第15分枝杆菌
第十一章 分枝杆菌属 (Mycobacterium)
粗糙 乳酪色 + + +
光滑或粗糙 黄或橘色 ± + +
防治原则
• 正确用药，对抗结核药物不敏感 • 局限性病变结合外科手术 • 加强对艾滋病患者的预防和治疗
麻风分枝杆菌
－－生物学性状
• 为抗酸杆菌 • 细胞内寄生 • 标本检测可见成团，束状于细胞中 • 细胞呈泡沫状，称为麻风细胞 • 体外人工培养尚未成功 • 犰狳是动物感染模型
麻风分枝杆菌－－临床意义与微检
• 经呼吸道，破损皮肤、粘膜，接触传播 • 引起麻风病 • 微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据
细菌主要侵犯
皮肤、神经
根据机体的免疫状态、病理变化、 临床表现分为——二型二类
二 型
瘤型（开放性）：
• 细胞免疫功能低下 • 麻风杆菌在体内大量繁殖 • 传染性强，若不治疗，病 情逐渐恶化 • 抗体与自身组织抗原形成 “麻风结节”—狮面状
炎和肿大的肺门淋巴结 )。 – 90% 以上的原发感染形成纤维化或钙化，不治自愈。少数 病灶扩散，引起肺外结核病。
继发感染——外源性或内源（原发感染遗留）性感染
– 多见成人，有免疫力 – 病灶局限，引起局部TB、开放性TB （反应剧烈，干酪性坏死、空洞）
2. 肺外感染
• 经淋巴、血液循环引起其它部位感染：
溶菌酶、青霉素等作用导致细胞壁肽聚糖的正常结构完整 性或其合成受阻, 导致菌体变成 L 型； 异烟肼则影响结核分枝杆菌细胞壁中分枝菌酸的合成 , 使 本菌出现抗酸染色阴性。
2. 培养特性
馋--营养要求较高，必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油
以及含某些无机盐类的特殊培养基（罗氏）上才能生长良好。
懒--生长缓慢，14-1 8 h分裂1次，在固体培养基上3-4 w才
病原微生物学,第13章分枝杆菌属,包括(第一节结核分枝杆菌,第三节麻风分枝杆菌)
L型变异
二、致 病 性
（一）致病物质
致病与细菌结构成分有关
(1)脂质（占胞壁干重的60%） 磷脂: 结核结节、干酪样坏死 脂肪酸（其中索状因子）: 破坏线粒体、抑制中性粒细胞 游走和吞噬、慢性肉芽肿 硫酸脑苷酯和硫酸多酰基化海藻糖: 使结菌在吞噬细胞中 长期存活（抑制吞噬体与溶酶体的结合） 腊质D : 超敏反应、佐剂 (2)蛋白质：结核菌素与腊质D结合后使机体发生超敏反应 (3)荚膜: 黏附、抗吞噬、保护细菌
慢性纤维空 洞性肺结核
致病性
肺外感染
• 免疫力低下患者 • 常见于脑、肾、骨、关 节、生殖系统 • 少数形成全身粟粒性结 核或播散性结核
结核病患者
临床症状
• 全身症状：发热（低热），疲倦、乏力、 夜间盗汗,消瘦 • 呼吸系统症状：咳嗽、咳痰 咯血、胸痛、气急
三、免疫与超敏反应
免疫特点
有菌免疫（菌体或成分消失，免疫也消失）
抗青霉素等抗生素
（四敏）
• 对紫外线敏感
• 对热敏感
• 对乙醇敏感
• 对抗痨药物敏感
“变”：毒力、耐药性、形态等均可变异
卡介苗（Bacille Calmette-Guerin，BCG）：卡— 介二人将有毒的牛型分枝杆菌培养于含胆汁、甘油、 马铃薯的培养基中，经230次传代，历时13年，使 其毒力发生变异，成为对人无致病性，而仍能保持 良好免疫原性的疫苗株
Robert Koch
• 1882年3月24日科 霍在德国柏林生 理学會上宣布了 结核菌是结核病 的病原菌。
•1995年起将每年的3月 24日定为“世界防治结 核病日”
Robert Koch 1843-1910
20世纪30年代，“十痨九死”的悲惨状况。
第17章 分枝杆菌属
特点:潜伏期长 特点:潜伏期长(2-5年), 年 , 发病慢(数月 数年), 数月-数年 发病慢 数月 数年 ,病程 长的慢性传染病. 长的慢性传染病 麻风病变可分为四型: 麻风病变可分为四型: 瘤型麻风: 恶性麻风) 瘤型麻风:(恶性麻风) 侵犯部位:皮肤黏膜,周围神经及内脏 侵犯部位:皮肤黏膜, 传染性强: 传染性强 病变中大量麻风细胞 免疫状态: 细胞免疫缺陷, 免疫状态 细胞免疫缺陷,体液免疫正常 临床表现:麻风结节,可融合成" 临床表现:麻风结节,可融合成"狮面 病情严重,逐渐恶化. 容",病情严重,逐渐恶化.
