三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进
广西三七中皂苷成分的含量测定及其变化
广西三七中皂苷成分的含量测定及其变化
刘华钢;梁秋云;赖茂祥;黄慧学
【期刊名称】《中国实验方剂学杂志》
【年(卷),期】2006(12)5
【摘要】目的:高效液相色谱法测定不同药龄、不同月份生育期的广西三七中皂苷的含量,并考察其变化规律,为广西三七的质量评价提供依据。
方法:采用HPLC 法,Shim-pack CLC-ODS柱分离,流动相:乙腈与水梯度洗脱,检测波长203nm,柱温:室温,流速1mL/min。
结果:不同药龄、不同月份生育期的广西三七中人参皂苷
Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的含量有明显差异,4年药龄的广西三七10月份采收三七皂苷含量最高。
结论:所建立的高效液相色谱法灵敏度高,专属性强,重复性好,能准确、快速地进行含量测定;药龄及月份生育期是影响广西三七皂苷含量的重要因素。
【总页数】3页(P5-7)
【关键词】HPLC;三七;人参皂苷;三七皂苷;采收期
【作者】刘华钢;梁秋云;赖茂祥;黄慧学
【作者单位】广西医科大学;广西中医药研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.三七中三种皂苷含量测定方法的比较研究 [J], 张涛;冯一凡;张明
2.HPLC法测定三七中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量 [J], 李华丽;王小龙;李梅荣;叶晓亚
3.HPLC-ELSD 法测定含三七中成药的皂苷成分的含量 [J], 王芮;郭华
4.超高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量 [J], 谢耀轩;林亚珠
5.HPLC法测定三七中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量 [J], 何书平
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三七总皂苷中代表性皂苷含量测定方法学的建立及稳定性研究
三七总皂苷中代表性皂苷含量测定方法学的建立及稳定性研究陆 燕，潘 旭（北京积水潭医院中药房，北京 100035）[摘要] 目的： 建立同时测定三七总皂苷中三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1和人参皂苷Rb 1三种成分的含量测定方法，并对其各种状态下的稳定性进行研究。
方法：以乙腈-水系统作为流动相，采用高效液相-梯度洗脱法，同时测定三七总皂苷中三种成分的含量，并考察方法的专属性、线性、精密度和回收率；测定四种pH 值溶液中三种皂苷成分的稳定性以及在高温、高湿和强光照射条件下，三七总皂苷粉末中三种皂苷成分的稳定性。
结果：方法学验证结果显示，在选定的梯度洗脱条件下，方法专属性良好，三种皂苷可有效分离和定量；在各自的线性范围内线性良好；精密度RSD 值均小于2%；三种皂苷的平均回收率分别为（98.98 ± 0.60）%、（98.86 ± 0.34）%和（100.19 ± 0.64）%，方法准确性良好。
稳定性研究结果显示，在溶液状态下，三种皂苷的稳定性趋势基本一致，稳定性与pH 值密切相关，在pH 1.2溶液中药物迅速降解，24 h 含量即降低了约80%；而在pH 4.5溶液、pH 6.8溶液以及水中，三种成分的稳定性均良好，24 h 内含量未发生明显变化；而在三七总皂苷粉末中，三种代表性皂苷对湿、热和光照均不敏感，10 d 内含量基本保持稳定；但是在高湿条件下，粉末有一定的吸湿性。
结论：所建立的液相方法准确、可靠，溶液状态下三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1和人参皂苷Rb 1的稳定性与pH 密切相关，随pH 的降低稳定性变差，而在固体状态下则稳定性良好。
[关键词] 三七皂苷R 1；人参皂苷Rg 1；人参皂苷Rb 1；稳定性；梯度洗脱[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1672 – 8157(2014)02 – 0088 – 04Study on the methodology establishment of content determination and stability of representative saponins in Panax notoginseng saponinsLU Yan, PAN Xu (Dispensary of Traditional Chinese Medicine, Beijing Jishuitan Hospital, Beijing 100035, China )[ABSTRACT] Objective: The HPLC method for simultaneous determination of notoginsenoside R 1, ginsenoside Rg 1 andginsenoside Rb 1 in Panax notoginseng saponins (PNS) was established to study the stability of the saponins under different states.Methods: Acetonitrile-water system was used as the mobile phase, and the method specificity, linearity, precision, recovery