性控冻精使用技术手册

第一部分性控技术和性控冻精的概况一、性控技术的概念和在畜牧业生产中的重要意义性别控制：通过人为的干预使雌性动物繁殖出人们所期望的性别后代的一种繁殖新技术。

奶牛XY精子分离技术是指将公牛的精液根据精子自身X染色体和Y染色体的DNA含量不同，把这两种类型的精子通过物理方法、计算机技术等进行有效的分离，将X精子分装冷冻后，用于牛的人工授精，使母牛怀孕的技术，母牛率可以达到90％以上；根据精子自身X、Y染色体中DNA含量的不同而有效分离的冻精就叫性控冻精。

从经济效益来讲，该技术的应用将直接为奶农带来更多的获得良种母牛机会，增加了奶农的收入。

其重要意义在于：1、产母犊效益提高良种母犊出生数量，使良种奶牛的繁育数量呈几何速度增长，加速牛群改良和更新，迅速达到良种化规模养殖，增加规模效益。

2、充分利用现有优质种公牛和高产奶牛的遗传潜力母牛一生能产6～7胎，平均可以留下3头母牛，采用性控冻精使高产奶牛一生可以产6～7头优质母牛。

3、提高生产性能加速低产奶牛的改良步伐，迅速扩大良种奶牛群，产奶性能得到快速提升，产奶效益不断增加。

以上三点都说明在使用性控冻精后可以显著的提高奶牛养殖的经济效益，同时与胚胎工程技术的结合可以使奶牛的品种改良一步到位。

二、性控冻精在我国应用的重要性和在国内的应用及效果由于我国奶牛的品种质量较差，平均单产达不到 3500公斤/头，远低于世界平均单产5500公斤/头的水平，更达不到以色列、美国等奶业发达国家奶牛单产的一半。

因此从我国实际情况分析，全国各地对良种牛的需求量非常大。

奶牛是单胎动物，自然状态下，一头母牛一年只能繁殖一胎，终生平均也只能提供3头左右的母牛后代。

由于奶牛自然繁殖率低，繁殖速度慢，年增长速度仅为15%，使得国内现有高产、良种奶牛扩繁速度受到很大限制；若从国外大批引进良种奶牛不但成本高，而且受到国外牛源和国家检疫的限制；因此，高产纯种奶牛的缺乏成为目前我国奶业快速发展的主要瓶颈。

奶牛XY精子分离技术是目前最先进、最经济的良种繁育技术，X精子分离纯度已达到90%以上，分离后受胎率和常规冻精相当；这样意味着如果得到一头良种母牛犊，采用传统的冻精配种，则需要4剂精液，花费二年的时间；而采用性控冻精，只需要2剂，花费一年的时间。

XY精子分离技术不论从繁育的成本还是从良种扩繁速度上考虑，都是畜牧业良种繁殖改良技术上的一场革命。

该产品已经在全国22个省市进行了广泛的推广和使用，以可信的质量和受胎率、母牛率在同类产品中最好（下表为部分抽样统计结果）得到了各级政府部门和养殖户（场）的称赞和认可。

性控冻精在全国各个省市受胎率抽样调查统计表产母犊率汇总第二部分流式细胞分离（性控冻精）技术的原理一、流式细胞分离技术的原理XY精子分离技术的原理是根据X和Y精子DNA含量存在差异，X（DNA）含量大于 Y（DNA）含量（3.8％）。

图解：精子经荧光染料染色后，通过流式细胞仪时液流与激光交截，精子上的荧光染料被氩离子紫外激光激发，产生蓝色激发光。

由于 X 精子所含有 DNA 比 Y 精子多，其结合上的荧光染料就相对比较多，所激发出的荧光会比 Y精子更强。

荧光信号通过光电倍增管探测并转变成电信号，传递给流式细胞仪的信息处理芯片，由它迅速根据 DNA 含量的差别分辨出哪个是 X 精子哪个是 Y 精子，处理得到的信息又迅速反馈回到液流上，使之能够带上正电荷或者负电荷。

同时由于喷嘴产生高频率的震动，喷射出的液柱也就形成一滴滴包含有 X精子或者Y精子且带有正电荷或者负电荷的液滴，液滴的两旁放置有电极，产生高压电场。

这样，携带不同电荷的液滴在电场作用力的引导下，落入左右两旁的收集容器中，X精子和Y精子得以分离。

二、性控冻精与常规冻精的比较特点由于流式细胞分离仪的工作原理，精子在分离过程中在体外滞留的时间相对常规冻精要长，耗能要多，因此性控冻精具有一下特点：1、性控冻精所含X精子解冻后在体外存活的时间较常规冻精短。

