洁净区环境消毒方法及效果验证方案
洁净区清场效果及有效期验证方案
Vilidation/Qulification Protocol for clean area clearance clearance effectand validity洁净区清场效果及清场有效期验证方案VP ID：编号: VP-01-PM-002-00Content目录1. Overview概述 (3)1.1 验证项目的背景介绍 (3)1.2 验证项目的关键性能说明 (3)2. Purpose验证目的 (3)3. Reference 验证依据 (4)4. Validation group 验证组成员 (4)5. Training 培训 (4)6. The content of validation 验证内容 (4)7. The evaluation of validation 验证总评价................................................ 错误！未定义书签。
8. The general conclusion of validation验证总结论： (10)9. Version History版本历史 (11)10. Attachments附件 (11)1.Overview概述1.1验证项目的背景介绍1.1.1洁净区是需要对环境中尘粒粒子及微生物数量进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留；1.1.2清场是指为防止污染、交叉污染或混淆而将与生产无关的文件、物料等进行清除或移除的过程。
在这个过程中包括但不限于清洁，还包括清点、销毁等过程；1.1.3GMP（2010修订）第四十一条：应当对厂房进行适当维护，并确保维修活动不影响药品的质量。
应当按照详细的书面操作规程对厂房进行清洁或必要的消毒；1.1.4注射剂车间的洁净区按无菌药品生产所需的洁净区分为以下4个级别：A级：高风险操作区，如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器区域及无菌装配或连接操作的区域；B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域；C级和D级：指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区；1.1.5为有效控制新注射剂车间洁净区的洁净度及微生物的数量，特制定切实可行的清洁消毒规程，并加以验证。
洁净区臭氧消毒效果验证方案及流程
洁净区臭氧消毒效果验证方案及流程一、洁净区臭氧消毒效果验证方案的重要性。
1.1 洁净区的特殊性。
洁净区啊，那可是个要求特别高的地方，就像一个娇贵的小宝贝，容不得一点脏东西。
它在很多行业里都起着关键作用，像制药啊、食品加工啊这些。
这里面生产的东西，都是要进到咱老百姓身体里的，所以必须得保证干净卫生。
1.2 臭氧消毒的优势与风险。
臭氧消毒呢，有它的好处。
它杀菌能力强，就像一个勇猛的小战士，能把很多细菌啊、病毒啊之类的坏家伙都消灭掉。
而且它消毒完了之后不会留下什么残渣之类的，多干净利落。
但是呢，这臭氧也不是十全十美的，要是浓度控制不好啊，可能会对设备、对人有影响，就像一把双刃剑，用好了行，用不好就麻烦了。
所以得验证它的消毒效果，心里才踏实。
二、验证方案的制定。
2.1 确定验证指标。
这验证指标得好好定。
首先呢，杀菌率肯定是个重要的指标，这就好比是一场战斗，看臭氧这个战士到底能消灭多少敌人。
还有啊，对洁净区内环境的影响，像空气的质量啊，有没有异味之类的，总不能把细菌杀了，结果弄出一股怪味来，那可不行。
2.2 选择验证方法。
验证方法的选择也不简单。
可以采用生物指示剂法，就像给臭氧找个小目标，看看它能不能把这个带有细菌的小目标给干掉。
还可以检测环境中的微生物数量，在消毒前和消毒后都测一测，对比一下，就知道臭氧消毒有没有效果了。
2.3 设定验证周期。
这个验证周期也得考虑好。
不能太长，太长了要是消毒效果不好，那得耽误多少事儿啊。
