最新活菌计数参考材料
活菌数的测定方法
活菌数的测定方法
一、直接计数法：
1.显微镜计数法：将样品通过适当稀释后涂布在平板上，然后在显微
镜下直接观察，将显示出的活菌数量进行计数。
2.罗氏计数室法：将适当稀释后的样品放在罗氏计数室中，通过显微
镜下观察菌落数并计数，然后根据稀释倍数计算活菌数。
3.涂布法：将稀释后的样品均匀涂布在琼脂平板上，在适宜温度下培
养一段时间，然后观察并计算菌落的数量。
二、间接计数法：
1.白细胞计数法：用白细胞计数板进行白细胞计数，由于白细胞数与
活菌数有一定的相关性，可以通过白细胞计数的结果进行推算。
2.生物标志物法：通过检测样品中特定的生物标志物，如ATP、葡萄
糖等，间接反映出活菌的数量。
3.代谢产物测定法：通过测定样品中的代谢产物（如氧气消耗量、二
氧化碳产生量等），间接推测出活菌的数量。
以上是常见的活菌数测定方法，不同的方法适用于不同的实际应用场景。
在选择测定方法时，需要考虑样品类型、检测目的、测定时间和精确
度等因素。
另外，为了提高测定结果的准确性，还需要严格控制实验条件，如温度、湿度、培养时间等。
最后，需要注意的是，活菌数的测定方法只能提供大致数量，无法直
接得到准确的数值。
因此，在进行活菌数测定时，需要结合其他的检测方
法和数据进行综合分析。
细菌计数简述
细菌计数【目的要求】1、掌握倾注培养法、活菌计数法和光电比浊计数法。
2、熟悉菌落形成单位（cfu）含义。
【器材和试剂】1、器材无菌平皿（直径90mm）、孵育箱、水浴箱、菌落计数仪、无菌刻度吸管、灭菌空试管、坐标纸。
2、培养基普通营养琼脂（每支15ml）、液体培养基。
3、其他待检样品，如饮用水、饮料、食品、药品、化妆品等。
【步骤和方法】1、倾注培养和活菌计数（1）按食品微生物学检验和医药化妆品检验国家标准（GB）的要求处理样品，如固体标本用无菌研钵研碎制成匀浆、油脂类物品用分散剂Tween-80、医药标本宜加入消除药物作用的中和剂等。
所有操作过程必须严格无菌，防止污染。
（2）将标本用无菌生理盐水按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5梯度稀释。
（3）取不同稀释度液体1ml注于直径90mm的无菌平皿，迅速加入已熔化并冷却至50℃的营养琼脂15ml，立即在平面上向同一方向平稳转动，使之混匀，待凝固后翻转平板。
一个稀释度接种两个平板。
（4）置35℃孵育18~24h，计数菌落形成单位（colony forming unit，cfu），求出每毫升或每克标本中所含活菌数。
1ml标本中活菌数=全平板cfu×稀释倍数（5）菌落计数方法：1）平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要使用放大镜检查，以防遗漏。
记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
2）在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
3）若片状菌落不足平板一半，而其余一半中菌落数分布均匀，则计数后乘2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。
（6）不同稀释度平均菌落数的确认：1）平均菌落数在30~300之间：①若两个稀释度的比值＜2，报告两个稀释度的平均菌落数，如表1-3-1例2；若比值≥2，应报告两个稀释度中较大菌落数者，如表1-3-1例3、例4.②当只有一个稀释度的平均菌落数在30~300之间时，即以该平均菌落数乘以稀释倍数报告之，如表1-3-1例1。
肺炎链球菌活菌数含量的测定操作规程
肺炎链球菌活菌数含量的测定操作规程1.引言肺炎链球菌是一种常见的呼吸道病原微生物，对于疾病的防控具有重要意义。
测定肺炎链球菌的活菌数含量是判断疾病传播性和临床治疗效果的重要指标。
本文档旨在规范肺炎链球菌活菌数含量的测定操作，确保测定结果的准确性和可靠性。
2.实验所需材料肺炎链球菌培养基冰箱分装管微量移液管、移液器和吸头显微镜细菌计数板和计数室3.实验步骤1.取一小瓶肺炎链球菌培养基放置于冰箱中冷藏，保持4℃。
2.取适量肺炎链球菌培养基，分装于无菌分装管中，避免反复冻融，可存放在-20℃的冰箱内长期保存。
3.取一支肺炎链球菌分离菌株，用无菌吸头取适量细菌液，接种于肺炎链球菌培养基中。
4.将接种好的培养基放置于恒温摇床中，在37℃恒温箱中培养24小时。
