大鼠取材方案
一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法
一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法真皮成纤维细胞是一种重要的细胞类型，其在生物医学研究、组织工程和再生医学等领域具有广泛的应用前景。
以下是一种常用的小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法：1. 实验前准备：- 小鼠或大鼠- 麻醉剂，如异氟醚等- 消毒剂- 必需的培养基和培养液2. 小鼠/大鼠的取材：- 麻醉小鼠或大鼠，确保其在实验过程中不会感到疼痛或不适。
- 消毒动物的表面，以减少细菌或其他微生物的污染。
- 取下小鼠/大鼠的皮肤。
使用消毒剪刀和镊子将皮肤切割成小块，以便后续的分离过程。
3. 细胞的分离和培养：- 将皮肤块转移到含有酶解消化液（如胰蛋白酶）的培养皿中，并在37°C的恒温搅拌器上进行酶解（通常为1-2小时）。
- 将酶解后的皮肤块过滤，移至新的培养皿中，加入培养基和培养液，如DMEM/F12或RPMI-1640，并添加10%胎牛血清。
- 将培养皿放在37°C的细胞培养箱中，保持适当的温度、湿度和CO2浓度。
- 培养皿中的细胞会开始生长和扩增。
定期更换培养基，并进行细胞的孵育以保持其正常生长。
4. 细胞的传代：- 当细胞密度达到80-90%时，使用胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA溶液将培养皿中的细胞与培养皿底部松散的连接断开。
- 将细胞计数，并根据需要的细胞数量进行传代。
一般情况下，将细胞按照1:3或1:4的比例重新分装到新的培养皿中。
- 重复上述步骤，直到获得足够数量且健康的细胞。
这种方法能够有效地分离和培养小鼠或大鼠真皮成纤维细胞，为相关研究提供了重要的细胞资源。
通过优化培养条件和细胞的传代方法，可以获得高质量和稳定的细胞群体，以支持各种实验或应用的需要。
提取大鼠平滑肌细胞——小总结
1．大鼠PASMCs的提取和原代培养(1)提取：对雄性SD大鼠用5％的水合氯醛经腹腔麻醉后，浸泡在75％的乙醇中5 rain。
将麻醉后的大鼠在超净工作台中固定好，无菌操作下迅速分离出心肺组织，置于盛有含有1％青链霉素的PBS培养皿中。
转移至无菌操作台中，漂洗心肺组织数次，眼科镊仔细剥离出肺动脉(包括肺动脉主干和左右肺动脉干)。
将已分离出的肺动脉用含1％青链霉素的HBSS冲洗数次，直至液体清亮为止，以尽量减少血细胞等的混入。
眼科剪纵向剪开肺动脉，内膜面朝上，用刀片来回轻刮2～3遍，去除内膜。
再将外膜面翻转过来，同样方法刮去外膜。
将中膜转移至盛有含20％胎牛血清的DMEM／F12的培养基中，用眼科剪反复剪成1 am×l mm×1 mm 的小组织块。
用滴管将小组织块转移至25T的培养瓶中，均匀的摆放与于瓶底，间距约0．5 cm。
加入3 mL含20％胎牛血清的DMEM／F12培养液，瓶底朝上，静置于37 oC、5％CO，的细胞培养箱巾孵育4～5 h。
待小组织块干涸后，轻翻转培养瓶，让培养液慢慢浸润瓶底上的小组织块，继续静置于培养箱中培养。
(2)原代培养：3—5 d后，有少量细胞从组织块周围游离出来；8—10 d后细胞融合成片，成峰．谷状分布，用胰酶消化传代。
一般2—3 d更换培养液，提取PASMCs 时用含20％胎牛血清的DMEM／F12，培养时用含15％胎牛血清的DMEM／F12。
采用生长状态良好的3～5代细胞进行后续实验。
取材、细胞原代及传代培养SD 大鼠肌注氯胺酮（22 mg / kg）麻醉后，作下腹部横切口，切取双侧输精管。
剥去外膜组织，小圆刀片刮除内膜，4 C PBS缓冲液（含青霉素100 U/ mI、链霉素100#g / mI）反复漂洗4 ~ 6遍，然后剪碎成1 mm3 大小的组织块。
先用0.1%的"型胶原酶消化作用10 min，倒去上清液，再加0.2% 的胰蛋白酶和0.1%的"型胶原酶消化20 min，使游离成单个细胞，600 > ! 离心5 min，收集消化的细胞，接种至25 cm2 培养瓶，加含20%胎牛血清的DMEM 培养液，置37 C含5%CO2孵箱中培养。
实验大鼠取材方案
实验大鼠取材方案引言：实验大鼠作为研究生物学和医学领域的重要动物模型，广泛用于疾病机制研究、药物毒理学评价以及创伤修复等实验中。
为了保证科学合理、可靠可重复的实验结果，大鼠取材方案的制定十分重要。
本文将详细介绍一个实验大鼠取材方案，包括大鼠的选择与购买、饲养与管理、实验前准备及取材方法。
一、大鼠的选择与购买实验大鼠的选择应该根据研究的目的和要求，选用符合实验条件和研究对象的品种，如Sprague Dawley大鼠、Wistar大鼠等。
同时，购买大鼠的时候需要注意以下几个方面：2.注意大鼠的种类、性别、年龄等信息，确保符合实验需求；3.检查大鼠的体表特征，确保健康、无畸形、无伤口等；4.购买大鼠前可以进行一定的初检，如测量体重、观察活动情况等。
二、大鼠的饲养与管理实验大鼠的饲养与管理是保证实验结果可靠性的重要环节。
1.饲养环境：-温度：保持恒温（20-25度），避免极端温度的影响；-湿度：保持适宜湿度（40-70%），避免湿度过高导致疾病的发生；-光照：保持适宜光照，如12小时昼光与12小时黑暗的交替；-通风：保持通风良好，避免污浊空气对大鼠健康的影响。
2.饲料与水：-提供优质饲料，如标准饲料或专门配制的实验饲料；-饲料的存放应防潮、通风，保证其营养成分的稳定性；-提供清洁、安全的饮用水，确保水质的卫生。
3.健康监测：-定期检查大鼠的健康状况，观察是否存在异常行为或症状；-定期测量大鼠的体重、体温等生理指标。
三、实验前准备在进行实验前，需要对大鼠进行一些必要的准备工作：1.环境适应：-将大鼠从饲养环境转移到实验环境前，应进行适应期的过渡；-适当调整温度、湿度和光照等条件的过渡，减少对大鼠的应激。
