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分光光度法测定治疗骨质疏松症的药物伊尔哈姆和法耶克国家药物管制和研究组织（NODCAR）.2003年7月24日.6.阿布哈齐姆ST，埃及，开罗，金字塔，邮政信箱29号专栏.2003年8月30日。

分光光度法用于治疗骨质疏松症的新药物：利塞膦酸钠（I），阿仑膦酸钠（II）和依替膦酸二钠（III）的开发，此方法简单，准确，灵敏。

第一种方法是基于测量的吸光度的差异（△A）的上升，利塞膦酸钠在0.01mol/L的盐酸溶液和0.1mol/L的氢氧化钠中反应，在波长262 nm处测得，，平均恢复系数为99.75±1.22、摩尔吸光系数（ε）为1.891×103。

浓度范围在15-150μg/ml内服从Beer定律。

第二种方法是阿仑膦酸钠浓度为0.05mol/L，在甲醇介质中与茚三酮试剂（II）的伯氨基碳酸氢钠中和反应。

有色产物测量波长为568 nm，线性范围是3.75-45μg/ml、平均回收率为99.77±0.73和ε= 9.425×103。

第三种方法是基于在氧化过程中提到的三个药物与硝酸铈（Ⅳ）在0.5 mol/L的硫酸中在室温和后续计量过量的未反应的铈（Ⅳ）在波长320 nm处的干燥。

三种药物平均回收率为99.79±1.16、99.73 ±1.38、99.86±1.13摩尔吸光系数ε14.427 ×103、13.813×103和14.000×103。

药物I，II，III在浓度范围为2-24μg/m内服从比尔定律。

分别所提出的三种方法成功地应用散装粉末药物和药物制剂的测定。

结果发现，获得了的结果在所报道的方法在统计学上吻合。

此外，该方法进行了验证根据药典规定，通过运用标准品添加技术也进行了评估。

关键词利塞膦酸钠阿仑膦酸钠依替膦酸钠吸光度差异（△A）茚三酮试剂铈（IV）硫酸利塞膦酸钠（I）为三氢钠（1- 羟基-2-（3-吡啶基）亚乙基）二膦酸，阿仑膦酸钠（II），和三氢钠（4 - 氨基-1 - 羟）二膦酸酯（III）的三水合物，依替膦酸二钠为磷酸二氢二钠（1- 羟基亚乙基）二膦酸盐，它们的结构如图.1所示。

它们都属于双膦酸盐组，用于佩吉特氏病骨和骨质疏松症的治疗，减少骨质流失。

已经报道了一些方法用于（I）的研究，（I）是一个非官方的药物，。

对于（II）中，已有色谱光度法,3-5）,电感耦合6-12），毛细管电13）和plasma14）的研究报道。

对于（Ⅲ），USP描述了一个单调乏味的滴定法测定15）试剂配制需要一个星期甚至更多时间，分光光度法已开发了TODATE，一些离子色谱法8,16,17）已经出版。

本文表明一种直接和简单分光光度法用于差异吸光度（△A）法[1]的测定。

方法[2]是使用茚三酮试剂。

方法[3]是根据测定（Ⅰ），（Ⅱ）和（Ⅲ）的氧化铈（IV）的硫酸盐，磷酸盐在室温下（25±5℃）。

三种方法的优点是准确，简单，成本低。

实验仪器岛津1601紫外/可见分光光度计1厘米的比赛细胞。

材料与试剂材料与试剂中利塞膦酸钠由埃及Avents有限公司惠赠，纯度为100.03％18），连同Actonel的片，贴上标签，含有35mg的利塞膦酸钠。

阿仑膦酸钠从NODCAR收到，纯度为99.71％18）和福善美被打成片剂（全球埃及那匹有限公司）含有10毫克的ALEN dronic 酸,当量为13.05mg阿仑膦酸钠。

