2019版高考生物一轮复习现代生物科技专题第1讲基因工程学案苏教版
第1讲 基因工程考点一| 基因工程的基本工具 (对应学生用书第241页) [识记—基础梳理]1．基因工程的概念及优点(1)概念：是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。
(2)遗传原理：基因重组。
(3)优点：①与杂交育种相比：克服了远缘杂交不亲和的障碍。
②与诱变育种相比：能定向改造生物的遗传性状。
2．基因工程的基本工具 (1)限制性核酸内切酶①来源：主要从原核生物中分离纯化而来。
②作用：识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
③结果：产生黏性末端或平末端。
(2)DNA 连接酶 (3)载体①常用载体——质粒⎩⎪⎨⎪⎧化学本质：双链环状DNA 分子特点⎩⎪⎨⎪⎧能自我复制有一个至多个限制酶切割位点有特殊的标记基因 ②其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。
[理解—深化探究]1．限制酶(1)识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称；=====CCAGG GGTCC 以=====AT为轴，两侧碱基互补对称。
(2)切割后末端的种类2．限制酶和DNA 连接酶的关系(1)限制酶和DNA 连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。
(2)限制酶不切割自身DNA 的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(3)DNA 连接酶起作用时，不需要模板。
3．载体 (1)条件与目的①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。
②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。
[运用—考向对练]1．下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。
请回答下列问题：限制酶Bam H Ⅰ Bcl Ⅰ Sau 3A Ⅰ H ind Ⅲ识别序列及切割位点↓GGATCC CCTAGG↑↓TGATCA ACTAGT↑↓GATC CTAG↑↓AAGCTT TTCGAA↑图1 图2(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过________酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒，需将其转入处于________态的大肠杆菌。
(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________，平板上长出的菌落，常用PCR 鉴定，所用的引物组成为图2中________。
(3)若Bam H Ⅰ酶切的DNA 末端与Bcl Ⅰ酶切的DNA 末端连接，连接部位的6个碱基对序列为________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。
(4)若用Sau 3A Ⅰ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA 片段。
[解析] (1)选择的限制酶应在目的基因两端且在质粒中存在识别位点，故可以用来切割的限制酶为Bcl Ⅰ、Hind Ⅲ、Bam H Ⅰ和Sau 3A Ⅰ，但由于Bam H Ⅰ和Sau 3A Ⅰ可能使质粒中的启动子丢失或破坏抗性基因，所以应选用Bcl Ⅰ、Hind Ⅲ两种限制酶切割。
酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA 连接酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒，需将其转入感受态的大肠杆菌中，使其增殖。
(2)根据质粒上抗性基因，为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素。
平板上长出的菌落，常用PCR 鉴定，目的基因DNA 受热变性后解链为单链，引物需要与单链两端相应互补序列结合，故所用引物组成是图2中的引物甲和引物丙。
(3)若Bam H Ⅰ酶切的DNA 末端和Bcl Ⅰ酶切的DNA 末端连接，连接部位的6个碱基对序列为T GATC C A CTAG G ⎝ ⎛⎭⎪⎫G GATC A C CTAG T ，由于两种酶均不能识别该部位的碱基对序列，所用两种酶都不能切开该部位。
(4)根据Bcl Ⅰ、Bam H Ⅰ和Sau 3AⅠ的酶切位点，Sau 3A Ⅰ在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A 、B 、C 三种片段，若部分位点被切开，可得到AB 、AC 、BC 、ABC 四种片段，所以用Sau 3A Ⅰ切质粒最多可能获得7种大小不同的DNA 片段。
