自身抗体的检测及应用 ppt课件
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自身免疫病和自身抗体检测详解演示文稿
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IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型
细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期
均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型
• 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗原
发生免疫应答，产生自身抗体和（或）致 敏淋巴细胞的现象。
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与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫病：
是指在各种内外因素的作用下， 自身免疫反应过强，超过了生理性自 身免疫反应的强度且持续相当长时间， 造成对正常细胞、器官的功能与结构 的破坏，呈现与此损伤相关的临床表 现及免疫学异常。
的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为
2%，而第一级HLA--B27阳性的亲属
中，发生强直性脊柱炎的危险性达
20%。
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自身免疫病的基本特征
系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率也 较高，在SLE第一代亲属中发病率达3%-5%，同胞姐妹发病率更高，特别是单卵 双胎更为常见 。在1980年的调查中35组 单卵双胎的患者中，有22组患SLE，共患 病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1组患 病，为12.5%。
免疫印迹法(IB）：
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自身免疫病常规实验室检查
• 血常规：
• RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。
现在是40页\一共有71页\编辑于星期二
自身免疫病常规实验室检查
现在是36页\一共有71页\编辑于星期二
自身抗体的检测方法
金标免疫斑点法
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IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型
细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期
均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型
• 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗原
发生免疫应答，产生自身抗体和（或）致 敏淋巴细胞的现象。
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与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫病：
是指在各种内外因素的作用下， 自身免疫反应过强，超过了生理性自 身免疫反应的强度且持续相当长时间， 造成对正常细胞、器官的功能与结构 的破坏，呈现与此损伤相关的临床表 现及免疫学异常。
的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为
2%，而第一级HLA--B27阳性的亲属
中，发生强直性脊柱炎的危险性达
20%。
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自身免疫病的基本特征
系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率也 较高，在SLE第一代亲属中发病率达3%-5%，同胞姐妹发病率更高，特别是单卵 双胎更为常见 。在1980年的调查中35组 单卵双胎的患者中，有22组患SLE，共患 病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1组患 病，为12.5%。
免疫印迹法(IB）：
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自身免疫病常规实验室检查
• 血常规：
• RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。
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自身免疫病常规实验室检查
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自身抗体的检测方法
金标免疫斑点法
血清免疫学自身抗体检查结果解析PPT课件
IgA
参考值：成人0.7～3.9克/升。IgA在局部免疫中起重要作 增高：见于IgA型多发性骨髓病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肝硬化、
用。主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生。不能通过胎盘， 湿疹、血小板减少等疾病。
小儿只能从母乳中得到。
降低：反复呼吸道感染、见于重链病、轻链病、吸收不良综合征、某些免疫缺陷
特异糖蛋白，是抗体发挥溶菌作用的必要补充条件。包括C1～C9共9种成分(C3最多),
• 作用：补体具有溶解靶细胞、促进吞噬、参与炎症反应等功能，同时补体还在免疫调节、清除免疫复合物、稳定机体内
环境、参与变态反应及自身免疫性疾病起关键性作用。
补体名称
特点
参考值
临床意义
总补体溶血活性 （CH50）
检测以红细胞50%溶血 为判定终点，测知总补 体溶血活性。
IgE。
作用及意义：测定人体血清免疫球蛋白的含量，是了解机体免疫功能的重要方
法，对自身免疫性疾病的诊断有一定的价值，特别是对浆细胞恶变、体液免疫 缺陷的诊断是很重要的指标。 此外，对观察疾病的疗效也有一定价值。 但血清免疫球蛋白的变化范围较大，又很少有特异性，因此，在诊断及分析其意 义时必须密切结合临床疾。
免疫学检查分析
2019-03-30
临床常用免 疫学检测
01
血清免疫球蛋白（Ig）检测
02
血清补体检测
03
细胞免疫检测
04
肝炎病毒标志物检测
05
感染免疫学指标检测
06
自身免疫抗体检测
一、血清免疫球蛋白检测
• 定义：Ig（免疫球蛋白）指具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。 • 分类：应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类： IgG、IgA、IgM、 IgD、
医学课件自身免疫病及其自身抗体的检测
表3.系统性红斑狼疮的自身抗体
_____________________________________________________________________
抗体反响性
阳性率(%)
抗原性质
_____________________________________________________________________
核糖体型 主要见于SLE. 5) 着丝点型 主要见于硬皮病及CREST综合征.
3.ID或CIE 主要用于检测抗ENA抗体.所用抗原:兔胸腺;小
牛胸腺;人脾;猪脾;组织培养细 胞等提取物.
