基因工程试题库

二、填空或选择填空题1.给以下质粒载体pUC18/19划线处填上其中文含义。

2.在进行琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子从电场的（正极；负极）向极泳动，超螺环型的质粒分子比其开环构型泳动更（快；慢）。

3.观察琼脂糖凝胶中的DNA分子带，常常以染色后在光下观察其荧光。

4.碱性磷酸酶主要有和两种，作用于DNA分子将其5’磷酸基团水解除去。

5.反转录酶的酶学活性主要有；和三种。

6.琼脂糖凝胶常用的浓度范围在%—%之间，相应可以分离Kb— Kb的DNA分子。

7.Southern吸印（Southern blot）是指针对分子的杂交；Northern吸印是针对⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽分子的杂交。

8.通常质粒载体可以克隆Kb的DNA片断；λ插入型载体可以克隆Kb的DNA片段；λ替换型载体可以克隆Kb的DNA片段；Cosmid可以克隆Kb的DNA片断。

9.琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，要观察到DNA条带，应加入染色，它可以在⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽光照射下发射荧光。

10.在采用超速密度梯度分离纯化质粒DNA时，在溶液中加入，使得质粒的浮力密度（大、小、等）于基因组DNA的浮力密度。

11.DNA自动测序将Sanger的双脱氧末端终止法与技术结合起来，使DNA测序摆脱了对大量单链模版的依赖。

12.DNA化学自动合成反应进行的方向与DNA酶催化合成的反应方向（一致；不同），是从（5’3’；3’5’）。

13.与T-DNA转移起重要作用的是其两端的各bp的重复序列及位于Ti质粒上编码与T-DNA转移有关蛋白的基因，而与T-DNA上携带的基因关系不大。

14.从细菌中经小量制备的质粒分子经电泳分离后，同一种分子由于构型不同而常产生两条带纹，其中一条为构型，另一条为构型，电泳迁移率前者（大、小、等）于后者。

15.λ载体在完成重组连接后，通过包装蛋白的离体包装形成噬菌体颗粒。

在包装蛋白进行有效的包装时，要求DNA大小在Kb之间，而且两端有两个位点。

16.大肠杆菌质粒的复制起始于一复制的原点，用表示，其复制是（单向；双向）进行，大肠杆菌基因组DNA复制是（单向；双向）进行的。

17.通常的电泳条件下，琼脂糖凝胶可以有效分离Kb——Kb的分子，如果采用⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽电泳的方式，也可以分离更大的DNA片断。

18.DNA的自动合成目前主要采用法，自端至端方向进行。

19.根据质粒在宿主中的拷贝数，细菌质粒可分为质粒和质粒。

pUC质粒通过对复制原点进行突变，使其在宿主中的拷贝数大大提高，因此它属于质粒。

20.反转录酶可以以（RNA，ssDNA，dsDNA）和⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽（RNA，ssDNA，dsDNA）为模板合成DNA互补链，同样也需要引物。

21.植物基因工程常用的报告基因有：、、、⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽等。

22.构建基因文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-L/G]，说明文库的大小取决于；和从中分离某一克隆片断的期望概率。

23.大肠杆菌DNA聚合酶I具有：；和三种主要酶学活性。

而Klenow酶则失去了活性。

24.在进行分子克隆时，质粒载体构建的重组分子通过方法进入细胞中扩增；而λ噬菌体重组体通过方法进入细胞；粘粒载体重组分子通过方式进入细胞中扩增。

25.与真核生物所有染色体一样，维持YAC（酵母人工染色体）在酵母细胞中的稳定性，Y AC必须具有三个基本结构要素：分别是；和。

26.用冷的CaCl2处理对数生长期的大肠杆菌细胞，可诱导细胞进入称为态的生理状态进行遗传转化。

27.构建cDNA文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-1/n]，说明文库的大小取决于和从中分离某一克隆片断的期望概率。

三、问答题：1．在进行α-互补筛选重组转化菌时，为什么要采用∆M15突变的大肠杆菌作为转化受体菌？2．下图为pUC18质粒的结构简图，简述以pUC18为载体进行DNA片断克隆的全过程。

3．在细菌宿主中表达外源蛋白，为何强调对表达基因进行调控？利用乳糖操纵子是怎样对下游基因的表达进行控制的？4．以λgt10构建的cDNA文库在扩增时，会出现混浊和清亮两种形式的噬斑，试解释这一现象的原理。

5．细菌对噬菌体的限制和修饰现象在分子水平是如何发生的？有何生物学意义？6．简述PCR自动DNA测序的过程和原理。

7．要使一外源基因在大肠杆菌中表达出蛋白质产物，要经过哪些基因工程步骤？请逐步加以说明。

8．怎样检测转基因植物中外源基因的存在和表达情况？列举两种方法。

9．构建基因组文库时为什么要制备DNA随机片段？怎样制备DNA随机片段？10．简述利用根癌农杆菌进行植物遗传转化时的主要步骤。

11．你了解的基因工程的主要工具酶有哪些，请一一阐述其作用。

12．什么是融合蛋白？为什么基因工程发酵生产外源蛋白时常以融合蛋白的形式生产出目标蛋白前体？13．以λgt11构建cDNA文库，包装的噬菌体感染大肠杆菌后形成蓝色和无色的两种噬斑，试解释其原因。

14．进行DNA克隆时，外源DNA片段有哪些主要来源。

如果你完成了一个特殊蛋白的氨基酸序列测定，怎样从其序列出发分离其相应的基因。

15．Lac UV 5 突变体启动子不依赖CAP的正调控，其在基因工程中运用有何优势？16．简述PCR技术的原理和过程。

17．多种载体中都采用α-互补的方式筛选重组子，简述利用α-互补进行重组子筛选的过程和原理。

18．什么是表达型载体？为了方便进行克隆基因的表达以及表达产物的分离与纯化，在表达型载体上采用了那些设计？19．获得转基因植物可以采用哪些方法？选择其中一种方法详细说明其操作的过程。

