乳及乳制品中添加皮革水解物的检测
乳制品中动物胶原水解蛋白测定方法研究
动物胶原水解蛋 白是一种廉价蛋白原料 ， ・ 在乳 制 品 中添 加 动物 胶 原 水 解 蛋 白能够 提 高 乳 中蛋 白 的质量分数 ， 降低成本 。但是添加动物胶原水解蛋 白不 单 会影 响 乳 的 口感 和 风味 ，改 变乳 的溶 解 度 ， 而且动物胶原水解蛋白比乳蛋 白的营养价值低 ， 会
福建分析测试
Ｆｊ ｎＡ ａ ｓ ＆Ｔ ｓｎ ｕａ ｙｉ ｉ ｎ ｓ ｅｔ ｇ ｌ ｉ
２ ５
乳制品 中动物胶原水解 蛋 白测定方法研 究
陈宏靖 ， 陈 菲
福州 ３０ ０ ） ５ ０ １
（ 建省疾病 预 防控 制 中心 ， 建 福 福
摘
要： 目的 ： 本文建立乳制品中皮革水解蛋 白含量的测定方法。 方法 ： 采用 比色法定量检测乳制品中添加的动物胶
严 重 影 响消 费者 的健 康 状况 。因此 ， 了加 强对 乳 为 制 品 的监 督 和 管理 ， 须 建立 一 种 快 速 ， 敏 的检 必 灵
。．
ｄ ｎ ｉ ｆ ｄ ｏ ｙ ｍｌ ｅ ａ ｄ ｃ ｌｕａ ｅｌ ｅｃ ｎｅ ｔ ｆ ｎ ｍａ ｏ ａ ｅ ｙ ｒ ｌｚ ｄ ｐ ｏｅｎ ｉ ａｒ ｒｄ ｃｓａ ｃ ｒ ｉｇ ｔ ｓ ｅ ｓｔ ｏ ｙ Ｈｙ ｒ ｘ ｐ ｉ ， ｎ ａ ｃ ｌｔ ｏ ｔｎ ｉ ｌ ｌ ｇ ｎ ｈ ｄ ｏｙ ｅ ｒ ｔｉ ｄ ｉ ｐ ｏ ｕ ｔ ｃ ｏ ｄ ｎ ｍａ ｓ ｎ ｈ ｏａ ｃｌ ｎ ｙ ｏ
ｈ ｄ ａ ｖ ｎ ａ ｅ ａ ｈ ａ ａ ｙ ｏ ｅａ ｉｎ ｆｓ ｎ ｏ ｄ ｒ ｐ ｏ ｕ ｉ ｉ ｔ， ｔ， ｔ ａ ｅ ｙ ｍｕ ｈ ｓ ｉ ｂ ｅ ｔ ｅ ｔ ｎ ｍａ ｃ ｌ ｇ ｎ ａ ｄ ａ ｔｇ ｓ ｓ ｃ ｓ ｅ － ｐ ｒ ｔ ， ａ ｔ ｄ ｇ ｏ ｅ ｒ ｅｂ ｆｙ ｅｅ Ｉ ｗ ｓ ｖ ｒ ｃ ｕ ｔ ｌ ｏ ｔ ｉ ｌ ｏｌ ｅ ｓ ｏ ａ ｄ ｉ ａ ｓａ ａ
生鲜乳皮革水解蛋白操作规程
生鲜乳中碱度和皮革水解蛋白操作规程一、碱度1检测原理和方法参照GB/T 5009.46-2003《乳与乳制品卫生标准的分析方法》规定的方法进行。
原理：鲜乳中如加碱，可使溴麝香草酚蓝指示剂变色，由颜色的不同，判断加碱量的多少。
2检测步骤试剂：溴麝香草酚蓝-乙醇溶液（0.4g/L）——准确称取40mg指示剂用乙醇溶解并定容与100mg容量瓶。
5%碳酸氢钠——称取2.5克碳酸氢钠用水溶解，并定容在50mL容量瓶中。
检测步骤：量取5mL生鲜乳式样，至于试管中，沿管壁小心加入5滴指示剂倾斜轻转2-3圈，静置2min根据环层指示剂特征确定结果，同时用为参碱的生鲜乳做空白对照实验。
添加实验——向5mL原料奶中加入50微升浓度为5%的碳酸氢钠溶液，牛奶中碳酸氢钠浓度为0.05%备注：1碳酸氢钠的检测限为0.05%2指示剂加入时，注意沿壁小心加入，剧烈晃动会导致指示剂同乳样混合，稀释颜色。
3加入指示剂2min后注意颜色变化，在滴加后的2-10min中内观察结果，因为颜色随时间的延长而加深。
二、皮革水解蛋白1、检测方法和原理检测牛奶中的皮革水解物就是检测牛奶中的L-羟脯氨酸（分子量131.13，C3H9N03）羟脯氨酸是人体内非必需氨基酸，是胶原蛋白特有的氨基酸，是衡量机体胶原含量的一个重要指标。
且牛奶中不含羟脯氨酸。
原理：生鲜乳经过水解后释放出羟脯氨酸，被氯胺T氧化，生成含有吡咯环的氧化物加入含有高氯酸的显色剂，高氯酸破坏过量的氯胺T，终止氧化，含有吡咯环的氧化物与显色剂对二氨基苯甲醛生成红色化合物，显色。
