第三章 研究植物细胞与组织的一般技术
植物组织培养技术第三章第四章植物器官的培养
营养器官的培养——茎尖的培养 营养器官的培养——茎尖的培养
1、 取材 、
取1-2㎝顶梢 ①直接取材：在生长旺盛、枝 直接取材：在生长旺盛、 条健壮、 条健壮、无病的母株上选生 长不久、杂菌污染少的顶梢 长不久、 （1－2cm）（取前可喷杀菌 cm）（取前可喷杀菌 ）（ 药，可顶芽或侧芽）。 可顶芽或侧芽）。 ②从试管苗获取。 从试管苗获取。
第一节 一、离体根的培养 意义： （一） 意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种 营养器官的培养
营养器官的培养——根的培养 营养器官的培养——根的培养
（二） 培养方法 1. 培养基选择 White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基 培养基； 或 培养基 培养基 注：离体根生长要求 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好， 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入 B1、B6最重要 生长素对离体根影响不一致。 最重要， B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。培养 温度25 27℃，暗光培养。 25－ 温度25－27℃，暗光培养。
离 体 根
脱分化培养基
愈 伤 组 织
再分化培养基
分 化 芽
再 生 植 株
植物器官的培养
二、茎尖的培养
•1.茎尖培养概念及类型 1.茎尖培养概念及类型 1. •2.茎尖培养方法及步骤 2.茎尖培养方法及步骤 2.
营养器官的培养——茎尖的培养 营养器官的培养——茎尖的培养
（一）茎尖培养概念及类型
茎尖培养： 茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行 无菌培养。 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 微茎尖培养: 微茎尖培养 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过0.5mm 普通茎尖培养： 普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便， 茎尖容易成活，成苗所需时间短
细胞工程课件习题 答案
第三章植物组织与细胞培养的基本原理.一、单选题1、植物组织培养是建立在__ _理论基础上的。
A进化论 B植物细胞全能性 C基因决定论 D细胞多样性2、植物组织培养的培养基不含__ _。
A含 N物质 B碳源 C血清 D生长激素3、过滤除菌适用对象_ __。
A玻璃器皿 B塑料器皿 C金属器皿 D易被高温破坏的材料如抗生素、激素等试剂4、将___ 重新转移到成分相同的新鲜培养基上生长的过程称为继代培养。
A外殖体 B愈伤组织 C 生根苗 D 幼苗5、下列植物细胞全能性最高的是（）A. 形成层细胞B. 韧皮部细胞C. 木质部细胞D. 叶肉细胞6、植物组织培养过程中的脱分化是指（）A. 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B. 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C. 植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D. 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程三、判断题1、根尖、茎、芽、嫩叶、种子、花粉均是植物组织培养外殖体的来源。
( √ )2、一个细胞由分生状态转变为成熟状态的过程，叫脱分化。
( × )3、所有的植物培养材料都必须高压灭菌锅灭菌121℃、15分钟。