werestudied. The stability of the three saponins in different pH solutions and solid state was evaluated. Results: The results of methodvalidation showed good specificity, effective separation and quantification, as well as good linearity of the three saponins in their linear range. The precision RSD values were less than 2%, average recovery rates were (98.98 ± 0.60)%, (98.86 ± 0.34)% and (100.19 ± 0.64)% for the three saponins respectively. The stability results showed that the stability of the three saponins was closely related to the pH value under the solution state, with rapid degradation about 80% in 24 h in pH 1.2 solutions and little degradation in the other test medium. In the solid powder state, the stability of saponins was good under the experimental high temperature, high humidity and highlight conditions, while a little moisture absorption was found in the high humidity conditions. Conclusion: The HPLC method was reliable. Stability of three saponins was closely related to the pH value of solution, while they were stable under solid state.[KEY WORDS] Notoginsenoside R 1; Ginsenoside Rg 1; Ginsenoside Rb 1; Stability; Gradient elution[作者简介] 陆燕，女，主管药师，主要从事临床药学工作。
采用HPLC法测定三七中3种皂苷的含量
采用HPLC法测定三七中3种皂苷的含量目的研究探讨采用高效液相色谱仪测定复三七中三种皂苷含量的临床应用价值。
方法以三七总皂苷分散片为研究对象，对其中的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1含量进行检测。
结果不同批次三七总皂苷分散片中，人参皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人参皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片。
结论通过高效液相色谱仪（HPLC）可以同时对三七中不同皂苷的含量进行准确定量，且具有操作简单、快捷的优点，重复性好，稳定性强，可以用于三七相关药物质量控制的过程中，值得推广应用。
标签：高效液相色谱；三七；皂苷；含量三七是我国传统医学中最珍贵的药材之一，具有止血、补血、活血、抗血栓等多种功效[1]。
本文以三七总皂苷分散片为研究对象，通过高效液相色谱法对三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1等三种皂苷含量进行测定，并对其具体操作方法及检测结果进行分析。
具体报告如下。
1资料与方法1.1一般资料仪器：选择日本岛津仪器生产的LC-10A高效液相色谱仪（组成部分有微体积串联双柱塞、柱温箱、紫外可见双波长检测器、超声波提取器HS 3120、中文化LC工作站）。
试剂：对照品人参皂苷Rb1（批号：110703-201420）、对照品人参皂苷Rg1 （批号：110703-201421）、对照品三七皂苷R1 （批号：110703-201423）；三七总皂苷分散片（三七总皂苷含量为50 mg/片）；洗脱剂乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、水（超纯水）。
其中，对照品皂苷购自中国食品药品检定研究院，三七总皂苷分散片为自制，洗脱剂购自津市科密欧化学试剂开发中心。
1.2方法分别取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品进行精密称定，并使用浓度为20%的乙腈水溶液对其进行溶解，并制成1 ml的混合溶液（其中人参皂苷Rb1含量为0.5 mg、人参皂苷Rg1含量为0.4 mg、三七皂苷R1含量为0.12 m）。
三七总皂苷含量测定不确定度的评估
三七总皂苷含量测定不确定度的评估张公信;周学进;李晓芬;高云涛【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2011(27)25【摘要】对分光光度法测定三七总皂苷含量的不确定度进行分析,找出影响不确定度的因素,为其测定方法的改进和评价检测报告提供依据。
用分光光度法测定三七总皂苷含量,并根据JJF1059—1999《测量不确定度评定与表示》的规定评估其不确定度。
