实验样品采集运输保存方法
实验样品采集运输保存方法

实验样品采集运输保存方法1. RNA实验样品采集、保存方法1.1 使用范围及样品量类别:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service样本量:样本样本量动物组织样品50-100mg哺乳动物培养细胞样品(悬浮细胞)1*107个哺乳动物培养细胞样品(贴壁细胞)15cm2植物组织样品100mg-1g,根据植物不同部位的组织决定组织需要量,尽可能多些,但不必超过1g1.2 动物组织样品1.2.1 新鲜组织样品A. 使用RNAlater试剂取新鲜组织(注:动物死亡后尽快在10min内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,所用组织必须切至厚度在0.5cm一下,然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管(或冻存管)中。
4度孵育过夜,此时样品管需要横臵以便组织块充分接触到RNAlater,然后转入-20中保存,样品在-20不会冻结,但溶液中可能会有一些晶体出现,这并不影响后续的RNA抽提。
B. 使用Trizol试剂取新鲜组织(1min以内),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,最好冰上进行操作。
匀浆的裂解液4度短期保存(1month),-20或者-70度长期保存。
1.2.2 冻存组织生物体死亡后尽快(10min以内)切取新鲜组织,并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块;培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞,弃去上清液。
细胞沉淀(1*107个)中加入1ml Trizol裂解液反复吸打几次后,目视可见细胞层溶液完全-70保存1.3 贴壁细胞从培养容器中吸出并弃去培养液培养瓶直接加入Trizol试剂,Trizol用量与细胞贴壁面积有关,15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。
反复吸打几次后,目视可见细胞层溶解完全。
-70度保存。
1.4 植物组织样品准确取得所需新鲜组织后,如有必要可用PBS清洗干净,将所用组织切碎,装入冻存管中或者用锡箔包裹好。
现场样品采集、保存与运输PPT课件( 28页)

(6)脑脊液
无菌条件下由腰椎穿刺抽取3-5ml,放于无菌试管。 注意:用于细菌培养时标本采集后应立即送检,用于病毒培养时在4-
8C最多可维持48h,否则在-70C保存。
2、用于病原体抗体检测的标本(血液和脑脊液)
血清标本:将10ml静脉血移入无抗凝剂的无菌螺口管,室温静 置30min使之凝集,然后置4-8C至少1-2h,离心收集血清;脑 脊液的采集方法同前所述,一般于出现神经症状时采集。
悲心,饶益众生为他人。
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14、梦想总是跑在我的前面。努力追寻它们,为了那一瞬间的同步,这就是动人的生命奇迹。
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15、懒惰不会让你一下子跌倒,但会在不知不觉中减少你的收获;勤奋也不会让你一夜成功,但会在不知不觉中积累你的成果。人生需要挑战,更需要坚持和勤奋!