( × )4、继代培养的最适时间是愈伤组织的生长达到高峰期时。
（×）5、高温处理和低温处理均是控制胚状体同步化的方法（×）第四章植物离体无性繁殖和脱毒技术一、选择题（单选）1. 甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。
目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。
这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的 A. 有丝分裂 B. 分化 C. 减数分裂 D. 全能性2、人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体，包裹在含有养分和具有保护功能的物质中，并在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体。
下列与人工种子形成过程无关的是（）A．细胞的脱分化和再分化 B．细胞的全能性 C．细胞有丝分裂 D．细胞减数分裂3. 植物组织培养依据的原理，培养过程的顺序及诱导的植物激素分别是（）①体细胞全能性②离体植物器官，组织或细胞③根，芽④生长素和细胞分裂素⑤生长素和乙烯⑥愈伤组织⑦再分化⑧脱分化⑨植物体A. ①、②⑧⑥⑦③⑨、④B. ①、②⑦⑥⑧③⑨、⑤C. ①、⑥②⑨⑧③⑦、⑤D. ①、②⑨⑧⑥⑦③、④4. 有关细胞全能性的叙述中，不正确的是（）A. 受精卵在自然条件下能够使后代细胞形成完整的个体，全能性最高B. 卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高C. 生物体内细胞由于分化，全能性不能表达D. 植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性5、胚状体是在植物组织培养的哪一阶段上获得的（）A．愈伤组织 B．再分化 C．形成完整植株 D．取离体组织二、判断题1、无病毒苗（脱毒苗）就是植物体已没有病毒感染了（×）2、茎尖外植体的大小与脱毒效果成正比。
第3章细胞工程1植物细胞
1934年美国的White，利 用番茄根建立了第一个 活跃生长的无性繁殖系， 发现B族维生素对培养的 离体根生长具有重要作 用。
创立了White培养基。
1943年White发表了《植物组织培养手册》的专著，
使植物组织培养开始成为一门新兴的学科。
1939年，Gautheret连续培养胡萝卜根形 成层首次成功
植物激素
吲哚乙酸(IAA)，2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)，奈乙 酸(NAA)，
吲哚丁酸(IBA)。
生长素的生理效应： ①使胞壁酸化，增加可塑性，导致细胞伸长变； ②促进RNA和蛋白质的合成，保证可持续生长。
1948 年，Skoog和崔徵通 过对烟草茎切段和髓培养组 织的研究，确定了腺嘌呤／ 生长素的比例是控制芽和根 形成的主要条件之一。
F.Skoog
1956年Miller等发现了激动素。控制器官分 化的激素模式变为激动素／生长素的比例关系。
指出其能有力诱导愈伤组织分化,促进组培发展。
1958年，英国科学家Steward 等用进行悬浮培养，成功诱导出胚 状体并分化为完整的小植株，首次获得植株再生成功。使细胞 全能性理论得到证实，这是植物组培的第一次突破。
induction medium. Bar 2 mm. C Androgenic embryos formed on calli. Bar 4 mm. D Haploid plantlets regenerated from anthers. Bar 3 cm
Assani et al. Plant Cell Rep 2019, 21, 511–516
细胞全能性
已经分化的体细胞具有使后代细胞形成完整 个体的潜能，细胞的这种特性叫做细胞的全能 性。
植物细胞和组织实验ppt课件
六、作业
1．绘洋葱鳞叶表皮细胞2~3个，并注明各部 分名称。
