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羊的胚胎移植

一、胚胎移植概述

二、胚胎移植原理

三、胚胎移植技术程序

一、胚胎移植概述

1.胚胎移植的发展历史

2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用

3.胚胎移植目前存在的问题

4.影响胚胎移植的主要因素

5.胚胎移植的经济效益

6.胚胎移植的发展前景

1.1国外胚胎移植发展史

George是世界上第一个提出动物胚胎移植的人。1890年4月，Walter Heape用兔作为实验动物，成功地获得了世界上第一个动物胚胎移植后代。Heape兔胚胎移植的成功，极大的影响着繁殖生物学和畜牧业的发展。1900年，Heape的杰出接班人FHA Marshall和John Hammond总结了他的主要工作内容，提出了哺乳动物性季节的概念，也就是现在所说的发情周期。1911-1913年，奥地利维也纳的Biedl 等进行了兔的胚胎移植实验，但由于战争，直到1922年才报道了其研究结果。虽然他们做了70多个实验，但由于把输卵管的胚胎移植到子宫，结果只有一只受体兔妊娠，这充分证明了胚胎和受体的同步性是非常重要的。1932年和1933年，Warwick,Berry和Horlache第

一次把胚胎移植技术用在绵羊和山羊上，Dr. Berry也因此成为了第一个国际胚胎移植协会先驱奖的获得者。1948年，张明觉用超数排卵技术从2只母兔获得88枚受精卵，给7只受体母兔移植，成功地产出76只小兔，这次试验的成功具有划时代的意义。1950年12月19日，33岁的美国人Elwyn Willed成功地获得了世界上第一头胚胎移植牛犊。60年代初，全部采用的是手术回收胚胎和移植，1964年Mutter 等和1965年Sugie相继报道了非手术移植胚胎获得成功。70年代中期，牛的非手术移植完全取代了手术移植. 1974年，成立了国际胚胎移植协会(IETS )，随后相继成立了美国胚胎移植协会、加拿大胚胎移植协会、欧洲胚胎移植协会

1.2 国内胚胎移植发展史

我国的胚胎移植研究起步较晚，于20世纪70年代初才开始。1973年首先在家兔上获得成功。1974年，中科院遗传所在绵羊胚胎移植上取得成功。1976年郭志勤、谭丽玲等在家兔胚胎和绵羊胚胎低温(100C)保持1天和10天后移植成功。手术法和非手术法牛胚胎移植在1978年和1980年也相继成功。1980年中国农业科学院畜牧所在绵羊胚胎超低温保存后移植产羔。20世纪80年代，胚胎移植进入了实验阶段，掀起了全国的研究高潮，20几个省近30个单位相继开展了胚胎移植研究工作。20世纪90年代初期，我国的胚胎移植工作逐渐进入了生产应用初始阶段。生产应用比较好的地区主要是内蒙古、新疆和黑龙江、北京

1.3 羊的胚胎移植发展历史

羊胚胎移植的商业化应用已有近40年的历史。在国际上，胚胎移植以牛的比例最大，其次为绵羊和山羊，其它家畜和动物胚胎移植(猪、鹿、马等)的研究相对较少，但近些年来也逐渐成为一个比较热的研究方向。在国内，羊的胚胎移植起步较发达国家要晚一些，近十几年来，才逐渐推广开来，前几年由于波尔山羊的大量引进而使山羊的胚胎移植研究也相对多了起来。全国二十多个省进行了波尔山羊的快繁技术项目的实施。2003年我国共生产波尔山羊、良种肉用绵羊胚胎40000枚左右，移植受体30000只以上。

2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用

（1）超数排卵技术能充分利用优秀种母畜的繁殖潜力，几十倍或成百倍地提高母畜的繁殖效率和后代的增长速度。

（2）克隆技术可实现同卵双生、同卵多生动物或无性繁殖后代，快速增加良种动物的数量，或为育种提供材料。

（3）可使优秀种畜遗传资源得到充分利用，加速育种速度和畜牧良种化进程。

(4）能用胚胎代替活畜运输，可在世界范围内实现品种交流，节约运输费用，减少疫病传播。

（5）用于建立胚胎库或基因库，使畜禽良种、珍稀物种(基因)能长期保存，对利用、保存优良基因或拯救濒危灭绝动物具有重大意义。

（6）可用于治疗动物和人类的不育。如：体外受精技术，特别

是显微受精技术。

3.胚胎移植目前存在的问题

（1）胚胎来源限制了NT的效率和实际应用

（2）缺乏熟练操作技术人员及我国优秀畜种比例低

（3）ET费用高，人力和时间耗费大，条件严格制约了其推广应用

（4）胚胎冷冻保存任存在很多问题

（5）胚胎采集和移植主要采用手术法的畜禽易造成粘连，受体重复使用受限制

（6）超排效果不够稳定、移植成功率低、超排效果不够稳定4.影响胚胎移植的主要因素

（1）超排技术：超数排卵是胚胎移植的关键技术之一，可以为胚胎移植受体提供优质、丰富的胚源，保证优良母羊发挥最大的繁殖潜能。但影响超排的因素也很多，如超排使用的药物种类，来源，生产厂家，使用剂量，操作程序等

（2）移植胚胎的质量：胚胎质量的好坏是胚胎移植能否成功的关键因素。通过胚胎鉴定，要选择具有形态结构完整紧凑、轮廓清楚、呈球形、分裂球大小均匀、色调和透明度适中及无附着的细胞和液泡等特征的一级（A 级）、或二级（B 级）胚胎进行移植。

（3）供体、胚胎与受体的同期化程度：供、受体之间的子宫内膜要与胚胎的发育相同步，这是胚胎从体外培养环境到体内并发生妊娠必须具备的重要条件之一。这就要求供体与受体在发情时间上要同

期，或移植的胚胎日龄与受体发情时间是同步，一般供、受体发情同步差为24h以内最理想。同步差越小，越有利于胚胎的发育，移植成功率越大

（4）移植胚胎的数目：一般认为，妊娠率与移植高质量的胚胎数成正相关，移植1枚、2 枚和3 枚胚胎受体的妊娠率差异不显著，但产羔率却依次增加。也有研究报道，当移植胚胎数超过 6 枚时，妊娠率反而下降。据研究单侧移植: 2-3 枚效果最佳，进行大规模的胚胎移植时，还要考虑受体羊的体况、产羔时繁重的接羔任务及产后受体羊的哺乳能力等。

（5）操作技术：胚胎移植的每个操作环节在实际操作中都十分复杂，都直接影响胚胎移植的成败。尤其手术操作要求熟练、稳重、轻巧、速度适宜。向宫腔内注入移植液和胚胎时速度不能过快，否则胚胎会随移植液进入输卵管而发生异位妊娠；如果速度太慢，子宫、输卵管等暴露于空气时间过长，增加污染率，同时也增加了胚胎的损伤率。术者手、臂、手术器械等对子宫的强烈刺激，对输卵管进行强拉硬拽都会产生不良影响

（6）其它：受体本身的黄体发育与孕酮含量、解冻剂与脱防冻剂的类型、胚胎移植的季节、供体年龄及营养状况等因素都不同程度影响胚胎移植的成功

5.胚胎移植的经济效益

胚胎移植是一个技术过程复杂，各个环节环环相扣，任何一个不能出现失误的系统工程。影响胚胎移植成功率的因素很多，同时，其