脂质:存在细胞壁,含量与毒力平行 脂质 存在细胞壁, 存在细胞壁 分枝菌酸+海藻糖 (1)索状因子(糖脂 分枝菌酸 海藻糖): 破坏 )索状因子(糖脂:分枝菌酸 海藻糖) 线粒体膜, 影响细胞呼吸,抑制白细胞, 线粒体膜, 影响细胞呼吸,抑制白细胞,引起慢性 肉芽肿. 肉芽肿. (2)磷脂 刺激单核细胞增生,病灶形成结核结 )磷脂: 刺激单核细胞增生, 及干酪样坏死等. 节,及干酪样坏死等. 肽糖脂) (3)蜡质 (分枝菌酸 肽糖脂):迟发型超敏反应 )蜡质D(分枝菌酸+肽糖脂 迟发型超敏反应 (4)硫酸脑苷脂 抑制吞噬,使细菌在吞噬细胞长 )硫酸脑苷脂: 抑制吞噬, 期存活
免疫力
主要是细胞免疫: 主要是细胞免疫:对该菌的免疫力随结核杆 细胞免疫 菌或其成分在体内存在而存在,故称感染免 菌或其成分在体内存在而存在,故称感染免 有菌免疫. 菌体成分消失,免疫力消失. 疫或有菌免疫 菌体成分消失,免疫力消失
结核菌素试验 原理: 原理:用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核杆 菌能否有超敏反应,以判断机体有无免疫力. 菌能否有超敏反应,以判断机体有无免疫力 试剂: 纯蛋白衍生物(PPD)5U 试剂 纯蛋白衍生物( ) 方法:前臂内侧皮内注射, 方法:前臂内侧皮内注射,48-72h观察 观察 结果: 结果: 红肿硬结≥5mm,阳性( ≥ 15mm,强阳性) 红肿硬结 ,阳性( ,强阳性) 红肿硬结<5mm,阴性 红肿硬结< , 意义 阳性: 过去感染残余/BCG,有免疫力 阳性: 过去感染残余 , 强阳性: 强阳性: 活动性结核 阴性: 无感染/未接种 未接种BCG 阴性: 无感染 未接种 假阴性:感染初期,严重结核病, 假阴性:感染初期,严重结核病,细胞免疫功能 低下者(艾滋病,肿瘤,使用免疫抑制剂等) 低下者(艾滋病,肿瘤,使用免疫抑制剂等)
第15章分枝杆菌
第15章分枝杆菌表15-1 分枝杆菌的分类分类生长速度菌落和色素产生代表菌种致病性结核分枝杆菌复合群生长缓慢结核分枝杆菌、牛分枝杆菌结核病非结核分枝杆菌RunyonⅠ组生长缓慢菌落不见光时为淡黄色,光照后则变为黄色或橙色堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、海分枝杆菌(M. marinum ) 肺结核样病变；皮肤丘疹、结节与溃疡RunyonⅡ组在37℃生长缓慢在暗处培养时菌落呈橘红色瘰疠分枝杆菌(M. scrofulaceum)儿童淋巴结炎RunyonⅢ组40～42℃下生长慢通常不产生色素鸟-胞内分枝杆菌(M.avium)结核样病变，多见于肺与肾RunyonⅣ组在25～45℃快速生长。
培养5～7天即可见到菌落个别种产生色素偶发分枝杆菌(M.fortuitum)极少致病麻风分枝杆菌人工培养基上不生长麻风第一节结核分枝杆菌俗称结核杆菌，是结核病的病原菌。
该菌可侵1/3感染了结核分枝杆菌。
特别是近年来世界范围内艾滋病的流行，结核病作为最多见的一种机会性感染，成为HIV阳性者死亡的主要原因，因此，结核病已成为全球重大公共卫生问题。
一、生物学性状（一）形态与染色在感染的组织中，结核分枝杆菌细长且直，大小约0.4×3 m（图15-1）；在人工培养基上，不同种呈现丝状、球状、串珠状等多形性。
由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量的脂质，不易着色，一旦被碱性染料着色后能够抵抗盐酸乙醇（含95%的乙醇和3%的盐酸）的脱色作用，被定性为抗酸菌（acid-fast bacteria），一般不用革兰染色法分类为革兰阳性或革兰阴性。
常用齐尼抗酸染色法（Ziehl-Neelsen acid-fast stain），以5%石碳酸复红加温染色后再经3%盐酸乙醇脱色，结核分枝杆菌被染成红色，而其他非抗酸菌及背景则被美蓝复染呈蓝色。
此外，结核分枝杆菌在药物如异烟肼的影响下，亦可变为抗酸染色阴性。