2、检测步骤试剂：盐酸（优级纯）50g/L苯酚水溶液（新蒸馏苯酚）缓冲溶液——将50g柠檬酸、26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠溶于水，稀释至1000mL，此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。
氯胺T——将1.41g氯胺溶于10mL水中，依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液。
（现用现配）显色剂——称取10g对二甲氨基苯甲醛，用35mL高氯酸溶解，缓慢加入65mL异丙醇。
测定乳制品中皮革水解蛋白
TAU
4.2
1.08 0.06
P-ET-AMINE 5.6
ASP
23.0
OH-PRO
31.0
THR
33.7
SER36.7AS NhomakorabeaARAGIN 39.0
0.13
1.13 1.15 0.18 1.38 0.09
0.05
0.83 0.19 0.18 0.13 0.09
E GLU GLY ALA CITRULLINE a-A-B-A VAL CYS MET 1-LEU CYSTATHIO NIN LEU TYR b-ALA r-A-B-A HIS ANSERINE ARG
OPA
CHO +
CHO
COOH N-A-L-C
H2N C R1 H
氨基酸
R2 S
C
COOH
N C R1
C
H
H
图 1 氨基酸柱后衍生检测原理
1.2 试剂与仪器 标 准 品 ： 24 种 氨 基 酸 混 标 ， 购 于
Sigma-Aldrich 公司。试剂：纯水，Milli-Q 超纯水仪制备得到；柠檬酸锂、高氯酸、溴酸、 氢氧化锂，AR；N-Acetyl-L-cysteine 、Brij-35、 邻苯二甲醛(OPA)，购自 Sigma-Aldrich；流
1. 材料与方法 1.1 原理
柱后衍生系统是欧洲药典收录的氨基酸 分析方法。与柱前衍生相比，柱后衍生方法允 许样品中残留少量缓冲溶液，不易受基质干 扰，适用范围更广泛，尤其适用于生物样品分 析，衍生反应及色谱检测全自动完成，同时还 具有定量、重现性优异等优点。目前，氨基酸 柱后衍生主要有茚三酮衍生化法和邻苯二甲
（OH-PRO）的校准曲线如图 4 所示：
乳与乳制品中几种非法添加物质及其检测方法
滥用 食 品 添加 剂 专 项 整 治 近期 工 作 重 点及 要 求 》 ，
列 出 了七 大 “ 危 ” 高 行业 ， 括乳 品 、 面 、 包 米 肉制 品 、
液 相 色谱 一 谱 ＼ 谱 法 （Ｓ ＭＳＭＳ ， 量 限 质 质 Ｌ — ＼ ）定
为 ０ １ ／ｇ ． ｋ ； ０ ｍｇ
三 聚 氰 胺 对 哺乳 动 物 低 毒 ，属 于低 毒 急 性 毒 类 。长 期摄 入 三聚 氰胺会 造 成生 殖 、 尿系统 的损 泌
害， 出现 膀 胱 、 肾部 结 石 ， 可 进 一 步诱 发 膀 胱 癌 。 并
三 聚 氰 胺 在 婴 儿 体 内最 大 耐 受 量 为 每 千 克 奶 粉 １ｍ 。 蛋 白精 ” 产 品就是 以三聚氰 胺为 主要成 分 ５ｇ “ 类 的一 种 添加 剂 。将 三 聚氰 胺 掺入 饲料 、 奶或 奶 制 牛
１ 危害 ． ２
皮革 水 解 蛋 白是 皮 革 “ 革 ” 鞣 工艺 中产 生 的下 脚 料 ， 一种 廉 价 的 工 业 原 料 ， 常 见 的 皮革 水 解 是 最 物是皮 革粉 。将其 掺人 牛奶 或奶粉 中可提 高蛋 白质
