常见致病菌的分类
食品致病菌检测
食品致病菌快速检测技术 时间:2004-05-11 10:24:00 来源:食品商务网 沙门氏菌、李斯特氏菌、大肠杆菌O157、弯曲杆菌等食物致病菌已成为危害食品安全的头号杀手。如何快速而准确地检测这些致病菌，是有效遏制这些杀手、确保食品安全的首要任务。 常规食品微生物检测方法包括反复增菌、菌落分离及多种生化和血清学鉴别实验，不仅步骤复杂，而且耗费时间，难以适应飞速发展的现代食品生产和流通领域。因此为了确保食品的安全性，开发快速检测致病菌的方法非常重要。 随着生物、化学、材料科学以及计算机领域的进步，新的快速检测和识别方法层出不穷，这些方法主要包括微量生化试剂盒、抗原－抗体检测、DNA检测，以及常规检测的改进方法。微量生化试剂盒主要用于食品微生物的纯培养的生化鉴别上，与常规方法原理相同。一般是特别针对肠道菌或非肠道菌（如弯曲杆菌、李斯特氏菌、厌氧菌、非发酵性G－菌和G ＋菌）而设计，采用鉴别某种微生物的多种微量培养基及底物，其结果可人工识读；如结合自动保温、监测并记录设备，再与计算机中储存的数据库比较而自动鉴别的话，则可进行多样品大规模快速检测。 DNA检测方法包括应用探针、PCR技术和噬菌体技术，这些检测方法已商品化。探针检测一般是检测rRNA，因其rRNA在细菌中的高拷贝数，无须扩增，检测灵敏。PCR技术是用小片段的 DNA探针或引物，与特异性模板杂交，并用Taq酶扩增。几次循环后，PCR可以在2h 内扩增单拷贝DNA到1百万倍，所以从理论上说无须增菌培养。但由于食品和培养基中存在的抑制剂，可能阻止引物连接和减低扩增效率，所以在检测食品时，还是需要在检测前先进行增菌培养。应用噬菌体对其宿主的高度专一性的特点，进行食品致病菌的检测的实例就是沙门氏菌的检测，其中所使用的噬菌体经过基因工程改造而携带有可检测标记。如有沙门氏菌存在，此噬菌体将标记带给宿主并表达，从而被检出。 抗体检测方法是利用抗原－抗体的高度专一性结合的特点。由于反应简单和易操作，现已开发了许多方法用于食品检测。最简单的是乳胶凝集（LA），此法采用抗体包埋的有颜色的乳胶珠或胶体金颗粒，用于从食品中分离的纯培养的快速血清学识别或分型，LA的改良方法是反向被动乳胶凝集（RPLA），法常用于检测食品萃取液中的毒素。例如，食品中金黄色葡萄球菌即可采用此法检出：葡萄球菌的表面存在A蛋白，具有种属特异性，该A 蛋白能与人及多种哺乳动物的免疫球蛋白IgG的Fc段结合，因此可采用IgG包埋的乳胶颗粒，结合血浆纤维蛋白原与凝集因子的凝集反应，来检测金葡菌的有无。 酶联免疫分析（ELISA）是食品病原菌检测最常用的抗体分析方法。常设计成“三明治夹心”实验：固体基质上连接抗体，用来捕获增菌培养物中的抗原，与酶相连的第二抗体用于检测。塑料微孔板的侧壁、涂抹棒等检测用具常作为固体基质。在食品微生物检测的国家标准中，金葡菌肠毒素即是采用此法检出的。 免疫沉淀或免疫层析也是采用“夹心法”，但是没有采用酶连接物，而是用耦联在有色乳胶珠或胶体金上的抗体来检测。该方法简便易行，无须洗涤或操作，在获得增菌样品后，短短十来分钟即可完成。现已商品化的李斯特氏菌检测试剂盒即采用此方法。 此外，用含脱水培养基的一次性板卡，以替代传统的琼脂平板；用荧光法检测细菌ATP，以快速在线检测细菌总数；将生色物质和荧光物质加入到培养基内，以快速检测特征酶活力———这些方法，在食品微生物的快速检测中都已成为常用方法。 快速方法的优点是可从大量食品样品中快速筛选某致病菌或毒素。但要注意的是，快速
常见致病菌的检测
常见致病菌的检测 摘要：近年来食品药品安全的问题屡见不鲜，做好致病菌的检测，是防范于未然的措施，因而显得尤为的重要，也越来越受到人们的重视。这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。 关键词：致病菌，肠球菌，霉菌和酵母菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌。一.肠球菌 （1）、形态与染色【1】 肠球菌为革兰阳性（G+）球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。本菌对营养要求较高，在含有血清的培养基上生长良好。 （3）致病性【1】 一般而言，肠球菌的毒力不高。与金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌相比，肠球菌对大多数动物的半数致死量（LD50）值相当高，而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。 肠球菌只有在宿主组织寄殖，耐机体非特异及免疫防御机制，并引起病理改变，才能导致感染。粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素，吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。另外，肠球菌可产生一种聚合物质（系一种蛋白表面物质，可聚集供体与受体菌，以利质粒转移），在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。 细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。血清中生长的肠球菌与多形核白细胞反应较弱，而肉汤中生长的细菌反应较强。体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与，而抗肠球菌抗体可增强该作用。 （4）、肠球菌属主要检测步骤如下：【2】 方法一：肠球菌平板计数法检验程序 25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水