图15-1 痰标本中的结核分枝杆菌（箭头所指）（Brooks et al, 2004）（二）培养和生长特性结核分枝杆菌的初代分离培养应使用选择和非选择培养基。
第章 分枝杆菌属
分枝杆菌属分枝杆菌属（Bacillus）是一类芽孢杆菌科中的细菌属，是一种常见的细菌。
分枝杆菌属细菌的形态为革兰氏阳性，有芽孢，不运动。
分枝杆菌属细菌存在于自然界中的土壤、水、空气、动植物沙门氏菌以及人体消化道中等地方。
此外，分枝杆菌属细菌还是许多纤维素降解菌之一，有着重要的应用价值。
1. 发现历史分枝杆菌属的物种首先被德国微生物学家F. Cohn于1872年所描述。
分枝杆菌属名称来源于拉丁语Baculum（杆子）而得名。
起初，包括芽孢杆菌属（Sporolactobacillus）和马铃薯杆菌属（Solanum）在内的多个属别被归于分枝杆菌属之下。
到了20世纪30年代，随着生物学的发展以及生物化学研究的深入，分枝杆菌属内部结构不断明朗起来。
1953年，福克勒（Foukceler）首次使用荧光染色技术，证实了分枝杆菌属细胞内有芽孢的产生，并为之制定了现代概念。
目前，分枝杆菌属内部物种的划分还在持续调整之中。
2. 特征2.1 形态学特征分枝杆菌属细菌形态为革兰氏阳性菌杆，大小为0.5 ~ 1.2 µm × 2 ~ 10 µm，杆状或为不规则形状。
除了胶孢杆菌属之外，其他细菌均不产生胶质囊或鞭毛等结构，而且周围亦不具有较多的纤毛或糖胶成份。
芽孢的形成是分枝杆菌属的一个显著特征。
分枝杆菌属细胞在恶劣环境条件下，通过细胞内分裂并将核质分割成若干形状不一、结构各异的小体，然后将其包裹在亚细胞层次的膜结构内，最终形成成熟的芽孢。
2.2 生理生化特征分枝杆菌属细胞在吸取营养和能量方面非常多样化，能够利用许多有机物和少数无机物。
分枝杆菌属能产生许多酶，包括外排酶、代谢酶、溶解酶等，具有泛酸稳定性。
此外，分枝杆菌属能抵抗许多化学物质和物理条件的影响，能生长于广泛的嗜酸或嗜碱环境中，也能在较高的温度下繁殖。
2.3 分类根据细胞结构、代谢特征及生命周期等特征，目前分枝杆菌属细菌被分为16个物种。
微生物第章 分枝杆菌属
微生物第章：分枝杆菌属一、概述分枝杆菌属（Bacillus）是革兰氏阳性的芽孢杆菌科中最常见的属之一。
其名称来源于其在培养基上形成的分枝的菌体形态。
该属菌体大小相对较大，形态多样，包括直形、杆形、梭形或球形等不同类型。
分枝杆菌属包括很多种类的细菌，一些种类在自然环境中很常见，有着重要的生态、工业和医学应用价值。
二、生态学和鉴定分枝杆菌属中的细菌生活在许多不同的环境中，包括土壤、水、植物、食品和动物的肠道中。
细菌在自然环境中存在着极为广泛的分布，在枯萎的植物、渣滓、泥炭、海水和河流等地方都可以发现其存在。
在实验室条件下，分枝杆菌属可以通过形态特征、代谢特性和生长特点等鉴定方法进行分离和鉴定。
最常用的方法是通过对分枝杆菌在特定培养基上的生长型态观察和菌落形态分析来确定其种属。
三、病原学分枝杆菌属在人类和动物中可以引起多种疾病，包括但不限于食物中毒、牲畜疾病和人类疾病。
尽管其中很多细菌是无害的或有益的，但某些菌株却可以对人类或动物健康构成威胁。
常见的分枝杆菌病原体包括：芽孢杆菌（B. anthracis）, 糖原芽胞杆菌（B. cereus），乳酸吸收性芽胞杆菌 (B. coagulans) 和枯草杆菌（B. subtilis）等。
分枝杆菌的病原性与其产生的细胞外毒素和内毒素有关，而这些毒素的分泌与生长环境和条件有很大关系。
四、工业应用除了在疾病治疗上的作用外，分枝杆菌属在工业生产中还有广泛的应用。
例如，在饮食加工业中，分枝杆菌可以用于制造豆腐、酱油等食品。
同时，分枝杆菌的一些菌株也可以进行微生物发酵生产出某些化合物，如抗生素、植酸酶、纤维蛋白溶酶等。
这些化合物在医药和普通日常生活中也被广泛使用。
五、分枝杆菌属在自然环境、医学、动物和食品加工业、以及其他工业领域都存在着广泛的应用和研究价值。
