实验样品采集运输保存方法

1.R N A实验样品采集、保存方法

使用范围及样品量

类别：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 样本量：

样本样本量

1*107个

哺乳动物培养细胞样品（悬浮

细胞）

15cm2

哺乳动物培养细胞样品（贴壁

细胞）

植物组织样品100mg-1g，根据植物不同部位的组

织决定组织需要量，尽可能多些，但不必

超过1g

动物组织样品

新鲜组织样品

A. 使用RNAlater试剂

取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在10min内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在一下，然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。

4度孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入-20中保存，样品在-20不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。

B. 使用Trizol试剂

取新鲜组织（1min以内），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg 组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。

匀浆的裂解液4度短期保存（1month），-20或者-70度长期保存。

冻存组织

生物体死亡后尽快（10min以内）切取新鲜组织，并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。

细胞沉淀（1*107个）中加入1ml Trizol裂解液

反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全

-70保存

贴壁细胞

从培养容器中吸出并弃去培养液

培养瓶直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。

反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。

-70度保存。

植物组织样品

准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好。

立即投入液氮中保存。

2.血液类样品采集、保存方法

适用范围及样品量

全血/血细胞：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service

血清/血浆：Microarray Service；PCR Array& PCR Service

样本量

样本样本量

全血1-2ml （即每份样品2-4

管）

血浆1-2ml （即每份样品2-4

管）

血清1-2ml （即每份样品2-4

管）

在样品保存及转移过程中，应避免反复冻融样品

一般建议用新鲜的血液标本进行试验，如果标本已经保存较长时间，请先联系技术部门确认样本是否适合进行实验。

全血

采集好全血，转移至单独的冻存管中，按照每400-500ul/管分装。

短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。

血浆

使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g 离心10min，分离血浆和细胞组分（抗凝剂一定不能是肝素）

将采集好的血浆转移至单独的冻存管中，按照每400-500ul/管分装。

短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。

血清

使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清；

采血后轻轻倒转采血管混合4-5次，直立置于室温待血液完全凝固，1000g 离心10min，分离血清。

将采集好的血清转移至单独的冻存管，按照每400-500ul/管分装。

短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。

从全血中提取白细胞

抗凝血收集

取无菌的15ml离心管一只，首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁，使离心管壁完全接触到该溶液，而后在管底留下少许该溶液（200ul左右）收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。

全血白细胞分离（以3ml抗凝血为例说明）

向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血，而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖，温柔的颠倒混匀数下，不要剧烈震荡

将离心管置于室温放置10min

将离心管以2500g 离心5min

弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色斑块细胞

弃去上清后在管底出现可见的白色斑块，此斑块为富集的白细胞。如果裂解不完全加入1mlPBS缓冲液重悬，然后重复第一步

充分裂解后，加入1mlPBS缓冲液清洗一次 2500g离心5min

弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的80%以上，而后可加入适量的Trizol，用移液枪充分吹打，混匀，直至出现清亮不粘稠的液体。

而后可以将以上的Trizol试剂存在生物冰（0-4度）寄送，或者直接干冰寄送。

实验样品采集、保存方法

适用范围及样品量

适用范围：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Service

样品量

样本样本量

组织50-100mg

悬浮细胞

约1*107个细胞，低速离心收集，弃去培养液；

加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中；

低速离心沉淀细胞，弃去PBS；

放入-70度冰箱保存。

对于ChIP-chip实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品

取107个悬浮细胞低速离心，用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中；

加入270ul 37%的甲醛，轻轻混匀，室温孵育10min；该步骤最好在通风橱完成

加入1ml 的甘氨酸，轻轻混匀，室温孵育5min，中和甲醛；

2000g离心5min，弃上清，用预冷的 PBS/EDTA 洗细胞两遍

2000g 离心5min，弃上清；