4.同位素(Farr氏法)检测
主要用于检测抗dsDNA抗体. 5.ELISA:可用于抗dsDNA;抗ssDNA;抗组蛋白抗体;
变性IgG,RANA
干躁综合征(SS)
SSA,SSB,唾液腺管
系统性红斑狼疮(SLE)
胞核成分
(DNA,DNP,RNP,SM)
酸性糖蛋白，是SLE的标记抗体。
抗Sm抗体是
胞浆成分(线粒体,微粒体)
RBC,血小板
混合结缔组织病(MCTD)
细胞核(RNP)
抗n RNP抗体
__________________________________________________
• 可存在于多种AID 中.SLE;MCTD;SS;RA;PSS;DM/PM;药物性 狼疮等疾病.缺乏特异性.
• 检测方法:ELISA;血凝等.
4.抗组蛋白抗体
• 主要的组蛋白有H1;H2A;H2B;H3和H4. • 主要见于药物性狼疮,阳性率95%以上.也
可见于SLE(70%),幼年类风湿性关节炎(30%) 等. • 检测方法:ELISA;IF;血凝法等.
自身抗体的检测及其临床意义PPT课件
抗RNP抗体 高滴度是混合性结缔组织病(MCTD,夏普综 合征)的特异性标志（阳性率为95-100%）， 抗体滴度与疾病活动性相关；低滴度可见 于SLE（15-40%，常伴Sm抗体阳性）。 抗Sm抗体 SLE的标志性抗体（5-30%），与dsDNA 一起是SLE的诊断指标，与疾病活动性无 关，一般伴有U1-RNP抗体阳性。 抗核小体抗体 SLE标志性抗体（85%），可用于SLE的 早期诊断，与狼疮肾炎相关
免疫印迹技术（IBT）
免疫印迹技术属于膜载体酶免疫技术，其
固相载体为吸附有抗原的硝酸纤维膜。
基本原理是将从小牛或兔胸腔提取的抗原,
经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按分子量大小分 离成区带,经参照对应分子量标准物质确定每 一抗原区带的分子量。然后将各抗原区带转 印至硝酸纤维膜上制成抗原吸附载体膜。
将待测血清加在已切成细条的硝酸纤维膜上, 待测血清中存在的抗体分别与硝酸纤维膜上 的相应抗原区带结合,当再加入酶标记抗人 IgG抗体后形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物, 再加入酶的底物,出现显色反应。凡有抗体与 膜上抗原结合的位置,均会因酶促反应而显色。
抗PCNA 是增殖性细胞核抗原，是SLE的标志性抗体 （2-10%），与SLE弥散性肾小球肾炎相关， 对激素治疗敏感。 抗组蛋白抗体 多种结缔组织病中均可出现，在药物诱导 的SLE中较常见（阳性率为95%）不具有疾 病特异性。仅有此抗体阳性，而不伴有其 他ANA，则强烈支持DIL的诊断。与SLE活 动性及狼疮肾病相关。
自身免疫性疾病患者大多数体内均可查出 较高滴度的自身抗体，因此自身抗体的检 测可帮助临床诊断，评价疗效，估计预后。 自身免疫性疾病以血清中出现大量自身抗 体为特征，其中与某种疾病密切相关的自 身抗体称为该疾病的标志抗体，标志抗体 的检出有助于临床医生确诊疾病，具有重 要的价值。通过大量的研究及临床资料统 计，目前比较公认的部分标志抗体：
自身抗体的检测
自身抗体的分类
器官特异性抗体
针对特定器官或组织产生的抗体，如抗甲状 腺抗体、抗平滑肌抗体等。
非器官特异性抗体
不针对特定器官或组织产生的抗体，如抗核 抗体、抗线粒体抗体等。
免疫复合物型抗体
与自身抗原结合形成免疫复合物的抗体，如 类风湿因子等。
细胞因子或生长因子抗体
能够与细胞因子或生长因子结合的抗体，如 肿瘤坏死因子抗体等。
03 自身抗体检测的临床意义
协助诊断自身免疫性疾病
自身抗体是自身免疫性疾病的标志， 通过检测自身抗体，可以协助医生诊 断自身免疫性疾病，如类风湿性关节 炎、系统性红斑狼疮等。
自身抗体检测可以为临床医生提供重 要的参考信息，帮助医生了解患者的 免疫状态和疾病进展情况，从而制定 更加精准的治疗方案。
通过自身抗体检测，可以评估治疗效果，为调整 治疗方案提供依据，提高治疗效果。
在临床研究中的应用前景
新药研发
在药物研发过程中，自身抗体检测可用于评估药物的疗效和安全 性，为新药研发提供重要参考。
疾病机制研究
通过自身抗体检测，可以深入了解疾病的发病机制，为疾病预防和 治疗提供新的思路和方法。
个体化诊疗方案制定
重要性
自身抗体检测对于诊断自身免疫性疾 病、感染性疾病、肿瘤等疾病具有重 要意义，有助于疾病的早期发现和治 疗。
自身抗体检测的方法
酶联免疫吸附试验（ELISA）
放射免疫分析法（RIA）
利用抗原包被的固相载体，通过酶标标记 抗体或抗原，检测样本中与固相载体结合 的自身抗体。
利用放射性同位素标记抗体或抗原，检测 样本中与标记物结合的自身抗体。
根据个体自身抗体检测结果，制定个体化的诊疗方案，提高治疗效 果和患者生活质量。
自身免疫性皮肤病的抗体检测ppt课件
表皮内或表皮下水疱形成
皮肤结构
表皮
真皮
皮下组织
自身免疫性大疱性皮肤病
表皮内水疱 天疱疮: 抗桥粒抗体（桥粒芯糖蛋白1和3）
细胞与细胞间粘连
表皮下水疱 类天疱疮: 抗半桥粒抗体（BP180和230)
细胞与基底膜粘连
疱疹样皮炎: 抗tTG与抗醇溶蛋白抗体
获得性大疱性表皮松解症: 抗VII型胶原蛋白抗体
EA 1495-4801 G
EA 1496-4801 G
desmoglein 1
desmoglein 3
*能够实现定量检测，抗体滴度与疾病活动度、严重度相关.
自身免疫性大疱性皮肤病
产生多种抗皮肤结构蛋白的自身抗体
靶抗原：介导表皮内棘细胞间的细胞-细胞连接以及表皮
和真皮层间的粘附
产生的自身抗体破坏连接
细胞间IgA 和 C3
Desmocollin1 (IgA), Dsg3
自身抗体的靶抗原是桥粒
寻常型天疱疮
最常见的表皮内形成水疱的自身免疫性皮肤病
发病率: 0.1-1.6 / 100,000 居民
常见于中年和老年人
约70%的水疱最早出现于口腔黏膜 （仅抗桥粒芯糖蛋白3抗体阳性）
蔓延至其他黏膜与皮肤 （抗桥粒芯糖蛋白3和1阳性）
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自身免疫性皮肤病 的抗体检测
已经上市产品
IIFT
订货号 靶抗原
表皮基底膜、棘细胞桥粒 类天疱疮抗原 移行上皮 桥粒芯糖蛋白1 桥粒芯糖蛋白3 BP230gC VII型胶原NC1
基质
食管 盐裂皮肤 膀胱 转染细胞 转染细胞 转染细胞 转染细胞 转染对照细胞 转染对照细胞 BP180-NC16A-4X EUROPLUS