的含量 。 ２２ 对 人体 的危 害 ．
影 响牛奶 的 口感 ，改变 牛奶 氨基 酸 的组 成 ； 会
聚氰 胺 的限量值 为 ２５ ／ｇ ． ｋ ；婴幼儿 配方奶 粉 中限 ｍｇ
量 为 ｌ ／ｇ ｍｇ 。 ｋ ２ 皮革 水解 蛋 白 ２ １ 性 质 ．
质、 危害 及 目前通 用 的检测方 法 ， 以供 同行 参考 。
１ 三聚氰胺 （ 白精 ） 蛋
１１ 性质 ． 三 聚 氰 胺是 白色 结 晶粉末 ， 称 三胺 ， 一 种 简 是 重 要 的含 氮有机 化工原 料 。广 泛应用 于木 材 、 塑料 、 涂料 、 造纸 、 纺织 、 皮革 、 医药 等。
食品安全事件案例分析
这起安全事件属于违法向食物里面添加非食用添加剂,继三鹿三聚氰胺奶粉和双汇瘦肉精事件之后的又一起典型食品安全事件。三个案例看似无大多关联,实则反映了中国当前的消费市场存在的问题。
第一,利益至上的经营观念。
对廉价青枣进行违法添加添加剂等方式的加工销售,使数十吨“糖精枣”第二,食品质量监督环节的漏洞
数十吨的问题青枣,近一个月的市场输入,食品监督部门对此毫无反应,说明食品监督部门对产品流入市场存在监管问题。
随着社会主义市场经济所占的地位不断强化,其自发性、盲目性、滞后性也不断显现出来,出现了诸如此类的食品安全问题。个人认为原因有下:
食品安全事件案例分析
“皮革奶”事件概述
2005年，山东等地曝出在牛奶中添加“皮革水解蛋白”的事件，引发时任国务院副总理吴仪的重视，曾经大力整顿。当时山东省工商部门至少查获2.8万多件使用水解蛋白的乳制品，有200多家小厂从事这类生产。
国家质检总局食品司于2009年2月份接到了一封举报信，举报浙江金华晨园乳业有限公司在生产乳制品的过程中添加“皮革水解蛋白粉”，从而达到提高产品蛋白质含量的目的。金华市质监局、兰溪市质监局于3月5日配合浙江省质监局，对晨园乳品公司进行突击检查。在当场查获60公斤无标签白色粉末，经鉴定该粉末为皮革水解蛋白粉。浙江省质监局在3月18日对浙江晨园乳业八个批次的产品抽样检测，其中三批次成品两批次半成品含有皮革水解蛋白成分。目前证据表明，早在2008年10月20日监管部门在晨园乳业公司当天生产的含乳饮料中，检测出了这种皮革水解物。晨园乳制品公司在生产经营中，无视国家法律的规定，漠视人民群众的生命安全，滥用非食品添加剂，最终酿成了严重的食品安全事故。
牛奶中三价铬和六价铬的同时提取和检测方法
chromium, chromium (Ⅲ) pre-column derivatization and milk protein sedimentation, which exhibited simplicity, convenience and high extraction efficiency of chromium. The separation of chromium (Ⅲ) and chromium (Ⅵ) was achieved on an IonPac CS5A column within 8 min. Chromium (Ⅲ) and chromium (Ⅵ) were chleated with PDCA and DPC and were detected with a
1.3.2 淋洗液的配制 将 100 mL 淋洗液储备液用超纯水稀释到 1L，稀释
后淋洗液的 pH 值应在 6.70～6.80 之间。