也不能太短，太短了可能还没看出真实的效果来呢。
得根据洁净区的使用频率啊、生产的产品类型这些因素来确定，就像量体裁衣一样，合适才好。
三、验证流程。
3.1 准备工作。
在开始验证之前，那得做好准备工作。
要把洁净区打扫干净，不能有太多的杂物，就像整理战场一样，这样才能让臭氧充分发挥作用。
还要准备好各种检测设备，这些设备得校准好了，要是设备不准，那测出来的数据就不靠谱了，就像瞎猫抓老鼠，全靠运气可不行。
洁净工作区臭氧消毒效果验证方案
在日常使用过程中，洁净区的空气中会有微生物存在。
为保证洁净区空气中微生物数量得到有效控制，特进行洁净区臭氧消毒效果的验证活动。
验证在规定的臭氧浓度条件下保持特定时间后，臭氧消毒对洁净区空气中微生物的消杀效果，以及臭氧在启动空气循环系统条件下达到0.15ppm 的安全阈值所需时间。
本公司十万级洁净车间和万级洁净工作区臭氧消毒效果的验证。
4.1 验证委员会4.2 验证小组4.3 验证涉及部门5.1 编制依据5.1.1 2003 年版《药品生产验证指南》 5.1.2 卫生部《消毒技术规范》5.1.3 《GB 28232-2020 臭氧消毒器卫生要求》 5.2 验证过程中偏差处理在方案实施过程中，若出现不符合测试标准的数据，应立即调查原因进行分析，并采取偏差处理措 施。
在偏差处理措施实施完成后，应确认偏差是否对本次验证结果产生影响，如果偏差影响到本次验证 结果，则判定本次验证失败，并对本系统重新实施验证方案。
如果在实施纠偏措施后，数据已符合测试 标准，不影响验证结果，则继续实施本方案，直至本次验证实施结束。
5.3 验证方案修改申请及批准书验证过程中严格按照验证方案执行。
若在实施过程中，发现验证方案存在缺陷，立即停止验证，验 证小组成员对验证方案进行修改，并填写《验证方案修改申请及批准表》（附件 4），由验证委员会成员 批准后，重新启动验证。
若验证方案无需修改，不需要填写《验证方案修改申请及批准表》。
6.1 验证所需文件、资料确认6.3 验证所需仪器仪表确认7.1 方案7.1.1 臭氧消毒浓度要求： 万级达到消毒浓度 15ppm ，十万级达到消毒浓度 10ppm 。
7.1.2 根据臭氧发生器说明书载明 WJ-K-E4 臭氧发生器臭氧发生量为 40g/h ，根据如下公式及房间体积 计算达到消毒浓度时间：V ∗ （1 ∗ 2.14 ∗ n ）t = 6040∗ 1000公式解释：V: 房间的体积（m 3） t: 达到消毒浓度的时间(min)n: 消毒浓度要求（ppm ）消杀效果。
洁净区环境消毒方法及效果验证方案
验证文件类别：清洁验证方案编码：QJ—YZ001R00页码：共17页第1页消毒剂消毒效果及使用周期的验证方案目录1. 概述2. 职责3. 验证内容3.1 消毒方法及效果的验证3.1.1 臭氧消毒3.1.1.1 概述3.1.1.2臭氧消毒原理3.1.1.3 消毒时间确定3.1.1.4 可接受标准3.1.1.5 取样计划3.1.1.6 检验方法3.1.1.7 消毒效果评价3.1.2 甲酚皂消毒剂消毒灭菌法3.1.2.1 原理3.1.2.2 取样计划3.1.2.3 检验方法3.1.2.4 确定可接受限度标准3.1.3 新洁尔灭消毒剂消毒灭菌法3.1.3.1 原理3.1.3.2 取样计划3.1.3.3 检验方法3.1.3.4 确定可接受限度标准3.1.4 消毒剂消毒频次，消毒剂更换频次的验证3.1.4.1 消毒剂消毒频次的验证3.1.4.1.1 原理3.1.4.1.2 沉降菌检测取样计划3.1.4.1.3 沉降菌检测方法3.1.4.1.4 表面细菌检测取样计划3.1.4.1.5 表面细菌检测方法3.1.4.1.6 确定可接受限度标准3.1.4.2消毒剂更换频次的验证3.1.4.2.1 原理3.1.4.2.2 沉降菌检测取样计划3.1.4.2.3 沉降菌检测方法3.1.4.2.4 表面细菌检测取样计划3.1.4.2.5 表面细菌检测方法3.1.4.2.6 确定可接受限度标准4. 验证实施5. 验证报告1. 概述。
1.1 背景。
洁净生产厂房用于D级口服固体制剂、外用制剂、丸剂生产。