5.取培养好的细菌液，用无菌吸头吸取适量的细菌悬液，放置在显微镜片上。
6.用显微镜观察细菌悬液中的活菌，计数并记录。
7.将细菌计数板放置在计数室中，将观察到的活菌在计数板上记录。
4.实验注意事项所用材料必须无菌，以防止其他微生物的污染。
活菌的计数应在24小时内完成。
活菌数的检测应重复3次并取平均值。
实验环境应保持洁净，避免灰尘和其他污染物对实验结果造成干扰。
5.结果记录与分析根据实验步骤所得的数据，计算平均活菌数含量，并记录在实验数据表中。
通过对不同样本的活菌数进行比较和分析，可以了解肺炎链球菌的传播程度和感染风险。
6.结论本操作规程提供了一种测定肺炎链球菌活菌数含量的标准化方法，经过验证具备准确性和可靠性。
科学使用本操作规程可以为疾病的早期预防和传播控制提供重要的实验数据支持。
注意：本操作规程仅供参考，具体实施过程请根据实验条件和要求进行调整。
饲料添加剂丁酸梭菌活菌计数、菌种鉴定
附录A（资料性）丁酸梭菌活菌计数A.1 试剂和材料A.1.1除非另有说明，在分析中仅适用确认为分析纯的实际，水符合GB/T 6682中三级水的要求。
A.1.2亚硫酸铁琼脂（Ferric sulfite Agar）称取胰蛋白胨15.0 g，大豆蛋白胨5.0 g，酵母粉5.0 g，偏重亚硫酸钠1.0 g，柠檬酸铁铵1.0 g，琼脂20.0 g，加入1000 mL蒸馏水加热煮沸至完全溶解后，用1mol/L盐酸溶液或1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.6±0.2，121℃高压灭菌15 min，冷却至50℃左右备用。
商品培养基按使用说明配制。
A.1.3 1mol/L盐酸溶液量取83.3 mL的12 mol/L浓盐酸，用水溶解定容至1 L，得到浓度为1 mol/L的盐酸溶液。
A.1.4 1 mol/L氢氧化钠溶液称取40.0 g氢氧化钠，用水溶解定容至1 L，得到浓度为1 mol/L的氢氧化钠溶液。
A.1.5 0.85%生理盐水称取0.85 g氯化钠，加少量蒸馏水溶解，倒入100 mL容量瓶里定容，121℃高压灭菌15 min。
A.1.6 革兰氏染色液商品革兰氏染色液按使用说明使用。
A.1.6.1 结晶紫染色液将1.0 g结晶紫完全溶解于20.0 mL 95％乙醇中，然后与80.0 mL 1％草酸铵溶液混合配成结晶紫染色液，过滤备用。
A.1.6.2 革兰氏碘液将1.0 g碘与 2.0 g碘化钾混合后，加入少许蒸馏水充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml，配成革兰氏碘液。
A.1.6.3 沙黄复染液将0.25 g沙黄溶解于10.0 mL 95％乙醇中，然后用90.0 mL蒸馏水稀释，配成沙黄复染液。
A.2 仪器设备和器具A.2.1 天平：感量为0.01 g；A.2.2 pH计：精度0.01；A.2.3 振荡摇床：转速范围满足220 r/min；A.2.4 拍击式均质器：拍击式；A.2.5 厌氧装置：厌氧盒或厌氧袋（配厌氧包）、厌氧箱或厌氧罐； A.2.6 恒温培养箱：使用温度为36℃±1℃； A.2.7 高压灭菌锅：使用温度为121℃±1℃；A.2.8 吸管：容量为1 mL 、10 mL 或相当规格的移液器； A.2.9 广口瓶或三角瓶：容量为500 mL ； A.2.10 平皿：直径为90 mm ；A.2.11 试管：15 mm×180 mm 、18 mm×180㎜。
活菌计数操作方法
活菌计数操作方法
活菌计数是一种用于确定样品中活着的微生物数量的技术。
下面是一种常见的活菌计数操作方法：
1. 准备培养基：选择适当的培养基，根据需要添加适当的营养物质和抑制微生物生长的物质。
2. 取样：从样品中取一定量的液体或固体样品。
对于液体样品，可以直接取样；对于固体样品，需要将其加入适量的缓冲液中进行均匀分散。
3. 稀释：将取样的液体稀释为一系列不同浓度的溶液。
这样做是为了确保培养基中的微生物数量处于可计数范围内。
4. 接种：将已稀释的样品溶液分别加入培养皿或培养瓶中，然后将培养皿或培养瓶密封。
5. 培养：将密封的培养皿或培养瓶放置在适当的温度和湿度下进行培养。
不同的微生物需要不同的温度和环境条件。
6. 计数：在培养一定时间后，使用显微镜或其他计数装置进行活菌的观察和计数。
活菌通常会产生可见的生长。
7. 计算：根据每个培养皿或培养瓶中观察到的活菌数量，结合稀释倍数和取样量，计算出原始样品中的活菌数量。
注意事项：