常见病原菌
葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌 生物学特性： 1．形态：G+，球形，葡萄状，0.4～1.2 m 2．培养：色素、耐盐 3．抗原构造：SPA 4．分类：金黄色葡萄球菌；表皮葡萄球菌；腐生葡萄球菌 5．抵抗力：强；易耐药 致病性： 1、致病物质：血浆凝固酶；溶血素；杀白细胞素；肠毒素 2、所致疾病：化脓性炎症；食物中毒；假膜性肠炎 防治原则：注意个人卫生；严格无菌操作；加强食品监督；合理使用抗生素。 链球菌 乙型溶血性链球菌 生物学特性： 1、形态：G+，球形,链状,0.5～1.0 m 2、培养：血平板 3、分类： 1) 根据溶血现象分： 甲型溶血性链球菌：草绿色溶血环。条件致病菌 乙型溶血性链球菌：透明宽大溶血环。致病性强 丙型链球菌：无溶血环。无致病性 2) 依细胞壁多糖抗原不同分：A、B、C、D等20个群，致病链球菌株90%属A群 4、抵抗力：不强 致病性： 1、致病物质： （1）菌体表面物质：M蛋白；脂磷壁酸 （2）毒素： 1）链球菌溶血素： SLO：对氧敏感,免疫原性强,感染后血中可出现溶血毒素O抗体； SLS：对氧稳定; 免疫原性弱,与溶血环有关 2）致热外毒素（红疹毒素或猩红热毒素） （3）侵袭性酶：透明质酸酶；链激酶；链道酶。 使链球菌的感染容易扩散且脓汁稀薄。 2、所致疾病 （1）乙型溶血性链球菌：化脓性疾病；中毒性疾病（猩红热）；超敏反应性疾病如风湿热、急性肾小球肾炎（2）甲型溶血性链球菌： 条件致病菌，引起亚急性细菌性心内膜炎 防治原则： 1、讲究卫生，及时治疗病人和带菌者，减少传染源。 2、彻底治疗咽峡炎、扁桃体炎，以防止急性肾小球肾炎、风湿热、亚急性细菌性心内膜炎。 3、治疗链球菌感染性疾病首选青霉素G。 肺炎链球菌 生物学特性： 1、形态：G+ ，矛头状,钝端相对,成双排列,荚膜 2、培养：血平板，自溶现象 3、生化反应：胆汁溶菌试验阳性，菊糖分解试验阳性 4、抗抗力：弱 致病性： 主要致病物质：荚膜
食品中常规致病菌快速检测(恒温扩增芯片法)
食品中常规致病菌快速检测（恒温扩增芯片法） 1范围 本标准规定了食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、阪崎肠杆菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌和侵袭性大肠埃希氏菌的快速检测方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、阪崎肠杆菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌和侵袭性大肠埃希氏菌的快速检测。 2术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 微流控芯片microfluidic chip 利用微加工技术，在硅、石英玻璃或高分子材料等基质上加工出各种微细结构，如管道、反应池、微泵、微阀等功能单元，进行样品的处理和分子的微系统。 3设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1冰箱：2℃~5℃、-20℃±5℃。 3.2恒温培养箱：36℃±1℃。 3.3均质器。 3.4漩涡震荡仪。 3.5电子天平：感量0.1g。 3.6水浴锅：能升温至95℃。 3.7高速离心机：12000rpm/分钟。 3.8瞬时离心机。 3.9生物安全柜。 3.10微型分光光度计。 3.11恒温扩增仪。 3.12微流控芯片。 3.13低速离心机。 3.14微量移液器。 3.15无菌离心管：1.5ml、200ul。 3.16无菌吸管：50ml。 3.17锥形瓶：容量1000ml、500ml。 3.18量筒：容量500ml。 3.19擦镜纸。
4 培养基和试剂 4.1食源性致病菌加强型培养基：配置方法见附录A 中A.1。4.2适用型核酸提取试剂盒。 4.3生理盐水：配置方法见附录A 中A.2。 4.4 适用型核酸检测试剂盒（生物芯片法）：碟式芯片结构示意图，见图 1。 图1 碟式芯片结构示意图 5 检测程序 食品中常规致病菌的快速检测程序，见图2。 样本前处理 25g （mL ）样品+225mL 食源性共増菌培养基36℃±1℃，16h ～20h 取100ul 共増菌培养液收集菌体，提取核酸浓度范围50pg/ul~50ng/ul 配置反应体系，上芯片上机 芯片离心 样本
人体各部位常见的致病菌
人体各部位常见的致病菌 一、人体中的常见的致病菌： 1、葡萄球菌： 属革兰氏阳性球菌。是人体皮肤上寄居最多的致病菌，也见于鼻咽等处。金黄色葡萄球菌致病力最强，主要产生溶血素、杀白细胞素和血浆凝固酶等，造成许多种感染，如疖、痈、脓肿和伤口感染等。金黄色葡萄球菌感染的特点是局限性组织坏死，脓液稠厚、黄色、不臭。也能引起全身性感染。 2、链球菌： 属革兰氏染色阳性球菌。存在于口、鼻、咽和肠腔内。链球菌的种类很多，溶血性链球菌、绿色链球菌和粪链球菌是常见的致病菌。溶血性链球菌能产生溶血素和透明质酸酶、链激酶等，溶解破坏细胞间质中的透明质酸、纤维蛋白和其他蛋白质，使炎症易扩散而缺乏局限化的倾向。脓液特点是比较稀薄，淡红色，量较多。典型的感染是急性蜂窝织炎、淋巴管炎等。绿色链球菌是一些胆道感染和亚急性心内膜炎的致病菌。粪链球菌属厌氧菌，常和大肠杆菌一同引起混合感染。 3、大肠杆菌： 革兰氏染色阴性。寄居于肠道内。对维生素K的合成有重要作用。它的单独致病力不大，若和其他致病菌在一起时，可造成严重的混合感染，如大面积烧伤感染、阑尾脓肿、急性胆囊炎等，产生的脓液稠厚，有粪臭。 4、绿脓杆菌： 革兰氏染色阴性。