设备厂房于2002年8月全面完成安装施工。
根据GMP要求，结合生产实际情况，决定于2012年10月～2012年6月对其清洁消毒效果进行验证。
1.2 验证目的。
清洁消毒方案及效果是否达到标准要求。
2. 职责。
2.1 验证领导小组。
验证方案的批准，验证的协调工作，验证数据及结果的审核，验证报告的审批，发放验证证书。
2.2 生产部。
制订验证方案，并负责验证方案的实施，收集各项验证试验记录，报验证领导小组，起草洁净区清洁消毒操作程序。
D级洁净区臭氧消毒效果及消毒周期验证方案
D级洁净区臭氧消毒效果及消毒周期验证方案D级洁净区是指在无菌要求相对较低的环境下进行操作和生产的区域。
臭氧消毒是一种常用的消毒方法，具有高效、快速、无残留物等特点。
以下是D级洁净区臭氧消毒效果及消毒周期验证方案的具体步骤和要求：步骤一：准备工作1. 确定消毒区域：根据D级洁净区的大小和布局，确定要进行臭氧消毒的区域。
2. 清洁准备：先进行彻底清洁，包括清理表面上的灰尘、杂物和污垢。
步骤二：臭氧消毒操作1. 操作要求：确保操作人员佩戴防护设备，避免直接接触臭氧。
2. 设备准备：确保臭氧发生器和相应配套设备的正常工作。
3. 操作流程：按照厂家提供的说明书进行臭氧消毒操作，包括设定消毒时间和臭氧浓度等参数。
步骤三：消毒效果评估1. 采样：在臭氧消毒后的区域进行采样，可以采用空气、表面和物品样品等不同类型的采样方法。
2. 实验室分析：将采集的样品送往专业实验室进行分析，例如使用菌落计数法或PCR等方法评估消毒效果。
步骤四：消毒周期验证1. 设定消毒周期：根据消毒需求和实际情况，确定消毒频率和周期。
2. 验证方法：定期进行消毒效果验证，可以根据国家和行业标准，如GB 5749-2006、GMP等要求进行。
3. 调整周期：根据验证结果和实际情况，对消毒周期进行调整，确保消毒效果符合要求。
注意事项：1. 消毒过程中确保操作人员的安全，避免直接接触高浓度臭氧。
2. 确保使用的臭氧发生器以及配套设备的正常工作和维护。
3. 在操作前，需要对操作人员进行消毒操作的相关培训。
以上是D级洁净区臭氧消毒效果及消毒周期验证方案的基本步骤和要求，具体操作中可根据实际情况进行调整和补充。
建议在实施方案前咨询专业机构或相关领域的专家进行指导。
洁净区甲醛消毒消毒效果验证方案及报告
洁净区甲醛消毒效果验证方案（文件编号：）一、验证组织与职责二、验证方案概述1、概述XX洁净区拟产用甲醛熏蒸和臭氧消毒两种方式交替，甲醛消毒拟定为每月一次，臭氧消毒拟定为每三天一次。
2、目的确认已选定的消毒剂甲醛对XX洁净区进行熏蒸方式的消毒效果，保证洁净区达到洁净级别要求。
3、验证范围：本验证方案适用于XX洁净区净化空调系统甲醛消毒。
4、验证要求：验证过程应严格按照本方案规定执行，整个验证过程应在验证小组人员的监督下进行，检查过程中任何与文件或规范的偏差或遇到任何例外的情况都要记录下来，以供文件偏差报告表的审查。
记录的偏差要进行调查，而且决定并采取相应的措施。
文件偏差报告表中需记录有调查、纠正性措施及其理由。
5、验证时间：20年8月27-9月30日。
三、消毒方式：按每立方米空间用甲醛10g计算消毒剂用量，用蒸汽加热发生罐使甲醛蒸汽随空调送风进入洁净区，时间60分钟，停止送风，焖消3小时。
开启空调送风、排风，恢复正常运行.其各洁净区体积及甲醛用量如下表：四、验证方案在甲醛消毒后分别抽取各洁净的关键或主要房间做为代表房间，对以上代表性房间进行分别取样检测，其试验项目如下:1、表面微生物判断标准：(1)B级表面微生物标准1/10即［接触555mm)1cfu /碟］2；(2)C级表面微生物标准的1/10即［接触555mm)3cfu /碟］「(3)D级表面微生物标准的1/10即［接触W55mm)5cfu /碟］2.检测记录如下：编号确认人：日期：审核人：日期：2、沉降菌检测(1)取样方法：执行洁净区沉降菌检测操作规程检测，沉降菌(*90mm) cfu/4小时。
(2)判断标准：B 级W1 CFU/4 小时，C 级W5 CFU/4 小时，D 级W10 CFU/4 小时。
