微生物学第03章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

①季铵盐类 （苯扎溴铵） ②氯已定 ③高锰酸钾
固体二氧化氯消毒剂
消毒灭菌的运用
（一）医疗器械物品的消毒灭菌 1.高危器械物品
用时需进入无菌组织的物品。所有这些物 品都应该灭菌。如针头、注射器、手术器械、 注射液体、敷料、静脉导管和尿道插管等。
2.中危器械物品
用时不进入无菌组织，但接触黏膜的器械。 采用消毒即可。如呼吸机、麻醉机、胃镜、支 气管镜、阴道窥器、体温计和口腔器械等等。
第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况 下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险 有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具 备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病 的微生物。如小鼠白血病病毒等。 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。
二、病原微生物实验室的分级
物理消毒灭菌法
热力、辐射、滤过、干燥和低温
化学消毒灭菌法
使用化学消毒剂
一、物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法
1.干热灭菌法
杀菌机制：使菌体脱水干燥、大分子变性。
杀 菌条 件 ： 80 ~1 0 0 ℃ 1 h 可杀 死 繁 殖 体 ，
160~170 ℃ 2h 可杀死芽胞。
常用方法
焚烧----最彻底的灭菌方法
①含氯消毒剂（次氯酸钠、二氯异氰酸尿酸钠和漂白 粉）②过氧化物消毒剂（过氧化氢、过氧乙酸） ③醛类消 毒剂 （戊二醛、甲醛） ④环氧乙烷
2.中效消毒剂 （intermediate-level disinfectants）
①含碘消毒剂（碘酊、碘伏） ②醇类消毒剂（乙醇、 异丙醇）
3.低效消毒剂 （low-level disinfectants）

灭菌条件
103.4kPa、121.3 ℃、15～30min

应用范围
耐高温、耐湿的物品

注意
（手术器械、敷料、培养基） 排完冷空气;防治物品多，摆放拥挤;安全阀 的使用
高压蒸汽灭菌锅
（二）辐射杀菌法 1.紫外线
杀菌波长 ：波长240～300nm的紫外线具有 杀菌作用265～266nm杀菌能力最强。 杀菌机制：使胸腺嘧啶形成二聚体，干 扰DNA的复制与转录。 特点：穿透力弱。 用途：空气、物品表面消毒。 注意：紫外线对眼睛、皮肤有损伤作用
（五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌
50g∕L次氯酸钠、漂白粉等。
（六）病人污染物品的消毒
日常生活用具：煮沸、 0.5%过氧乙酸浸泡。 家具： 0.2 %～0.5 %过氧乙酸。
（七）饮水的消毒
自来水：氯气、漂白粉。
（八）环境的消毒
影响消毒灭菌效果的因素
一、微生物的种类 二、微生物的物理状态 三、微生物的数量 四、消毒剂性质、浓度与作用时间 五、温度 六、酸碱度 七、有机物
用途
牛奶、酒类、饮料
煮沸消毒法

原理
利用一个大气压下，水的煮沸温度为100 ℃

灭菌条件
水煮100 ℃ ，5min(繁殖体)~2h(芽胞)

应用范围
耐热，不怕湿的物品。 食具、刀剪、注射 器（在水中加入2％的碳酸钠可防治金属 器皿生锈）
流通蒸汽消毒法

原理
利用一个大气压下100 ℃的水蒸气进行消毒
第五节 ization）：杀灭物体 上所有微生物的方法。包括细菌芽胞、 病毒和霉菌在内的全部病原微生物和非 病原微生物。 消毒（ disinfection ）：杀死物体 上或环境中的病原微生物、并不一定能 杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。
（三）手和皮肤的消毒
人体手上的细菌可分为暂住菌和常住菌两大类。 用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。常用的有75% 酒精、0.2%过氧乙酸、0.4 %～0.5 %氯已定溶液等。
（四）黏膜的消毒
口 腔 黏 膜 3% 过 氧 化 氢 、 尿 道 、 阴 道 、 膀 胱 0.1%～0.5%氯已定。
废弃物、尸体
烧灼----直接用火焰灭菌方法
接种环、试管口
干烤----加热160-170℃ 2h
玻璃器皿、瓷器
2. 湿热灭菌法
杀菌机制：在水分子存在情况下更易
于使菌体蛋白凝固，热力穿透性更强。
常用方法
巴氏消毒法
煮沸消毒法
流通蒸汽消毒法 间歇蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌法
巴氏消毒法
概念 方法
利用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微 生物，保持物品中所需的不耐热成分不被破 坏的消毒方法 61.1～62.8 ℃ ，30min 71.7 ，15～30s
一、病原微生物的分类
根据传染性、感染后对个体或者群体的危 害程度，病原微生物分为四类： 第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾 病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布 消灭的微生物。
第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病， 比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、 动物与动物间传播的微生物。
一、病原微生物的分类
监督的主要内容是监督病原微 生物实验室执行国家有关法律、行 政法规、国家标准和要求的记录、 档案及报告的情况。
法律责任的核心是承担造成传 染病传播、流行或者其他严重后果 的法律责任。
思考题