[答案] (1)Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ DNA 连接 感受 (2)四环素 引物甲和引物丙(3)T GATCC A CTAGG ⎝ ⎛⎭⎪⎫G GATC A C CTAG T 都不能 (4)7 2．(2018·德州模拟)下面为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题：(1)a 代表的物质和质粒的化学本质都是____________________，二者还具有其他共同点，如①____________，②____________(写出两条即可)。
(2)若质粒DNA 分子的切割末端为—A—TGCGC，则与之连接的目的基因切割末端应为________；可使用________把质粒和目的基因连接在一起。
(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA 上称为________________，其作用是______________________________________________________________。
(4)下列常在基因工程中用作载体的是( ) A ．苏云金芽孢杆菌抗虫基因 B ．土壤农杆菌环状RNA 分子 C ．大肠杆菌的质粒 D ．动物细胞的染色体[解析] (1)a 代表的物质是拟核DNA 分子，质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核之外的小型环状DNA 分子，两者都能自我复制，并蕴含遗传信息。
(2)质粒DNA 分子的切割末端能够与目的基因切割末端发生碱基互补配对，可使用DNA 连接酶将它们连接在一起。
(3)质粒DNA 分子上的氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，便于对重组DNA 进行鉴定和筛选。
(4)作为载体必须具备的条件：①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；②有多个限制性核酸内切酶切点；③有一定的标记基因，便于筛选。
常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
苏云金芽孢杆菌抗虫基因一般作为目的基因；土壤农杆菌环状RNA 分子不容易在宿主细胞内保存；动物细胞染色体的主要成分是DNA 和蛋白质，不能被限制性核酸内切酶切割，因此不能用作载体。
[答案] (1)DNA 能够自我复制 具有遗传特性 (2)CGCGT —A —DNA 连接酶 (3)标记基因 供重组DNA 的鉴定和选择 (4)C[技法总结] 确定选择限制酶种类的方法1．根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类(1)应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。
(2)不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。
(3)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和Eco RⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。
2．根据质粒的特点确定限制酶的种类(1)所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。
(2)质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。
考点二| 基因工程的操作程序及应用(对应学生用书第243页)[识记—基础梳理]1．基因工程的基本操作程序(1)目的基因的获取方法①从基因文库中获取。
②利用PCR技术扩增。
③通过化学方法人工合成。
(2)基因表达载体的构建①目的a．使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。
b．使目的基因能够表达和发挥作用。
②组成及作用(连线)组成作用Ⅰ.目的基因a．转录的起点，是RNA聚合酶识别和结合的部位Ⅱ.启动子b．转录的终点Ⅲ.终止子c．鉴别受体细胞中是否含有目的基因Ⅳ.标记基因d．能够控制特定性状[答案]Ⅰ—d Ⅱ—a Ⅲ—b Ⅳ—c(3)将目的基因导入受体细胞(连线)受体细胞导入方法①动物细胞②植物细胞③微生物细胞a．农杆菌转化法b．显微注射技术c．基因枪法d．感受态细胞法(Ca2＋处理法) e．花粉管通道法[答案]①—b ②—a、c、e ③—d(4)目的基因的检测与鉴定(1)含义①乳腺生物反应器是指使外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达，利用动物的乳腺组织生产药物蛋白。
②工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。
(2)两者区别1．目的基因的获取途径(1)从基因文库中获取：包括基因组文库和cDNA文库等。
(2)人工合成目的基因的常用方法①化学合成法：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。