确认人：日期：审核人：日期：3、生物指示剂细菌挑战性试验(1)指示剂：枯草黑色变种芽孢菌片,5X105-6 cfu/片(2)方法：甲醛气体消毒前，在阳性菌室将枯草黑色变种芽孢菌片分装于玻璃瓶(每瓶一片)，将装有菌片的玻璃瓶置于规定房间的中央地面，并编号。
(完整版)洁净厂房消毒效果验证方案
洁净厂房消毒效果验证方案编码：目录1 概述2 验证目的3 适用范围4 验证可接受标准5 消毒程序5。
1 地面墙壁消毒5.2 洁净区空气消毒5。
3 洁净区人员手消毒6 验证步骤6.1 地面墙壁消毒效果验证6.2 洁净区人员手消毒6.3 洁净区内空气臭氧灭菌效果验证7 消毒效果检测结果7。
1 消毒液表面消毒效果检测结果7。
2 75％乙醇对手消毒效果检测结果表7.3 臭氧对洁净区空气消毒效果8 洁净区厂房消毒效果验证结论9 再验证规定1 概述为了确保固体制剂车间30万级洁净区的洁净度,分别采用不同的消毒剂、不同的消毒方法对不同的对象进行消毒。
对洁净区的空气每周用臭氧消毒1小时，每三个月使用2％的戊二醛溶液消毒一次。
对墙壁、地面每星期用0.2％新洁尔灭溶液或2％苯酚溶液进行擦拭消毒，对进入洁净区人员的手采用75％的乙醇消毒。
2 验证目的按相应的消毒操作程序进行消毒后，残留在已消毒对象表面的微生物数应控制在可接受标准的限度范围内.3 适用范围适用于臭氧消毒、地面墙壁消毒、手消毒后的消毒效果验证。
机器设备的清洁消毒效果及有效期的验证不在此验证范围内。
4 验证可接受标准：4.1 洁净区以臭氧消毒后沉降菌的数量应比消毒前降低50%以上或沉降菌菌落数应≤5个/皿。
4.2 洁净区工作人员手以75%的乙醇消毒后，拇指、食指、中指前节的细菌残留量应各小于15CFU/节。
4.3 墙壁、地面以2％苯酚溶液或0.2％新洁尔灭溶液消毒后，地面表面细菌≤120CUF/25cm2;墙壁表面细菌≤80CUF/25cm2.5 消毒程序5.1 地面墙壁消毒：30万级洁净区用丝光毛巾蘸饮用水擦拭墙壁、地面,至干净无粉尘、无垢斑后，以丝光毛巾蘸2%苯酚溶液擦拭消毒10个操作室的墙面及地面，以另一块丝光毛巾蘸0.2%新洁尔灭溶液擦拭剩余操作室的墙面、地面。
5.2 洁净区空气消毒：按《空气净化系统清洁消毒程序》(SOP-GC-02—002）以臭氧对洁净区消毒1小时.5.3 洁净区人员手消毒：用75％乙醇消毒双手腕关节以下的手掌、背、指，使消毒剂在手上停留的时间不少于30秒钟。
消毒剂消毒效果及有效期验证方案要点
1.概述2.验证范围3.验证目的4.验证参考文件5.验证小组名单6.验证小组职责7.验证内容8.结论与评价9.再验证周期1.概述1.1.本公司的洁净区分为A级、B级、C级和D级，拟定用于洁净区表面消毒的有三种消毒剂：75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、2%甲酚皂溶液。
本次验证方案将选用以上3种消毒剂分别进行验证试验。
1.3.作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。
在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于5分钟。
1.4.为了确认消毒剂的消毒效力，通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。
实验室考察部分，定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法；表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。
洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种，故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃载片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