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16、人生在世:可以缺钱,但不能缺德;可以失言,但不能失信;可以倒下,但不能跪下;可以求名,但不能盗名;可以低落,但不能堕落;可以放松,但不能放纵;可以虚荣,
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11、人生的某些障碍,你是逃不掉的。与其费尽周折绕过去,不如勇敢地攀登,或许这会铸就你人生的高点。
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12、有些压力总是得自己扛过去,说出来就成了充满负能量的抱怨。寻求安慰也无济于事,还徒增了别人的烦恼。
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13、认识到我们的所见所闻都是假象,认识到此生都是虚幻,我们才能真正认识到佛法的真相。钱多了会压死你,你承受得了吗?带,带不走,放,放不下。时时刻刻发
3、水样采集(饮用水)
类型:水源水、出厂水和管网水的采集 要求:同一水源、同一时间采集几类检测指
标水样时,应分类采集、分类保存 注意:采集测定溶解氧、生化需氧量和有机
物的水样时,应将水样注满容器,上 部不留空间,并采用水封
关于血培养标本运输和保存中的注意事项

关于血培养标本运输和保存中的注意事项
血培养标本是常见的临床检查物品,正确的保存和运输对于检验
结果至关重要。
以下是关于血培养标本运输和保存的注意事项:
1. 标本应该尽快送达检验实验室,并避免长时间存放。
2. 运输途中应对样品容器进行防护,以避免破损或渗漏。
3. 运输途中应避免样品温度过高或过低。
一般情况下,应该将样品存
放在室温下运输,避免日晒或受热。
4. 标本保存前应尽早进行采集,并注意采集方法、时间和容器的卫生
清洁。
5. 标本在保存前应先进行适当的标识,以避免混淆。
6. 标本保存期应当根据所需检验项目而定,一般来说,常规血培养保
存时间为7天,而病原菌检测则需要在24小时内完成。
7. 标本保存应在符合相关规定的条件下进行,如避光、密封、冷藏等。
总之,对于血培养样品的运输和保存,我们需要注意适当的采集
方法、标识、保存时间和条件,以保证检验结果的准确和可靠。
样品采集保存和运输

基因芯片样品的采集、保存和运输基因芯片实验、microRNA芯片实验、PCR芯片实验和实时定量PCR实验的样品准备一、动物组织样品保存与运输(每张芯片需50-100mg组织)1、新鲜组织样品的保存与运输A、使用RNA later试剂→取新鲜组织(注:生物体死亡后尽快在10分钟内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,所用组织必须切至厚度在0.5 cm以下(长宽不限),然后放入装有5倍体积RNA later的离心管(或冻存管)中。
→4℃孵育过夜,此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNA later,然后转入- 20℃中保存。
样品在- 20℃不会冻结,但是溶液中可能有一些晶体出现,这并不影响后续的RNA抽提。
冻存样品也可以反复冻溶,其RNA含量和完整性不受影响。
→RNAlater处理的标本可用常规冰袋4℃低温运输(无需使用干冰- 70℃运输)。
B、使用Trizol试剂Trizol试剂可抑制RNA酶活性,破坏细胞膜结构以裂解细胞释放出RNA。
→取新鲜组织(注:生物体死亡后1分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50~100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,操作最好在冰上进行。
→匀浆的裂解液4℃短期保存(1个月),-20度或- 70℃长期保存。
干冰运输,短期(5天以内)冷藏(4℃)运输亦可。
2、冻存组织的保存与运输生物体死亡后尽快(最好在10分钟内)切取新鲜组织,以PBS或生理盐水清洗干净切为小块,立刻放入液氮中冷冻2-3小时后可转入-70℃冰箱保存或着一直保存在液氮中。