②反转录法：以RNA 为模板，在逆转录酶作用下人工合成。
(3)通过PCR 技术扩增目的基因利用DNA 复制的原理在体外特异性的复制某DNA 片段以获得大量的目的基因。
2．基因表达载体的构建方法3．将目的基因导入受体细胞[运用—考向对练]1．(2018·湖北武汉2月调研)如图是获得转基因抗虫棉的技术流程示意图。
请回答：(1)A→B 利用的技术称为________，其中②过程需要热稳定的________酶才能完成。
(2)图中将目的基因导入棉花细胞需要经过C 过程，该过程为构建______________，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在且可以遗传给下一代，并能表达。
(3)上述流程示意图中，将目的基因导入棉花细胞所采用的方法是______________法，该方法一般________(填“适宜”或“不适宜”)用于将目的基因导入单子叶植物。
(4)从F→G的过程利用的主要技术为____________，欲确定抗虫基因在G体内是否表达，在个体水平上需要做________实验。
如果抗虫基因导入成功，且与某条染色体的DNA整合起来，该转基因抗虫棉可视为杂合子，将该转基因抗虫棉自交一代，预计后代中抗虫植株占________。
[解析](1)A→B是PCR技术中的操作，②过程是PCR技术中的延伸过程，需要耐热的DNA聚合酶参与。
(2)过程C是构建基因表达载体。
(3)图中显示，将目的基因导入棉花细胞的方法是农杆菌转化法，该方法不适于将目的基因导入单子叶植物，这是因为农杆菌对大多数单子叶植物没有感染力。
(4)F→G过程是将棉花体细胞培育形成新的个体，需要采用植物组织培养技术；检测抗虫基因在转基因植株体内是否表达，在个体水平上需要做抗虫接种实验；假设抗虫基因为A，则该杂合子基因型可以表示为A0，A0自交，后代中抗虫植株A_和非抗虫植株00分别占3/4、1/4。
2019版高考生物一轮复习现代生物科技专题第1讲基因工程学案苏教版
第1讲 基因工程考点一| 基因工程的基本工具 (对应学生用书第241页) [识记—基础梳理]1．基因工程的概念及优点(1)概念：是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。
(2)遗传原理：基因重组。
(3)优点：①与杂交育种相比：克服了远缘杂交不亲和的障碍。
②与诱变育种相比：能定向改造生物的遗传性状。
2．基因工程的基本工具 (1)限制性核酸内切酶①来源：主要从原核生物中分离纯化而来。
②作用：识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
③结果：产生黏性末端或平末端。
(2)DNA 连接酶(3)载体①常用载体——质粒⎩⎪⎨⎪⎧化学本质：双链环状DNA 分子特点⎩⎪⎨⎪⎧能自我复制有一个至多个限制酶切割位点有特殊的标记基因 ②其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。
[理解—深化探究]1．限制酶(1)识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称；=====CCAGG GGTCC 以=====AT 为轴，两侧碱基互补对称。
(2)切割后末端的种类2．限制酶和DNA 连接酶的关系(1)限制酶和DNA 连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。
(2)限制酶不切割自身DNA 的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(3)DNA 连接酶起作用时，不需要模板。
3．载体 (1)条件与目的①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。
②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。
[运用—考向对练]1．下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。
请回答下列问题：图1 图2(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过________酶作用后获得重组质粒。
近年高考生物一轮复习第十一单元现代生物科技专题第一讲基因工程练习苏教版(2021年整理)
2019版高考生物一轮复习第十一单元现代生物科技专题第一讲基因工程练习苏教版编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（2019版高考生物一轮复习第十一单元现代生物科技专题第一讲基因工程练习苏教版）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为2019版高考生物一轮复习第十一单元现代生物科技专题第一讲基因工程练习苏教版的全部内容。