2．绘马铃薯三种类型的淀粉粒图，并引注各 部分的名称。
图2-5 小麦颖果果皮
单纹孔
取新鲜红辣椒的表皮细胞，制片进行观察。在 视野中可看到细胞的初生壁加厚形似念珠状， 在相邻细胞壁上有许多小孔道的地方，这些念 珠状之间的孔道便是单纹孔。
6）后含物
蛋白质 ：高倍镜下观察蓖麻籽，
可见许多有色颗粒，即为糊 粉粒（图2-6）。在颗粒中包 含有多边形的晶体，即拟晶 体、圆球形晶体，即球晶体 （由蛋白质与鳞酸钙镁结合 而）。
图3—19 筛管、伴胞
5、分泌结构
⑴ 内分泌结构 取桔(Citrus limon
(Ｌ．) Burm f．)果皮 制片，可见到许多薄壁 细胞合成的圆形的腔状 结构，内有许多残余的 挥发油，此为分泌腔-内分泌结构（图3-20）。
图3—20 柠檬果皮切面一部分
⑵外分泌结构 取棉叶横切片观察，可见正对主脉下方的表皮上
8C）。
图2-9 马铃薯块茎—示淀粉粒形态
1)顶端分生组织 洋葱根尖纵切片
图3—1 黑藻芽纵切
3.分生组织:
1)顶端分生组织 洋葱根尖纵切片
根尖分区 取出小麦幼苗，用刀片截取0.5—1cm
长的幼根根尖（带有一部分根毛）， 用压片法制成临时玻片，在10×物镜 下观察，可见根尖顶端为一帽状结构， 这便是根冠；根冠以内可见有一部分 细胞纵向、横向细胞壁长度相近（中 央部分呈不透明的黄色），此区域称 分生区，也称生长点；分生区向后细 胞逐渐伸长，细胞纵向壁长度大于横 向壁，此区域即为伸长区；伸长区再 向后，可看到表皮细胞外壁向外突出 形成根毛，根的中央部分可观察到螺 纹、环纹导管及筛管分子，此即为根 毛区。 取洋葱根尖纵切片，仔细观察各区下 列细胞特征：
植物生物学实验技术掌握研究植物的实验方法和技术
植物生物学实验技术掌握研究植物的实验方法和技术植物生物学是研究植物的生理、生态和遗传等方面的科学。
要深入了解植物的生命活动，就需要掌握一定的实验方法和技术。
本文将介绍几种常用的植物生物学实验技术，帮助读者更好地开展植物科研工作。
一、组织培养技术组织培养是植物生物学研究中常用的实验技术之一，其主要目的是通过体外培养植物组织、细胞或器官，以探究植物的生长发育规律以及植物的分子与细胞机制等。
组织培养技术主要包括无菌技术、组织切分和培养基的制备等。
二、基因转化技术基因转化是将外源基因导入植物体内，使其在植物体内表达的技术。
通过基因转化技术，可以引入外源基因，改善植物的品质、抗逆性等性状，同时也有利于研究植物的基因功能。
常用的基因转化技术包括农杆菌介导的遗传转化和基因枪法等。
三、蛋白质组学技术蛋白质组学是研究植物蛋白质组成、结构和功能等方面的科学。
通过蛋白质组学技术，可以全面了解植物中各种蛋白质的表达情况、相互作用以及功能等信息。
常用的蛋白质组学技术包括二维凝胶电泳、质谱分析和蛋白质互作网络分析等。
四、分子标记技术分子标记技术是利用植物基因组中的特定序列进行物种鉴定、遗传连锁图谱构建和基因定位等的技术。
通过分子标记技术，可以对植物的遗传背景进行研究，推进植物育种和种质资源保护等工作。
常用的分子标记技术包括PCR、RAPD和SSR等。
五、光合作用测定技术光合作用是植物进行能量和有机物质合成的重要过程。
通过测定光合作用速率和光合色素的含量等指标，可以评估植物的光合能力和生长发育状态。
光合作用测定技术主要包括光合速率测定、气体交换测量和光合色素提取等。
六、荧光探针技术荧光探针技术是利用荧光信号来研究植物生理和生化过程的技术。
通过荧光探针技术，可以实时监测植物的氧化还原状态、酸碱平衡、离子浓度等生理生化过程。
常用的荧光探针技术包括叶绿素荧光测定、荧光染料标记和荧光显微镜观察等。
在进行植物生物学实验时，务必注意实验操作的准确性和可重复性。
植物细胞与组织的实验原理
植物细胞与组织的实验原理植物细胞和组织的实验原理涵盖了多个方面，包括细胞结构的观察、组织培养和细胞分离等。
以下是对植物细胞与组织实验原理的详细解释：一、植物细胞结构观察实验原理：1. 细胞质染色观察：通过荧光染料如卡伦登染料或结构染料如甲苯胺蓝B染色剂对细胞膜、细胞质和核等结构进行染色，然后通过荧光显微镜或透射电子显微镜观察和记录。