常用的消毒剂有哪些种类? 简述化学消毒剂的杀菌机制。 湿热灭菌有哪些方法? 各有何用途? 筒述紫外线杀菌的作用机制和注意事项。 在温度和时间相同的情况下，为什么湿热 灭菌法的效果比干热法好? 当从事病原生物学安全实验室工作时，应 考虑哪些与生物安全相关的问题？
实验室应有科学、严格的管理制度，定 期对实验室设施设备、材料等进行检查、维 护和更新，应对废水、废气以及其他废物进 行合理处置，防止环境污染。
生物安全
三、实验室感染的控制以及 监督和法律责任
实验室感染控制工作包括定期检查实验室的 生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本 保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和 废气以及其他废物处置等实施情况。 实验室发生高致病性病原微生物泄漏时， 预防、控制措施包括：①封闭被病原微生物污 染的实验室或可能造成病原微生物扩散的场所； ②开展流行病学调查；③对病人进行隔离治疗， 对相关人员进行医学检查；④对密切接触者进 行医学观察；⑤进行现场消毒；⑥对染疫或者 疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。
2.电离辐射
包括高速电子、X射线和 γ 射线 杀菌机理： 产生游离基，破坏DNA 特点：穿透力强，不破坏营养。 适用：塑料、食品、药品和生物制品消 毒灭菌。
3.微波
使物品发热。
（三）滤过除菌法
原理 用物理阻留的方法除去液体或空气中的细
菌、真菌,以达到除菌目的。
滤菌器 含有微细小孔0.1～ 0.45微米,只允许液体
一、二级实验室不得从事高致病性 病原微生物实验活动。三级、四级实验 室从事高致病性病原微生物实验活动。 从事高致病性病原微生物相关实验 活动应当有２名以上的工作人员共同进 行。在同一个实验室的同一个独立安全 区域内，只能同时从事一种高致病性病 原微生物的相关实验活动。应有健全安 全保卫制度 。
实验室工作人员应掌握实验室技术规范、 操作规程、生物安全防护知识和实际操作技 能。应有符合要求的防护用品，应建立健康 档案；进行预防接种。
表面活性剂、脂溶剂：增加菌细胞表面
张力，并增加其通透性使细菌破裂。 注意：大多对人体组织有害，只能外用 或环境消毒。
（二）消毒剂的应用
种类 使用浓度 用途
石炭酸 乙醇
3%-5% 70%-75%
地面、器具表面、皮肤消毒 皮肤、体温计消毒
皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒 皮肤、粘膜、小创伤消毒
高锰酸甲 0.1% 红汞 2%
硫柳汞
0.1%
皮肤消毒、手术部位消毒
过氧乙酸 0.2%-0.3% 塑料、玻璃器材消毒 碘酒 2%-2.5% 皮肤消毒 手术洗手、浸泡手术器械 浅表创伤消毒
新洁而灭 0.05%-1% 龙胆紫 2%-4%
（三）化学消毒剂按其杀菌能力分三大类
1.高效消毒剂 （high-level disinfectants）
防腐（antisepsis）：防止或抑 制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。 清洁（cleaning）：是指通过除去 尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过 程。 无菌（asepsis）和无菌操作：无 菌是无活菌的意思，多是灭菌的结果。 防止细菌进入人体或其它物品的操作技 术，称为无菌操作。
消毒灭菌的方法
病原微生物所致的安全问题，如病原微 生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐 怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社 会所面临的最现实的生物安全问题。
病原微生物实验室生物安全的核心是 防扩散和防感染。 关于病原微生物实验室生物安全，我 国法令包括对病原微生物的分类管理，对实 验室的分级管理，实验室感染的控制以及监 督和法律责任等。
或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不 能通过 。
用途
血清、毒素、抗生素以及药液的除菌
注意：病毒、支原体、某些L型细菌可以
通过滤菌器
滤器和层流室
（四）干燥与低温抑菌法
不耐干燥的微生物。 低温一般不能杀死细菌。 冷冻真空干燥法：在低温状态下真空抽去水分
用 途
保存菌种
化学消毒灭菌法
消毒剂的种类
酚类、醇类、重金属盐类、 氧化剂、表面活性剂
病原微生物实验室生物安全
生物安全（biosafety）是生物技 术安全（safety of biotechnology） 的简称。 狭义地指现代生物技术的研究、 开发、应用及转基因生物可能对生物 多样性、生态环境和人类健康产生潜 在的危害。 广义地指与生物有关的各种因素 对社会、经济、人类健康及生态环境 所产生的危害或潜在风险。
2.干扰细菌的酶系统和代谢 to interfere enzymatic system and metabolism of bacterium