第一讲基因工程[课时作业］单独成册1．（2018·河北衡水调研)请回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：(1)培育转基因植物过程的核心步骤是__________，其目的是使目的基因在受体细胞中__________,并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用。
(2)构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的__________键。
基因表达载体的组成部分包括启动子、终止子、目的基因、__________、复制原点等。
（3)组成基因表达载体的单体是__________。
基因表达载体中的启动子是__________识别和结合的部位,这种结合完成后才能驱动目的基因通过__________（填过程）合成mRNA.（4）用两种限制酶XbaⅠ和SacⅠ（两种酶切出的黏性末端不同)切割某DNA，获得含目的基因的片段。
若利用该片段构建基因表达载体,应选用的Ti质粒是如图中的__________。
注：图中箭头所指的位置是限制酶识别和切割的位点解析：(1)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在,并可以通过复制遗传给下一代，同时使目的基因表达和发挥作用。
推荐K122019版高考生物一轮复习现代生物科技专题第一讲基因工程精选教案
第一讲基因工程[基础知识·系统化]知识点一基因工程的基本工具知识点二基因工程的基本操作程序知识点三蛋白质工程[基本技能·问题化]1．据两种限制酶的作用图示填空(1)已知限制酶Eco RⅠ和SmaⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓AATTC和CCC↓GGG，在图中画出两种限制酶切割DNA后产生的末端并写出末端的种类。
(2)①产生的是黏性末端；②产生的是平末端。
(3)Eco RⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶识别的碱基序列不同，切割位点不同(填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有专一性。
2．观察下图所示过程，回答相关问题(1)①是限制酶，②是DNA连接酶，二者的作用部位都是磷酸二酯键。
(2)限制酶不切割自身DNA的原因：自身DNA不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
3．结合抗虫棉的培育过程图填空(1)从图中可以看出，目的基因是Bt毒蛋白基因，使用的载体是Ti质粒，将目的基因表达载体导入受体细胞的方法是农杆菌转化法。
(2)请写出两种检测目的基因是否表达的方法：抗原—抗体杂交法、用棉叶饲喂棉铃虫。
4．填写蛋白质工程流程图中字母代表的含义A．转录，B.翻译，C.分子设计，D.氨基酸序列，E.预期功能。
考点一基因工程的操作工具命题点(一) 限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用1．(2016·全国卷Ⅲ)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了Eco RⅠ、Bam HⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的Eco RⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。
↓↓↓——GAATTC————GGATCC————GATC————CTTAAG————CCTAGG————CTAG——↑↑↑图(a)根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)经Bam HⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被________酶切后的产物连接，理由是_____________________________________________________________________________________________________________________________________。
2019版高考生物一轮复习第7单元生物的变异育种与进化第1讲基因突变和基因重组学案苏教版
第1讲 基因突变和基因重组考点一| 基因突变 (对应学生用书第129页) [识记—基础梳理]1．基因突变的实例及概念(1)基因突变的实例：镰刀型细胞贫血症 过程中。
)母填字(a 。
突变发生在翻译和转录、复制A DN 过程分别代表c 、b 、a 中图示① 。
=====A T 突变成=====T A 碱基对由，基因突变根本原因是发生了，异常血红蛋白患者贫血的直接原因是② (2)基因突变的概念的改变。
基因结构――→引起分子中发生碱基对的替换、增添和缺失DNA 2．基因突变的类型、原因、结果、特点和意义[思维辨析] 1．经X射线照射的紫花香豌豆品种，其后代中出现了几株开白花植株。
X射线不仅可引起基因突变，也会引起染色体变异。
(√) 2．用射线照射大豆使其基因结构发生改变，可获得种子性状发生变异的大豆。
(√) 3．积聚在甲状腺细胞内的131I可能直接诱发甲状腺滤泡上皮细胞基因突变并遗传给下一代。