1.3.3 柱后衍生液的配制 将 0.5g 1,5- 二苯卡巴肼(DPC)溶解在 100mL 甲醇中。
在约 500mL 去离子水中加入浓硫酸 25mL。将上述两种 溶液混合，并用超纯水准确定容至 1L ，所得溶液真空 抽滤，滤去不溶性杂质。
１ 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器 牛奶 市售。 吡啶 -2,6- 二羧酸(PDCA，纯度 99%) Aldrich 公
司；1,5- 二苯卡巴肼( DPC，分析纯) 新中化学厂；
收稿日期：200 9-07 -04 作者简介：李静(1982 —)，女，硕士，研究方向为离子色谱分析。E-mail：lijing@ * 通信作者：梁立娜(1976 —)，女，博士，研究方向为液相及离子色谱分析。E-mail：lianglina@
农业部：下令严查“皮革奶”
农业部：下令严查“皮革奶”
佚名
【期刊名称】《中国食品》
【年(卷),期】2011(0)5
【摘要】日前,农业部下发＂2011年全国生鲜乳质量安全监测计划＂和＂农业部生鲜乳质量安全监测工作规范＂两个文件。
此次安全监测计划提出,除所有抽检样品都必须检测三聚氰胺外,其中30%的样品还要检测皮革水解蛋白和碱类物质。
【总页数】1页(P36-36)
【关键词】农业部;皮革;安全监测;监测工作;质量安全;三聚氰胺;水解蛋白;奶【正文语种】中文
【中图分类】TS529
【相关文献】
1.江泽民下令严查的“建国以来最严重的间谍案” [J], 王衍;
2.农业部：皮革奶列入监测黑名单 [J],
3.农业部下令严查“皮革奶粉” [J],
4.农业部:皮革奶列入监测黑名单 [J],
5.农业部下令严查“皮革奶粉”只抽检30%样品 [J],
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上海市畜牧兽医办公室关于印发2017年上海市生鲜乳质量安全监测计划的通知-沪牧医办〔2017〕16号
上海市畜牧兽医办公室关于印发2017年上海市生鲜乳质量安全监测计划的通知正文：----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------上海市畜牧兽医办公室关于印发2017年上海市生鲜乳质量安全监测计划的通知沪牧医办〔2017〕16号上海市农产品质量安全检测中心：为进一步贯彻落实《乳品质量安全监督管理条例》，全面掌握本市生鲜乳状况，确保本市生鲜乳质量安全，根据《农业部关于开展2017年生鲜乳质量安全监测工作的通知》（农牧发〔2017〕2号）、《农业部办公厅关于开展<生乳>国标指标监测工作的通知》（农办牧〔2017〕12号）要求，现将《2017年上海市生鲜乳质量安全监测计划》印发给你们，请结合实际，认真执行。
上海市畜牧兽医办公室2017年3月30日附件：2017年上海市生鲜乳质量安全监测计划为贯彻落实《乳品质量安全监督管理条例》和国务院关于加强乳品质量安全工作的要求，根据《农业部关于开展2017年生鲜乳质量安全监测工作的通知》（农牧发〔2017〕2号）和《农业部办公厅关于开展<生乳>国标指标监测工作的通知》（农办牧〔2017〕12号）的有关要求，结合本市实际情况，特制订本监测计划。
一、监测区域本市范围内。
二、监测对象和内容（一）农业部监测任务1、全国生鲜乳专项监测以本市生鲜乳收购站和生鲜乳运输车为监测对象，每半年进行一次抽检，每次抽取24批次样品，全年监测样品48批次，其中生鲜乳收购站8批次、生鲜乳运输车40批次。