现场考察试验部分选择冻干车间的配液间（C级洁净区）、灌装间（A/B级洁净区）、灌装间操作人员手部消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。
1.5.A/B级洁净区使用的消毒剂需经0.22pm除菌过滤。
2.验证范围本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。
3.验证目的通过消毒剂消毒效果及有效期的确认，科学制订消毒程序，以保证各洁净级别的操作间及设备外表面、人员手部按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果。
4.验证参考文件《药品生产验证指南》（2003版）；《医疗机构消毒技术规范》（2012年版）；《中国药典》（2010年版）；《药品GMP指南-无菌药品》、《现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术》。
5.验证小组名单6.验证小组职责7.验证内容7.1.验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。
见附表1。
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验证文件类别：清洁验证案编码：QJ—YZ001R00页码：共17页第1页消毒剂消毒效果及使用期的验证案目录1. 概述2. 职责3. 验证容3.1 消毒法及效果的验证3.1.1 臭氧消毒3.1.1.1 概述3.1.1.2臭氧消毒原理3.1.1.3 消毒时间确定3.1.1.4 可接受标准3.1.1.5 取样计划3.1.1.6 检验法3.1.1.7 消毒效果评价3.1.2 甲酚皂消毒剂消毒灭菌法3.1.2.1 原理3.1.2.2 取样计划3.1.2.3 检验法3.1.2.4 确定可接受限度标准3.1.3 新洁尔灭消毒剂消毒灭菌法3.1.3.1 原理3.1.3.2 取样计划3.1.3.3 检验法3.1.3.4 确定可接受限度标准3.1.4 消毒剂消毒频次，消毒剂更换频次的验证3.1.4.1 消毒剂消毒频次的验证3.1.4.1.1 原理3.1.4.1.2 沉降菌检测取样计划3.1.4.1.3 沉降菌检测法3.1.4.1.4 表面细菌检测取样计划3.1.4.1.5 表面细菌检测法3.1.4.1.6 确定可接受限度标准3.1.4.2 消毒剂更换频次的验证3.1.4.2.1 原理3.1.4.2.2 沉降菌检测取样计划3.1.4.2.3 沉降菌检测法3.1.4.2.4 表面细菌检测取样计划3.1.4.2.5 表面细菌检测法3.1.4.2.6 确定可接受限度标准4. 验证实施5. 验证报告1. 概述。
1.1 背景。
洁净生产厂房用于D级口服固体制剂、外用制剂、丸剂生产。
设备厂房于2002年8月全面完成安装施工。
根据GMP要求，结合生产实际情况，决定于2012年10月～2012年6月对其清洁消毒效果进行验证。
1.2 验证目的。
清洁消毒案及效果是否达到标准要求。
2. 职责。
2.1 验证领导小组。
验证案的批准，验证的协调工作，验证数据及结果的审核，验证报告的审批，发放验证证书。
2.2 生产部。
制订验证案，并负责验证案的实施，收集各项验证试验记录，报验证领导小组，起草洁净区清洁消毒操作程序。
2.3 质量部。
验证案的审核，按验证案规定的取样计划和标准操作规程进行取样和实验，并报告检验结果；审核验证中的评价结论。
2.4 工程部。
仪器的校正、公用系统、设备监护等项工作提供可靠的服务。
3. 验证容。
3.1 消毒法及效果的验证。
3.1.1臭氧消毒3.1.1.1 概述：臭氧可消灭空气中的细菌和微生物。
在常温常压下，分子结构不稳定，很快分解成氧和单个氧原子，单个氧原子具有很强的氧化作用，可破坏细菌部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将细菌和微生物杀死。
臭氧通过高频臭氧发生器来获得。