冻存组织可放入干冰中直接运输,或者以Trizol 4℃下匀浆:冻存的组织块以液氮研磨后加Trizol或直接加Trizol以电动匀浆器匀浆,匀浆的裂解液干冰运输或短期(5天以内)冷藏(4℃)运输。
二、哺乳动物培养细胞样品采集、保存与运输——使用Trizol试剂(不建议使用RNAlater)1、悬浮细胞→悬浮细胞培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞,弃去上清液。
样品管理规范

样品管理规范一、引言样品管理是保证科学研究和实验室工作质量的重要环节。
本文旨在制定一套样品管理规范,确保样品的采集、存储、运输和处理等环节符合科学规范和质量要求,以保证实验结果的准确性和可靠性。
二、样品采集1. 样品采集前,必须对采样现场进行充分调查和评估,确保采样点的选择准确合理。
2. 采集样品前,必须佩戴适当的个人防护装备,如手套、口罩等。
3. 采样器具必须事先消毒,并保持干净。
4. 样品采集必须按照规定的采样方法和采样量进行,避免污染和损坏样品。
5. 采集样品后,必须及时标识和记录样品的相关信息,如采样时间、地点、采样人员等。
三、样品存储1. 样品存储前,必须对样品进行分类和编号,确保样品的追踪和管理。
2. 样品存储容器必须干净、密封,能够保持样品的原样性。
3. 样品存储温度必须符合样品特性和要求,避免样品的变质和降解。
4. 存储样品的库房必须保持干燥、阴凉、通风,避免阳光直射和湿度过高。
5. 存储样品必须定期检查和维护,确保样品的完整性和可用性。
四、样品运输1. 样品运输前,必须对样品进行适当的包装和固定,避免样品的破损和泄漏。
2. 样品运输过程中,必须避免样品与其他物质的接触和污染。
3. 样品运输车辆必须符合运输要求,保持车内的温度和湿度稳定。
4. 样品运输过程中,必须及时记录样品的运输信息,如起始地、目的地、运输时间等。
五、样品处理1. 样品处理前,必须按照实验要求和方法进行样品的预处理,如样品的分离、提取等。
2. 样品处理过程中,必须遵守实验室的操作规程和安全要求,确保实验人员的安全和实验结果的准确性。
3. 样品处理后,必须及时记录样品的处理方法和结果,以备后续分析和评估。
六、样品处置1. 样品处置前,必须对样品的危险性和环境影响进行评估,确保合理、安全地处理样品。
2. 样品处置必须符合相关法律法规和环境保护要求,避免对环境和人体造成损害。
3. 样品处置过程中,必须记录样品的处置方法和结果,以备查证和追溯。
医院实验室强传染性样本的采集、运输、处理与保存制度

7强传染性样本的采集、运输、处理与保存制度7.1目的为有效预防医务人员在工作中发生职业暴露感染,防止实验室污染、交叉污染和周围环境污染,特制定本指导原则。
7.2定义强传染性样本是指含有一类、二类高致病菌的微生物标本,如:含SARS病毒、霍乱弧菌、艾滋病毒、炭疽芽孢杆菌、结核杆菌等具有强致病性病原微生物的样本。
7.3适用范围本管理细则适用于检验科各专业组。
7.4具体制度7.4.1标本采集7.4.1.1为避免交叉污染,检验人员原则上不直接进入病区采集标本,如必须进入时,应穿隔离衣和防护服,戴口罩(12-18层或N95口罩)、双层帽、护目镜、面罩、戴三层手套、靴子。
7.4.1.2详细登记有关病例的姓名、性别、年龄、家庭住址、联系电话等基本信息以及标本采集日期。
7.4.1.3采集的标本放入带盖的容器内,盖紧盖子装入标本运送箱,加注特别标识,密封专人送检。
采集标本时不能污染容器外部。
7.4.2标本运输将密封包装好的,放在专门运输用双层标本箱里,加盖,由两人运送。
运送过程严防破碎和外溢。
送入检验科由双人签收。
7.4.3标本前处理标本接种、血清分离等在生物安全柜内进行。
使用专用的离心机,离心时使用密闭的离心机转头或密闭样品杯,离心停止10-30分钟后取出。
7.4.4标本检测标本应在专用区由专人进行检测,以便标本、仪器、环境集中消毒和处理。
尽量避免标本分散到多个实验室。
7.4.5标本检测后处理废弃标本放入带盖套有黄色塑料口袋的专用污物桶内,集中高压灭菌后送到特殊垃圾处进行无害化处理。
所有检测标本后废液都用2500mg/L有效氯消毒液浸泡4小时以上,或直接高压灭菌,再排入医院污水站消毒处理。