2.实验前禁食：-固定禁食时间，如12小时或更长时间；-禁食能够减少胃肠道内容物对实验结果的影响。
3.麻醉和体表消毒：-根据实验需要选择合适的麻醉方式，如乙醚麻醉、氧化氮麻醉等；-在取材前进行局部体表消毒，减少感染风险。
大鼠腹膜间皮细胞培养
取材：120-160g雄性清洁级SD大鼠主要仪器设备：超净台、手术剪、眼科剪、镊子、注射器、无菌培养皿、25 cm2培养瓶、25ml 烧杯、CO2培养箱（37℃，5%CO2，湿度95%）、弯头吸管、移液器、10ml尖底离心管、普通离心机、0.22μm滤膜过滤器、倒置相差显微镜。
（50ml培养瓶、100目不锈钢筛、6孔板[3]）（24、96孔板，25 cm2、75cm2塑料培养瓶、100目不锈钢筛、离心管用15ml/50ml[4]）（恒温震荡箱，离心管用50ml）培养：选择120-160g雄性清洁级SD大鼠，局麻后无菌取大网膜，在pbs中洗去红细胞，然后用含0.125%胰蛋白酶、0.01%EDTA的PBS液消化（37℃）20-25分钟，之后弃去消化液再加入胎牛血清（FBS）终止消化，吹打收集消化下来的单个细胞，4℃下离心（800r/min，5min）得到细胞团，用DMEM/F12培养液（含青、链霉素100U/ml及20%FBS）重悬细胞，接种于25cm2的培养瓶中，在CO2孵箱中培养24h后首次换液，以后每2-3d换液一次。
待细胞融合达80%时传代，用PBS洗一次后，加0.125%胰蛋白酶2ml室温消化3min，用FBS终止消化，4℃离心，细胞团用DMEM/F12生长液重悬，以2×106个细胞/ml的密度接种于25 cm2的培养瓶中，在CO2孵箱中培养24h后首次换液，以后每2-3d换液一次。
第二代被培养的细胞汇合至90%时经倒置相差显微镜观察并用细胞角蛋白抗体及波形蛋白抗体行免疫组化染色进行鉴定，明确其为PMC（腹膜间皮细胞），纯度达到99%以上。
第三代细胞用于实验。
参考文献：[1]马姝琛，严海东，庄守纲等.大鼠腹膜间皮细胞的分离培养方法[J].同济大学学报.2012年12月第33卷第6期[2] 曾莉，毛春芹，陆兔林等.大鼠腹膜间皮细胞的培养与鉴定[J].南京中医药大学学报. 2012年7月第28卷第4期[3]曾莉，徐庆，金桂兰等.大鼠腹膜间皮细胞的原代培养与鉴定[4]杜伟伟，杨洪涛.大鼠腹膜间皮细胞原代培养方法[J].中国中西医结合肾病杂志. 2012年8月第13卷第8期[5]樊敏，刘伏友，段绍斌等.改良法培养鼠腹膜间皮细胞[J].湖南医科大学学报.2002，27（6）细胞原代培养及传代一、腹腔外消化1、明胶铺备培养瓶：2-3ml明胶液体加入25cm2培养瓶，平放培养瓶，使液体全部覆盖瓶底，放入37℃培养箱中静止30min，倾出瓶中多余液体，干燥备用。
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项[取材内容]大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]大鼠[取材步骤]1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。
注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。
6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法为了获得高质量的大鼠神经节样本，本文提出了一种改良的取材方法。
通过对大鼠腰椎进行解剖，切除脊柱并暴露出神经节，使用显微镊子和显微注射器进行取材，避免了常规方法中可能出现的神经节损伤和污染，同时保证了样本的完整性和纯度。
本方法在研究神经退行性疾病等方面具有应用前景。
关键词：大鼠腰椎；神经节；取材；改良方法引言神经节是神经系统中重要的组成部分，其功能与神经元的生存和发展密切相关。
因此，研究神经节的结构和功能对于理解神经系统的发育和疾病具有重要意义。
大鼠是神经科学领域中常用的实验动物，其神经节样本的获取对于研究神经退行性疾病等具有重要意义。
然而，传统的取材方法存在一些问题，如神经节损伤、污染等，影响了样本的完整性和纯度。
因此，本文提出了一种改良的大鼠神经节取材方法，以期提高样本的质量和可靠性。
材料与方法1. 实验动物本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250-300g，由实验动物中心提供。
2. 取材工具显微镊子、显微注射器、手术刀、剪刀、镊子、无菌手套、无菌巾等。
3. 取材步骤3.1 麻醉和解剖将大鼠置于麻醉盒中，用异氟醚气体麻醉2-3分钟，待大鼠完全麻醉后，将其移至手术台上。
用无菌巾将大鼠的四肢固定，用手术刀在腰部进行皮肤切开，剪开腹肌，暴露出腰椎。
3.2 切除脊柱用剪刀将腰椎两侧的肌肉和韧带剪开，用镊子将椎弓切除，将脊柱暴露出来。
用剪刀将脊柱切开，切除椎体和椎间盘，暴露出神经节。
3.3 取材用显微镊子将神经节取出，放置在无菌PBS缓冲液中。
用显微注射器将PBS缓冲液注入神经节，使其膨胀，便于后续的分离和处理。
将取出的神经节进行离心，去除PBS缓冲液，即可得到纯净的神经节样本。
结果本方法成功地获得了大鼠腰膨大背根神经节样本，样本完整、纯净。
与传统的取材方法相比，本方法避免了神经节的损伤和污染，取材效率高，样本质量好。
讨论本文提出的大鼠神经节取材方法具有一定的优势。
DRG的取材
DRG的取材
DRG的取材，已经有很多⽂献报道，因为我最近也培养了DRG细胞，所以谈谈⾃⼰的经验：新⽣⼤⿏（红⽪）浸⼊酒精5min 处死，断头后剥开脊髓周围⽪和肌⾁，⽤显微镊剪开脊髓椎管，去除脊髓，使整个脊髓腔暴露，在解剖镜下，椎孔间的DRG 可以清晰看到，⼀个⿏应该有很多对DRG，⽤超细⼿术镊取DRG，动作要轻柔，不能将DRG夹坏。