(×)【提示】此突变发生于体细胞而不是生殖细胞，一般不能遗传给下一代。
4．基因突变通常发生在DNA→RNA的过程中。
(×)【提示】基因突变通常发生在DNA→DNA过程中。
5．基因突变是可遗传的变异，但不一定遗传给后代。
(√)6．由环境引起的变异一定是不可遗传的变异。
(×)【提示】环境引起的变异若改变了遗传物质就是可遗传的变异。
7．基因突变一定会导致基因结构的改变，但却不一定引起生物性状的改变。
(√) 8．基因突变是DNA分子水平上基因内部碱基对种类和数目的改变，基因的数目和位置并未改变。
(√)9．A基因突变为a基因，a基因还可能再突变为A基因。
(√)10．原核生物和真核生物都能发生基因突变。
(√)11．基因突变对生物的生存总是有害的。
(×)【提示】若基因突变后产生的性状能适应环境，则对生物的生存就是有利的。
12．基因突变的频率很低，种群每代突变的基因数不一定很少。
(√)13．基因突变的方向与环境没有明确的因果关系。
2019届一轮复习苏教版 基因工程 课件
01
课前抓双基——别样设计
第一讲 基因工程
02
课堂研考点——以案说法
03
课后测能力——双级测评
04
调研试题重点研究——明趋势
返回
Part
01
课前抓双基—— 别样设计
KEQIAN ZHUASHUANGJI BIEYANGSHEJI
返回
(一)
基因工程的基本工具
01 感性认知
返回
5.明确启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子 启动子和终止子位于DNA片段上，分别控制转录过程的 启动和终止；起始密码子和终止密码子位于mRNA上， 分别控制翻译过程的启动和终止。
返回
6.掌握目的基因检测与鉴定的方法示意图
返回
(三)
基因工程的应用和 蛋白质工程
返回
01 合成 (2)方法 通过 DNA合成仪 用化学方法人工合成 合成 利用 PCR技术扩增
返回
5.基因表达载体的组成及作用
返回
6.连线不同种类的受体细胞与目的基因导入的常用方法返回Leabharlann 7.结合抗虫棉的培育过程填空
(1)从图中可以看出，目的基因是Bt毒蛋白基因，使用的载体是Ti 质粒， 将目的基因表达载体导入受体细胞的方法是 农杆菌转化法 。 (2)请写出两种检测目的基因是否表达的方法：抗原－抗体杂交法、用棉
返回
3.连线载体须具备的条件及其作用
0 2
理性归纳
完成情况
返回
1.图解基因工程的三种操作工具
返回
2.明辨与DNA有关的酶
比较 项目
限制酶 DNA
分子 磷酸 二酯键 黏性末 端或平 末端
DNA 连接酶
高考生物大一轮复习第一部分基因工程课件苏教版选修
。
利益公正分配原则
确保基因工程研究和应用产生的利益 得到公平分配，关注弱势群体的权益
。
不伤害原则
确保基因工程研究和应用不对个体或 群体造成伤害，避免基因歧视和基因 优化的滥用。
可持续发展原则
确保基因工程研究和应用符合可持续 发展要求，促进人类和生态系统的长 期健康发展。
国际合作与交流
加强国际合作与交流，共同 探讨基因工程伦理问题，推 动全球范围内基因工程伦理 准则和规范的制定和实施。
伦理审查机制
建立健全的伦理审查机制， 对基因工程研究和应用项目 进行严格的伦理审查，确保 符合伦理原则和规范。
05
高考生物中基因工程考点 解析
考点梳理
基因工程的原理及技术基础
基因工程的原理、基因工程的基本操作步骤 、基因工程所需的工具等。
基因工程的基本原理
基于分子生物学和遗传学原理，通过基因操作技 术，将外源基因插入到生物体的基因组中，实现 基因的表达和调控。
基因工程的主要技术手段
包括基因克隆、载体构建、基因导入、基因表达 和检测等。
基因工程发展历程
1973年
美国科学家伯格首次成功地将外源基因导入 大肠杆菌，标志着基因工程的诞生。
重组蛋白的功能分析
对表达的重组蛋白进行生化活性分析 ，如酶活性检测、抗原抗体反应等。
重组DNA分子的序列分析
对阳性克隆的重组DNA分子进行序 列分析，验证目的基因的正确性。
实验结论总结
根据实验结果，总结实验结论，分析 实验的成功与不足之处，提出改进意 见。
04
基因工程伦理问题
基因工程的伦理原则
尊重自主性原则
高考生物复习现代生物科技专题第1讲基因工程课件苏教版
完全酶切可得到记为 A、B、C 三种片段，若部分位点被切开，可得到 AB、AC、
BC、ABC 四种片段，所以用 Sau3AⅠ切质粒最多可能获得 7 种大小不同的 DNA
片段。
[答案] (1)BclⅠ和 HindⅢ DNA 连接 感受
(2)四环素 引物甲和引物丙
T (3)A
GATCC G CTAGGC
(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加 ________，平板上长出的菌落，常用 PCR 鉴定，所用的引物组成为图 2 中 ________。
(3)若 BamHⅠ酶切的 DNA 末端与 BclⅠ酶切的 DNA 末端连接，连接部位的 6 个碱基对序列为________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”、“都 不能”或“只有一种能”)切开。
(4)若用 Sau3AⅠ切图 1 质粒最多可能获得________种大小不同的 DNA 片 段。