7.4.6标本的保存7.4.6.1疑似强致病菌标本保存,应专室专柜,两人管理,每天查看并记录。
明确有高致病菌标本,P2实验室不得保存。
7.4.6.2疑似HIV阳性标本送到东阳市疾控中心确认,先通知保健科,标本应三层包装,专人送到东阳市疾控中心,标本双人交接并签字。
样品采样的保存方法
样品采样的保存方法引言在科学研究、实验室工作等领域中,样品采样是一个非常重要的环节。
正确的样品采样及其保存方法可以确保样品的完整性和可靠性,从而保证实验结果的准确性。
本文将介绍一些常用的样品采样的保存方法,并说明其重要性和操作注意事项。
样品采样的重要性样品采样是一个关键的环节,对于后续实验的结果具有直接影响。
正确的样品采样可以尽可能减少误差,保证实验数据的可靠性和真实性。
样品采样的不当可能导致样品污染、氧化、变质等问题,影响实验结果的准确性。
因此,科研工作者在进行样品采样时需要遵循一定的规范和方法。
样品采样的保存方法1. 现场采样现场采样是指在样品来源地点进行采样的方法。
具体操作步骤如下:- 准备采样设备:根据不同的样品类型和要求,选择合适的采样容器(如玻璃瓶、塑料袋等)、采样工具、标签等。
- 现场处理:根据采样目的和样品特性,进行现场处理。
例如,对于水样品,可以在采样前用滤膜过滤或添加适量的抑制剂。
- 采样过程:进行样品采集,并严格控制样品的接触和受到外界污染的可能性。
避免样品接触到空气、降落灰尘等污染物。
- 样品封存:将采样容器密封,并在标签上清晰地注明样品的采样时间、地点、采样人员等信息。
2. 传统保存方法传统保存方法主要适用于一些较为稳定的样品,如不易变质的固体样品。
具体操作如下:- 清洁容器:使用干净、无残留物的容器进行样品储存。
对于液体样品,可以选择玻璃瓶或塑料瓶;对于固体样品,可以选择密封塑料袋或玻璃瓶。
- 干燥保存:将样品保存在阴凉、干燥的环境中,避免暴露在阳光直射下。
对于一些易吸湿的样品,可以在容器中放置干燥剂。
- 标签记录:每个样品容器都需要贴上清晰的标签,标明样品名称、采样时间、保存人员等信息。
3. 低温保存方法低温保存方法适用于一些需要冷藏或冷冻的样品,如食品、血液等。
具体操作如下:- 冷藏保存:将样品保存在2-8摄氏度的冰箱中。
保持冷藏设备的干净和温度稳定。
- 冰冻保存:对于需要长时间保存或需要快速冷冻的样品,可以使用-20摄氏度或更低的冰箱或冰柜进行冷冻保存。
早期诊断样本的采集运输保存
早期诊断样本的采集运输保存
背景
早期诊断是许多疾病治疗成功的关键,相较于晚期诊断,早期诊断通常能提高
生存率和治疗效果,减轻病人的负担。
现代医学在早期诊断方面做出了许多突破,其中一个关键环节就是样本的采集、运输和保存。
样本的采集
样本的采集一般是由专业的医护人员进行的,样本种类较多,常见的包括血液、组织、尿液、粪便等。
在采集样本时,要做好采集部位的清洁和消毒,避免污染和交叉感染。
另外,不同的样本采集方法也有些许不同。
比如,血液样本通常通过静脉采集,组织样本则需要进行手术切取。
样本的运输
样本采集后,需要进行运输以便进行检测。
样本的运输需要保证其稳定性和准
确性,避免样本在运输过程中出现问题导致检测结果失准。
目前医院一般都有专门的样本运输车,同时也会有规范的运输流程和标识系统。
在运输过程中,还需要注意样本的防护,避免在运输过程中被污染或者破损。
样本的保存
样本的保存也是非常重要的一环。
不同的样本需要不同的保存方式,如干血片
可以通过防潮、防曝光等方式保存;组织样本可以通过固定和包埋等方式进行保存。
在样本保存过程中,要注意存放温度和采用合适的保存方法,避免样本质量变化或者损坏。
在早期诊断中,样本的采集、运输和保存环节非常关键,一旦出现问题就可能
会导致检测结果失准。
因此,医护人员需要严格按照规范进行操作,保证样本的质量和整个检测过程的准确性。
同时,医院和实验室也需要提供合适的设施和操作规范,保证样本的安全性和可靠性。
样品采集运输保存的管理
病原微生物标本采集中的要求
7、选择合适的采样液:根据检测目的和项目 利于病原或抗体稳定,采样对象易于接 受 、成本低等,但要防止采样液过多。 8、采样人员经过必要的专业培训,对专业熟 悉。 9、样本标识明显、来源明确,信息齐全,并 附送检单,两者标识一致。十分重要!