3.1.1.2 原理：将臭氧发生器通向组合式空调器，通过与空气接触发生臭氧而随空气流动进入洁净区，保持一定的时间起到消毒的目的。
3.1.1.3 口服制剂、外用剂、丸剂HVAC系统分别设有臭氧消毒功能，来完成洁净区空间的消毒工作。
使用时根据洁净区消毒后的微生物检查情况，确定消毒时间及消毒期。
3.1.1.4 可接受标准。
3.1.1.5 取样计划。
3.1.1.5.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。
3.1.1.5.2 取样：每个房间2个培养皿。
3.1.1.5.3 取样时间：按规定时间通进臭氧后，迅速取样。
3.1.1.5.4 取样部位：在距取样点地面0.8米水平面上均匀分布，每点设培养皿1个。
3.1.1.5.5 取样点数目。
3.1.1.5.6 取样点布置如图示：在房间部位均匀布置，一次与一次的取样位置不能重复。
3.1.1.5.7 取样次数：每点一次。
3.1.1.5.8 取样器具应无菌。
取样操作遵循无菌操作法。
取样员应穿无菌服并套上无菌脚套，以防污染。
3.1.1.6 检验法。
将已准备好的肉汤琼脂培养皿置于取样点，打开培养皿，使培养基表面暴露0.5h，再盖上盖。
按照《中国药典》（2010年版二部）附录ⅪJ微生物限度检查法项下平皿菌落计数法检测菌落数。
检验结果以算术平均值计算。
并跟踪检验三个批次。
检验结果与可接受限度标准相比较，消毒效果达到预期标准并且照射时间最短的时间即为所要选的最佳照射时间。
结果计算：C1+C2A××室=----------2A××室：为××室的平均菌落数。
C1：为第一取样点取样菌落数。
C2：为第二取样点取样菌落数。
3.1.1.7 取样期：每次消毒后连续取样10天进行检测；共计进行三次消毒和取样。
3.1.1.8结果判定：3.1.1.8.1消毒效果判定：根据已知的臭氧消毒量、消毒时间，根据取样检测的微生物结果，判定消毒效果是否符合标准。
3.1.1.8.2消毒期判定：根据已知的臭氧消毒量、消毒时间，根据取样检测的微生物结果，以微生物出现不合格或不合格边沿线的时间为基准，缩短三天后的时间既定为消毒期。
3.1.1.9消毒效果评价及期确定：根据连续三个期检测结果，由质量管理部做出臭氧消毒效果评价，并确定消毒期及确认每次消毒时间。
3.1.2 甲酚皂消毒剂消毒灭菌法。
3.1.2.1 原理。
甲酚皂溶液溶于水，呈碱性反应，有除垢作用，并能破坏细菌的细胞膜，导致细胞物质外渗或漏出，从而呈现出抑菌或杀菌作用。
其杀菌作用与浓度有着直接的关系。
所以通过对甲酚皂消毒液浓度的确认并与规定的可接受限度标准相比较，若在可接受限度标准围之，则可判定该消毒法的有效性及稳定性。
具体法为：在洁净区指定几个房间，然后设定3个浓度梯度，分别为1.5%、2.5%、3.5%，按照浓度梯度，配制好相应浓度的甲酚皂溶液。
然后用不同浓度的甲酚皂溶液擦拭洁净区墙壁（指定位置），并在擦拭后的对应位置上分别取样，做洁净区房间表面污染试验。
根据试验结果以及洁净区最大允微生物浓度限度标准来确认最佳消毒浓度。
3.1.2.2 取样计划。
3.1.2.2.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。
3.1.2.2.2 取样面积：2inch2/每个棉签。
3.1.2.2.3 取样时间：用规定浓度的甲酚皂溶液充分擦拭地面，10分钟后取样。
3.1.2.2.4 取样部位：地面。
3.1.2.2.5 取样点数目。
3.1.2.2.6 取样点布置如图示：在地面上均匀布置。
3.1.2.2.7 取样次数：每点一次。
3.1.2.2.8 取样器具应无菌。
取样操作遵循无菌操作法。
3.1.2.3 检验法。
用灭菌生理盐水润湿的灭菌脱脂棉按规定取样面积充分擦拭取样部位，然后放入装有生理盐水的灭菌容器，充分振摇。
按照《中国药典》（2000年版二部）附录ⅪJ微生物限度检查法项下平皿菌落计数法检测浸出液的含菌量即可。
并做空白试验。
检验结果以算术平均值计算。
并跟踪检验三个批次。
