植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
设计性实验 ——类胡萝卜素植物色素的色谱分离与仪器分析
类胡萝卜素植物色素的色谱分离与仪器分析设计人：丁永朴班级：农学112学号：113131206类胡萝卜素植物色素的色谱分离与仪器分析【实验目的】1.学习从天然产物中提取有机化合物的方法。
2.掌握从胡萝卜或番茄中分离提纯胡萝卜素和番茄红素的原理和方法。
3.学习紫外光谱（分光光度法）、薄层色谱法的原理及其方法。
【实验原理】胡萝卜素是最早发现的一个多烯色素。
后来又发现了许多在结构上与胡萝卜素类似的色素，于是就把这类物质叫做胡萝卜色素类化合物，或者叫做类胡萝卜素。
这类化合物大都难溶于水，易溶于弱极性或非极性的有机溶剂，因此又把这类物质叫做脂溶性色素。
番茄红素是胡萝卜素的开链异物体。
番茄红素在成熟的红色植物果实如番茄、西瓜、胡萝卜、草莓、柑桔等中含量最高，其中含量最多的是番茄。
CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3 123456789101112131415161718192015'14'13'12'11'10'9'8'7'6'20'19'18'17'16'5'4'3'2'1'番茄红素（Lycopene）β-胡萝卜素和番茄红素的分子式均为C40H56，分子量为536.85，β-胡萝卜素的熔点184℃，番茄红素的熔点174℃。
β-胡萝卜素和番茄红素是不饱和碳氢化合物，难溶于甲醇、乙醇，可溶于乙醚、石油醚、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有机溶剂。
β－胡萝卜素的结构式根据β-胡萝卜素和番茄红素的上述性质，故可利用石油醚、乙酸乙酯等弱极性溶剂将它们从植物材料中浸提出来。
然后，根据它们对吸附剂吸附能力的差异，用柱色谱进行分离，用薄层色谱检测分离效果。
并根据它们在可见光区有强烈吸收的性质，用紫外-可见分光光度法进行测定，β-胡萝卜素的最大吸收峰为451nm，番茄红素的最大吸收峰为472nm。
植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。
二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。
把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。
四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663 – 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663 +20.29⨯OD645) V/1000*W按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663 – 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663 + 17.95⨯OD645) V/1000*W 注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。
新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离、测定
新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离和测定
班级：临五一班（2小班）姓名：任依梦学号：5117119051
【实验目的】
●掌握从新鲜胡萝卜中提取、分离β-胡萝卜素的方法
●掌握应用紫外-可见吸收光谱法测定β-胡萝卜素的紫外光谱图
●了解共轭多烯化合物π→π*跃迁吸收波长的计算方法及共轭多烯化合物的紫
外吸收光谱特征
【实验原理】
简介胡萝卜素是维生素A的前体，具有类似维生素A的活性，有α、β、γ异构体，其中以β-胡萝卜素生理活性最强。
β-胡萝卜素的结构如下：
β-胡萝卜素是长链多烯化合物，它的π-π*跃迁吸收带处于可见光区，因此纯β-胡萝卜素是橘红色晶体。
提取胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂，故可用有机溶剂来提取。
分离采用柱层析法将提取液中β-胡萝卜素分离出来。
测定经分离提纯的β-胡萝卜素含量可以直接用紫外-可见分光光度法测定。
【实验步骤】
1.β-胡萝卜素的提取
20g新鲜胡萝卜+40mL1：1丙酮-石油醚混合溶剂研磨5min（研钵）萃取（分液漏斗）
2.柱层析
在层析柱中加入少许浸有石油醚的脱脂棉→加入一半层析柱高的石油醚→加入20g中性氧化铝→在氧化铝上面加一圆形滤纸→加入β-胡萝卜素提取液→用9:1（体积比）石油醚-丙酮溶液洗脱，进行层析
3.β-胡萝卜素的紫外-可见吸收光谱的测定
将层析分离得到的橙黄色试样稀释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，用分光光度计测定400~600nm范围内的吸收
【实验结果】
β-胡萝卜素的吸收曲线。
类胡萝卜素的测定方法
类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法）本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为 4.3ng/mL，γ-胡萝卜素为3.5ng/mL，番茄红素为2.7ng/mL，斑蝥黄素为1.0ng/mL。
1. 方法提要样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器（1）高效液相色谱仪。
（2）冷凝回流皂化装置。
（3）旋转蒸发仪。
（4）离心机（5000r/min）。
3. 试剂本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。
（1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。
（2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。
（3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。
（4）二丁基羟基甲苯（BHT）。
（5）无水乙醇（C2H5OH）。
（6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。
（7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。
4. 测定步骤（1）样品处理：a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
β―胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定
β―胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定一、实验目的1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。
2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf 值的方法。