随着科学技术的发展和研究范围不断扩大，分枝杆菌属的多样性和作用将会得到更深入的了解和研究。
《医学免疫学与医学微生物学》课件第十九章分枝杆菌、放线菌、诺卡菌属【67页】
世界防治结核病日
１８８２年３月２４日，德国科学家罗伯特·科赫 （郭霍）宣布发现结核杆菌是导致结核病的病原 菌，从而给防治结核病带来突破。此后，随着抗 结核药物研制成功，结核病的流行得到有效控制， 并在一些地区绝迹。
在纪念郭霍氏发现结核菌100年之际，1982年在 国际防痨和肺病联合会及世界卫生组织的倡议下， 将每年的3月24日定为“世界防治结核病日”。
第一节 结核分枝杆菌
❖ 目前结核病是世界上最普遍和最严重的人类传 染病之一，全球人口的1/3感染了结核菌。死亡 人300万/每年。
❖ 对人有致病性的主要为人型、牛型和非洲型， 我国为结核大国，居世界第二位(解放前为世界 之首)。
❖ 耐药菌的增加、流动人口的增加、艾滋病、吸 毒、贫困、麻痹心理等原因 使结核病在二十 世纪末死灰复燃。
干酪样肺炎
慢性纤维空 洞性肺结核
Im X光N 片a 诊o 断ge
正常胸部 (右侧 )
右侧浸润型肺结核
No Image
2、肺外结核
肠结核，结核性脑膜炎，皮肤结核，肾结核，骨 结核等
双重感染
同时感染人类免疫缺陷病毒（HIV）与 结核菌的人称为双重感染者。其病死率 高，对人类健康与生命均构成严重威胁。
No Image
No Image
生化反应
❖ 不发酵糖类
❖
触酶试验 热触酶试验
结核分枝菌 +
-
非结核分枝菌 +
+
抵抗I 力m ：因N 其细a 胞壁o 中g 含有大e 量的脂质，可防
止菌体水分的丢失，故对干燥有较强的抵抗力，在 干燥的痰内可存活6—8个月。
❖ 四怕 湿热 紫外线 乙醇 抗痨药物（链霉素、 异烟肼、利福平等）
第14章分枝杆菌、棒状杆菌
（三）免疫性
毒素与抗毒素的中和作用 锡克试验（Schick test） 根据外毒素与 抗毒素中和的原理，以少量外毒素测定体 内有无抗毒素存在的试验。
三、微生物学检查法
标本 涂片镜检 异染颗粒 分离培养 毒力试验 （1）体内法 豚鼠体内中和试验 （2）体外法 平板毒力法（Elerk试验）双相琼脂扩散法
迟发性变态反应 ↓ 结核结节＋干酪样 坏死，病灶扩大、 溶解播散
和结 变核 态杆 反菌 应引 起 的 免 疫 反 应
和结 变核 态杆 反菌 应引 起 的 免 疫 反 应
干酪样坏死
（二）所致疾病
结核 肺内感染 肺外感染 传播途径 呼吸道、消化道、受损皮肤 最常见：肺结核
肺外感染
结 核 菌 素 试 验
方法：5U皮内注射
48－72小时观察结果。
结果分析：红肿硬结直径
＜0.5cm
：阴性
无感染、早期、细胞免疫低下或缺陷
0.5－1.5cm：阳性，感染或接种过疫苗
＞1.5cm：强阳性，可能有活动性结核
三、微生物学检查
标本 集菌 提高检测阳性率 染色镜检 抗酸染色 培养法 罗氏培养基 动物试验 豚鼠 细菌核酸检测
四、防治原则
预防接种 BCG
对结核患者早期发现、隔离和治疗
治疗 以合理的化疗为主，以传统 的休息和营养为辅。 * 治疗原则：对活动性肺结核必 须坚持早期、联合、规则、足量、 全程的用药原则。
麻风分枝杆菌（M.leprae）
目前全世界约有病例1000万以上，主要分布 在东南亚地区。我国目前病例不足7万。
4、变异
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分子生物法菌种鉴定
• PCR 限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP） • PCR单链构象多态性分析（PCR-SSCP） • 核酸探针 • 核酸序列分析 • 多重PCR
高效液相色谱（HPLC）
• 检测分枝菌酸：由于不同种的分枝杆菌细 胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC检 测分枝菌酸可鉴定菌种。
Bactec –TB 960快速培养系统
3D-120型