- 操作过程需要做好无菌操作，以防止细菌的交叉感染。
- 操作要求精确和细致，避免误差的出现。
- 需要根据需要选择适当的物品和仪器来进行实验。
- 操作过程中应注意安全，避免对自身和他人造成伤害。
细菌计数方法实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌计数的基本原理和方法。
2. 了解不同细菌计数方法的优缺点。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据处理和分析能力。
二、实验原理细菌计数是微生物学研究中的一项基本技能，常用的细菌计数方法有直接计数法、活菌计数法和间接计数法等。
本实验主要介绍平板菌落计数法（CFU法）和显微镜直接计数法。
1. 平板菌落计数法（CFU法）：将样品进行稀释，涂布在固体培养基上，培养一定时间后，根据培养皿上生长的菌落数来推算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：将样品进行稀释，用计数板或计数仪直接计数，根据计数室内的细菌数来推算样品中的细菌数量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌液、牛肉膏蛋白胨培养基、生理盐水、计数板、显微镜、移液器、培养箱等。
2. 实验仪器：培养皿、移液器、酒精灯、镊子、无菌操作台、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入培养皿，制成平板。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用无菌镊子取适量稀释液，涂布在平板上。
（4）将平板倒置放入培养箱，培养一定时间。
（5）计算平板上生长的菌落数，根据稀释倍数计算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入计数板，制成涂片。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用移液器吸取适量稀释液，滴加在计数板的计数室上。
（4）将计数板置于显微镜下，观察计数室内的细菌数。
（5）根据计数室内的细菌数和稀释倍数计算样品中的细菌数量。
五、实验结果与分析1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）稀释倍数：10^-4（2）菌落数：30（3）样品中的细菌数量：30 × 10^4 = 3 × 10^52. 显微镜直接计数法：（1）稀释倍数：10^-3（2）计数室内的细菌数：200（3）样品中的细菌数量：200 × 10^3 = 2 × 10^5实验结果表明，两种细菌计数方法得到的样品中的细菌数量基本一致，说明实验结果准确可靠。
实验三 平板分离技术与活菌计数
实验三平板分离技术与活菌计数实验教学课题：实验三平板分离技术与活菌计数实验教学目的：1学习从泡菜中分离微生物的方法，学习无菌操作技术。
2用稀释法分离大肠杆菌和酵母菌。
3用平板划线法分离微生物。
实验教学重点：平板划线分离方法。
实验教学难点：转角划线的轻重。
实验用品：1酵母菌。
2已灭菌的LB、YPD固体培养基各1瓶。
3无菌培养皿10套、无菌EP管10支、泡菜样品、天平、称量纸、药匙、试管架、记号笔、涂布器、1ml、10ml移液管，1000ul、200ul枪头和移液器。
4无菌水(90、带玻璃珠) 1瓶。
实验教学方法与手段：板书讲解+演示实验＋学生动手实验教学课时：4课时教学过程：一、实验方法(一)泡菜稀释分离1取泡菜：取表层以下5-10ml处的泡菜10g，泡菜汁10ml，或放在4℃冰箱中暂存。
2制备稀释液(1)制备泡菜悬液：称泡菜10g，或泡菜汁10ml，迅速倒人带玻璃珠的无菌水瓶中，振荡5-10min，使泡菜充分打散，即成为10-1的泡菜悬液。
(2)梯度稀释：用移液器吸10-1的泡菜悬液1ml，放入装有9ml无菌水的试管中，震荡，即为10-2的稀释液，如此重复，可依次制成10-3-10-8的稀释液。
注意：每一个稀释度换用一支移液管。
3混菌法测定菌落数的方法(1)LB：取原液、10-1两管稀释液各1ml，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。
然后取冷却至50℃的MRS培养基，分别倒人以上培养皿中(装量以铺满皿底的2／3为宜)，迅速轻轻摇动平皿，使菌液与培养基充分混匀，但不沾湿平皿的边缘，待琼脂凝固即成乳酸菌平板。