取下的DRG放在冰PBS ⾥。
取好⾜够的DRG后，还需仔细将每个DRG的包膜剥去，这⼀步很重要，对下⼀步的组织块培养或消化培养时减少杂细胞都很关键。
这种⽅法要点就是要操作快，去除脊髓过程尽量减少出⾎，个⼈经验出⾎过多使DRG浸在⾎中会影响其活⼒。
实在有出⾎应该⽤冰PBS清洗⼀下。
还有就是剥好膜后也要放在新的冰PBS中去除⾎和杂质。
接下来就可以进⾏下⼀步操作了。
SD大鼠背根神经节细胞新取材和培养方法
华中科技大学硕士学位论文SD大鼠背根神经节细胞新取材和培养方法姓名：艾玛AmmarAliAhmed申请学位级别：硕士专业：外科学（手外科）指导教师：康皓2011-05SD大鼠背根神经结细胞的新取材和培养方法华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 硕士研究生：艾玛 指导教师： 康皓 教授 中文摘要 【目的】：探讨有效摘取ＳＤ大鼠背根神经结（ＤＲＧ）的方法，为实验取材奠定基础。
方法①取材 选择为三周ＳＤ大鼠，提取ＤＲＧ神经元。
用显微解剖获取足够数量的ＳＤ大鼠背根神经结，通过胰蛋白酶＋Ⅳ型胶原酶消化②分离：ＰＢＳ洗涤吸干液体，加入０．２％Ⅳ型胶原酶和０．２５％胰蛋白酶放入３７０Ｃ温箱边消化边用眼科剪剪碎背根神经结重复数次，直到消化液变得粘稠后就可以用滴管吹打，吹打后就可以完全的把背根组织彻底的消化掉，加入含有血清的ＮＢＬ培养基终止消化，用１０００转离心，③原代培养将细胞悬液加入底面铺有Ｌ一多聚赖氨酸的培养皿（ＰＰ ）中，放人３７℃、体积分数为０．０５的ＣＯ２培养箱中，让其自然贴壁。
定期在倒置相差显微镜下观察。
【结果】背根神经结细胞原代贴壁生长较慢，一个月以后才能长满瓶底生长二天后２０倍光镜下背根神经结细胞。
细胞成簇生长，向四周放射状排列，细胞核圆形透亮，细胞形态多边型，向四周伸出较长的触须，其他类型细胞基本上已经死掉而悬浮在培养基里。
【关键词】背根神经结；细胞培养 New method in extracting and culture of dorsal rootganglion neurons of SD ratDepartment of Hand surgery, Union Hospital, Tong Ji Medical School, HuazhongUniversity of Science and TechnologyPostgraduate: Ammar Ali Ahmed TaherSupervisor: Pro. KangHaoAbstract【Objectives】To explore the effective method applied in extracting of dorsal root ganglion (DRG) of SD rats, thus lay a foundation for obtainment of the experimental materials.【Methods】①Obtainment of materials: Select 3-week SD rats to extract DRG neuron. Sufficient dorsal root ganglions of SD rat may be obtained via microdissection and digested using trypsin + collagenase IV. ② Isolation:The liquid is washed and sucked up with PBS, add 0.2% collagenase IV and 0.25% trypsin, after that it is placed in 37℃incubator for digestion, during which the dorsal root ganglion should be sheared with ophthalmic scissor for several time until the digestive juice becomes thick, and then a pipette is used to blow, the dorsal root tissue may be digested totally after blowing, add NBL medium containing serum to terminate the digestion process, and centrifuged at 1000r. ③Culture of primary generation of cells: Add cellular suspension in Petri dish (PP) with L-poly-lysine laid down at its bottom, and placed in incubator (37℃, 0.05 volume fraction of CO2) to allow natural adherent growth. The inverted phase contrast microscope is used regularly to perform the observation.