2. 细胞器观察：通过不同的实验方法，如细胞器标记、免疫荧光染色或电镜观察等，来观察植物细胞中的细胞器，如叶绿体、线粒体、高尔基体、内质网和液泡等。
3. 细胞膜透明化和显微观察：通过染色和脱水技术，将植物细胞膜透明化，然后使用显微镜观察细胞膜的形态结构和细胞器的位置，以了解细胞内部结构的分布情况。
4. 细胞骨架的观察：通过染色和显微镜观察，可以研究植物细胞骨架的组成和结构，如微丝、中间丝和微管等，同时也可以观察细胞骨架在细胞分裂和细胞形态变化中的作用。
二、植物组织培养实验原理：1. 组织培养基的配制：根据植物组织的生长需求，配制含有不同植物激素和养分的培养基，确保组织的生长和分化。
2. 组织的获取和处理：从植物的茎、叶、根等部位获取组织，并通过消毒处理获得无菌组织。
3. 组织培养和细胞分裂：将组织接种在含有培养基的培养皿中，在合适的温度、光照和湿度条件下培养，通过细胞分裂和组织分化来获得较大量的细胞和组织。
4. 细胞分化和组织再生：通过调节培养基中激素的类型和浓度，可以促进细胞分化和组织再生，形成新的植株。
三、植物细胞分离实验原理：1. 细胞溶解：将植物茎、叶、根等组织切碎，使用酶解液或溶解液对细胞进行溶解，以释放细胞内的物质。
2. 细胞筛选：通过离心和过滤等方法，将细胞的碎片和其他细胞组分分离出来，然后使用显微镜或流式细胞仪等设备对特定细胞进行观察和分析。
3. 细胞培养：将分离的细胞接种在含有培养基的培养皿中，促使细胞再次生长和分裂。
4. 细胞检测和分析：通过染色、免疫荧光染色、酶活性测定等方法，对分离的细胞进行检测和分析，以研究细胞的类型、结构和功能。
植物细胞学的研究内容和实验方法
植物细胞学的研究内容和实验方法植物细胞学是指研究植物细胞的结构、功能和生理过程等方面的学科。
细胞是构成生物体的基本单位，因此研究植物细胞的结构与功能，可以帮助我们更好地理解植物的生长、发育和代谢等重要生物学过程。
本文将介绍植物细胞学的研究内容以及一些常用的实验方法。
一、植物细胞学的研究内容植物细胞学的研究内容十分广泛，主要包括细胞结构、细胞分裂、细胞器和细胞代谢等方面。
以下是其中一些重要的研究内容：1. 细胞结构：植物细胞由细胞壁、质膜、质网、叶绿体、线粒体、高尔基体、内质网、核糖体等多个细胞器组成。
研究植物细胞结构可以揭示细胞各个组成部分的功能及其相互关系。
2. 细胞分裂：细胞分裂是用于生物体生长和繁殖的重要过程。
植物细胞学研究细胞分裂的各个阶段、分裂方式以及相关的调控机制等，可以揭示细胞分裂过程中的分子和遗传学变化。
3. 细胞器：植物细胞内的多个细胞器对植物的生长和代谢起着重要作用。
研究细胞器的结构、功能和代谢调控机制等内容，可以深入了解植物细胞的工作原理。
4. 细胞代谢：植物细胞是进行光合作用和物质代谢的重要场所，研究其代谢过程可以帮助我们更好地理解植物的营养需求和生长发育等关键生物学过程。
二、植物细胞学的实验方法在植物细胞学研究中，常用的实验方法有多种。
下面将介绍其中一些常见的实验方法：1. 细胞染色：细胞染色是观察细胞结构和细胞器的常用方法。
常用的细胞染色方法有荧光染色、吉姆萨染色和伊红染色等。
通过不同的染色方法可以使细胞器或细胞组织在显微镜下呈现出不同的颜色，从而帮助研究者观察和分析细胞的结构和分布等。
2. 细胞培养：细胞培养是将植物细胞放入培养基中，在合适的条件下进行体外培养。
细胞培养可以研究细胞的生长、分化和变异等过程。
常用的细胞培养技术包括悬浮培养、离体培养和组织培养等。
3. 显微镜观察：显微镜是植物细胞学研究的必备工具之一。
通过显微镜的放大镜头，可以观察到植物细胞的微观结构。
植物细胞工程的基本技术
思考与探究
• 1.为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学 家所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？
