糖产生完全被抑制,未见到升糖激素(皮质醇、生长激素、胰高血糖素)显著兴奋及内源性胰岛素释放。
(2)扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹稳态期,胰岛素介导的机体葡萄糖利用率(葡萄糖消失率)较基础状态显著增加〔(5.86±0.65)mg ・kg -1・min -1比(2.45±0.15)mg ・kg -1・min -1,P <0.01〕,并以糖原合成为主;脂肪氧化被显著抑制,游离脂肪酸浓度显著下降。
结论 扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹技术已成功建立;在外源性胰岛素2葡萄糖代谢的稳定状态下,机体对葡萄糖利用显著增加,脂肪分解显著减少。
【关键词】 葡萄糖钳制技术;扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹技术;代谢Establishment of an extended hyperinsulinemic euglycemic clamp technique J IA Weiping ,CHEN Lei ,XI 2A N G Kunsan ,et al.Department of Endocrinology and Metabolism ,S hanghai Diabetes Institute ,S hanghai Sixth People Hospital ,S hanghai 200233【Abstract 】 Objective To establish an extended hyperinsulinemic euglycemic clamp for the study of in 2sulin sensitivity in Chinese.Methods C ombining glucose clamp ,323H labelled glucose tracer technique and indirect calorimetry ,an extended hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was applied into the study of methodology in 9normal weight subjects with normal glucose tolerance.R esults (1)When a higher level of insulin was created during maintaining euglycemia ,hepatic glucose production was completely inhibited ,and the counter 2regulatory hormones (including cortisol ,growth hormone and glucagon )and endogenous insulin secretion were not significantly stimulated.(2)During the steady 2state of the extended hyperinsulinemic eug 2lycemic clamp ,the insulin 2mediated glucose disappearance rate was significantly increased compared with basal state 〔(5.86±0.65)mg ・kg -1・min -1vs (2.45±0.15)mg ・kg -1・min -1,P <0.01〕,predominately by glycogen synthesis.And also ,the release of free fatty acid was remarkably inhibited with significant decrease of lipid oxidation.Conclusion The extended hyperinsulinemic euglycemic clamp technique is successfully es 2tablished in Chinese.During the steady 2state of exogenous insulin and glucose metabolism ,glucose metabolism and glucose utilization increased ,while the lipid catabolism decreased.【K ey w ords 】 G lucose clamp technique ;Extended hyperinsulinemic euglycemic clamp technique ;Metabolism(Chin J Endocrinol Metab ,2001,17:2682271) 高胰岛素2正葡萄糖钳夹技术具有稳态、定量、重复性好,精确测定外周组织胰岛素敏感性的优点,缺点是不能提供内源性葡萄糖(即肝糖)产生以及葡萄糖在细胞内利用的情况。