[解析] (1)选择的限制酶应在目的基因两端且在质粒中存在识别位点，故可 以用来切割的限制酶为 BclⅠ、HindⅢ、BamHⅠ和 Sau3AⅠ，但由于 BamHⅠ和 Sau3AⅠ可能使质粒中的启动子丢失或破坏抗性基因，所以应选用 BclⅠ、Hind Ⅲ两种限制酶切割。酶切后的载体和目的基因片段，通过 DNA 连接酶作用后获 得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入感受态的大肠杆菌中，使其增殖。 (2)根据质粒上抗性基因，为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平 板培养基中添加四环素。平板上长出的菌落，常用 PCR 鉴定，目的基因 DNA 受热变性后解链为单链，引物需要与单链两端相应互补序列结合，故所用引物
3.基因工程的应用(Ⅱ)
2014·卷ⅡT40，2013·卷ⅠT40
高考生物一轮复习 专题一 基因工程课件 苏教版选修3
【例2】 (2009·广东高考)(1)饲料加工过程温度较高，要求植酸酶具有
较好的高温稳定性。利用蛋白质工程技术对其进行改造时，
首先必须了解植酸酶的___空__间__结_构，然后改变植酸酶的______氨__基__酸, 序列(xùliè) 从而得到新的植酸酶。
(2)培育转植酸酶基因的大豆，可提高(tí gāo)其作为饲料原料时磷的利
(2)基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白质工程进行 修饰、改造
第十三页，共32页。
即时(jíshí)突破
3．(2010·南通调研)下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不
正确的是
()
A．需要限制酶和DNA连接酶
B．必须在细胞内进行
C．抗生素抗性基因可作为标记基因
D．启动子位于目的基因的首端
解析：基因表达载体是目的基因与载体的结合(jiéhé)，在此过
程中
需用同一种限制酶切割目的基因与载体,用DNA连接酶将相同
的末端连接起来；基因表达载体的构建是在细胞外进行的；
基因表达载体包括启动子(位于基因首端使转录开始)、终止
子、目的基因和标记基因。
答案：B
第十四页，共32页。
4．(2010·南京调研)下列关于蛋白质工程的说法，正确的是 ()
A．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接 进行操作(cāozuò)
第三页，共32页。
2．载体 (1)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。 (3)种类 ①质粒：一种(yī zhǒnɡ)祼露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之 外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。
2019版高考生物一轮复习 第十一单元 现代生物科技专题 第一讲 基因工程课件 苏教版
答案：(1)黏性末端 平末端 (2)切割产生的 DNA 片段末端 与 EcoRⅠ切割产生的相同 (3)E·coli T4 (4)mRNA(或 RNA) cDNA(或 DNA) PCR (5)噬菌体 动植物病毒 (6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源 DNA)的 能力极弱
2．(2016·高考全国卷Ⅲ)图(a)中的三个 DNA 片段上依次表 示出了 EcoRⅠ、BamHⅠ和 Sau3AⅠ三种限制性内切酶的 识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体 上的 EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。
(3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，常见的 有________和________，其中既能连接黏性末端又能连接平 末端的是____________________。
(1)由图(a)可知，尽管 BamHⅠ和 Sau3AⅠ两种限制酶的识别位 点不相同，但两种酶切割后产生的 DNA 片段具有相同的黏性末 端，故被 BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与图(b)中表达载 体被 Sau3AⅠ酶切后的产物连接。(2)运载体上的启动子和终止 子具有调控目的基因表达的作用，由于甲和丙的目的基因分别插 入在启动子的上游和终止子的下游，故这两个运载体上的目的基 因都不能被转录和翻译。(3)常见的 DNA 连接酶是 E·coli DNA 连接酶和 T4DNA 连接酶，但作用有所差别，T4DNA 连接酶既 能连接黏性末端，又能连接平末端，而 E·coli DNA 连接酶只能 连接黏性末端。
种类 项目
限制酶
DNA连接 酶
DNA聚合酶
解旋酶
作用底物
DNA分子
DNA分子 片段
脱氧核苷酸
DNA分子
磷酸二酯
碱基对间
作用部位 磷酸二酯键