病原微生物标本采集中的要求
(二)、细菌性疾病的样本采集原则 基本与病毒性疾病一致或相同。但两者又有所不同。表现在: 1、病原学标本:细菌样本怕冷怕热 病毒怕热不怕冷 2、采样液:细菌保护液 病毒细胞培养液,生理盐水等 3、细菌分离样本要求在使用抗生素之前采集。否则这种标本在分离培 养时要加药物拮抗剂,例如使用青霉素的要加青霉素酶,磺胺药的 加对氨苯甲酸 。 4、病毒比细菌更容易失活,保存条件要求更高。 5、病毒样本中组织标本分布相对多一些。而细菌在体液中 分布相对多一些?
病原微生物标本采集中的要求
5、要做好采样器具及剩余动物组织或样本的消毒 等无害化处理,以及对工作场所的消毒灭菌工作。 6、相关人员应尽可能接种相关的疫苗,进行免疫 保护。 7、对采样及相关人员要加强健康监护,一旦出现 身体不适或发热等情况时,要及时就诊和治疗。 8、一旦发生意外事故或暴露,要及时采取相应措 施,并立即向负责人报告。
病原微生物标本采集中的要求
五)、样本采集的安全要求
样本采集过程中,相关人员必须采取相应的个人安 全防护措施: 1、采样人员熟悉采样工作,并能胜任。 2、采样人员要根据采集样本的可能危险度,进行个人防 护,特别是采集疑似高致病性病原微生物样本时,要做好 安全防护工作,按要求穿戴防护用品。 3、采集样本时,尽量避免使用尖锐、锋利、易碎、牢固 不够的器具 4、在采集野外动物组织样本时,要注意采取防虫媒顶咬 措施,如穿高帮胶靴等。
样品采集、运送和保存
二、样品的采集和处理
艾滋病检测最常用的样品:血液,包括血清、
血浆和全血。
唾液或尿液有时也可作为测试样品。
1. 血清样品采集:
用一次性注射器(或真空采血管) 抽出一定量静脉血,一般为5mL,放入 一次性塑料试管,室温下自然放置1-2 小时,待血液凝固和血块收缩后再用 3000rpm离心15分钟,吸出血清备用。
首选EDTA。 肝素是PCR反应的一个潜在的抑制剂,会使核 酸检测出现假阴性结果。且HIV-RNA降解的速 率显著高于EDTA和枸橼酸钠处理的血浆 。 采集样品应避免微生物和核酸污染。
病毒载量测定对样品的要求
血清和血浆的测定结果具有高度的相关性。 血清的检测结果大约是血浆的50%( 3080% )。因为部分HIV病毒颗粒被包裹在纤 维蛋白网络中。 首选血浆标本,血清标本也可。但每位病人 每次检测使用的标本类型应始终保持一致。
样品管应为螺旋口的塑料管(1.5ml),检 查有无破损,将螺旋盖旋紧,防止样品渗漏。 血清样品量至少应大于600μ l 。 禁止使用扳盖式样品管。 建议第一层:螺旋口的塑料管(1.5ml) 第二层:血清盒。5份或5份以下可以使 用一次性乳胶手套(每个手指放一个) 第三层:冰瓶(内置冰块) 禁止第二层使用封口塑料袋
普遍性防护原则(WHO推荐)
2.对所有器具严格消毒 为保证消毒效果,器具必须用热水和清洁剂洗干净 后再消毒,所有符合消毒规范的消毒程序都足以杀 灭HIV、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒。 常用的灭菌方法足以使HIV灭活。常用的两种灭菌 方法是煮沸和化学灭菌。煮沸是有效的灭菌方法, 已清洗过的器具应煮沸20分钟。 医务人员的手常常带有病原微生物,这也是造成病 原体在病人中传播和主要原因之一。医务人员手上 沾着的体液,可以很容易地用肥皂和水清除干净。
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放入-70度冰箱保存。
贴壁细胞
约1*107个贴壁细胞,胰酶消化;
加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体;
加入2-5 ml PBS 悬浮细胞,转入小离心管中;
低速离心沉淀细胞,弃去PBS
放入-70度冰箱保存。
组织
采集新鲜组织(生物体死亡后10min内取材并保存好)
组织块以PBS或生理盐水清洗干净,切为小块
血清
使用凝血管采集全血,采血后两小时内分离血清;
采血后轻轻倒转采血管混合4-5次,直立置于室温待血液完全凝固,1000g离心10min,分离血清。
将采集好的血清转移至单独的冻存管,按照每400-500ul/管分装。
短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。
从全血中提取白细胞
抗凝血收集
15cm2