在应用葡萄糖钳夹技术的基础上,近年来联合同位素稀释追踪及间接测热技术〔1,2〕,全面了解机体葡萄糖的生成及利用,这三法联合应用称之为扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹技术〔3〕。
目前国际上已应用这项综合技术进行不同病理生理状态的研究,尤其在胰岛素抵抗相关疾病(肥胖、2型糖尿病、高血压)方面,对于研究胰岛素抵抗程度及机制,阐明药物或非药物措施对胰岛素敏感性的影响及作用机制有独到之处。
为此在国内建立并开展这项技术有重要意义。
对象和方法一、对象9例正常体重的上海地区中国人,男性4例,女性5例,年龄(47.0±2.8)岁。
研究对象均排除糖尿病、糖耐量减退、肝、肾疾病,未使用任何影响胰岛素敏感性药物。
试验前3天,研究对象每日碳水化合物饮食不少于200g,维持体重稳定。
试验前,将试验的性质、目的以及可能产生的不良反应告知研究对象,并填写知情同意书。
二、方法由高胰岛素2正葡萄糖钳夹、323H标记葡萄糖示踪和间接测热法三部分组成〔1,2〕。
受试对象空腹12小时,早晨8:00到实验室,测定身高、体重并排空小便后,仰卧。
分别在双前臂头静脉或正中静脉穿刺并留置导管以0.9%NaCl液维持静脉通道,以备抽血及输注各种试验用液。
整个实验是在研究对象清醒安静状态下进行(实验流程图见图1)。
图1 扩展高胰岛素2正葡萄糖钳夹试验流程图Fig1 The extended hyperinsulinemic euglycemic clamp pro2 cedures1.323H标记葡萄糖示踪技术:根据同位素标记葡萄糖的去向评估机体内源性葡萄糖生成率。
用于计算内源性葡萄糖(主要是肝糖)产生和葡萄糖消失率。
323H标记葡萄糖液(美国Amersham公司,比活性16.8Ci/mmol,纯度99.7%)输注总量为100μCi。
初始剂量25μCi,5分钟内注入,随后用注射泵以0.25μCi/min速率持续输注,共5小时。
2.高胰岛素2正葡萄糖钳夹(共150分钟):在323H标记葡萄糖示踪技术开始120分钟后进行高胰岛素2正葡萄糖钳夹试验(日本Terumo公司STC2 508型输液泵及STC2527微量输注泵)。
此时取血标本一侧前臂应置于恒温仪中(温度50℃)以保证静脉血动脉化。
在钳夹开始10分钟内输注人胰岛素溶液(丹麦Novo公司人正规胰岛素,40U/ml)使血浆胰岛素水平迅速升高。
随后140分钟内以40 mU・m-2・min-1速率持续输注。
在此期间,每5分钟测定一次动脉化的静脉血葡萄糖(Beckman6517型葡萄糖测定仪),输注并调整20%葡萄糖液输注率,使钳夹血糖值接近研究对象正常空腹血糖值,通常设置在4.4～5.0mmol/L,并记录调整时间。
钳夹期间每10分钟取血测定血浆葡萄糖比活性和胰岛素,每30分钟取血标本测C肽、皮质醇、生长激素、胰高血糖素和游离脂肪酸。
所有血样均经离心分离血清或血浆,-70℃保存至测定。
3.间接测热法(美国Sensormedics公司Vmax29型间接测热仪):通过测定受试者O2和CO2的交换,了解底物(糖、脂肪、蛋白质)氧化及非氧化的情况。
本研究主要用于测定葡萄糖在细胞内氧化和非氧化的量。
在钳夹前30分钟和钳夹第120～150分钟,测定基础状态和高胰岛素正葡萄糖钳夹稳定状态下的糖、脂代谢情况。
4.收集实验期间的尿标本,测定尿糖,以监测有无尿糖排泄,测定尿素氮,以估测机体蛋白质代谢。
5.糖、脂及激素测定:血浆葡萄糖(葡萄糖氧化酶法,美国Beckman公司);血浆323H葡萄糖比活性测定(液体闪烁测量技术);血胰岛素(放免法,华西糖尿病研究所);C肽、皮质醇、生长激素、胰高血糖素(放免法,美国DPC公司);血游离脂肪酸浓度(酶标比色法,日本和光制药株氏会社);尿糖(氧化酶法);尿素氮(尿素酶法)。
6.计算方法〔1〕:(1)应用Steele公式计算钳夹过程每10分钟的平均葡萄糖输注率、葡萄糖空间校正值、血浆葡萄糖显现率(glucose appearance rate, Ra)、血浆葡萄糖消失率(glucose disappearance rate, Rd,又称葡萄糖利用率)。
总葡萄糖利用率以钳夹开始40分钟至150分钟的平均Rd值表示。
胰岛素2葡萄糖代谢稳定状态(钳夹稳态期)指高胰岛素稳定状态下,葡萄糖输注率变化最小的期间,通常为钳夹120分钟～150分钟。
(2)肝糖产生量(hepatic glu2 cose production,HGP):基础肝糖产生等于323H葡萄糖的输注率(cpm/min)除以钳夹前30分钟稳定期内的平均血浆葡萄糖比活性(cpm/mg);在空腹状态下,血糖浓度相对恒定,内源性葡萄糖产生(即Ra)相等于Rd。
高胰岛素2正葡萄糖钳夹稳定状态下肝糖产生=Ra-葡萄糖输注率-葡萄糖空间校正值。
(3)葡萄糖在细胞内的代谢途径及代谢量:利用间接测热法得出葡萄糖氧化率,而葡萄糖非氧化率(即糖原合成率)是Rd与葡萄糖氧化率的差值。