依替膦酸钠的DISO介质从NODCAR获得，其纯度为99.83％15）：Hydrochloricacid为0.01mg/L的水溶液。

氢氧化钠为0.01mg/L水溶液。

茚三酮在0.2％的甲醇中的，2到4℃下保存，碳酸氢钠盐为0.05mg/L水溶液。

0.1％的硫酸高铈浓度为0.5mg/L在深茶色的彩色容器的保存。

标准实验方案方法[1]（△A）：利塞膦酸钠标准溶液（0.6mg/ml）的制备在蒸馏水中。

方法[2]使用茚三酮：阿仑膦酸钠标准溶液，（0.15mg/ml）在蒸馏水中制备。

方法[3]使用硝酸铈（IV）硫酸：利塞膦酸钠，阿伦dronate钠和依替膦酸二钠标准溶液（80μg/ml），在蒸馏水中制备。

在一个星期内可用于所有标准的方案解决，并储存在4℃下样品准备四片药或10片，准确称重，并磨成粉，和依替膦酸二钠III合成的混合物。

60mg 的I粉状粒，方法[1]，15mg的II，方法[2]和60mg的药物的III，方法[3]。

将I，II，III转移到100ml目录的烧瓶中，然后用50ml的蒸馏水溶解，摇动10分钟，过滤。

制备最终浓度为0.6mg/ml的方法[1]和0.15mg/ml的方法[2]和80毫mg/ml方法[3]的溶液。

方法[1]△A标准溶液相当于0.15-1.5mg（I）被转移到不同的等分两个系列的10ml体积的烧瓶中。

完成与0.01mol/L的盐酸和0.01mol/L的氢氧化钠的反应。

以氢氧化钠为空白，在262 nm处测定。

方法[2]使用茚三酮试剂标准储备溶液相当于37.5—450μg（Ⅱ）的不同的等分试样转移到10ml的烧瓶中。

0.5ml的碳酸氢钠的溶液中加入2.5ml的水合茚三酮，该混合物在水浴中加热，在90±5℃下20加热分钟。

将烧瓶冷却的室温，用蒸馏水稀释至刻度。

参比试剂为空白，在568 nm处测定吸光度。

方法[3]使用铈（IV）硫酸被转移到10ml容量瓶中的一系列不同的等分试样，相当于三个引药（I，II，III）20-240mg的标准原液。

1.5ml铈硫磷酸盐溶液，静置一小时，在环境温度下（25±5℃）。

对每个实验中，测定体积与0.5mol/L硫酸和空白溶液的吸光度（1.5ml硫酸铈与0.5mol/L硫酸）完成。

吸光度的差异成比例,假定所提到的三个药物使用的硫酸高铈量相同。

结果与讨论第二阿仑膦酸钠，依替膦酸二钠III。

如图.1所示。

没有生色团和没有吸收整个紫外/可见波段的频谱，两种药物可以由普通的直接分光光度法测定。

方法[1]利塞膦酸钠，拥有可观的生色团（图1），吡啶基负责如苯胺在酸性介质中的质子化，而在碱性介质中没有观测到变化。

它表现出高于在含水的碱在含水酸中，在262 nm处的紫外吸收。

对DA的方法取决于测量利塞膦酸钠溶液中0.01mol/L的HY-drochloric酸，以0.01mol/L氢氧化钠作为空白，如图2所示，在图中作为一个测试药物的等摩尔部分的吸光度的差异。

吸光度的差异△A药物的I.Different莫耳浓度（0.01-0.1mol/L）的盐酸和氢氧化钠的浓度成比例进行了研究，没有观察到吸光度的差异，所以0.01mol/L的解决方案，达到环境的安全的要求。

A（1％，1cm）上升利塞膦酸钠在262 nm处进行了计算，并发现在波长152nm在含水酸中和91nm在含水的碱中，可用于直接估计。

方法[2]使用茚三酮阿仑膦包含一个主脂族氨基，这是众所周知的反应，与茚三酮试剂。

这种试剂用于测定伯胺和氨基19，20）第二药物反应，与茚三酮在碳酸氢钠的存在下通过氧化作用脱氨的初级氨基酸基，随后和减少的茚三酮缩合以形成的coloredreaction产品，Ruhemenn的紫色，最大吸光度在568 nm处，如图3所示。