常寄居于肠道和皮肤上，它对大多数抗菌药物不敏感，故成为继发感染中的重要致病菌，特别是大面积烧伤感染时，可引起难以控制的绿脓杆菌败血症。绿脓杆菌感染的伤口常不易愈合，其脓液呈淡绿色，有腥臭味。 5、变形杆菌： 革兰氏染色阴性。存在于肠道和前尿道，为尿路感染、急性腹膜炎和大面积烧伤感染的致病菌之一。变形杆菌对大多数抗菌药物有耐药性。脓液具有特殊的恶臭。 6、无芽胞厌氧菌： 革兰氏染色阴性的专性厌氧菌。在一般外科感染中，此类细菌为重要的病原体之一。具有临床意义的有脆弱类杆菌、核梭形菌、消化球菌和消化链球菌等多种。这些无芽胞厌氧菌寄生在人体内的腔道，特别是胃肠道（结肠内的数量最多）、口腔、阴道等处。它们与需氧菌共同构成机体的正常菌群。正常情况下保持菌群相对平衡，对人体无害。其致病条件是：当某些原因（如血液供应障碍、组织坏死、需氧菌共生等）造成局部组织的氧化还原电势降低，便有利于无芽胞厌氧菌的繁殖。在机体许多封闭部位，单纯厌氧菌可造成感染，但多数厌氧菌是与其他需氧菌共生而引起感染的。厌氧菌感染脓液有恶臭。目前有效的治疗药是甲硝哒哇（灭滴灵）。 二、食品中常见的致病菌： 1、肉毒杆菌： 偏爱高蛋白食物。肉毒杆菌是自然界广泛存在的一种细菌，在土壤、动物粪便等地方经常可以见到它。它尤其喜欢肉肠、火腿等富含蛋白质的食品，同时在豆制品和煮熟的黄豆、豆酱类食品中也可能含有。在我国的新疆、青海等少数民族地区，几乎每年都会出现因自制发酵肉制品而导致中毒甚至死亡的事件。 2、沙门氏菌： 多在动物性食品中出现。它是导致我国食物中毒的主要元凶之一，通常寄居在人或动物肠道内。它主要污染动物性食品，包括禽畜类、蛋类、奶类及其制品，如果没有彻底加热，则可能感染。美国曾多次出现大规模沙门氏菌污染事件，包括鸡蛋等。
牛奶中三种常见食源性致病菌快速检测方法的建立
牛奶中三种常见食源性致病菌快速检测方法的建立食源性疾病是全球最重要的公共卫生问题之一,导致食源性疾病的有病原微生物、寄生虫及其代谢产物、天然毒素以及化学性有毒有害物质等等。微生物引起的食源性疾病是全球食品安全面临的最重要挑战之一。 在发达国家70%～80%的细菌性食物中毒是由沙门氏菌引起的,在我国甚至 达到90%;引起沙门氏菌中毒的食品中,蛋类、奶类等动物性产品约占90%,沙门氏菌生存能力较强,可在乳制品中生存几个月。单增李斯特菌广泛存在于自然界中,且在冷藏温度4℃下依然能够生长,引起单增李斯特菌食物中毒的食品主要有: 奶及奶制品、肉制品、水产品、蔬菜及水果,其中以乳制品最为常见,单增李斯特菌能够给高风险人群带来严重的感染性疾病。 志贺氏菌又称痢疾杆菌,是引起人类细菌性痢疾中最为常见的食源性致病菌,该菌也是食品卫生相关法规及标准中要求必须检测的项目之一。本文以牛奶中常见的食源性致病菌单增李斯特菌、沙门氏菌和志贺氏菌为目标菌种,利用环介导等温扩增技术和高分辨率熔解曲线技术建立了多重LAMP检测体系和多重 HAND-HRM检测体系,结果如下:1.针对单增李斯特菌溶血素蛋白(hly)基因、沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因和志贺氏菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)序列的高度保守序列设计引物,通过引物筛选分别建立了三种食源性致病菌的LAMP反应体系。 进一步经过引物筛选,及对影响反应效率和特异性的镁离子浓度、甜菜碱浓度、引物浓度进行优化,建立了多重LAMP反应体系。对多重LAMP反应体系进行特异性和灵敏度检测。 在特异性检测中含有目标菌的模板出现扩增,空白对照和非目标菌均未发生特异性扩增,提示该多重LAMP反应体系特异性强。在灵敏度检测中单增李斯特菌
生活中有哪些常见的致病菌
生活中有哪些常见的致病菌 一、人体中的常见的致病菌: 1、葡萄球菌: 属革兰氏阳性球菌。就是人体皮肤上寄居最多的致病菌,也见于鼻咽等处。金黄色葡萄球菌致病力最强,主要产生溶血素、杀白细胞素与血浆凝固酶等,造成许多种感染,如疖、痈、脓肿与伤口感染等。金黄色葡萄球菌感染的特点就是局限性组织坏死,脓液稠厚、黄色、不臭。也能引起全身性感染。 2、链球菌: 属革兰氏染色阳性球菌。存在于口、鼻、咽与肠腔内。链球菌的种类很多,溶血性链球菌、绿色链球菌与粪链球菌就是常见的致病菌。溶血性链球菌能产生溶血素与透明质酸酶、链激酶等,溶解破坏细胞间质中的透明质酸、纤维蛋白与其她蛋白质,使炎症易扩散而缺乏局限化的倾向。脓液特点就是比较稀薄,淡红色,量较多。典型的感染就是急性蜂窝织炎、淋巴管炎等。绿色链球菌就是一些胆道感染与亚急性心内膜炎的致病菌。粪链球菌属厌氧菌,常与大肠杆菌一同引起混合感染。 3、大肠杆菌: 革兰氏染色阴性。寄居于肠道内。对维生素K的合成有重要作用。它的单独致病力不大,若与其她致病菌在一起时,可造成严重的混合感染,如大面积烧伤感染、阑尾脓肿、急性胆囊炎等,产生的脓液稠厚,有粪臭。 4、绿脓杆菌: 革兰氏染色阴性。常寄居于肠道与皮肤上,它对大多数抗菌药物不敏感,故成为继发感染中的重要致病菌,特别就是大面积烧伤感染时,可引起难以控制的绿脓杆菌败血症。绿脓杆菌感染的伤口常不易愈合,其脓液呈淡绿色,有腥臭味。 5、变形杆菌: 革兰氏染色阴性。存在于肠道与前尿道,为尿路感染、急性腹膜炎与大面积烧伤感染的致病菌之一。变形杆菌对大多数抗菌药物有耐药性。脓液具有特殊的恶臭。 6、无芽胞厌氧菌: 革兰氏染色阴性的专性厌氧菌。在一般外科感染中,此类细菌为重要的病原体之一。具有临床意义的有脆弱类杆菌、核梭形菌、消化球菌与消化链球菌等多种。这些无芽胞厌氧菌寄生在人体内的腔道,特别就是胃肠道(结肠内的数量最多)、口腔、阴道等处。它们与需氧菌共同构成机体的正常菌群。正常情况下保持菌群相对平衡,对人体无害。其致病条件就是:当某些原因(如血液供应障碍、组织坏死、需氧菌共生等)造成局部组织的氧化还原电势降低,便有利于无芽胞厌氧菌的繁殖。在机体许多封闭部位,单纯厌氧菌可造成感染,但多数厌氧菌就是与其她需氧菌共生而引起感染的。厌氧菌感染脓液有恶臭。目前有效的治疗药就是甲硝哒哇(灭滴灵)。 二、食品中常见的致病菌: 1、肉毒杆菌: 偏爱高蛋白食物。肉毒杆菌就是自然界广泛存在的一种细菌,在土壤、动物粪便等地方经常可以见到它。它尤其喜欢肉肠、火腿等富含蛋白质的食品,同时在豆制品与煮熟的黄豆、豆酱类食品中也可能含有。在我国的新疆、青海等少数民族地区,几乎每年都会出现因自制发酵肉制品而导致中毒甚至死亡的事件。 2、沙门氏菌: 多在动物性食品中出现。它就是导致我国食物中毒的主要元凶之一,通常寄居在人或动物肠道内。它主要污染动物性食品,包括禽畜类、蛋类、奶类及其制品,如果没有彻底加热,则可能感染。美国曾多次出现大规模沙门氏菌污染事件,包括鸡蛋等。 3、金黄色葡萄球菌:
食源性致病菌快速检测方法研究报告
食源性致病菌快速检测方法研究报告 发表时间：2011-05-13T14:13:40.207Z 来源：《中外健康文摘》2011年第5期作者：高友中 [导读] 目的应用酶联免疫吸附实验（ELISA）快速检测奶类及肉类制品中沙门菌。 高友中（湖南省岳阳县疾病预防控制中心 414100） 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)5-0106-02 【摘要】目的应用酶联免疫吸附实验（ELISA）快速检测奶类及肉类制品中沙门菌。方法样品经增菌后，用ELISA法及国标法对样品中的沙门菌进行初步检测，并比较ELISA法检测结果与国标法灵敏性、特异性、符合率。结果检测200份奶类制品和肉制品，经ELISA法检测阳性率为8.3%，国标法阳性率为6.7%。ELISA法敏感性、特异性分别为100%、97%，与国标法符合率达99.3%。结论 ELISA法可快速、方便的对食品中沙门菌的污染情况进行初步检测，灵敏度高、特异性好，与国标法符合率高。适用于食品中沙门菌的初步检测。 【关键词】奶制品肉制品沙门菌 ELISA 沙门菌为常见的引起食源性疾病爆发的病原菌，在我国微生物性食物中毒中一直位居首位，而受沙门菌污染的奶、肉制品为造成人类感染的主要来源，因此沙门菌一直为医疗卫生、食品卫生及商检部门重点检验对象之一[1]。本研究采用ELISA法检测奶、肉制品中沙门菌，并与国标法进行比较研究，现报道如下： 1 材料与方法 1.1实验材料 奶、肉制品分别来自本市8家不同超市，包括70份奶及奶制品样本，60份肉及肉制品样本。取样均采取随机抽样的方法进行。每份样品250ml或250g，经无菌包装后置冷链保存送实验室检测。 缓冲蛋白胨水，氯化镁孔雀绿增菌液，四硫酸钠煌绿增菌液，亚硒酸盐胱氨酸增菌液，亚硫酸铋琼脂，DHL琼脂，HE琼脂，WS琼脂，SS琼脂，三糖铁琼脂，蛋白陈水、靛基质试剂，尿素琼脂（pH7.2)，氰化钾（KCN）培养基，氨基酸脱梭酶试验培养基，糖发酵管，ONPG培养基，半固体琼脂，丙二酸钠培养基，沙门氏菌因子血清。均按国标相关规定进行。 ELISA相关试剂均购自试剂公司。 1.2实验方法 样品按国标法相关规定预先增菌。样品处理后于36°C培养4h，转种于100ml氯化镁孔雀绿增菌液中，42°C18-24h，另取10ml转种于亚硒酸盐胱氨酸增菌液中，36°C18-24h。 ELISA法简要步骤如下：特异性抗沙门菌单克隆抗体包被，加入待见样品检测。显色于酶标仪上读取OD值。 国标法简要步骤如下：经增菌后，划线接种于亚硫酸铋琼脂平板和EHL琼脂平板。36°C培养18-24h，观察菌落生长情况。挑选可疑菌落接种于三糖铁琼脂，鉴别反应结果。如出现异常结果，按国标相关规定选择补做甘露醇和山梨醇试验，ONPG等。 1.3数据分析 参考田素娟[1]等的方法进行。即利用检验通用的计算方法，并国标法比较实验的敏感性、特异性、符合率。 2 结果 2.1ELISA及国标法检测结果 用ELISA法同步检测份奶、肉制品的沙门菌污染情况，采用国标法进一步验证，结果见表1。 表1沙门菌污染情况检测 2.2ELISA法与国标法敏感性、特异性、符合率计算结果 表2ELISA法与国标法比较 3 讨论 3.1常规检测沙门菌方法 目前，沙门菌常用检测方法有：（1）酶快速反应检测技术。包括快速酶促反应显色培养基及自动化微生物分析仪两种方法。VITEK AMS自动微生物检测系统对细菌鉴定是基于细菌的微量生化反应，可鉴定405种细菌。（2）以免疫学为基础的检测技术。包括酶联免疫吸附实验（ELISA）；免疫磁分离技术，如王海明[2]等报道的使用抗沙门氏菌免疫磁珠经增菌后于VITEK全自动生化鉴定仪和荧光PCR分子检测确认；免疫胶体金技术等。（3）以核酸为基础的检测技术，如杨俊超[3]等报道的使用实时荧光定量PCR与常规PCR比较研究，其敏感性、特异性均较好；依赖PCR的DNA指纹图谱技术；随机引物扩增DNA多态性（RAPD）；基因内重复性一致序列（ERIC）的扩增；多重PCR检测技术；NASBA；基因芯片技术等。 3.2本研究采用检测方法 本研究采用ELISA法快速检测奶及奶制品、肉及肉制品中沙门菌的污染情况。其敏感性、特异性较高，且与国标法符合率较高。一般24h 之内可以出检测结果。其不足之处在于：（1）不能定量检测沙门菌的含量，只能做定性分析，即是否存在沙门菌污染，但不能测得污染量的大小。后续研究考虑通过设置标准沙门菌对照（蛋白含量已知）的情况下，设立不同稀释度，然后比较样品各组OD值，用统计软件作出标准曲线，进而推算出沙门菌含量。（2）检测结果不太稳定，有可能出现假阳性结果。ELISA实验普遍存在抗体效价下降很快的通病，如
普通手术室常用细菌学监测方法
