鲎试剂使用说明书
QC-7129B鲎试剂灵敏度复核操作规程
正文规范鲎试剂灵敏度复核的操作过程和要求，确保鲎试剂灵敏度复核结果的可靠性。
适用于质监处药理室对鲎试剂灵敏度的复核。
质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。
USP版附录85；CP版附录Ⅺ E 。
细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。
鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。
鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。
细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37 1 C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
细菌内毒素标准品：USP细菌内毒素参考标准品(RSE)或已标定的细菌内毒素工作标准品(CSE)。
反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。
一、试剂、材料与仪器设备试剂：鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。
细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。
细菌内毒素标准品批号、效价、生产商。
材料及仪器设备：电热恒温水箱型号、设备编号。
电热鼓风干燥箱型号、设备编号。
漩涡混合器型号。
无热原试管规格：1075mm。
正文无热原玻璃瓶规格：25ml。
无热原玻璃吸管规格：1ml、2ml、5ml、10ml。
试管架、无热原封口膜、洗耳球、酒精棉球、砂轮片。
二、试验准备试验所用的容器、用具都必须经过处理，250C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。
试验操作过程应避免微生物的污染。
三、内毒素溶液配制细菌内毒素标准品系列溶液配制取RSE或CSE 1瓶，按照使用说明书加入规定量的细菌内毒素检查用水使溶，并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释至2.0、、 0.5、 0.25四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。
鲎试验实验报告
一、实验目的1. 了解鲎试验的原理和方法。
2. 掌握鲎试验在微生物检测中的应用。
3. 提高微生物学实验技能。
二、实验原理鲎试验是一种检测微生物内毒素的试验方法。
鲎血中含有一种特殊的凝固蛋白，当鲎血接触到细菌内毒素时，凝固蛋白会立即凝固，从而产生凝胶。
根据凝胶形成的时间，可以判断样品中内毒素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鲎试剂- 标准菌液- 待测样品- 生理盐水- 移液器- 培养皿- 灭菌棉签- 酒精灯- 镊子2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 移液器- 移液管- 培养皿- 镊子四、实验步骤1. 准备工作：- 将鲎试剂置于37℃恒温水浴箱中预热。
- 将待测样品和标准菌液分别用生理盐水进行稀释。
2. 制备样品：- 取适量鲎试剂加入培养皿中，加入适量的生理盐水，混匀。
- 分别加入标准菌液和待测样品，混匀。
3. 观察结果：- 将培养皿置于37℃恒温水浴箱中，观察凝胶形成的时间。
- 记录标准菌液和待测样品的凝胶形成时间。
4. 结果分析：- 根据凝胶形成的时间，判断样品中内毒素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准菌液凝胶形成时间为5分钟，说明标准菌液内毒素含量较高。
2. 待测样品凝胶形成时间为8分钟，说明待测样品内毒素含量较高。
3. 根据凝胶形成的时间，判断待测样品内毒素含量为中等。
六、实验讨论1. 鲎试验是一种简单、快速、灵敏的检测微生物内毒素的方法。
2. 在实验过程中，应注意操作规范，避免污染。
3. 实验结果与实际情况可能存在一定的误差，需结合其他实验方法进行综合判断。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了鲎试验的原理和方法，掌握了鲎试验在微生物检测中的应用，提高了微生物学实验技能。
在实验过程中，我们应注意操作规范，保证实验结果的准确性。
同时，我们应不断总结经验，提高实验技能，为微生物学领域的研究贡献力量。
鲎试剂凝胶法
遮光，在冷处保存。
【包装】
(1)1ml 安瓿；(2)2ml 安瓿；(3)5ml 安瓿；(4)7ml 抗生素瓶；(5)10ml 抗生素瓶 【有效期】
稀释内毒素标准品时应按其使用说明用漩涡混合器混合适当的时间。 2.2 检品稀释 当检品需要控制的内毒素限值大于鲎试剂的灵敏度值时，需要用检查用水对检品进行稀释，计算公式如下：
MVD：检品的最大有效稀释倍数 L：检品需控制的内毒素限值（Eu/ml） λ：鲎试剂灵敏度值（Eu/ml） [举例]：某检品需要控制的内毒素限值为 5Eu/ml，使用灵敏度 λ=0.25Eu/ml 的鲎试剂作细菌内毒素检查。
二年
【批准文号】
(94)卫药准字 SJ-01 【生产企业】
企业名称：湛江安度斯生物有限公司
地 址：广东省湛江市人民大道中 38 号 邮政编码：524022 电 话：（0759）3380672 传 真：（0759）3391072
E-mail:zacb@ 网 址：
若阳性对照管为阴性表明鲎试剂或标准内毒素已失效或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确或标准内毒素的稀释有误
鲎试剂说明书
【名称】 通用名：鲎试剂 英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate (TAL) 汉语拼音：Hou Shi Ji 【性状】 本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水中易溶。 【原理】 本品为鲎科动物东方鲎（Tachypleus Tridentatus, Leach）的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，内含能被 微量细菌内毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme）和凝固蛋白原（Coagulogen）。在适宜的条件下（温 度，pH 值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。凝胶法鲎试 剂是根据反应所形成凝胶的程度来限量检测细菌内毒素。 【用途】 用于细菌内毒素检查。 【使用方法】 1. 实验准备 1.1 选择所需规格及灵敏度的鲎试剂，细菌内毒素标准品以及细菌内毒素检查用水。 1.2 10×75mm 反应试管（若使用 0.1ml 规格的鲎试剂无需准备此试管）和大口径稀释试管若干支，以及移液器具。 实验所用器皿须经 250℃干烤至少 1 小时或其它适宜的方法除去可能存在的外源性热原。 1.3 水浴恒温器或干热恒温器，漩涡混合器，试管架，计时器。实验开始前应把恒温器温度调到 37±1℃。 2. 实验操作 2.1 内毒素标准品稀释 取内毒素标准品（冻干品）1 支，开启，按使用说明加入检查用水溶解后分步稀释至所需浓度备用。 如下稀释方法供参考：