自身抗体 ppt课件
PPT课件
17
ANA检测的临床意义
PPT课件
18
• ANA在各种自身免疫性疾病中的阳性率
自身免疫性疾病
系统性红斑狼疮(SLE) 活动期
非活动期 药物诱导性红斑狼疮(DLE) 混合结缔组织病 (MCTD) 类风湿性关节炎(RA) 进行性系统性硬化症(PSS) 多发性肌炎及皮肌炎(PM/DM) 干燥综合症(SS) 慢性活动性肝炎(CAH) 溃疡性结肠炎(UC)
PPT课件
6
ANA
间接免疫荧 光法（IFA Indirect Fluorescen t Assay ）
ENA
免疫印迹法 （IB）
Westernblot LIA
PPT课件
7
2、ANA的检测方法 间接免疫荧光法
• 用核质丰富的培养细胞Hp-2细胞和灵长类 肝冰冻破片作为抗原基质。
• 用荧光显微镜观察ANA荧光着染强度和免疫 荧光图形。
PPT课件
5
ANA分类
根据细胞内靶抗原的理化特性和分布： • 抗DNA（dsDNA,ssDNA) • 抗组蛋白（Histone) • 抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable
nuclear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA） • 抗核仁（Nucleolus）
PPT课件
4
ANA分类
根据细胞内靶抗原的理化特性和分布： • 抗DNA（dsDNA,ssDNA) • 抗组蛋白（Histone) • 抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable
nuclear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA） • 抗核仁（Nucleolus）
《自身抗体的检测》课件
常见的自身抗体检测技术
1
ANA
全称抗核抗体，常见于结缔组织病和
ds-DNA
2
自身免疫性肝病等。
双股DNA抗体，常见于系统性红斑狼
疮等。
3
SSA/Ro
SSA或Ro抗体，常见于干燥综合征和
SSB/La
4
系统性红斑狼疮等。
SSB或La抗体，常见于干燥综合征等。
自身抗体检测的临床应用
诊断
治疗
可用于自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤的诊断。 可以为自身免疫疾病的治疗提供指导和监测。
自身抗体检测的意义和挑战
1 意义
2 挑战
自身抗体检测可以提高自身免疫疾病的早 期诊断率和准确性，减少疾病的发生和发 展。
自身抗体检测的标准化、质量控制和参比 标准等问题仍需要进一步解决。
结论及展望
结论
自身抗体检测已成为临床医学中的重要工具， 在疾病的筛查、诊断、治疗和监测中发挥了 重要作用。
展望
随着技术的不断发展，自身抗体检测将越来 越趋向于高通量和个性化。希望未来的自身 抗体检测可以更好地为疾病的预防和治疗提 供支持。
利用特殊荧光素标记的相应 抗体探测待测样本中的自身 抗体，常用于系统性自身免 疫病的诊断。
酶联免疫吸附实验 (ELISA)
利用酶标记的抗体探测待测 样本中的自身抗体，常用于 自身免疫疾病的筛查。
免疫印迹(Western blot)
利用电泳将不同大小的自身 抗原分离，再用特异性抗体 检测其中的自身抗体，常用 于多种自身免疫病的诊断。
为什么需要进行自身抗体检测?
自身抗体检测可以帮助医生确定是否存在自身免疫疾病，并指导治疗和监测疾病的进展。自身抗体的定义和作用 Nhomakorabea定义
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22
ANA阴性
(1)正常人或非结缔组织病患者，其体内应该不存在ANA。 (2)疾病初期，ANA含量不足以被检测出;临床治疗有效，病情缓解，
ANA确实转阴。 (3) 实验室误差，特别是试剂，不同厂家的试剂检测结果会有差异。
23
24
ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析,阳性并不能确定某种临床诊 断,反之,ANA阴性也不能排除自身免疫性疾病。
但是临床上如果ANA滴度≥1:1000肯定可以考虑为结缔组织病或自身 免疫性疾病，具体是哪一种疾病，要结合其他临床病史、症状体征 和实验室结果综合考虑下结论。
一般ANA滴度为1:100时，临床意义不大。
SLE、药物性狼疮
核膜型 与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
12
抗核抗体（ANA）
核点型 与抗ENA有关，应进一
步查特异性抗体
核仁型 多见于系统性硬皮病
13
特异性抗体检测
检测除ANA以外其他项目。 其中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗双链DNA抗体(抗dsDNA)是用
间接免疫荧光法。 而其他特异性抗体(包括抗Sm抗体，抗着丝点抗体，抗SSA抗体等)均采
临床表现阳性，实验室检查阴性 实验室检查阳性，临床表现阴性
18
“自相矛盾”的结果
ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性 ANA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性 （膜条法），占10%，为客观存在 ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）
19
什么？
5
（2）免疫印记法：将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置，每一种抗原 只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、特异好， 判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确，阴性 与阳性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体滴度相关 。
6
（3）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异 性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原 只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在 临床免疫实验室的应用受到一定限制 。