空气培养是通过空气菌落测定实现的，空气菌落测定可作为一种环境清洁的指标。 1人员着装要求： 检测者需要洗手戴口罩和帽子 2空气培养目的 检测手术部空气在静态下是否达到空气卫生学标准。 3采样时间 每月监测一次，在消毒处理后关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。 4采样方法 检测者需要洗手带口罩和帽子，根据采样原理采用平板暴露法：在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好营养琼脂平板，采样高度距地面0.8～1.5m，采样时，将平板盖打开搭在平皿边缘上，暴露5min，盖好平皿盖。 5注意事项 （1）布点位置要正确，严格按照房间面积、布点要求及采样方法进行操作。（2）采样后及时送检，48小时出结果。（可请护理服务中心送检，内线电话：542） （3）培养采样者应及时将结果取回，结果取回后如无异常应将检验报告单依次粘贴在A4纸上，并注明培养房间和培养日期做好完整记录，如有超标应及时通知护士长，并查找原因，复检。 6检测结果判断 空气培养标准值小于或等于200cfu/m3
1人员着装要求：检测者需要洗手戴口罩和帽子 2检测内容 （1）手术间的物体表面及可能有可能与患者接触的物体表面： 每月培养一次。包括治疗车、治疗台、无菌灯、输液架、手术间门把手、无菌器械台、麻醉机、吸引器瓶、麻醉床、手术间墙壁等。 （2）手卫生培养： 每月培养检测一次以同一台手术至少五人为一组，包括器械护士、手术医师，若一台手术人员不足五人，可两台手术合并5-6人做手培养。 （3）腔镜器械： 每月培养检测一次，培养项目3-5个，镜头、腔镜管道为每月必做项目，其余手术器械随机抽查 （4）无菌物品： 每月培养检测一次。包括一次性无菌物品及高压灭菌后的无菌物品。一次性无菌物品及高压灭菌后的无菌物品每月随机抽取至少3例，不得检出任何微生物。（5）植入性器械： 每月抽查一次骨科外来植入性器械包括钉子和钢板及专用器械。 2采样方法： （1）物体表面主要采用棉式子涂抹法。采用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，取出棉拭子，先在酒精灯外焰进行烧灼后，直接在物体表面按一定顺序滚动式涂抹，后将棉拭子入装有含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。（2）手部培养方法，被检测者须五指并拢，取出棉拭纸先在酒精灯外焰进行烧灼后以手掌到手指尖为平面S型滚动式涂抹，涂抹后将棉拭子入装有含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。 3注意事项： （1）培养不得检测出任何微生物。 （2）采样后及时送检，48小时出结果。 （3）结果出来后将检验报告单依次粘贴在A4纸上，并注明培养房间和培养日期做好完整记录。
PCR技术在快速检测食源性致病菌中的作用
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/4d3745906.html, PCR技术在快速检测食源性致病菌中的作用 作者：庄璐 来源：《现代食品·上》2017年第05期 摘要：现阶段，我国正以飞快的速度发展，食品微生物检测也由传统的培养方法向分子 水平过渡。通过对聚合酶链式反应（PCR）技术的研究分析可知，可以利用这种先进的快速检测技术来检验食品中的食源性致病菌，本文归纳总结了几种不同的PCR技术，旨在提供一些关于食品微生物的快速监测技术。 关键词：PCR技术；食源性致病菌；检测；应用 Abstract：China is developing at a fast pace and the detection of food microorganisms is also moving from the traditional cultivation method to the molecular level. Based on the polymerase chain reaction （PCR） for certain research analysis， can be verified in food borne pathogens using rapid detection technology which is advanced， this paper summarizes several different PCR technology，aims to provide some food on microbial monitoring technology. Key words：PCR technology； Foodborne pathogenic bacteria； Detection； Application 中图分类号：R155.5 改革开放以来，我国现代科学技术以惊人的速度发展，人们的生活水平也在逐渐提高，最直接的结果就是人们越来越重视食品，有着越来越高的要求，但近年来，食品安全问题一直威胁着人们的生命健康，这一问题已经受到了人类的高度重视。2007年，在某些速冻食品中检 测出致病菌；在我国经常提到的地沟油事件层出不穷；让人们谈虎色变的三鹿奶粉事件等，每一件事情都在提醒着人们食品安全问题的重要性和严重性。其中，微生物检测是衡量食品卫生质量的重要指标之一，因此，研究食品微生物检测的快速检测技术具有十分重要的意义。 1 传统的食源性致病菌检测方法 1.1 增菌 致病菌在食品中有着较低的污染水平，所以要以增菌或增菌的步骤为前提来根据国家标准检测食品致病菌，前增菌的实质就是把处于濒死状态的致病菌放在无选择性的培养基中，使其恢复活力，而增菌与之不同，增菌是利用选择性培养基，目的是让微生物大量繁殖，这样就会抑制其他细菌，从而为下一步的分离培养奠定基础。 1.2 分离培养
临床常见致病菌