试验建立了数学模型,找出了各分量的归宿,根据实验测定,A类不确定度由方法的重复性影响所引起,通过对多次平行测定得到的观测列进行统计分析求得其相对不确定度为0.00296。
B类不确定度包括质量分量、体积分量和分光光度计吸光度分量,其相对不确定度为0.00321。
利用标准曲线回归方程计算标准曲线拟合引起的不确定度,其相对不确定度u1(m)/m=1.53×10-5。
根据分析,本次评估的不确定度由扩展不确定度表示为0.0022。
方法具有一定的准确性,能满足测定的要求。
在本次不确定度的评估中,天平称量和测量方法的重复性这2项引起的不确定度分量对合成不确定度构成显著贡献。
【总页数】5页(P235-239)【关键词】三七总皂苷(PNS);分光光度法;不确定度【作者】张公信;周学进;李晓芬;高云涛【作者单位】云南民族大学化学与生物技术学院;民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.散装矿产品取样、制样通则水分测定方法-热干燥法测定水分含量不确定度的评估 [J], 李英华;贺兵2.分光光度法测定纺织品中甲醛含量的不确定度评估 [J], 何维3.HPLC法测定制何首乌饮片中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的不确定度评估 [J], 李正刚;马彧;王丹彧;李本淳;赵艳4.高效液相色谱-蒸发光散射法测定酱腌菜中三氯蔗糖含量的不确定度评估 [J], 黄宇;赵嵩;张月松;汪强5.高含量金合金首饰中金含量的测定不确定度评估 [J], 仲伟娜;蒋晓梅;徐剑瑛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三七总皂苷的现代提取方法研究进展汇总
三七总皂苷的现代提取方法研究进展汇总三七总皂苷的现代提取方法研究进展【摘要】在近期学者研究的基础上，本文综述了三七中总皂苷类成分的提取方法，分别阐述了超声法、酶法、加速溶剂法、超临界流体萃取法、湿式超微粉碎法等的优缺点，供科学研究参考。
【关键词】三七总皂甙；提取方法；研究进展三七是五加科人参属植物三七((Panax notoginseng F.H.chen)的块根，《本草纲目》载：三七主“止血、散血、定痛、金刃箭伤、跌扑杖疮出血……诸病”。
主要有三七素、三七总皂苷、黄酮、挥发油、氨基酸、糖类等有效成份，现代药理学表明三七总皂苷（PNS）具有止血活血、补血、改善脑血流功能、保护脑神经、增强免疫力、抗炎、镇痛、抗肝纤维化、改善肾脏功能等作用[1]。
三七皂苷主要成分是人参皂苷，因此三七皂苷提取方法与人参皂苷的提取方法相类似。
比较传统的方法就是溶剂提取法，包括浸渍法、煎煮法、渗漉法、回流提取法，但操作都很费时间、溶剂。
现代提取方法，如微波、超声波及超临界提取等，提取速度快，得率高，但要实现工业化，目前的生产成本还较高。
本文就近期三七总皂苷现代提取方法的研究进行综述，供科学研究参考。
1 超声波提取温度是影响提取结果的主要因素，超声提取可以在较低的温度下提取出有效成分，避免高温破坏有效成分。
该法常用乙醇为提取溶剂，省时，省溶剂，提出杂质少。
马妮等[2] 研究超声提取方法对三七中皂苷的提取率的影响，超声法提取三七皂苷能显著提高提取效率，采用超声提取30min~1h可以代替常规浸泡36h处理的方法。
2 酶法提取三七药材含有大量的淀粉多糖，传统的水提醇沉法在水煎煮过程中容易糊化，难于滤过，醇沉后由于沉淀的吸附作用，皂苷损失较大，提取率低；渗漉法虽然提取率较高，但溶剂消耗过大，提取周期较长[3]。
而酶法以水为提取溶剂，提取活性高，专一性强，条件温和，不污染环境，对药效成分的保存率、提取率高等优点。
常用纤维素酶、果胶酶、α-淀粉酶等，纤维素酶能水解结构致密的植物细胞壁[4]，有利于胞内三七皂苷等有效成分的溶出，果胶酶能将三七药材中大量的淀粉、蛋白质等不溶物水解，从而增加提取物得率，而α-淀粉酶可以迅速水解淀粉。
广西三七皂苷类成分含量的分析
广西三七皂苷类成分含量的分析【摘要】目的研究广西三七不同产地、不同部位的皂苷含量特征。
方法利用香草醛-高氯酸比色法测定三七中总皂苷含量，以高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1，Rb1，Re和三七皂苷R1含量。
结果广西靖西县不同产地三七样品的总皂苷及单体皂苷含量存在差异；不同部位间皂苷含量的差异达到极显着水平，以根茎的最高，主根次之；同一样品中，各单体皂苷含量以人参皂苷Rg1最高，人参皂苷Re最低，不同样品中各单体皂苷间比值存在差异。
结论广西靖西县各地三七质量存在差异，药材中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者含量之和符合2005版《中国药典》规定。
【关键词】三七总皂苷人参皂苷三七皂苷三七Panax notoginseng为五加科植物，是我国传统名贵中药材，含皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、三七素等多种活性成分，有散淤止血、消肿定痛之功效，用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等［1］。
目前市场上三七主要来源于云南，并且国外也具有十分巨大的市场潜力。
随着人们生活水平的提高，对三七的需求量不断增加［2］。
在保证三七稳产优质的条件下，开辟新的种植区域是满足三七需求的重要途径。
广西作为三七的原产地，曾经也是主产地［3］。
凭借优越地理条件和长期累积的经验，在广西扩大三七的种植面积是可行的。
刘华钢等［4］也报道了广西三七含有较高人参皂苷Rg1，Rb1，Re和三七皂苷R1含量。
广西政府已将三七纳入广西靖西等县鼓励种植的中药材之一。