不同的参数，以优化反应条件，已被研究的试剂，如钠和碳酸氢盐的浓度，温度，时间和溶剂。

2.5ml的0.2％茚三酮试剂足够在张力最大色彩。

碳酸氢钠的浓度作为反应仅在碱性介质中进行。

不同的摩尔浓度（0.01〜0.1mol/L）进行了研究，0.5毫升0.01mol/L碳酸氢钠，得到最大的吸收。

药物（II），是能够以茚三酮的反应在较高温度下的水浴中加热20分钟（90±5℃）。

已经尝试了不同的稀释溶剂：水，甲醇和乙醇。

水给了最好的结果，产品的稳定至少1小时。

方法[3]使用铈（IV）硫酸铈（IV）是一种强氧化剂，已被用于测定几种药物包括对乙酰氨基酚21）和aztreonam.22）分光光度法测定药物I，II和III，通过使用其氧化铈过剩（Ⅳ）中的存在下，0.5mol/L的硫酸，在室温下干燥。

测定的量等价于这些药物的浓度消耗高铈硝酸铈溶液（空白）的吸光度通过测量320 nm处（图4）对供试品溶液。

图1.药物的结构图2.在0.01 N盐酸（_）和0.01N的氢氧化钠（—）测定利塞膦酸钠（60μg/ml）的吸收光谱。

图3.阿仑膦酸钠（30μg/ml）与茚三酮的反应产物的吸收光谱图4。

铈（IV）硫酸的反应产物与药物吸收光谱所有影响反应的因素进行深入的研究，如硫酸高铈浓度，溶剂，温度和反应时间实现了最佳条件的优化，在反应结束时消耗的Ce4+的体积至少增加一倍。

尝试了不同的溶剂（如甲醇，乙醇，水和硫酸与不同的当量浓度）和0.5mol/L硫酸给出了最高的吸光度差异。

冷却和加热不同的温度tisted室温适合完全反应。

结果发现，与酸化的溶液中Ce4+接触的60分钟是足够完全氧化引药，如最高在320 nm处测定吸光度不同干扰实验，至少1小时的反应产物被认为是稳定的。

化学计量反应的方法[2] [3]研究了工作方法的不断变化。

被发现的药物试剂的摩尔比为（1：2）与图.5。

在图1和图2中建议的反应的机制。

当前方法的性能评估计算的t-和F-值与所报告的酸- 碱滴定法，用0.1mol/L钠羟基的双重作用的药物相比，I和II 18）和官方方法用于药物III 15）获得的结果表明，计算的T和F值没有超过理论值（95％置信度的五个自由度的限制）（表1）。

方法验证对方法的线性，准确性和精确度进行了测试。

使用上述分光光度度量的、程序，进行线性回归方程，回归图obtained.The Beer定律在表2中给定的范围的吸光度呈线性关系。

还总结Thetable斜率，截距，相关系数，相对标准偏差（RSD），检测限，定量限，如实验数据的统计分析结果。

为了确定准确度和精确度的方法，制备了三种不同浓度的药物溶液，并分析在三个重复3 d内（表2）。

所提出的方法用于测定三种药物在药物制剂中的标准添加技术，一种方法，用于评估验证。

所提出的方法与那些通过离子交换色谱方法18）药物I＆II和USP方法15）药物三表明所建议的程序更经济，溶剂和试剂的消耗就没有得到的结果比较任何损失的准确度或精确度（表3）。

干扰一种方法，通过观察是否有任何干扰检查的特异性片剂赋形剂。

分光光度法的测量结果表明，安慰剂组样品没有任何吸收的实验条件下。

如镁stearte，乳糖，微晶纤维素和交联羧甲基纤维素钠的稀释剂和添加剂的不干扰的分析，即使在高浓度下、。

图5.反应的化学计量方法[2]，（0.125×10-4mol/L的解决方案）在568 nm处，串2并的方法[3]，（3 ×10-4mol/L的解决方案）在320 nm处，系列1的测定。