检验结果与可接受限度标准相比较，消毒效果达到预期标准并且消毒浓度最低的浓度即为所要选的最佳消毒浓度。
结果计算：C1+C2A××室=----------2A××室：为××室的平均菌落数。
C1：为第一取样点取样菌落数。
C2：为第二取样点取样菌落数。
3.1.2.43.1.2.5 消毒效果及期评价。
3.1.3 新洁尔灭消毒剂消毒灭菌法。
3.1.3.1 原理。
新洁尔灭为阳离子型表面活性剂，能吸附于细胞表面，改变细胞壁的通透性，从而呈现出强大的杀菌作用。
其杀菌作用与浓度有着直接的关系。
所以通过对新洁尔灭消毒液浓度的确认并与规定的可接受限度标准相比较，若在可接受限度标准围之，则可判定该消毒法的有效性及稳定性。
具体法为：在洁净区指定几个房间，然后设定3个浓度梯度，分别为0.05%、0.10%、0.15%，按照浓度梯度，配制好相应浓度的新洁尔灭溶液。
然后用不同浓度的新洁尔灭溶液擦拭洁净区墙壁（指定位置），并在擦拭后的对应位置上分别取样，做洁净区房间表面污染试验。
根据试验结果以及洁净区最大允微生物浓度限度标准来确认最佳消毒浓度。
3.1.3.2 取样计划。
3.1.3.2.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。
3.1.3.2.2 取样面积：2inch2/每个棉签。
3.1.3.2.3 取样时间：用规定浓度的新洁尔灭溶液充分擦拭墙壁，10分钟后取样。
3.1.3.2.4 取样部位：墙壁。
3.1.3.2.5 取样点数目。
3.1.3.2.6 取样点布置如图示：在墙壁的水平面上均匀布置。
3.1.3.2.7 取样次数：每点一次。
3.1.3.2.8 取样器具应无菌。
取样操作遵循无菌操作法。
3.1.3.3 检验法。
用灭菌生理盐水润湿的灭菌脱脂棉按规定取样面积充分擦拭取样部位，然后放入装有生理盐水的灭菌容器，充分振摇。
按照《中国药典》（2000年版二部）附录ⅪJ微生物限度检查法项下平皿菌落计数法检测浸出液的含菌量即可。
并做空白试验。
检验结果以算术平均值计算。
并跟踪检验三个批次。
检验结果与可接受限度标准相比较，消毒效果达到预期标准并且消毒浓度最低的浓度即为所要选的最佳消毒浓度。
结果计算：C1+C2A××室=----------2A××室：为××室的平均菌落数。
C1：为第一取样点取样菌落数。
C2：为第二取样点取样菌落数。
3.1.3.43.1.3.5 消毒效果评价。
3.2 消毒剂消毒频次、消毒剂更换频次的验证。
3.2.1 消毒剂消毒频次的验证。
3.2.1.1 原理。
不同级别的洁净区有不同等级的洁净度要求。
洁净度受到人员、环境、设备等诸多因素的影响。
洁净区工作人员每日虽按SOP对洁净区环境进行全面清洁，但却不能保证把进入室人员或物品散发的细菌全部杀死或清除出洁净区。
所以洁净区应定期进行消毒。
通过对洁净区沉降菌及表面污染细菌这两项指标的跟踪检测（一天一次，连续十天），以出现不符合可接受限度标准（一个指标不符合即为不符合）的那一天（dx）为界，统计dx以前的天数，此天数即为消毒剂消毒频次确定的理论依据，从而判定该消毒频次确定的有效性及合理性。
3.2.1.2 沉降菌检测取样计划。
3.2.1.2.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。
3.2.1.2.2 取样时间：洁净区净化空调系统正常运行30分钟后取样。
3.2.1.2.3 取样点数目。
3.2.1.2.4 取样点布置如图示：3.2.1.2.4.1 取样点在离地0.8米高的水平面上均匀布置。
3.2.1.2.4.2 布置取样点时，应避开回风口。
3.2.1.2.5 取样器具应无菌。
取样操作遵循无菌操作法。
3.2.1.3 沉降菌检测法。
3.2.1.3.1 将已准备好的肉汤琼脂培养皿置于取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上。
3.2.1.3.2 全部取样结束后，将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。