临床常见致病菌 概述临床常见致病菌(不包括真菌):(1)分几大类与各类所包含得具体细菌种属;(2)生化鉴定要点;(3)各自得主要临床意义。 常见致病菌 表1 革兰阳性 葡萄球菌属 分类及常见种属:根据凝固酶实验分为凝固酶阳性得金黄色葡萄球菌(包括中间与猪),与凝固酶阴性得表皮葡萄球菌,溶血葡萄球菌,里昂葡萄球菌,施氏葡萄球菌等生化鉴别: 葡萄球菌与链球菌鉴别,葡萄球菌单双葡萄状排列,链球菌单双链状排列,除形态外,葡萄球菌触酶阳性,链球菌阴性。与微球菌区别,微球菌四联排列,产酸实验葡萄球菌阳性,微球菌阴性,杆菌肽敏感实验,葡萄球菌敏感,微球菌耐药。呋喃唑酮敏感试验则相反。 表2 三种葡萄球菌鉴别
临床意义: 金黄色葡萄球菌引起人类机会性感染与医院内感染得主要致病菌。其对人主要致病为:一,侵蚀性疾病,通过皮肤局部感染,器官得化脓感染,全身感染,败血症,脓毒血症等;二,毒素性疾病,由产肠毒素得金黄色葡萄球菌菌株污染食物引起。 凝固酶阴性得葡萄球菌就是人类正常菌群,表皮葡萄球菌与置换瓣膜、人工关节及导管相关感染有关。确定就是否为致病菌应注意:一,分离培养菌株就是否来自无菌体液或感染部位;二,同一菌株反复多次分离到,或占优势生长。腐生葡萄球菌在尿道感染患者尿中分离到,认为就是致病菌。溶血、里昂葡萄球菌易引起先天瓣膜性心内膜炎。 链球菌属 分类与常见种属:通常分为化脓与非化脓两类,化脓性链球菌出现β-溶血,非化脓性链球菌出现α-溶血或不溶血。常见得化脓性链球菌有化脓链球菌,无乳链球菌。非化脓性链球菌有缓症链球菌群包括口腔链球菌,肺炎链球菌等;咽峡炎链球菌群包括咽峡炎链球菌,中间链球菌等;以及牛链球菌群与其她链球菌群。 生化鉴别 链球菌革兰染色阳性,触酶阴性,血琼脂板三种溶血α草绿色,β透明溶血,γ非溶血。 化脓链球菌CAMP实验阴性,VP实验阴性,PYR实验阳性。 表4 牛链球菌与非β溶血链球菌鉴别 化脓性、中毒性、变态反应三类。化脓性感染包括淋巴管炎、淋巴结炎蜂窝织炎、痈脓疱疮等,其她系统感染包括扁桃体炎,咽炎、中耳炎等。中毒性疾病如猩红热。变态反应疾病有风湿热与急性肾小球肾炎。 肺炎链球菌存在于正常人群得口腔、鼻咽部,属正常菌群。带有荚膜得肺炎链球菌菌株
食品中致病菌的快速检测技术的研究现状与进展
参考文献： ［１］李文印．芹菜芫荽保鲜法［Ｊ］． 北方园艺，１９９２，（１）：５１． ［２］车芙蓉，马岩松．现代蔬菜果品贮藏保鲜产业中发展的若干问题（下）［Ｊ］．中国果菜，２００２，（２）：４６－４７． ［３］李容．几种蔬菜的无公害贮藏保鲜技术［Ｊ］．西南园艺，２００１，２９（３）：３２－３３． ［４］李素芬，郑素月．ＭＡ包装对芫荽贮藏性的影响［Ｊ］．农业与技术，２０００，２０（５）：２３－２５． ［５］顾振新，饭本光雄，田川彰南等．弱光照射和无机营养供给对冷藏绿芦笋（Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｏｆｆｉｎａｌｉｓ Ｌ．）品质变化的影响［Ｊ］．南京农业大学学报，２００１，２４（４）：８４－８８．［６］田浩，名和义彦，黑木吉，等．野菜の收获后にぉけゐ品质に及ほす光の影响（第１报）コマシナ（Ｄｅｔａｃｈｅｄ ｌｅａｆ）の贮藏中にぉけゐ成分变化［Ｊ］．食品综合研究所报告，１９８１，３８：３３－３９． ［７］富士原和宏，高久晃一，饭本光雄．收获后チャビルの低温贮藏のための赤色光グィォ－ドにょゐ弱光照射ゎょび养液ゲル利用［Ｊ］．生物环境调节，１９９７，３５（２）：５１－５４． ［８］小林玲子，高坦美智子，久保田智惠利，等．低温贮藏中の弱光照射ガクィワレゲィコンの影响［Ｊ］．生物环境调节，１９９６，３４（２）：５７－５９． ［９］潘瑞炽，董愚德．植物生理学（第３版）［Ｍ］．北京：高等教育出版社，１９９５．６７－１１． 食品中致病菌的快速检测技术的 研究现状与进展 陈庆森１，冯永强２，黄宝华１，魏国祥１，庞广昌１，胡志和１ （１．天津商学院生物工程系，天津 ３００１３４； ２．天津市海河乳业有限公司，天津 ３００１３４） 摘 要：本文从食品中致病菌快速检测的技术发展现状的角度出发，较系统地介绍了利用生物化学、免疫学和分子生物学的技术手段快速检测病原菌的技术和方法，特别是近几年来基因操作技术在病原菌快速检测方面的应用研究，这些技术对该领域产生了很大的推动作用。 关键词：致病菌；快速检测技术；微生物 Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｆａｓｔ ＤｅｔｅｃｔｉｏｎＴｅｃｈｉｎｑｕｅ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ ＣＨＥＮ Ｑｉｎ－ｓｅｎｇ１，ＦＥＮＧ Ｙｏｎｇ－ｑｉａｎｇ２，ＨＵＡＮＧ Ｂａｏ－ｈｕａ１， ＷＥＩ Ｇｕｏ－ｘｉａｎｇ１，ＰＡＮＧ Ｇｕａｎｇ－ｃａｎｇ１，ＨＵ Ｚｈｉ－ｈｅ１ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｔｉａｎｊｉｎ Ｕｎｉｒｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｅ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３００１３４， Ｃｈｉｎａ； ２．Ｔｉａｎｊｉｎ Ｈａｉｈｅ Ｄａｉｒｙ Ｃｏ． Ｌｔｄ．