倒平板时要注意无菌操作。
(2)酵母菌：先把冷却至50℃的PDA培养基倒入培养皿中，凝固后，取10-4、10-5两管稀释液各200ul，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释险接两个平皿。
接着，用涂布棒（灭菌）把菌液涂布均匀，即为酵母菌平板。
4培养：将接种好的平板倒置，即皿盖朝下放置，于28-30℃中温培养，大肠杆菌和酵母菌均培养1-2d。
样品活菌数量检测实验报告
样品活菌数量检测实验报告以下是一份样品活菌数量检测实验报告:实验目的：本实验旨在检测样品中的活菌数量，并通过不同处理方式对样品活菌数量的影响进行比较。
实验材料：1. 样品：从超市购买的多种食品样品。
2. 培养基：含有酵母提取物、蛋白质、糖类等营养成分，用于培养细菌。
3. 细菌培养器：用于培养细菌的设备。
4. 酒精：用于消毒实验用具和样品。
5. 显微镜：用于观察细菌的形态和运动情况。
实验步骤：1. 消毒：将实验用具和样品用酒精进行消毒，然后晾干。
2. 采集样品：将样品放置在室温下，待样品温度回升后，取适量样品放入细菌培养器中，并进行接种。
3. 培养：将细菌培养器放置在温暖的环境中，培养细菌，时间为 48 小时。
4. 计数：在细菌培养器中，通过观察细菌的菌落数量和形态，计数样品中的活菌数量。
5. 比较：将不同样品中的活菌数量进行比较，分析样品中存在的细菌种类和数量。
实验结果：在实验中，我们检测了多种食品样品中的活菌数量。
具体结果如下:样品名称 | 活菌数量 (万个/克)---|-----鸡蛋黄 | 10.6酸奶 | 8.9苹果泥 | 7.3香蕉泥 | 7.1面包 | 4.9实验结果表明，不同样品中的活菌数量存在差异。
鸡蛋黄和酸奶中的活菌数量较多，而苹果泥和香蕉泥中的活菌数量较少。
此外，样品中的活菌数量也会受到处理方式的影响，例如酒精消毒会影响样品中活菌的数量。
实验结论：本实验结果表明，样品中的活菌数量可以通过不同处理方式进行调节，并且样品中的活菌数量可以受到处理方式的影响。
因此，在样品活菌数量检测实验中，需要充分考虑样品处理方式对实验结果的影响。
同时，本实验结果也为食品安全监管提供了一定的参考。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细菌计数参考材料一、检样稀释1、以无菌操作用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。
2、另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。
3、根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
二、基本原理平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。
三、器材大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基，1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有9ml 无菌水的试管，试管架和记号笔等。
四、操作步骤1、编号：取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-6、10-7各2套。
另取7支盛有9ml 无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10－7。
2、稀释用1ml无菌吸管精确地吸取1ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，另取1支吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。
换一支吸管自10-1试管吸1ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。
整个稀释过程如图Ⅷ-3。
3、取样用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-6、10-7的稀释菌液0．1ml，对号放入编好号的培养皿中。
4、计数培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×10一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。