20．以下是pBR322的结构图，如果利用Pst I限制性酶克隆一外源DNA片断，怎样进行这一重组过程？怎样选择重组的转化菌？21．说明Southern吸印（Southern blot）杂交的原理和方法。

22．如何从一个文库中筛选出携带目的基因的克隆？简述其过程。

23．如果DNA片断和载体间的粘性末端不能匹配，怎样实现这两种分子的重组连接？请提出至少两种方法。

24．经过PCR扩增获得了某一特定的DNA带，怎样利用T载体将其克隆下来？25．什么是转基因动物？试简要阐述两种获得转基因动物的方法？26．什么是cDNA文库？欲构建水稻花药cDNA文库，简述构建该cDNA文库的基本步骤。

27．根据基因工程法利用大肠杆菌表达外源蛋白药物的过程和特点，试设计基因工程生产胰岛素的过程？28．进行植物遗传转化主要有哪些常用方法？你认为哪种方法最为合理？为什么？29．什么是包涵体？当基因工程生产的蛋白质形成包涵体后应怎样进行下游的工作？30．怎样对一段给定序列的DNA 分子运用PCR 方法进行定点突变？31．大肠杆菌为什么能高效表达外源基因？32．大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？33．目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？34．在进行大肠杆菌表达外源蛋白质时，启动子为何需要具有可控性？35．IPTG 诱导P lac 启动子的分子机制是什么？36．在大肠杆菌中采用T7启动子表达外源基因产物时，为什么要选用大肠杆菌DE3作为表达菌株？37．Ti 质粒的主要分子生物学特征是什么？38．Ti 质粒诱导植物根部生瘤的机理是什么？39．什么是动物反应器？将动物乳腺作为生物反应器的理由是什么？四、综合思考题1． 今通过显微注射的方法获得了转基因羊若干，怎样对转基因羊进行分子检测？试根据你所掌握的基因工程、分子生物学等知识，提出实验方法对转入的外源基因在羊中的整合、基因的表达水平加以检测。

2． 你认为转基因生物会带来哪些潜在的危险性？对转基因生物进行安全性管理是否必要？3． 运用你所学习的基因工程知识，描述进行某一生物基因组计划应采取的具体实施步骤。

4． 限制性内切酶对DNA 进行酶切时，哪些因素会影响酶切反应的效果？如果你分离的DNA 酶切效果不佳，应该采取什么措施进行处理？5． 基因工程表达的蛋白易形成包涵体，而一些蛋白形成包涵体后的溶解与复性效率往往不高。

运用你掌握的基因工程知识，提出一些基因工程的措施，降低包涵体的形成。

6． 什么是密码子的偏好性？怎样纠正大肠杆菌对外源基因密码子的偏好性？7． 试设计一个实验对下段约2Kb 的DNA 进行定点突变，将位于分子中部的A-T 转换成G-C 。

五、选择题（单项选择，请在括号内填上相应的一个英文字母）1．根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 】Ａ： 基因诱变；Ｂ： 分子克隆；Ｃ： DNA 重组；Ｄ： 遗传工程；Ｅ： 基因无性繁殖。

2．生物工程的上游技术是【 】Ａ： 基因工程及分离工程；Ｂ： 基因工程及发酵工程；Ｃ： 基因工程及酶工程；Ｄ： 基因工程及细胞工程；Ｅ： 基因工程及蛋白质工程。

3．基因工程作为一种技术诞生于【 】Ａ： 上世纪 50 年代初；Ｂ： 上世纪 60 年代初；Ｃ： 上世纪 70 年代初；Ｄ： 上世纪 80 年代初；Ｅ： 上世纪 90 年代初。

4．利用基因工程实现分子克隆，是通过【 】Ａ： 基因定向重排；Ｂ： 强化启动基因；Ｃ： 增强子重组； A T 5' 3' 5'3'Ｄ：SD 顺序的存在；Ｅ：载体自主复制。

5．第一个由基因工程大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【】Ａ：生长激素（Growth hormone）；Ｂ：胰岛素（Insulin）；Ｃ：干扰素（Interferon）；Ｄ：白细胞间溶菌素（Interleukin）；Ｅ：生长激素释放抑制素（Somatostatin）。

6．下列有关基因的叙述，错误的是【】Ａ：蛋白质是基因表达的唯一产物；Ｂ：基因是DNA 链上具有编码功能的片段；Ｃ：基因也可以是RNA；Ｄ：基因突变不一定导致其表达产物改变结构；Ｅ：基因具有方向性。

7．限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是【】Ａ：修复自身的遗传缺陷；Ｂ：促进自身的基因重组；Ｃ：强化自身的核酸代谢；Ｄ：提高自身的防御能力；Ｅ：补充自身的核苷酸消耗。

8．天然PstI 限制性内切酶的来源是【】Ａ：Bacillus amyloliquefaciens；Ｂ：Escherichia coli；Ｃ：Haemophilus influenzae；Ｄ：Providencia stuartii；Ｅ：Streptomyces lividans。

9．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是【】Ａ：GAAACTGCTTTGAC；Ｂ：GAAACTGGAAACTG；Ｃ：GAAACTGGTCAAAG；Ｄ：GAAACTGCAGTTTC；Ｅ：GAAACTGCAGAAAG。

10．下列五个DNA 片段，最可能含有II型限制性内切酶SstI 酶切位点的是【】Ａ：GGAGAGCTCT；Ｂ：GAGCACATCT；Ｃ：CCCTGTGGGA；Ｄ：A TCCTACATG；Ｅ：AACCTTGGAA。