， Ｔｉａｎｊｉｎ ３００１３４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｔｈｉｓ ｔｅｘｔ ｃａｕｓｅｓ ｔｈｅ ａｎｇｌｅ ｏｆ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｅｒｍ ｍｅａｓｕｒｅｓ ｆａｓｔ ｔｏ ｓｅｔｏｕｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｆｏｏｄ， ｈａｖｅ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｆａｓｔ ｍｏｒｅ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ， Ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｇｅｎｅ ｈａｓｍｅａｓｕｒｅｄ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｓｐｅｃｔ ｆａｓｔ ｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ， Ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｈａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｅｎｏｒｍｏｕｓｉｍｐｅｔｕｓ ｔｏ ｔｈｉｓ ｆｉｅｌｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐａｔｈｏｇｅｎ；ｆａｓｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ 中图分类号： ＴＳ２０７．７ 文献标识码： Ａ 文章编号：１１０２－６６３０（２００３）１１－０１４８－０５ 收稿日期：２００３－０５－０８ 作者简介：陈庆森（１９５７－），男，教授，从发酵生物技术及活性蛋白质、酶技术的研究。
常见致病菌
革兰阳性致病菌革兰阴性致病菌 葡萄球菌属（金黄色葡萄球菌）链球菌属（化脓性链 球菌） 支原体目(肺炎支 原体) 放线菌目(结核分 支杆菌) 埃希菌属（大肠杆 菌） 沙门菌属（伤寒杆 菌） 志贺菌属（痢疾杆 菌） 螺旋体目(苍白 螺旋体) 衣原体科 生物学特性形态 与结 构 球形，多呈葡萄串 状排列。无鞭毛， 无芽胞，有的有荚 膜。G+ 球形，链状排列。无 鞭毛，无芽胞，幼龄 菌多由荚膜。G+ 无细胞壁，呈高度 多形性，吉姆萨染 色呈淡紫色，胞外 繁殖最小微生物， 细胞膜，荚膜，环 状双链DNA 有菌丝和孢子，具 有原始核质，无核 膜核仁，肽聚糖和 磷壁酸组成细胞壁 细胞壁(分支菌酸) 杆状，多数有周身 鞭毛，有菌毛，无 芽胞。G- 具有周身鞭毛，无 芽胞，有菌毛，有 荚膜。G- 短小杆状，有菌毛， 无芽胞，无鞭毛。 G- 体纤细，螺旋致 密规则，两端尖 直，Fontana镀银 染色为棕褐色， 菌体弯曲成S或C 形 体积微小，呈圆 形或椭圆形体， 肽聚糖细胞壁， 有原体(胞外，高 度感染性)和网 状体 抗原 构造 有葡萄球菌蛋白A （SPA）、磷壁酸等。 A群链球菌细胞壁上 多有多糖抗原，再外 层有蛋白质表面抗 原。 1、蛋白质抗原： 血清学分型依据 2、糖脂抗原 细胞壁含有独特的 分枝酸 主要有菌体（O）、 鞭毛（H）和K抗原 三种。 O抗原产生IgM；H 抗原产生IgG；Vi 抗原有助于诊断。 有O、K抗原，依据 O抗原将志贺菌属 分为4群 密螺旋体抗原 （属共同抗原） 1、脂多糖抗原： 属特异性 2、外膜蛋白抗 原：种特异性、 型特异性 代谢 与培 养 需氧或兼性厌氧， 在普通培养基上生 长良好，耐高温。 兼性厌氧，血平板或 含血清的培养基培 养。 1、兼性厌氧/厌 氧 2、营养要求高， 10-12%血清培养 基 3、高pH （7.8-8.0） 4、荷包蛋样典型 菌落 正常寄生菌，培养 困难，血平板，厌 氧/微需氧 代谢活跃能发酵乳 糖，产酸、产气； IMViC：+ + - - 对营养要求不高， 兼性厌氧/需氧，普 通培养基，无色半 透明S型菌落，可 根据生化反应的不 同区分种与亚种， IMViC为-+-+ 能分解葡萄糖，产 酸、不产气，不发 酵乳糖。普通平板 IMViC试验为-+-- 厌氧、毒力株： 家兔单层上皮细 胞 非毒力株：活细 胞人工培养基 专性细胞内生 长，6-8天鸡胚卵 黄囊或Hela299 细胞培养 抵抗 力 较强，80℃30min 可杀死，对青霉素、 红霉素、庆大霉素 等过敏。 不强，60℃30min即 被杀死，对消毒剂、 青霉素、红霉素、磺 胺敏感。 1、弱，对理化因 素较细菌敏感。2、 对醋酸铊、结晶紫 有抵抗3、化学消 毒剂敏感。4、对 干扰细胞壁的抗 菌素耐药。5、对 干扰蛋白质合成 的抗菌素敏感 抗理化因素,抗干 燥和酸碱,对结晶 紫和孔雀绿有抵抗 力,对乙醇、湿热、 紫外线、结核治疗 药物敏感,抗菌素 敏感 强，56℃60min、 60℃15min有些仍 可存活。对化学消 毒剂敏感,胆盐、煌 绿等对其有抑制作 用,对磺胺类、链霉 素、氯霉素敏感, 但易耐药 不强，60℃15min 可被杀死，对氯霉 素敏感水中存活 2-3周、粪便存活 1-2月，理化因素敏 感(60℃30min )， 氯霉素等敏感，消 毒剂敏感 较其他肠道杆菌 弱，60℃10min即 被杀死，对酸敏感 极弱，对热、冷、 干燥、消毒剂和 肥皂水敏感，对 青霉素、四环素 和庆大霉素敏 感。 对热和消毒剂敏 感，耐低温，在 室温下迅速丧失 传染性，60℃ 5-10分钟、75% 乙醇半分钟或2% 苏打水5分钟即 可被杀死
实验二 食品中致病菌的检测