三、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定 3. 菌种鉴定
(1) 生化反应
（2）噬菌体鉴定法
（3）分子生物法菌种鉴定
(4)高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸
生化反应--烦琐、费时（ 4～8 周）,影响因素多
• 结核分枝杆菌不发酵糖类 • 能产生触酶 • 人型MTB能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受 噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB则不能 • 人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无 毒株则为阴性，并失去索状生长现象
致病性
一.致病物质 1.脂质：磷脂能促进使单核细胞增生，引起结核结节和干酪样坏死； 分枝菌酸与菌体的抗酸性有关； 梭状因子能破坏线粒体膜，抑制白细胞游走，引起慢性肉芽 肿；
蜡质D能激发机体的Ⅳ型变态反应；硫酸脑苷脂能抑制吞噬与溶酶 体的结合
2.蛋白质：诱发变态反应 3.多糖：与蜡质D结合能引起局部病灶的细胞浸润 4分枝杆菌生长素：脂溶性的铁熬合物
结核分枝杆菌抗原检测
• 用ELISA 方法在血清中检测结核分枝杆菌 抗原-结核菌外分泌特异性抗原 (external secreted specific antigen) 浓度。 • 任何体液如血液、痰液、脊髓液、尿液和 各式组织萃取液等体液可用于检测特异蛋 白抗原。
结核抗体
• 作为活动性MTB感染的快速诊断方法之一 • 比传统的痰涂片抗酸染色、MTB培养等方法简便、 快速、敏感性高，但存在一定的假阳性。 • 近年，胶体金、蛋白芯片检查结核杆菌IgG抗体 抗体，特别是后者，针对三种抗原（脂阿拉伯甘 露糖、38K Da和16K Da蛋白质抗原），其灵敏 度和特异性均有所提高。
二.所致疾病： 1：原发感染：多见于儿童。常有肺门淋巴结大、干酪样坏死和结核结节 的形成，也可经血到达多个脏器引起相应结核病。 2继发感染：多见于成人或较大的儿童，也以肺部多见，特点为病灶局限， 不易累积邻近淋巴结，病灶常钙化而愈，也可破溃成空洞。 三、免疫性 1.免疫机理：传染性免疫，主要是细胞免疫 2.免疫与变态反应：T细胞介导的结果
三、微生物检验
（六）药物敏感性试验
• 将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物的固体 培养基上，同时做不含药物的对照组。 • 经过培养，含有药物的培养基上菌落数目是对照
组的 75 ％以上，则认为该菌对该药物浓度为完全
耐药，如无菌落生长则为敏感。
第二节
一、概述与分类
非结核分枝杆菌
二、临床意义
三、微生物学检验
一、概述与分类
非结核分枝杆菌（Ｎontuberculosis
Mycobactericum，NTM） :
指结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分 枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分 枝杆菌) 和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。
概 述
• NTM种类众多，现已被鉴定的有150余种, 包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。
二、临床意义
• 迄今为止已发现NTM有150余种，其中约 1/3与人类疾病有关。 条件致病菌 毒力低于结核分枝杆菌 自然界中广泛存在 可以在人体某些部位定植 • 结核病和NTM感染的治疗不同
为何要关注NTM？
自然界中广泛存在〃如水、土壤和气溶胶〃 可导致免疫力低下的患者感染。 近年来〃因手术器械、注射器具及医疗用 水等灭菌不合格、使用不规范造成患者手术 切口、注射部位NTM感染暴发事件。