2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》
2005年版中国药典《细菌内毒素检查法》凝胶法鲎试剂使用说明书【名称】通用名：鲎试剂英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate （简称TAL）汉语拼音：hou shi ji本品主要成份为B因子、C因子、凝固酶原、凝固蛋白原。
【用途】专用于细菌内毒素检查。
【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。
【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【用法】1．材料和设备1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。
2．实验操作2.1 稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）1支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。
2.2 TAL试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于TAL试剂中，轻轻振摇至少30S至试剂完全溶解。
注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。
2.3 检查操作2.3.1 取分装有0.1ml 鲎试剂溶液的10×75mm试管或复溶后的0.1ml /支规格的鲎试剂原安瓿8支，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。
2.3.2 每支供试品管加入0.1ml供试品；阴性对照管加入0.1ml检查用水；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ内毒素的供试品。
2.3.3 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果。
试管在孵育期间应避免任何的振动。
[精华]鲎试剂试验方法
![[精华]鲎试剂试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/28cbff01caaedd3383c4d3b4.png)
[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。
使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。
使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。
特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。
因此不列为独立品种。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。
这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。
2.检测范围宽，可达4个数量级。
3.灵敏度高达0.005EU/ml。
4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。
5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。
6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。
鲎试剂_精品文档
鲎试剂摘要：本文档介绍了鲎试剂的基本概念、用途、制备方法、相关研究进展及其在生物医学领域的应用。
鲎试剂是一种重要的化学试剂，因其在生物医学研究中的广泛应用而备受关注。
在本文中，我们将详细探讨鲎试剂的制备方法和相关合成技术，并介绍其在生物医学研究中的应用前景。
1. 引言鲎试剂是一类重要的化学试剂，广泛应用于生物医学研究领域。
鲎是一种海洋生物，其体内含有丰富的活性物质，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等多种生物活性，因此被广泛应用于药物研发和生物医学研究中。
2. 鲎试剂的制备方法2.1. 鲎采集与提取鲎是一种海洋底栖无脊椎动物，生长在海洋深处，常见于大洋的中、深层海域。
采集鲎主要有两种方法，一种是利用潜水艇、潜水器等工具直接采集；另一种是利用钓网、拖网等渔具进行捕捞。
采集到的鲎需要迅速进行冷冻保存，以保持其生物活性。
提取鲎试剂主要有两种方法，一种是通过高温高压提取，将鲎样品加入适量的溶剂中，在高温高压的条件下进行提取。
另一种是通过酸碱提取，将鲎样品进行酸碱处理，使其中的目标物质转化为带电离子，再通过溶剂分离。
2.2. 鲎试剂的纯化与分离提取得到的鲎试剂需要进行纯化和分离，以获得纯度较高的鲎试剂。
常用的纯化和分离方法包括反渗透、离心分离、柱层析等。
这些方法可以有效地去除杂质，提高鲎试剂的纯度。
2.3. 鲎试剂的结构鉴定经过纯化和分离后的鲎试剂需要进行结构鉴定，以确定其化学成分和结构。
常用的结构鉴定方法包括质谱分析、核磁共振等。
这些方法可以帮助研究者了解鲎试剂的化学性质，并为进一步研究和应用提供依据。
3. 鲎试剂的应用前景3.1. 鲎试剂在药物研发中的应用由于鲎试剂具有多种生物活性，因此被广泛用于药物研发领域。
鲎试剂可以作为药物候选物，通过对其进行结构优化和改造，开发出具有较高药效的新药。
同时，鲎试剂也可以作为药物控释系统的载体，实现药物的控制释放。
3.2. 鲎试剂在生物医学研究中的应用鲎试剂在生物医学研究中有着广泛的应用。
标准品、鲎试剂操作规程
标准品、鲎试剂操作规程目的：建立标准品、鲎试剂操作规程，指导检验员正确执行标准品、鲎试剂操作。
1.适用范围：适用于标准品、鲎试剂操作。