同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。
由10-6、10-7两个稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。
平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。
平板菌落计数法的操作是先将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，待凝固后编号，并于37℃温室中烘烤30分钟左右，使其干燥，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种于不同稀释度编号的培养皿中的培养基上，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20—30分钟，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于37℃的温室中培养。
五、无菌操作的基本要求1、试验开始前，应以湿式方法清洁台面和打扫室内地面，然后以紫外线或其他方法对实验室内空气进行消毒；2、实验人员应穿戴工作服、口罩、帽子；进行无菌检验时，需经风淋后进入实验室，然后，正确穿戴好无菌隔离衣、帽和口罩；3、每吸取一次不同样液应更换无菌吸管，接种环（针）需在火焰上烧灼灭菌后，才可再次使用；4、要求无菌的试剂，如蒸馏水、生理盐水、磷酸盐缓冲液、培养基、牛血清白蛋白、标准硬水、中和剂等，均需灭菌或过滤除菌；5、无菌器材和试剂，使用前须检查容器或包装是否完整，有破损者不得使用；6、正在使用的无菌器材和试剂不得长时间暴露于空气中；7、移液或接种时，应将试管口和琼脂平板靠近火焰，防止污染；8、所有用过的污染器材，应立即放入盛有消毒液的容器中，以防止对周围环境和清洁物品造成污染；9、若不慎发生微生物培养物摔碎或其他试验微生物泄漏事故时，不论是否具有致病性，均应立即对污染及可能波及的区域进行消毒处理；10、全部试验结束后，应按常规对室内空气和环境表面进行消毒处理。
六、活菌培养计数技术1、适用范围测定细菌悬液、菌片、采样液等样本中含有活菌的数量。
2、试验器材（1）刻度吸管（1.0ml、10.0ml）。
（2）稀释液：（3）营养琼脂培养基：3、操作程序本规范要求在杀菌试验中的活菌培养计数统一使用倾注法。
其操作程序如下。
（1）对菌悬液可直接进行培养计数。
对菌片、采样棉拭与小型固体样本等，应将其上的细菌洗下成为菌悬液后进行培养计数。
洗菌时，一般以稀释液为洗液。
具体方法如下: 取含 5.0ml 稀释液无菌试管，对菌片或小型固体样本直接投入即可，对棉拭则将其采样端剪入管内，每管一份样本。
而后，用电动混合器混合20s （或在手掌上用力振敲80 次），将菌洗下形成菌悬液。
以上操作应严格按无菌要求进行。
（2）将试管按需要数量分组排列于试管架上，每管加入 4.5ml 稀释液。
各组由左向右，逐管标上10-1、10-2、10-3......等。
（3）将菌悬液样本在用电动混合器混合20s（或在手掌上用力振敲80次），随即吸取0.5ml加至10-1管内。
（4）将10-1管依前法用电动混合器混合20s（或在手掌上用力振敲80次），混匀，再吸取出0.5ml加入10-2 管内。
如此类推，直至最后一管。
必要时，还可作某稀释度的1:1或1:4稀释。
（5）选择适宜稀释度试管（以预计生长菌落数每平板为15cfu～300cfu 者为宜），吸取其中混合均匀的悬液 1.0ml 加于无菌平皿内。
每一稀释度接种3个平皿。
一般需接种2个～3个不同稀释度。
平皿加样前，应先按组编号，以免弄混。
（6）将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15ml～20ml。
（7）将平皿盖好，即刻轻轻摇动混匀，平放于台上。
待琼脂凝固后，翻转平皿，使底向上，置37℃温箱内培养。
（8）每日观察细菌生长情况。
培养至规定时间（细菌繁殖体为48h，白色念珠菌与细菌芽孢为72h），计数最终结果的菌落数。
（9）对菌片和采样棉拭洗液的活菌培养计数，先按各试验要求处理（如去除残留消毒剂等），而后取其最终样液按上法进行培养计数。
（10）计数菌落时，一般以肉眼观察，必要时用放大镜检查。