用免疫印迹法。
14
抗ENA抗体谱
是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体 的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核 小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体, 抗dsDNA。
不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗 ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊 断和鉴别具有重要意义。
20
ANA阳性
可见于多种临床情况，出了风湿病外，也可见于正常人或非风湿病。 (1)健康人:年龄越大,阳性率越高(>60岁的阳性率为20%-25%),但为低滴
度。 (2)有SLE家族史的一级亲属,有近50%为阳性 (3)肺疾病、肝病、血液病、慢性感染等。 注意：正常人中一般ANA滴度较低。
21
ANA阳性
10
抗核抗体（ANA）
检测方法：间接免疫荧光法（检测总抗） 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型(颗粒型，均质型等)，用荧光
强度判定抗体滴度(1:100，1:320，1:1000，1:3200等) 优点：敏感性高 缺点：操作复杂，对人员要求高，各实验室标准有差异
11
抗核抗体（ANA）
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗 DNA有关，引起LE形成主要见于
3
自身抗体的检测方法
4
(1) 间接免疫荧光法(IFT): 检测ANA的金标 准，具有很高的敏感性 和特异性。 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温 育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体与相应的核抗 原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基 质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。
15
16
欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、 SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP B、 dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。
17
自身抗体检测结果正确解读
检测方法局限性：假阳性，假阴性 临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期
自身抗体的检测及应用
1
自身抗体
【概念】 由各种原因造成的机体B细胞产生针 对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每
种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。
2
自身抗体的意义
自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后； 指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。
7
自身抗体检测常用方法学
间接免疫荧光法：解决有与无的问题 免疫印迹法：解决有什么的问题 酶联免疫吸附试验：解决有多少的问题
8
2020/11/25
9
抗核抗体（ANA）
【定义】 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称，泛指抗各种细胞核成分的 抗体。
【分类】 (1)抗核蛋白抗体 (2)抗DNA抗体(包括抗dsDNA和抗ssDNA) (3)抗可提取性核抗原(ENA)抗体
ANA阴性
(1)正常人或非结缔组织病患者，其体内应该不存在ANA。 (2)疾病初期，ANA含量不足以被检测出;临床治疗有效，病情缓解，
ANA确实转阴。 (3) 实验室误差，特别是试剂，不同厂家的试剂检测结果会有差异。
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ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析,阳性并不能确定某种临床诊 断,反之,ANA阴性也不能排除自身免疫性疾病。
但是临床上如果ANA滴度≥1:1000肯定可以考虑为结缔组织病或自身 免疫性疾病，具体是哪一种疾病，要结合其他临床病史、症状体征 和实验室结果综合考虑下结论。
一般ANA滴度为1:100时，临床意义不大。
SLE、药物性狼疮
核膜型 与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
12
抗核抗体（ANA）
核点型 与抗ENA有关，应进一
步查特异性抗体
核仁型 多见于系统性硬皮病
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特异性抗体检测
检测除ANA以外其他项目。 其中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗双链DNA抗体(抗dsDNA)是用
间接免疫荧光法。 而其他特异性抗体(包括抗Sm抗体，抗着丝点抗体，抗SSA抗体等)均采
临床表现阳性，实验室检查阴性 实验室检查阳性，临床表现阴性
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“自相矛盾”的结果
ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性 ANA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性 （膜条法），占10%，为客观存在 ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）