马铃薯—番茄没有像人们预想的那样地上长番茄、地 下结马铃薯，主要原因是：生物基因的表达不是孤立 的，它们之间是相互调控、相互影响的，所以马铃 薯—番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传 物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再 像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，杂 交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯就是很自然的 了。
制备原生质体：酶解法去掉细胞壁
诱导融合
新的原生质体
生出细胞壁
杂种细胞 筛选
组织培养
杂种植株 （同时具有两个物种的遗传性）
意义：克服远缘杂交不亲和的障碍、培育新品种
• 2.自然界中有一种含有叶绿体的原生动物 ──眼虫，说明植物的细胞器同样可以在某 些动物细胞中存活，请探讨：动物细胞与植 物细胞之间可以实现杂交吗？如果理论上可 行，请设计出具体实验方案。
植物细胞工程的基本技术
It is applicable to work report, lecture and teaching
应用的原理和方法
细胞生物学和 分子生物学
概念 研究的水平 研究的目的
细胞整体水平或细
胞器水平 按照人们的意愿来改
细
变细胞内的遗传物质 或获得细胞产品
胞
工
植物细胞工程
程
分类
演讲结束，谢谢大家支持
附PPT常用图标，方便大家提高工作效 率
生活
图标元素
医疗
图标元素
是（ B ）
A、愈伤组织的形成是离体植物细胞 分化的结果
B、愈伤组织的形成是离体植物细胞 分裂的结果
植物细胞与组织培养技术的优化与创新
植物细胞与组织培养技术的优化与创新植物细胞与组织培养技术是一种通过体外培养植物细胞或组织的方法，为科学家研究植物生长发育、遗传变异以及种子繁殖提供了便利。
随着科技的不断进步，植物细胞与组织培养技术也在不断地优化与创新。
本文将探讨植物细胞与组织培养技术的优化与创新，并介绍一些相关的应用。
一、培养基的优化培养基是植物细胞与组织培养的基础，其成分和配方的优化对于培养结果的影响至关重要。
近年来，随着对植物生长调控机制的研究深入，一些生长因子和植物激素的加入成为培养基优化的热门方向。
例如，添加生长因子如细胞分裂素和生长素可以促进植物细胞的分裂和伸长，从而提高培养效果。
此外，调节培养基的pH值、添加适量的营养物质等也可以有效提高培养基的质量。
二、外植体的选择和准备在植物细胞与组织培养中，外植体的选择和准备对于培养效果具有重要影响。
外植体是从植物组织中分离出来的初始材料，在培养中作为种子输入系统的移植物的主要来源。
为了提高培养效果，科学家们通过优化外植体的选择和准备流程来提高培养效率。
例如，选择生长健康、无病害的外植体，并通过适当的消毒等处理减少外植体的污染，可以显著提高培养的成功率。
三、生物体外胚胎发育技术生物体外胚胎发育技术是植物组织培养技术中的一项重要创新。
它通过体外培养，将植物胚胎发育过程模拟于实验室中，从而实现植物的无性繁殖。
这项技术的应用在植物育种和植物繁殖中具有广泛的前景。
通过优化培养条件和培养基的配方，可以实现植物大量繁殖和育种的需要，提高植物的产量和品质。
四、基因转化技术的应用基因转化技术是将外源基因导入到植物细胞中，使其表达出新的特性，从而对植物进行改造的一种技术手段。
这种技术的应用在植物品种改良和农田物种改进方面具有重要意义。
通过优化载体构建、转化方法等关键环节，可以提高转化效率和基因稳定性，为植物种质资源的改良提供了有效的手段。
总结起来，植物细胞与组织培养技术的优化和创新对于植物繁殖、育种以及基因改良具有重要意义。
植物细胞工程的基本技术
实验：萝卜的组织培养
切取 形成层
移栽
无菌 脱分化 接种
培养室
诱导愈伤织 的形成
再分化
试管苗的形成
1、过程：
外植体
离体的植物器官、组织或细胞
脱分化
愈伤组织 再分化
植物激素： 细胞分裂素、生长素
胚状体
根、芽
植物体
想一想： 植物细胞体现出全能性的必要条件是 什么？