三七不同部位皂苷含量不同，三七主根、根茎和支根中总皂苷含量差异明显［5］，广西三七茎基和须根的主要单体皂苷含量具有差异，且同一部位不同单体皂苷含量差异较大［6］。
药理研究［7］表明，各单体皂苷的药理作用不同，相互间的含量比值的差异对三七药材质量有重要影响。
因此，本文在前人研究的基础上，探索广西三七不同产地、不同入药部位的皂苷含量变化规律以及各单体皂苷在药材中的变化,为进一步研究广西三七质量奠定基础。
三七及其制剂中皂苷类成分含量测定方法研究概述
三七及其制剂中皂苷类成分含量测定方法研究概述
陈朝
【期刊名称】《中医药导报》
【年(卷),期】2017(23)5
【摘要】目的:综述三七药材及其制剂中皂苷类成分含量测定方法研究进展。
方法:查阅近10年研究文献,对三七及其制剂中皂苷类成分含量测定方法如薄层扫描法、毛细管电泳法、近红外光谱法、紫外分光光度法、液相色谱法、液相色谱-质谱联
用法进行介绍,重点介绍高效液相色谱法,比较各种方法的适应范围和方法间的差异。
结果与结论:每种方法的专属性、精密度和准确性、实际操作可行性以及成本各有
差别,但高效液相色谱法以其专属性好、灵敏度和准确度高等优势能够更真实地反
映药物含量,因此在药物含量测定中应用更为广泛,是三七及其制剂中皂苷类成分含
量测定的主要方法。
【总页数】5页(P49-53)
【关键词】三七;皂苷;毛细管电泳法;近红外光谱法;高效液相色谱法;超高效液相色
谱法;液相色谱-质谱联用法
【作者】陈朝
【作者单位】广西中医药大学第一附属医院药学部
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.天然药物中皂苷类成分的含量测定方法的研究进展 [J], 翟红;魏慧;武玉凤;薛培凤
2.三七不同加热炮制品中5种皂苷类成分的含量测定 [J], 周新惠;赵荣华;张荣平;朱培芳
3.复方丹参方中三七皂苷类成分的HPLC测定方法研究 [J], 黄鹤洁
4.探析复方丹参方中三七皂苷类成分的含量测定方法 [J], 高彩凤
5.对比三七不同炮制品中皂苷类成分的含量 [J], 陈英銮
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三七皂苷含量标准
三七皂苷含量标准三七，又称田七、人参三七，是五加科人参属植物，具有丰富的药用价值。
三七皂苷是三七的主要活性成分，具有抗炎、镇痛、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，三七皂苷含量的测定对于评价三七质量具有重要意义。
本文主要对三七皂苷含量的测定方法及其标准进行研究。
一、三七皂苷含量的测定方法1. 液相色谱法（HPLC）液相色谱法是目前最常用的三七皂苷含量测定方法。
该方法具有灵敏度高、分离效果好、重复性好等优点。
常用的检测器有紫外检测器（UV）和蒸发光散射检测器（ELSD）。
根据三七皂苷的化学性质，可以选择适当的色谱柱和流动相进行分离和检测。
2. 薄层色谱法（TLC）薄层色谱法是一种常用的定性分析方法，也可以用于三七皂苷含量的初步测定。
该方法操作简单，但灵敏度和分离效果相对较低。
常用的显色剂有碘化铋钾、香草醛-硫酸等。
3. 毛细管电泳法（HPCE）毛细管电泳法是一种新型的分离分析方法，具有分离效果好、操作简单、运行成本低等优点。
该方法可以用于三七皂苷组分的分离和含量测定，但目前仍处于研究阶段。
二、三七皂苷含量标准三七皂苷含量标准是评价三七质量的重要依据。
目前，国内外尚无统一的三七皂苷含量标准。
不同国家和地区根据当地的气候、土壤、生长条件等因素，制定了相应的质量标准。
例如，中国药典规定三七中人参皂苷Rb1、Rg1和Re的含量分别不低于0.8%、0.5%和0.3%。
三、三七皂苷含量标准的影响因素1. 品种差异：不同品种的三七，其皂苷含量存在显著差异。
例如，云南三七的皂苷含量通常高于云南三七。
因此，在制定三七皂苷含量标准时，需要考虑到品种的差异。
2. 生长环境：生长环境对三七皂苷含量也有显著影响。
例如，土壤肥力、光照时间、降水量等因素都会影响三七的生长和皂苷含量。
因此，在制定三七皂苷含量标准时，需要考虑到生长环境的差异。
3. 采收时间：三七的生长周期较长，不同时间段采收的三七，其皂苷含量存在显著差异。
一般来说，种植后2-3年的三七，其皂苷含量高。
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作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。
3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进冯 亮,蒋学华3,叶利民(四川大学华西药学院,四川成都610041)摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。
方法 T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)～15min (45∶55);流速1.5ml ・min -1;测定波长200nm 。
结果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。
结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。
其准确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。