以菌落数在15cfu～300cfu的平板为准，每个稀释度3 个平板生长菌落数全合乎上述标准，则以该3个平板的菌落平均值作为结果；若有2个符合上述标准，则以该合格的两个平板菌落的平均值为结果。
对估计菌量极少的样本（如消毒处理后样本），在培养计数时可不作稀释，即使平板菌落数未达15时，亦可用其计算最终结果。
将求得的平均菌落值，再乘以稀释倍数，即得每毫升原样液中的菌量。
菌量单位为cfu。
4、注意事项（1）严格无菌操作，防止污染。
（2）认真检查试验器材有无破损（要特别注意试管底的裂痕和破洞），以防丢失样本和污染环境。
（3）注意菌液的均匀分散。
（4）稀释或取液时要准确，尽量减少吸管使用中产生的误差。
（5）每吸取一个稀释度样液，必须更换一支吸管，以减少误差。
（6）样液接种于平皿后应尽快倾注营养琼脂培养基，避免样液干燥于平皿上，影响结果的准确性。
（7）倾注时琼脂培养基温度不得超过45℃，以防损伤细菌或真菌。
倾注和摇动时，动作应尽量平稳，以利细菌分散均匀，便于计数菌落。
勿使培养基外溢，以免影响结果的准确性和造成环境的污染。
（8）为提高试验成功率，最好先用浊度计对原菌液含菌量做出估计，尽可能在首次试验时所取的有限稀释范围内（2个～3个稀释度）即有长菌在15cfu～300cfu 之间的平板。
（9）结果计算时，必须弄清稀释倍数，以免计算错误。
菌落数计算参考1．计数时应选取菌落数在30~300之间的平板（SN标准要求为25~250个菌落），若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。
2．若所有稀释度均不在计数区间。
如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。
如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。
有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。
3．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。
如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。
4．当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。
如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。
5．当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。
再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。
6．菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。
固体检样以克（g）为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。
兽药典的活菌计数法取菌液或疫苗（如果为冻干苗，则先加原装量5～10倍量稀释液作放大稀释）进行稀释，在一定条件下培养，所得细菌菌落数乘以稀释倍数，即为其活菌数。
按下列方法测定。
1、表面培养测定法每个样品取1.0ml，用各制品适宜的稀释液做10倍系列稀释，每个稀释度换1支吸管。
具体方法是：准确吸取菌液1.0ml，放入盛有稀释液9.0ml的第1支试管中（不接触液面），另取1支吸管将第1管液体混合均匀后，吸取1.0ml放入第2管中，依次稀释至最后一管，根据对样品含菌数的估计，选择适宜稀释度，吸取最终稀释度的菌液接种适宜的培养基平板3个，每个平板0.1ml，使菌液散开，置37℃晾干后，翻转平板，培养24～48小时（亦可适当延长）。
2、混合培养测定法稀释法同上，取最终稀释度的菌液接种平板3个，每个1.0ml，然后将溶化并冷至45℃的普通琼脂倾注入平板中，轻轻摇动平板，使稀释的菌液与培养基混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，置37℃培养24～48小时（亦可适当延长）。
3、菌落计算肉眼观察菌落，并在平板底面点数，算出3个平板的平均菌落数，乘以稀释倍数（表面培养法应乘以10），即为每1.0ml原液所含的总菌数。
最终稀释度一般选择每个平板菌落数为40～200CFU的稀释度。
如果有片状菌落生长，或同一稀释度平板间菌落数相差50％以上时，应重检。