【Results】The adherent growth of the primary generation of dorsal root ganglion cells isso slow that a month is needed to cover the bottom of the flask. The dorsal root ganglion cells under 20 x optical microscope grow for two days. The cluster of cells grows in radial arrangement to the surrounding; the nucleus appears round and transparent and cellular morphology in shape of polygon while the longer tentacles expand around the cell; other types of cell have been basically dead and suspend in the medium.【Keywords】Dorsal root ganglion; Cell culture独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。
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实验大鼠取材方案[取材内容]1. 取大鼠静脉血分离血浆、血清-80℃保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清-80℃保存。
3. 取大鼠甲状腺组织制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6. 取大鼠肝脏组织制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠胰腺组织制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取大鼠胃部组织制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大鼠肾组织制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰冻保存备用。
13. 取大鼠肾上腺组织左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组织左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]Wistar大鼠[取材步骤]1. 取材大鼠前夜禁食自由饮水。
2. 腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。
用5ml的注射器配合5.57号针头。
腹腔注射时右手持注射器左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴另外三个手指抓住大鼠的颈部使大鼠的头部向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
进针的动作轻柔防止刺伤腹部器官。
尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离最好是从腹部一侧进针穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔注射完药物后缓缓拔出针头并轻微旋转针头防止漏液。
待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3. 修剪去颈部及腹部毛发75%酒精消毒。
4. 沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部皮肤直至剑突向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉剪开腹膜暴露腹腔将肝脏向上翻起显露门并游离静脉将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉抽取门静脉血2ml无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜4℃离心3000-3500/min10分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
5. 把胃与脾之间的薄膜除去可见到在其下方有如树枝状的肉色组织分为左、右两叶钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织结扎止血。
胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胰腺体部约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余组织全部液氮冰冻保存备用。
生理盐水冲洗操作器械。
6. 剔除脾周组织放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①从脾脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②继续切取脾约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定③其余组织液氮冰冻保存备用。
7. 从剑突继续向上剪开皮肤自颌下向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露胸廓及颈浅肌层。
沿正中剪开胸廓、胸膜避免损伤胸腺的胸腔脏器。
暴露心脏找到上下腔静脉后确认右心房5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
加4ml静脉血入肝素锂真空采血管摇匀室温静置10分钟4℃离心3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