实验二食品中致病菌的检测 一、实验目的 1.掌握引起食物中毒的常见病原菌； 2.熟悉金黄色葡萄球菌的检测方法。 二、器材试剂 材料：血平板、甘露醇管、血浆、革兰染液等 三、检验程序 见实验指导P371 四、检验方法 1.样品的采取和送检 （1）散装或大型包装的乳品检样：用灭菌刀、杓取样。在移采另一件样品前，应将用过的刀、杓清洗灭菌。采样时应注意不同的部位，使样品有代表性。样品放入灭菌容器内，及时送检。 （2）小型包装的乳品检样：应采取整件包装，奶粉1瓶或1包。采样时应注意包装的完整性。 （3）成批产品质量的检样：采样量一般以1%的比率抽取，应注意代表性，不足千件者抽取1件。 2.检样处理 （1）灌（瓶）装乳粉：将灌或瓶表面先用温水洗清，再用点燃的酒精棉球消毒灌或瓶的上表面，然后用灭菌的开罐器打开灌（瓶）面，以无菌手续称取25g检样，放入装有玻璃珠的三角烧瓶内，然后徐徐加入225ml温热的灭菌生理盐水，（先加入少许使乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结块），震摇均匀，使充分溶解后即为1：10稀释液。 （2）袋装乳粉：可用75%的酒精棉球擦拭消毒袋口后，以无菌手续开封取样。以后操作同灌（瓶）装乳粉。 3.増菌培养 用无菌吸管吸取上述稀释液5ml加入7.5%NaCL肉汤，置37℃温箱培养24h。在肉汤中呈浑浊生长。 4.分离培养 直接取可疑奶粉或増菌培养物划线接种至血平板，37℃培养24h。取可疑菌落作革兰染色镜检。根据形态染色性，作进一步鉴定。 5.血浆凝固酶试验（玻片法） 血浆凝固酶试验是鉴定金葡菌的主要试验。金葡菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，附着于细菌的表面，产生凝固。凝固酶可分为两种，一种是与细胞壁结合的凝固酶，可用玻片法测定；另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，可用试管法测出。 玻片法：取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，分别滴加新鲜人或兔血浆及生理盐水各一滴，挑取待检菌的菌落，分别与血浆和生理盐水混合，立即观察结果。 6.甘露醇发酵试验 取斜面上菌苔接种于甘露醇管中，再覆盖无菌石蜡约5mm高，37℃培养，连续观察4天，报告结果。 7.脱氧核糖核酸酶试验（平板法） 取融化的甲苯胺蓝核酸琼脂3ml铺于洁净载玻片上，凝固后打上4-8个直径为2mm的孔，每孔滴加经沸水浴处理过的细菌培养物一滴，置37℃温箱3h，试验的同时应设对照。
临床常见致病菌
临床常见致病菌 概述临床常见致病菌（不包括真菌）：（1）分几大类和各类所包含的具体细菌种属；（2）生化鉴定要点；（3）各自的主要临床意义。 常见致病菌 表1 血培养脑膜炎奈瑟球菌伤寒及其他 沙门氏菌大肠埃希菌肺炎 克雷白菌沙雷菌铜绿假单 胞菌不动杆菌流感嗜血杆 菌布氏杆菌芽孢杆菌属等金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌草绿色链球菌属肺炎链球菌肠球菌产单核李斯特菌产气荚膜菌等 尿培养淋病奈瑟球菌肺炎克雷白菌 沙雷菌大肠埃希菌变形杆 菌沙门氏菌属假单胞菌属 等金黄色葡萄球菌腐生葡萄球菌表皮葡萄球菌肠球菌链球菌等 痰培养卡他莫拉菌脑膜炎奈瑟球菌 流感嗜血杆菌肺炎克雷白菌 假单胞菌军团菌多杀巴斯 德菌等肺炎链球菌金黄色葡萄球菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌放线菌诺卡菌等 便培养伤寒及其他沙门氏菌志贺菌 属治病大肠埃希菌（出血产 毒致病侵袭）等金黄色葡萄球菌结核分枝杆菌蜡样芽孢杆菌艰难芽孢杆菌等 革兰阳性 葡萄球菌属 分类及常见种属：根据凝固酶实验分为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌(包括中间和猪)，和凝固酶阴性的表皮葡萄球菌，溶血葡萄球菌，里昂葡萄球菌，施氏葡萄球菌等生化鉴别： 葡萄球菌与链球菌鉴别，葡萄球菌单双葡萄状排列，链球菌单双链状排列，除形态外，葡萄球菌触酶阳性，链球菌阴性。与微球菌区别，微球菌四联排列，产酸实验葡萄球菌阳性，微球菌阴性，杆菌肽敏感实验，葡萄球菌敏感，微球菌耐药。呋喃唑酮敏感试验则相反。
表2 三种葡萄球菌鉴别 金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌 血浆凝固酶+ —— 溶血素+ —— 耐热核酸酶+ —— SPA + —— 卵磷脂酶+ —— 分解甘露醇+ —— 新生霉素耐药——+ 临床意义： 金黄色葡萄球菌引起人类机会性感染和医院内感染的主要致病菌。其对人主要致病为：一，侵蚀性疾病，通过皮肤局部感染，器官的化脓感染，全身感染，败血症，脓毒血症等；二，毒素性疾病，由产肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株污染食物引起。 凝固酶阴性的葡萄球菌是人类正常菌群，表皮葡萄球菌与置换瓣膜、人工关节及导管相关感染有关。确定是否为致病菌应注意：一，分离培养菌株是否来自无菌体液或感染部位；二，同一菌株反复多次分离到，或占优势生长。腐生葡萄球菌在尿道感染患者尿中分离到，认为是致病菌。溶血、里昂葡萄球菌易引起先天瓣膜性心内膜炎。 链球菌属 分类与常见种属：通常分为化脓和非化脓两类，化脓性链球菌出现β-溶血，非化脓性链球菌出现α-溶血或不溶血。常见的化脓性链球菌有化脓链球菌，无乳链球菌。非化脓性链球菌有缓症链球菌群包括口腔链球菌，肺炎链球菌等；咽峡炎链球菌群包括咽峡炎链球菌，中间链球菌等；以及牛链球菌群和其他链球菌群。 生化鉴别 链球菌革兰染色阳性，触酶阴性，血琼脂板三种溶血α草绿色，β透明溶血，γ非溶血。表3 触酶阴性革兰阳性球菌鉴别 链球菌属肠球菌属乳球菌属气球菌属 万古霉素S S S S 葡萄糖产气———— 吡咯烷酮芳氨酶—+ —+ 亮氨酸氨基肽酶+ + + — 6.5%NaCl —+ 反应不定+ 45℃生长反应不定+ —— 10℃生长—+ + —化脓链球菌CAMP实验阴性，VP实验阴性，PYR实验阳性。 表4 牛链球菌与非β溶血链球菌鉴别 肺炎链球菌牛链球菌其他草绿色链球菌Optochin敏感性+ —— 胆汁溶菌+ —— 胆汁七叶苷—+ —