关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927文献标识码:A文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponionsFE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming(West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China )Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ・min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC.K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927Document code :AArticle I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。
其中三七总皂苷(Panax noto 2ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化淤的功效。
三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。
其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。
对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。
而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成分的含量。
为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。
1 实验部分1.1 仪器与试药LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μm ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。
Rb 1、Rg 1和R 1对照品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。
1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精华西药学杂志W C J ・P S 2006,21(2):187～189 密称定后置25ml 量瓶中,加甲醇溶解定容,摇匀。
用干燥滤纸滤过,弃初滤液,精密量取续滤液2ml ,置10ml 量瓶中,加甲醇定容,摇匀,作为供试品溶液。
另取经过60℃真空干燥3h 的对照品Rb 13mg 、Rg 13mg 和R 11mg ,精密称定后置同一25ml 量瓶中,加甲醇溶解定容,摇匀,作为对照品溶液。
吸取供试品溶液2μl 、对照品溶液2、4μl ,分别交叉点于同一薄层板上(使用前105℃活化约30min ),以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层液为展开剂;27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂;l05℃烘至斑点清晰,取出放冷至室温。
测定波长λs =535nm ,λR =460nm ,SX =4,反射式锯齿扫描,灵敏度中。
取峰面积,采用外标法分别计算样品中Rb 1、Rg 1和R 1的含量。
1.2.2 线性范围的考察 分别取3种对照品适量,精密称定后置1ml 量瓶中,加甲醇溶解,定容;分别精密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μl 点于同一薄层板上。
按“1.2.1”项下方法展开,显色,测定峰面积。
将峰面积对点样量进行线性回归。
回归方程分别为:A Rb1=2.097×103C +1.107×104(r =0.9914),点样量在2.30～36.80μg 范围内,线性关系良好;ARg1=6.549×103C +1.970×104(r =0.9921),点样量在1.25～20.00μg 范围内,线性关系良好;A R1=2.211×103C +1.130×104(r =0.9964),点样量在1.75～28.00μg 范围内,线性关系良好。
1.2.3 峰面积检测精密度 分别精密吸取3种对照品溶液2μl ,点于薄层板上,按“1.2.1”项下方法展开,显色,测定峰面积。
对同一待测斑点连续重复扫描测定5次。
峰面积的RSD 为1.04%～1.85%,表明峰面积检测精密度良好。
1.2.4 板内精密度 精密吸取3种对照品溶液,在同一块薄层板上点5个点,每次点样2μl 。
按“1.2.1”项下方法展开,显色,测定峰面积。
峰面积的RSD 为6.34%～7.30%。
RSD 值大于5%,可见板内精密度低,故需多取几个样品点样测定,并取平均值。
1.2.5 板间精密度 精密吸取3种对照品溶液,分别在5块薄层板上点样,每次点样2μl 。
按“1.2.1”项下方法展开,显色,测定峰面积。
峰面积的RSD 为9.54%～14.85%。
RSD 大于5%,可见板间精密度低,故在测定时必须保持色谱条件的稳定并使用随行对照。
1.2.6 方法精密度 精密称取三七总皂苷样品5份(每份约50mg ),按“1.2.1”项下方法制备供试品溶液。
展开,显色,测定每份样品中Rb 1、Rg 1和R 1的含量,其RSD 为7.74%～10.65%。
3种组份含量的RSD 均大于5%(n =5)。
表明方法精密度低。
1.2.7 显色稳定性考察 分别精密吸取3种对照品溶液2μl ,点于薄层板上。
按“1.2.1”项下方法展开,显色,对待测斑点于显色后0、1、2、3h 测定峰面积。
其RSD 为1.39%～4.20%。
表明三七总皂苷的3个主成分显色后的斑点在3h 内基本稳定。
1.2.8 回收率试验 精密称取已测定含量的样品9份,分别加入相应的对照品适量。