• 结核菌素试验（OT）： ①原理：细胞免疫或Ⅳ变态反应。 ②方法：用OT或PPD所做的皮内试验 ③结果：阳性5mm＜红肿硬结直径＜2cm强阳性红肿硬结直径＞2cm； 阴性红肿硬结直径＜5mm ④意义：阳性：已感染过结核，但不一定有结核病；强阳性：可能有活 动性结核病；阴性：未感染过结核，应排除感染初期或免疫力下降
噬菌体鉴定法（PhaB）
• Wilson 等于1997年建立的快速检测新技术 • 原理：是分枝杆菌噬菌体D29能感染活的分 枝杆菌,未进入感染菌体内的噬菌体被随后加 入的杀毒剂灭活 ,已进入菌体内的噬菌体不 受影响。噬菌体在感染菌体内大量增殖 ,并 将菌体裂解 ,释放出的子代噬菌体可感染随 后加入的指示细胞 ,并将其裂解 ,在琼脂平板 上出现透亮的噬菌斑。
4. 关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报
5. 关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报 6. 卫生部关于安徽省某县医院血液透析患者感染丙肝事件的通报 7. 关于广东省汕头市潮阳区某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件的 通报 ———摘自江苏省卫生厅《严重医院感染事件通报与处罚规定选编》 （2010年7月）
第十五章 分枝杆菌、
太钢总医院 张艳
汪涵
俞敏洪 李冰冰 哈佛 李嘉诚
李 冰 冰
林 徽 因
概 述
分枝杆菌属（Mycobacterium） 是一类细长、直或略带弯曲专 性需氧性杆菌。无动力、无牙 胞、细胞壁含有大量脂质，该 菌一般认为革兰染色阳性。多 数细菌在生长的一定时期抵抗 酸-醇（acid-alcohol-fast）， 故又称抗酸杆菌（acid-fast bacillus）
流动人口的剧增 耐多药结核菌的 出现 人类免疫缺陷病 毒的蔓延
WHO :世界仍处于 结核病严重威胁之中
生物学性状
1.形态染色：菌体细长微弯曲，有分枝，排列不规则，单个散在。易发生L 型抗酸染色阳性 2.培养特性： ◆专性需氧，最适温度37℃5-10%CO2可促进生长 ◆营养要求高，罗氏培养基（蛋黄、甘油、天门冬素、马铃薯、无机盐、 孔雀绿） ◆生长缓慢，18小时分裂一次，2-4周形成R型菌落，“菜花样菌3.抵抗力：含大量脂质，抵抗力强抗干燥、抗酸碱、抗化学消毒剂、对湿 热和紫外线敏感 4.变异性：结核杆菌易发生菌落形态（L型）、毒力（BCG）、免疫原性 和耐药性变异。
• 国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）分为 三类，即缓慢生长菌、快速生长菌和不能 培养菌三种类型。
• Runyon按细菌产色素和生长速度将临床重 要分枝杆菌分为RunyonⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群
Runyon 分类法
Ⅰ群———光产色菌,如猿猴分枝杆菌、堪萨斯分枝 杆菌、海分枝杆菌; Ⅱ群———暗产色菌,如苏加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆 菌、瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌; Ⅲ群———不产色菌,如鸟分枝杆菌复合群(M1avium complex ,MAC) 、玛尔摩分枝杆菌、土地分枝杆菌、 溃疡分枝杆菌、嗜血分枝杆菌; Ⅳ群———快生长菌,如偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、 脓肿分枝杆菌。
最适生长温度为35～37℃，最适pH6.5～6.8 14 ～ 18h 分裂 1 次，在固体培养基上 2 ～ 5 周才 出现肉眼可见的菌落 典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透 明，乳白色或淡黄色，如菜花样