2、植物细胞体现出全能性的必要条件： 离体、一定的营养物质、激 素和其它外界条件
2、因素：
生物体的每一种细胞都含本物种的 全套遗传物质，都有发育成完整个 体的全套基因。
3、在特定的时间和空间条件下，细胞中 的基因会有选择性地体现出多个蛋白质， 从而构成生物体的不同组织器官。（基因 的选择性体现）
*4、全能性大小：
1）受精卵 ＞生殖细胞 ＞ 体细胞
2）植物细胞全能性普通比动物细胞强
优点：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种。
未解决的问题：不能让杂种植物按照人们的 需要体现出亲代的优良性状。
“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想 像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯，为什么？
重要因素是：生物基因的体现不是孤立的，它 们之间是互相调控、互相影响的，马铃薯—番茄杂 交植株的细胞中即使含有两个物种的遗传物质，但 这些遗传物质的体现受到互相干扰，不能再像马铃 薯或番茄植株中的遗传物质同样有序体现，因此杂 交植株不能地上长番茄、分裂
杂种细胞
愈伤组织
植物组织培养
杂种植株
2、概念
将不同种的植物体细胞，在一定条件下 融合成杂种细胞，并把杂种细胞哺育成新的 植物体的技术。
3、原理：
细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
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第三章研究植物细胞与组织的一般技术•一光学显微镜
•(一) 普通光学显微镜: 观察细微结构.
•(二) 相差显微镜: 观察未染色的活体组织和细胞结构.
•(三) 暗视野显微镜:观察几何轮廓,分辨不清内部的细微结构.
•(四) 荧光显微镜:观察固定的切片标本或活体染色的活细胞.
•(五) 倒置显微镜:组织培养、细胞离体培养、浮游生物等的显微观察．
•（六）微分干涉相差显微镜：观察无色透明活体标本的细微结构、无色荧光标本、染色标本及显微操作等．
•（七）偏光显微镜：鉴别纤维、染色体、纺锤丝、淀粉粒、细胞壁、晶体等•（八）体视显微镜：观察和解剖植物的根、茎、叶、花、果实等器官和各种表皮组织．
•（九）激光共焦点扫描显微镜：进行亚细胞水平的观察．
•二电子显微镜
•１用电子束代替了照明光线；
•２用静电透镜和磁透镜代替了玻璃聚光镜、物镜和目镜；
•３分辨率和放大倍数比光学显微镜提高了１０００倍．
•（一）透射电子显微镜：观察亚细胞的精细结构．
•（二）扫描电子显微镜：观察样品表面的形貌特征．
第二节研究植物细胞或组织常用的技术与方法
•一植物细胞化学和免疫细胞化学
•(一) 植物细胞化学:
•据已知的化学反应,在细胞原位上借助于化学反应定位显示出该细胞中的化学成分、性质和变化规律, 从而将结构和机能更紧密地联系在一起.
•显示细胞内的化学物质, 有:
•蛋白质;
•核酸;
•糖类;
•酶;
•生物胺;
•特异抗原;
•无机盐和微量元素.
•(二) 免疫细胞化学
•根据免疫学原理, 用抗原抗体反应在原位上确定组织细胞结构的化学成分和化学性质.
•研究细胞内蛋白质分子定位的重要技术.
•二细胞组织分离技术
•研究不同植物组织细胞或细胞组分的形态结构、生理功能和理化性质等.
•三植物制片技术
•(一) 徒手切片法
•简单易行, 可做活体或鉴定观察.
•取材：
•切片：完整、均匀、近于半透明的薄片。
•固定：70％的乙醇固定15－30分钟。
•染色、脱水、透明、封片：
•整理、贴标签。
•(二) 石蜡制片法：可连续切片；
•观察植物体内部细微结构和组织发育动态过程。
•材料：
•固定:
•脱水与过渡：
•透蜡与包埋：
•切片：
•贴片与干片：
•脱蜡、染色：
•透明、封片：
•(三) 冰冻切片技术
•(四) 树脂切片法
•了解细胞的精细结构
•取材：
•固定：
•清洗：
•脱水：
•渗透：
•包埋、聚合：
•切片：
•染色：。