二．仪器和试剂仪器三角瓶（50ml）、分液漏斗（150ml）、蒸馏瓶（50ml）、普通蒸馏装置（或减压蒸馏装置）、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。
试剂胡萝卜、丙酮、石油醚（bp30~60℃）、硅胶（层析用，200~300目）、无水硫酸钠、石油醚（bp60~90℃）、丙酮：石油醚（1：9）（V/V）。
三．实验方案1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部，切碎。
称取碎鲜胡萝卜【1】10g于小研钵中,研碎。
碎胡萝卜移至50mL三角烧瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次，再用石油醚（bp30~60℃）萃取固体两次，每次10mL。
把石油醚溶液加到丙酮液中。
在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液【2】振荡，分去下层，用蒸馏水洗涤上层液两次，每次50mL，分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液（约1h）,把混合液倒入50mL圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂，得固体。
在制得的固体物加入3mL石油醚（bp60~90℃）拌硅胶1g，在通风橱内抽干，得黄色硅胶颗粒，待上柱。
2、装柱和分离取20cm*1cm色谱柱一根，垂直装置，以50ml三角烧瓶作洗脱液的接受器。
用镊子取少许脱脂棉【3】放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一层厚0."5cm的海石砂（或用一张比柱内径略小的滤纸代替），关闭活塞，向柱内倒入石油醚（bp60－90℃）至约为柱高的3／4处，打开活塞，控制流出速度为1滴/s。
通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。
用洗耳球轻轻敲打柱身，使填装紧密。
当装填到3/4时，再在上面加一层0."5cm厚的海石砂，操作时一直保持上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。
植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4295
植物原花青素（OPC）含量检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4295规格：50T/24S可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体25mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加25mL提取液，充分溶解。
配制好的试剂二应尽快使用，2-8℃保存时间不超过一个月；2.标准品：10mg原花青素。
临用前加入1mL提取液，充分溶解得到10mg/mL标准液，2-8℃保存两周；3.工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合，现用现配。
用多少配多少。
产品说明：原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。
在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。
技术指标：Oligomeric Proantho Cyanidins(OPC)VanillinH+Colored Compound(500nm)最低检出限：0.0622mg/mL线性范围：0.078-5mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、台式离心机、粉碎仪、超声清洗仪、30-50目筛和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取（功率300W，温度25℃，时间30min）；12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。
植物体叶绿素含量的测定实验报告
实验报告植物体叶绿素含量的测定摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿体色素，叶绿素a,叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm>649nm和470r1m。
根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a,叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm>649nm和470nm o根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：扇握分光光度计法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
实验材料：生物材料：菠菜叶片0.25g,自己培养的全素番茄苗叶片0.2g,缺磷番茄苗叶片0.2g；试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、IOm1量筒、50m1容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。
实验步骤•1叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片0.25g,擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许石英砂和CaCo3，再加入95%乙醇3m1,研磨成匀浆，再加95%乙醇IOmI,静置IOmin,用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣至无色；用容量瓶定容至50m1。
2.吸光度的测定取光径Icm比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和47Onm下测定吸光度。
3结果计算依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a、B的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
C a（叶绿素a）=13.95A≡-6.8Cb（叶绿素b）=24.96-9-7.32A665C T（叶绿素）=C a+C b=18.16‰+6.63MC xc（类胡萝卜素）=（IOOOA470-2.05C a-114.8C b）∕248色素浓度（mg∕1）χ提取液体积（1）X稀释倍数叶绿体色素含量样品鲜重（g）实验结果：菠菜叶片提取液吸光值:叶绿素叶绿素叶绿素总浓度1、测定叶绿素ab为什么选用红光波长？叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。
三七地上部分中叶绿素和类胡萝卜素的含量测定