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什么？
5
（2）免疫印记法：将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置，每一种抗原 只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、特异好， 判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确，阴性 与阳性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体滴度相关 。
6
（3）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异 性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原 只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在 临床免疫实验室的应用受到一定限制 。
用免疫印迹法。
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抗ENA抗体谱
是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体 的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核 小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体, 抗dsDNA。
不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗 ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊 断和鉴别具有重要意义。
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ANA阳性
可见于多种临床情况，出了风湿病外，也可见于正常人或非风湿病。 (1)健康人:年龄越大,阳性率越高(>60岁的阳性率为20%-25%),但为低滴
度。 (2)有SLE家族史的一级亲属,有近50%为阳性 (3)肺疾病、肝病、血液病、慢性感染等。 注意：正常人中一般ANA滴度较低。
21
ANA阳性
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抗核抗体（ANA）
检测方法：间接免疫荧光法（检测总抗） 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型(颗粒型，均质型等)，用荧光
强度判定抗体滴度(1:100，1:320，1:1000，1:3200等) 优点：敏感性高 缺点：操作复杂，对人员要求高，各实验室标准有差异
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抗核抗体（ANA）
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗 DNA有关，引起LE形成主要见于
3
自身抗体的检测方法
4
(1) 间接免疫荧光法(IFT): 检测ANA的金标 准，具有很高的敏感性 和特异性。 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温 育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体与相应的核抗 原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基 质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。
15
16
欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、 SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP B、 dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。
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自身抗体检测结果正确解读
检测方法局限性：假阳性，假阴性 临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期
自身抗体的检测及应用
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自身抗体
【概念】 由各种原因造成的机体B细胞产生针 对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每
种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。
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自身抗体的意义
自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后； 指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。
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自身抗体检测常用方法学
间接免疫荧光法：解决有与无的问题 免疫印迹法：解决有什么的问题 酶联免疫吸附试验：解决有多少的问题
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2020/11/25
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抗核抗体（ANA）
【定义】 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称，泛指抗各种细胞核成分的 抗体。
【分类】 (1)抗核蛋白抗体 (2)抗DNA抗体(包括抗dsDNA和抗ssDNA) (3)抗可提取性核抗原(ENA)抗体