植物组织样品
100mg-1g,根据植物不同部位的组织决定组织需要量,尽可能多些,但不必超过1g
动物组织样品
新鲜组织样品
A. 使用RNAlater试剂
取新鲜组织(注:动物死亡后尽快在10min内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,所用组织必须切至厚度在一下,然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管(或冻存管)中。
将离心管置于室温放置10min
将离心管以2500g 离心5min
弃上清,尽可能将上清吸净,勿吸到管底白色斑块细胞
弃去上清后在管底出现可见的白色斑块,此斑块为富集的白细胞。如果裂解不完全加入1mlPBS缓冲液重悬,然后重复第一步
充分裂解后,加入1mlPBS缓冲液清洗一次 2500g离心5min
弃上清,可获得血液样品中全部白细胞的80%以上,而后可加入适量的Trizol,用移液枪充分吹打,混匀,直至出现清亮不粘稠的液体。
取无菌的15ml离心管一只,首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁,使离心管壁完全接触到该溶液,而后在管底留下少许该溶液(200ul左右)收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。
全血白细胞分离(以3ml抗凝血为例说明)
向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血,而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖,温柔的颠倒混匀数下,不要剧烈震荡
样本
样本量
全血
1-2ml (即每份样品2-4管)
血浆
1-2ml (即每份样品2-4管)
血清
1-2ml (即每份样品2-4管)
在样品保存及转移过程中,应避免反复冻融样品
一般建议用新鲜的血液标本进行试验,如果标本已经保存较长时间,请先联系技术部门确认样本是否适合进行实验。
全血
采集好全血,转移至单独的冻存管中,按照每400-500ul/管分装。
低速离心沉淀细胞,弃去PBS
放入-70度冰箱保存。
对于ChIP-chip实验为了获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品
组织
采集新鲜组织(生物体死亡后10min内取材并保存好)
组织块以PBS或生理盐水清洗干净,切为小块
放入液氮或-70度冰箱保存
4.蛋白实验样品采集、保存方法
适用范围及样品量
而后可以将以上的Trizol试剂存在生物冰(0-4度)寄送,或者直接干冰寄送。
实验样品采集、保存方法
适用范围及样品量
适用范围:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Service
样品量
样本
样本量
细胞
1*107个
组织
50-100mg
悬浮细胞
约1*107个细胞,低速离心收集,弃去培养液;
适用范围:Microarray Service Other Service
样本量:
样本
样本量
血清和血浆
100-200ul
细胞
107个
组织
50-100mg
血清和血浆
采集新鲜血液,分离血清或血浆,放入-20度或者-70度冰箱保存
悬浮细胞
约1*107个细胞,低速离心收集,弃去培养液;
加入2-5ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中;
立即投入液氮中保存。
2.血液类样品采集、保存方法
适用范围及样品量
全血/血细胞:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service
血清/血浆:Microarray Service;PCR Array& PCR Service
样本量
短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。
血浆
使用抗凝管采集全血,并尽快进行血浆分离:1000g 离心10min,分离血浆和细胞组分(抗凝剂一定不能是肝素)
将采集好的血浆转移至单独的冻存管中,按照每400-500ul/管分装。
短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。