– – –
2.分离培养
• 标本接种于选择性培养基中(常用罗氏，所 含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长) • 37℃，5％～10％CO2培养8周 • 结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落 • 涂片染色为抗酸阳性
三、微生物学检验
（五） 免疫学诊断 1．结核菌素试验
2．结核分枝杆菌抗原检测
3. 结核分枝杆菌抗体检测
4. 全血干扰素测定法
结核菌素试验
• 针对旧结核菌素(OT)与结核菌素纯蛋白衍生物 (PPD)两种菌体蛋白 • 原理：当将蛋白注入皮内后，如受试者已感染 结核杆菌，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性 结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发性超敏 反应性炎症，若受试者未感染MTB则无反应。
全血干扰素测定法
• 原理：当全血与PPD和对照抗原（植物血凝素）共同 孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌IFN-γ ，通过检测 IFN-γ 的含量来鉴定菌种。 • 2004年，Quantiferon-TB Gold assay 问世，应用 结核分枝杆菌RD1区域编码的早期分泌抗原靶（ESAT） 和培养滤液蛋白（CFP-10）特异抗原刺激细胞检测。 • 近来ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于诊断活动 性结核病，准确、灵敏、特异、快速。 • 结果与结核菌素试验相当，干扰因素小。
微生物学检验
（一）基本特性 • 结核分枝杆菌尚未发现产生内毒素、外毒 素及侵袭性酶 • 致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖 引起的炎症、代谢物质的毒性以及菌体成 分引起的免疫损伤有关 • 结核分枝杆菌的致病物质主要是荚膜、脂 质和蛋白质
三、微生物学检验
（二）标本采集 • 据感染部位的不同采集不同的标本 • 疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检 • 疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或24小时尿沉淀10～ 15ml送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通 常需3～5份标本） • 采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物,深部脓肿用无 菌注射器抽取送检 • 其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌 试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取 凝块作涂片或接种培养
4＋
>9/视野
>36/视野
核酸检测
• 用PCR法快速诊断MTB感染 • PCR法检测DNA特异性更强，敏感性更高 • PCR 须按法规要求规范操作，应防止标本污染出现 假性结果
三、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定
1.
– –
培养特性
专性需氧 3％～5％CO2能促进其生长
–
营养要求高 : 须在含血清、卵黄、马铃薯、甘 油以及含某些无机盐类的特殊培养基上才能生 长良好。常用罗氏培养基
涂片镜检的报告方式
半定量报告
石炭酸复红染色：抗 酸杆菌（1000×）