检测指标：三聚氰胺、黄曲霉毒素M1、β-内酰胺酶、皮革水解蛋白、碱类物质、硫氰酸钠。
2、《生乳》国家标准指标监测以上海市生鲜乳收购站和生鲜乳运输车为监测对象，在3月、5月、8月和10月进行抽检，每次抽取30批次样品，全年监测120批次样品。
“皮革奶”风波等
“皮革奶”风波春节前后，内地民众在香港大量购买婴幼儿奶粉，使得香港一度出现奶粉供应紧张的局面，其中一种婴幼儿奶粉甚至断货超过一个星期。
此后，澳门也出现了内地民众大量购买婴幼儿奶粉，导致澳门市场也出现了奶粉短缺的状况。
内地游客在港澳地区大量购买奶粉，致使当地奶粉供应紧张的情况经过媒体报道，引起了公众的普遍关注。
就在这时，又有媒体报道，国内的一些不法企业，将一种名为“皮革水解蛋白粉”的物质，混到牛奶里，提高牛奶的蛋白质含量。
报道称，这种所谓的“皮革水解蛋白粉”就是利用皮革下脚料甚至动物毛发等物质，经水解生成的一种粉状物，因其蛋白质含量较高，添加在乳制品中可以提高乳制品中蛋白质含量。
消息一出，公众对国产奶粉质量的关注度随即大幅提升，国产乳制品的质量问题再次成为全社会关注的焦点。
针对所谓“皮革奶”的消息，国家质检总局和农业部等相关部门立刻展开了调查。
经过调查相关部门发现，部分媒体报道的所谓“皮革奶”事件，并不是新近发生的事件，相关部门最近一次在牛奶中检测出“皮革水解蛋白粉”还要追溯到2009年。
2009年3月18日，浙江省质监局检出晨园乳业生产的多批次牛奶中，含有“皮革水解蛋白粉”，这家企业随即被执法部门查封。
而农业部门也表示，在2010年的牛奶检查当中，并没有发现添加“皮革水解蛋白粉”的现象。
但是经过调查记者发现，目前消费者对国产奶粉的信心明显不足。
记者在北京市对一些婴幼儿奶粉销售比较集中的超市和母婴用品专卖店进行了调查，对购买婴幼儿奶粉的消费者进行了采访，结果接近7成的被采访者都表示不会选择国产品牌的奶粉。
由于消费者对国产奶粉的信心不足，导致大部分超市和专卖店中，进口奶粉的销量都明显好于国产奶粉。
三鹿奶粉事件之后，监管部门也开始着手研究如何采取有效措施，完善监管体系，加大对乳制品行业尤其是婴幼儿奶粉生产企业的监管力度。
日前，国家乳制品工业协会委托国内权威的检测机构对我国市场上销售的国产和进口婴幼儿奶粉进行了抽查检测。
＂皮革奶＂的克星离子色谱与紫外检测器联用技术测定牛奶中六价铬
离 子 色 谱 仪 ： Ｉ一 ０ 型 离 子 色 谱 仪 。 有 柱 后 衍 ＣＣ ３ ０ 配 生 装 置 和 紫 外 检 测 器 ，青 岛 盛 瀚 色 谱 技 术 有 限 公 司 超 纯 水 制 备 设 备 ： 普 超 纯 水 机 ， 都 超 纯 科 技 有 限 优 成
公 司 。分 析 天 平 ：北 京 赛 多 利 斯 天 平 有 限 公 司 ，
化 手 丌 亘 匀 万 个 丌坟 ７ 卜
皮革奶 ” 的克星
离子色谱 与紫外检测器联用技术 测定 牛奶 中六 价铬
口杨 兰玲 许 爱华 许 美玲 王 若琳 张 习 志 田海 峰
铬 是 人 体 必 需 的微 量 元 素 之 一 ． 是 自然 界 分 布 也 较 广 泛 的 一 种 元 素 ． 的 毒 性 与 其 价 态 有 关 。 价 铬 铬 六 具 有 很 强 的 毒 性 ． 干 扰 重 要 的 酶 体 系 ， 有 致 癌 和 可 具 诱 发 基 因 突 变 的 作 用 。 近 日， 场 上 出现 了皮 革 奶 风 市
儿 童死 亡
由于铬 酸根 的紫外吸 收 比较弱 ． 如果 直接进入紫