三七地上部分中叶绿素和类胡萝卜素的含量测定杨晶晶;曲媛;崔秀明【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】以不同产地的三七茎、叶和不同产地、不同生长年限的三七花为原材料，采用丙酮研磨法及紫外-可见分光光度法分析三七地上部分中叶绿素和类胡萝卜素的含量。
结果表明，三七茎、叶和花中均含有丰富的叶绿素和类胡萝卜素，不同样品中色素含量有明显差异，其中三七茎、叶中色素含量高于三七花，茎、叶和花中叶绿素含量的变化范围分别在2.12mg/g～4.48mg/g和0.73mg/g～1.55mg/g ，而类胡萝卜素含量的变化范围分别在0.24mg/g～0.53mg/g和0.08mg/g～0.17mg/g。
这为三七地上部分作为新资源食品提供数据支撑。
【总页数】4页(P63-66)【作者】杨晶晶;曲媛;崔秀明【作者单位】昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500; 昆明理工大学云南道地药材研究开发中心，昆明 650500;昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500; 昆明理工大学云南道地药材研究开发中心，昆明 650500;昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明650500; 昆明理工大学云南道地药材研究开发中心，昆明 650500【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.丹参地上部分抗动脉粥样硬化活性部位中齐墩果酸和熊果酸的含量测定研究 [J], 李彧;曾荣洁;欧惠根;陈建忠2.糖脂康中试产品中藻蓝素、叶绿素、类胡萝卜素含量测定 [J], 钱金袱;左绍远;张学清;杨云川3.不同方法对龙胆中地上部分有效成分的含量测定 [J], 江蔚新;安胜利;尹清永;杨红梅;江淼4.当归地上部分中绿原酸和金丝桃苷的含量测定 [J], 胡淑毅;刘东来5.三七地上部分提取总皂苷及人参皂苷Rb3工艺研究 [J], 胡庆普;焦家良;付翠花;朱姝;潘杰;杨炳治因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4330
规格:50T/48S
产品简介：
类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称，普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。
类胡萝卜素是体内维生素A的前体，同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。
植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根等组织，样本通过溶剂萃取，分离提取类胡萝卜素，在440±10nm处有特殊吸收峰。
大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而叶绿素a 和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。
所以针对含叶绿体的组织，为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰，根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卜素的含量；针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、1mL玻璃比色皿、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。
产品内容：
提取液：自备，80%丙酮，即将丙酮:蒸馏水（V:V）=4:1混合待用。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
操作步骤：
一、样本制备：
1、新鲜植物叶片（去掉中脉）或其他组织用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL离心管或
试管中。
3、用提取液冲洗研钵或匀浆器，将所有冲洗液转入10mL 离心管或试管中，用提取液定容至10mL，置于黑暗条件或者包上锡箔纸浸提3h （期间可以颠倒混合2次），观察底部组织残渣接近于白色则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至组织残渣颜色接近于白色。
二、测定步骤：
A、黄色或其他非绿色组织（不含叶绿体）类胡萝卜素含量测定步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至440nm，用提取液调零。
2、取上层浸提液1mL 于1mL 玻璃比色皿中，测定440nm 处吸光值，记为A 440。
B、新鲜植物叶片或其他绿色组织（含叶绿体）类胡萝卜素含量测定步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节多波长至470nm、646nm 和663nm，用提取液调零。
2、取上层浸提液1mL 于1mL 玻璃比色皿中，测定470nm、646nm 和663nm 处吸光值，分别记为A 470、
A 646和A 663。
注意：若上层浸提液有残渣，可吸取1.2mL 上层浸提液置于1.5mL 棕色EP 管，常温下4000r/min 离心5min，再取上清液检测。
三、类胡萝卜素含量的计算
A、黄色或其他非绿色组织（不含叶绿体）类胡萝卜素含量的计算公式：
类胡萝卜素含量（mg/g 鲜重）=A 440÷（ε×d）×V 样总×1000÷W×F
=0.04×A 440×F÷W
V 样总：提取液总体积，0.01L；1000：单位换算系数，1g =1000mg；ε：类胡萝卜素经验消光系数，250L/g/cm；d：比色皿光径，1cm；F：稀释倍数；W：样本质量，g。
B、新鲜植物叶片或其他绿色组织（含叶绿体）类胡萝卜素含量的计算公式：
C a （mg/L）=12.21×A 663-2.81×A 646
C b （mg/L）=20.13×A 646-5.03×A 663
类胡萝卜素浓度：C c （mg/L）=（1000×A 470-3.27×C a -104×C b ）÷229
=4.367×A 470-0.014×C a -0.454×C b
类胡萝卜素含量（mg/g 鲜重）=C c ×V 提取×F÷W =0.01×C c ×F÷W
V 提取：提取液体积，0.01L；F：稀释倍数；W：样本质量，g。
注意事项
1.若不确定组织中有无叶绿素影响，可取样本提取液采用分光光度计在波长400-700nm 下进行扫描，看
波长640-670nm 之间有无波峰，有波峰则为有叶绿素，反之则无。
2.当A 超过1时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数F。
3.为了避免色素见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
4.提取液易挥发，操作时做好防护措施。
5.测定大量样本时，注意比色池中用来调零校正的比色皿中的提取液的液面位置，防止挥发造成误差。