常温运输
本市内细胞样品也可以直接常温运送,运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口,然而某些实验条件中包含时间限制,建议冻存后运输。
样品运输注意事项
打包好的样品交于快递公司,不提及干冰等字样
快递寄出,将快递单号告知销售,以便跟踪快递进程
务必在周日、周一、周二寄出快递,以免到达上海的时间是周末,公司无法查收。
匀浆的裂解液4度短期保存(1month),-20或者-70度长期保存。
冻存组织
生物体死亡后尽快(10min以内)切取新鲜组织,并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块;培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞,弃去上清液。
细胞沉淀(1*107个)中加入1ml Trizol裂解液
反复吸打几次后,目视可见细胞层溶液完全
放入液氮或-70度冰箱保存
5. 样品保存和运输
注意事项
将收集的各类样品用冻存管或离心管装好,保存在低温冰箱或者液氮中。
所使用的冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌处理,装好样品后管口需要以封口膜封好。
注意已保存的样品不要反复冻融。
干冰运输
根据干冰量准备大小适当的泡沫盒,在其中放入干冰(需要10公斤,至少为8公斤)和标本(用塑料袋或者塑胶手套装好),盒子内的空隙用旧报纸塞满,以防干冰挥发后有液体流出。
加入1ml 的甘氨酸,轻轻混匀,室温孵育5min,中和甲醛;
2000g离心5min,弃上清,用预冷的 PBS/EDTA 洗细胞两遍
2000g 离心5min,弃上清;
收集到的样品-80度冻存。
贴壁细胞
约1*107个贴壁细胞,胰酶消化;
加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体;
加入2-5 ml PBS 悬浮细胞,转入小离心管中;
-70保存瓶直接加入Trizol试剂,Trizol用量与细胞贴壁面积有关,15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。
反复吸打几次后,目视可见细胞层溶解完全。
-70度保存。
植物组织样品
准确取得所需新鲜组织后,如有必要可用PBS清洗干净,将所用组织切碎,装入冻存管中或者用锡箔包裹好。
泡沫盒须选择较厚的,以免在运输过程中破碎导致样品丢失,分别用封箱带密封。最后在外面套上一个纸盒子,也要用胶带密封。
冰袋运输
保存在RNAlater中的组织样本;
保存于Trizol中的细胞样本或经过匀浆的组织样本在短期(5day)可使用冰袋运输。
液氮运输
冻存组织需要干冰或液氮运输。液氮无法快递,适合市内运输。
1. RNA实验样品采集、保存方法
使用范围及样品量
类别:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service
样本量:
样本
样本量
动物组织样品
50-100mg
哺乳动物培养细胞样品(悬浮细胞)
1*107个
哺乳动物培养细胞样品(贴壁细胞)
加入2-5ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中;
低速离心沉淀细胞,弃去PBS;
放入-70度冰箱保存。
对于ChIP-chip实验为了获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品
取107个悬浮细胞低速离心,用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中;
加入270ul 37%的甲醛,轻轻混匀,室温孵育10min;该步骤最好在通风橱完成
4度孵育过夜,此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater,然后转入-20中保存,样品在-20不会冻结,但溶液中可能会有一些晶体出现,这并不影响后续的RNA抽提。
B. 使用Trizol试剂
取新鲜组织(1min以内),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,最好冰上进行操作。