外 检 测 器 进 行 测 定 灵 敏 度 太 低 ． 而 铬 酸 根 与 生 成 紫 然 红 色 络 合 物 在 ５ ０ｒ处 有 强 烈 的 吸 收 。 次 ， ３ｎ ｎ 其 由于 牛 奶 样 品 成 分 比较 复 杂 ． 扰 比较 多 ． 用 比 色 法 或 者 分 干 采 光 光 度 法 误 差 较 大 。 因此 ． 者 首 先 采 用 离 子 色 谱 柱 笔 将 铬 酸根 分 离 出 来 ．从 而 排 除 了其 他 物 质 的 干 扰 ， 之
时 ， 测 的信 噪 比高 ， 选 择 衍 生 剂 流 速 为０５ ／ ｉ 检 故 ． ｍＬｍ （ ） 测 波 长 的选 择 ３检 对 铬 酸 根 与Ｄ Ｃ 合溶 液 进 行 全 波 长 扫 描 ．扫 描 Ｐ混
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试验研究
乳及 乳制 品 中添加皮革水解物 的检 测
吴 燕 王 贞 （ 山东省青岛市饲料兽药检测站 ２ ６ ６ ０ ７ １ ）
摘要 本试验 采用紫外分光光度计 法测定生鲜Ｓ Ｌ Ｌ ． 羟脯氨酸的含量 来确 定是 否添加皮革 水解物 ，在前处理过程 中用
中，再加一 些香 精、色 素等 原料而 制得 的皮 革水解 产物
Ｄ Ｇ Ｇ ． ９ ２ ４ ０ Ａ 干燥 箱（ 上海森信实验仪器有 限公司） 。
１ ． ２ 试 剂
可提高乳制品中蛋白质的含量，这种奶称为“ 皮革奶” 。皮
革 奶会改变 生鲜 乳的 口感及 氨基酸 的组 成 ，降低 生鲜乳 中氨 基酸 的吸收利 用率 ，其 中含有 重金 属铬 被人体 吸收 后 ，积累可 导致 中毒 ，关节疏 松肿 大 ，造成 人体重 金属
用 已经废弃 的皮革 制 品或动物 毛 发 ，水 解后 制成粉 末 ， 因而 蛋 白含 量 比较 高 。 由于 乳及乳 制 品中蛋 白含量 要求 较 高 且相 对 固 定 ，将 皮 革 水解 蛋 白粉 掺 入 牛 奶 或奶 粉
ＤＶ － ８ ０ ０ 紫 外可见 分光光度 计（ 贝克曼公司） 、高速 冷 冻 离心机 （ Ｈｅ ｒ ａ ｅ ｕ ｓ 公司） 、水浴锅（ 上海亚荣生化仪器厂 ） 、
中毒 甚至造 成婴 儿死亡 。２ ０ ０ ９ 年 ，卫生 部 已将 皮革 水解
１ ． ２ ． １ 氟胺Ｔ 溶液
将１ ． ４ １ ｇ 氯胺Ｔ 溶 于１ ０ ｍｌ 水 中，依次加
入ｌ Ｏ ｍｌ 正丙醇和８ Ｏ ａｌ ｒ 缓冲溶液 。现用现配 。 １ ． ２ ． ２ Ｌ ． 羟脯 氨酸标 准溶 液 （ １ ）Ｌ ． 羟 脯氨酸标准储 备 液（ ５ ０ ｏ ￣ ｇ ／ ｍ１ ） 。精 密称 取Ｌ － 羟脯 氨 酸标 准 品（ 国 药 集 团） ５ ０ ａｇ ｒ ，用 少量 ０ ． ０ ２ ｍｏ ｌ ／ ｌ 盐酸 溶解 并 定容至 １ ０ ０ ｍｌ 容量 瓶 。（ ２ ）Ｌ ． 羟脯 氨酸标准 工作 液（ ５ ￣ ｔ ｇ ／ ｍ１ ） ：吸取 Ｌ ＿ 羟脯 氨 酸标准储备液５ ． ０ ０ ｍｌ 于５ ０ ０ ｍｌ 容量瓶 中，定容 。
中图分类号 ：￥ ８ ５ ９ ． ８ ４
文献标 识码 ：Ａ
乳 品掺假 已成为 困扰 我 国乳 品工业 发展 的一个 突 出
问题 ，在三 聚氰胺 成 为严 打 的对象 后 ，一些 不法 企业和
奶站便将 目光锁定在“ 皮革水解 蛋 白” 。皮革水解蛋 白是利
ｌ 材料与方法
１ ． １ 仪器
操作强，重复率好，稳定性高，适பைடு நூலகம்乳及乳制品中皮革水解物的测定．
关键词 乳及乳制品 皮革 水解蛋 白 Ｌ ． 羟脯氨酸 紫外分光光度法