2.定义2.1标准品系以细菌内毒素国家标准品为基础标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.责任：QC人员。
4.规程4.1申购4.1.1标准品采购：按《对照品操作规程》中对照品申购程序，进行采购。
到药品检验所或中国生物制品检定所统一订购。
4.1.2鲎试剂采购：由管理员根据检验需要，填写申购单，注明：品名、规格、灵敏度、数量、购回日期。
交化验室主任核准后，交物料部采购。
4.2接收4.2.1物料部将鲎试剂与标准品购回后，管理员接通知，开具领料单。
4.2.2经化验室主任签字后，凭领料单到仓库领用。
4.2.3接收前，管理员仔细核对所领细菌内毒素工作标准品或鲎试剂的规格、数量、有效期和灵敏度，检查外包装、标签有无损坏或泄漏。
无误后，方可接收。
4.3贮存4.3.1接收的标准品与鲎试剂根据其特性存放在适宜的条件下，且根据批号、灵敏度分类摆放。
4.3.2管理员及时登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》。
4.4发放、使用4.4.1检验员根据检品需要，向管理员申请试验用量的标准品、鲎试剂。
4.4.2管理员在核实申请情况后，方可发放。
4.4.3领用后，检验员登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》，管理员签名确认。
4.4.4每批入库的鲎试剂必须按药典规定，进行灵敏度复核试验，符合规定后方可发放、使用。
4.4.5鲎试剂灵敏度复核4.4.5.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每步混匀30秒。
4.4.5.2取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个浓度平行做4管；另两管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
鲎试剂灵敏度复核SOP
鲎试剂灵敏度复核SOP1.目的为规范鲎试剂标示灵敏度复核的操作，确保鲎试剂试验的准确性，特制定此操作规程。
2.范围本标准操作规程适用于新批号鲎试剂使用前对标示灵敏度的复核以及试验条件发生任何可能影响检验结果的改变时，对鲎试剂标示灵敏度的复核。
3.定义无4.职责4.1QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3质量总监负责批准本规程。
4.4QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版二部6.材料见8.程序。
7.流程图无8.程序8.1试剂：细菌内毒素工作标准品、鲎试剂溶解水、待复核灵敏度的鲎试剂。
8.2仪器与设备：恒温水浴箱、烤箱、小试管、中管、半中管。
8.3操作步骤8.3.1试验前准备试验用吸管、小管等玻璃器皿应在试验前1～2天内包好，经200℃干烤2小时除内毒素备用。
8.3.2鲎试剂灵敏度复核根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在漩涡混合器上混匀30秒钟；取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm×100mm试管18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照；将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，保温60分钟±2分钟。
8.4结果判定8.4.1将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。
保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
8.4.2当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。
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凝胶法鲎试剂使用说明书
一、检测步骤
1、标准品稀释：开启后加入检查用水（W）1.2ml，置漩涡混合器上混合5min，得到
浓度为10EU/ml的内毒素溶液，标记为（E10），其余各梯度稀释方法如下：
0.3ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml
E10 －－－→E1－－－→E0.5－－－→E0.25－－－→E0.125－－－→E0.06－－－→E0.03
2.7mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW
此步骤为新开启标准品者操作，各梯度做好标记，其余操作人员可直接使用。
2、取鲎试剂8支，折断安瓿瓶颈，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2
支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管，做好标记。
3、阴性对照管加入0.2ml检查用水，其余各管加入0.1ml检查用水，每支供试品检查
管另加入0.1ml供试品；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ（即0.1ml 的E0.125）内
毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ（即0.1ul 的E1）内毒素的供试品。
4、封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37℃的恒温金属浴中60min，然后取出观察结果。
在孵育期间避免任何震动！
二、结果判断
1、将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°，若管内形成凝胶，不变形，不滑落者
为阳性，记录为（+）；反之为阴性，记录为（—）。
取出试管应尽量避免受到震动
造成假阴性结果！
2、阴性对照管必须为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管必须为阳性，否则实验结
果无效。
3、若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水货实验器具受到污染；若阳性对照管
为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价
标示不准，或实验条件不满足；若供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑
制反应的干扰因素存在。