2ml加入普通真空采血管低温静置过夜4℃离心3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
8. 展开肠系膜于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织剔取肠系膜淋巴结数枚放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②其余组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
心管5ml、9. 上端于贲门上端结扎食管下端于直肠远端结扎直肠末端钝锐结合完整取下胃肠道。
10. 离断胃放置于无菌培养皿残端结扎。
①沿胃大弯剖开生理盐水洗涤切取约1mm×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余胃组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
11. ①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm距回盲部10cm处切取回肠10cm生理盐水洗涤切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含全层的空肠和回肠组织各1条做标记浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余空肠和回肠组织全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
12. 结扎剪断肝门管道系统钝锐结合完整取出大鼠肝脏放置于无菌培养皿生理盐水冲洗称重并记录。
①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
13. 于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。
在肾脏的前方内侧和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。
右侧肾上腺呈豆状长轴指向后内侧左侧呈卵圆形长轴指向腹外侧。
钝锐结合摘取两侧肾上腺。
①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②右叶肾上腺放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
14. 剪开后腹膜结扎剪断双侧肾门钝锐结合取下双侧肾脏剔除肾周筋膜组织放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①于中间肾门部横行切开左侧肾脏切取上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧肾脏放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
15. 大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。
性成熟的大鼠睾丸和附睾下降入阴囊使表面凸出并突向后方。
小心剪开双侧阴囊可见椭圆形睾丸钝锐结合摘取双侧睾丸、附睾放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
16. 颈白线钝锐结合分离颈前肌群直至气管向上显露甲状腺。
仔细操作切取包括甲状软骨在内的甲状腺。
①切取约1mm×1mm×1mm组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。
切取左侧睾丸下端1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧睾丸组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
17. 大鼠胸腺由两叶组成似等边三角形。
大部分位于胸腔前纵膈顶端近喉部基底部附着于心包腹面的前上方。
钝锐结合完整取下胸腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胸腺1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②切取胸腺5mm×5mm×5mm组织1块浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余组织置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
18. 整体取下大鼠心肺组织剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定冻存管液氮冰冻保存备用。
19. 各取样标本细致编号登记。
20. 大鼠废弃尸体处理。
[注意事项1. 戊巴比妥钠配成1%生理盐水溶液平均每只大鼠用量12.6mg 1.2ml左右。
2. 大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为510ml/kg。
3. 完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎不易寻找肠系膜淋巴结所以先取淋巴结。
取下胃肠道由专人操作取胃肠道及胃肠道取下后取材的操作器械单用一套。
4.取材时三人同时操作取一只大鼠结合取材方案多脏器并行取材缩短取材时间。
③右肺组织置于无菌1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。