文章编号： １ ０ ０ ７ － １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ － ０ ０ ２ ７ ・ ０ ２ 度【 。本试验建立紫外 分光光度法测 定生鲜乳中皮革水解 蛋白的检 测方 法。 －
蛋 白公布为 《 食 品中可 能违法添 加 的非 食用物 质和 易滥 用的食品添加 剂品种名 单（ 第二批） ¨ 】 。 在常规 检测 中 ，试 验 结果是 乳及 乳制 品 中全 部 蛋 白 质含量 ，无法 显示乳 蛋 白的实 际含量 。所 以，添加在 乳 及 乳制 品 中更 为 隐 蔽 ，检 测 难 度 更 大 。Ｌ （ ． ） ． 羟 脯 氨 酸 （ Ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｎ ｅ ，Ｈ ｙ ｐ ） 为胶原蛋 白中 的特有组 分，而牛奶 中不含此氨基酸 ，因此鉴定Ｌ （ ． ） 一羟脯氨 酸就 能鉴定皮革 水解蛋 白，如若样品中含有Ｌ （ ． ） ． 羟脯 氨酸 ，就可判定添加 了动物水解蛋 白。 因此 ，为 了加强对 乳制 品 的质量 安全 监督 ，必 须建 立一种 快速， 并且灵敏度 较高 的检测方 法来 判断乳制 品 中 有无掺 加动物 胶原水 解蛋 白。紫外 分光 光度法 利用羟 脯 氨酸 难挥发 ，在紫外 区有 微弱 的吸 收 ，没有 荧光基 团等 性质进 行检测 。胶原 蛋 白在浓酸 或浓 碱 的条件 下 ，经 过 高温长 时间水解 ，彻 底变 成游离 的氨 基酸 。其 中 的羟 脯 氨 酸首先 用氯胺 Ｔ 氧化 生成 含吡 咯环 的物 质 ，然后 以高 氯酸 溶液除去剩余 的氯胺Ｔ，加入对 一二 甲基氨基苯 甲醛
１ ． ２ ． １ 样 品 制备
称取５ ｇ 样 品于 １ ０ ０ ｍｌ 锥 形瓶 中，加 入
３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 硫 酸溶液 ３ ０ ｍｌ ，用表 面 皿 盖 住 ，于 １ ０ ５ ＂ Ｃ干燥 箱
内恒 温 １ ６ ｈ 。用滤纸 趁 热将 水解产 物过 滤至 ２ ５ ０ ｍｉ 容量 瓶
１ ． ２ ． ３ 缓 冲液
将５ ０ ｇ 柠檬 酸 。２ ６ ． ３ ｇ 氢氧化钠和 １ ４ ６ ． １ ｇ 无
水 乙酸钠（ ＧＢ ６ ９ ４ ） 溶 于水 ，稀释 至 ｌ Ｌ ，此溶 液与２ ０ ０ ｍｌ 水
和３ ０ Ｏ ａｌ ｒ 正丙醇混合 。 １ ． ２ ． ４ 氢氧化钠溶 液 ｌ ｍｏ １ ／ Ｌ 、ｌ Ｏ ｍｏ 儿
１ ． ２ ． ５ 硫 酸溶 液 Ｃ （ Ｈ２ Ｓ Ｏ ４ ） ＝ ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 量取 ７ ５ ０ ｍｉ 水 于２ Ｌ的
烧杯 中， 在搅 拌下缓 慢加 入３ ２ ０ ｍｉ 浓硫 酸， 冷却 至室温后 用
水定容至２ Ｌ 。
１ ． ２ ． ６ 生鲜乳样 品
１ ． ２ 方法
青岛生鲜乳站 。
硫酸溶液代替 了传统 中氯化 亚锡盐酸溶液水解样品．结果表 明，Ｌ ． 羟脯氨酸浓度在ｏ ￣ ２ ． Ｏ 咖 ｌ 呈 良好的线性关系
（ ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ８ ９ ） ，Ｌ ． 羟脯氨 酸的回收率 为９ ２ ． ８ ￣ ／ ｏ － １ ０ ０ ． ８ ％，相 对标准偏差 为３ ． ０ ２ ％．本 方法 测定皮革奶 中 Ｌ ． 羟脯氨 酸的含量可