2、解冻后精子的活力高。

性控冻精在分离过程中，经过优胜劣汰后保留了活力最高、受胎能力最强的X精子；3、每支性控冻精含有的精子数比常规冻精要少。

性控冻精每支X精子含量在230万左右，而常规冻精每支精子数目在1000万左右，然而性控冻精在分离过程中，将Y精子分离的同时那些活力较差、受胎能力不强的精子也进行了剔除，留下来都是受胎能力非常好的精兵强将，因此受胎率与常规冻精相当。

第三部分性控冻精的使用规范奶牛性控冻精的生产过程与常规冻精相比较，它多了一道在不改变精子本身物理性状和遗传物质情况下进行纯物理的体外分离过程。

因此，只要清楚地了解性控冻精的分离原理及特点，才能在使用的过程中更加自如一些，其受胎率就能够达到常规冻精的使用效果。

因此在应用和推广性控冻精过程中，如何提高情期受胎率是性控冻精使用好坏的关键，我们在吸取了国内大量成功使用经验的基础上，总结出一套有利于提高性控冻精情期受胎率的方法和操作要点。

一、性控冻精的操作要点和注意事项1、发情的准确观察只有准确观察到奶牛的发情时间才能为性控冻精的适时配种提供有效的帮助。

牛的发情活动具有一定的规律性，大多数发情集中在傍晚、夜间或凌晨，若想观测到90％的发情牛，必须注重傍晚和凌晨的观察。

农户应每天早晚在饲喂牛群时至少进行半小时的发情观察，对于有外阴红肿、爬跨其它牛、兴奋骚动不安等症状的牛记录牛号；不能放牧或不能在运动场运动的牛，待牛吃草挤奶后静卧休息时，观察其尾部是否有分泌物，同时注意粘液的粘性和颜色，详细记录出现症状和牛号。

对于发情异常的母牛在观察完成后立即查阅繁殖记录，剔除产后时间不合适、正在进行繁殖疾病治疗和其它不适合进行配种的母牛。

对观察到上述症状的适合冷配的空怀母牛，应及时和配种员联系；并在发情后10-12小时进行直肠检查。

直肠检查子宫的大小和质地，判断有无产科疾病，再根据卵泡发育状况等决定进行输精配种的时间。

2、配种时间的准确判断奶牛在发情后，卵泡发育质量的好坏是受胎率的基础，故掌握卵泡的发育程度和最佳输精时间是提高受胎率的关键。

在实际配种过程中，往往都是将直肠检查卵泡和外部症状观测结合起来判断配种时间。

由于很多散户对奶牛的发情掌握不是很准确，因此配种人员必须以直肠检查为主，外部症状判断为辅。

实际配种中奶牛的外部表现和卵巢上卵泡的发育程度是一致的，利用直肠检查卵泡发育状况确定配种时间是最准确、最科学实用的方法。

一般卵泡发育可分为四个阶段，最适合配种的是发情后期.卵泡出现小而圆（发情早期）发育增大有弹性（发情中期）成熟皮薄显波动（发情后期）排卵激流畜疼痛（排卵期）空腔软皮指相碰（黄体形成期）直肠检查：结合母牛的外部发情表现,通过直肠检查卵泡的发育情况，发现如下症状时立即输精:⑴、卵泡膜变薄、且表面光滑。

⑵、卵泡波动感明显，有一触即破的感觉。

⑶、子宫兴奋性明显降低，已感觉不到发情旺期时子宫受到刺激后的充实感和弹性感。

输精时间尽量控制在排卵前六小时之内,越近越好。

外部观测：一般是在发情结束后10－12小时进行配种，即奶牛接受爬跨后10－12小时。

奶牛表现安静，外阴肿胀开始消失，阴门流出半透明的牵缕性黏液。

按照常规冻精输精方法，要求性控冻精输精时间比常规冻精输精退后3－4个小时。

3、输精操作要点：在农村实际配种中，往往是配种人员在自家解冻后前往奶农家进行配种，使得性控冻精在体外运输过程中受到第二次冷打击，减少了精子在子宫内的存活时间,降低了精子的受精能力。

因此必须将液氮罐拿到现场,做到解冻后立即输精，缩短精子在外面存留时间。

解冻方法：从液氮罐中取冻精时，提漏中的冻精不可超过液氮罐口，在10秒钟之内取出冻精，若没有取出，应再次浸入液氮中几分钟后再操作，取出冻精后立即放入38℃左右的清水中,停留10秒中后取出,用无菌的干脱脂棉擦干,剪断封口装入输精器准备输精。

输精时做到“轻插、慢推、缓出”，严禁配种操作中动作粗暴，以防止不必要的子宫内膜损伤。

输精部位要求在排卵侧子宫角，采用子宫体深部输精，保证有足够精子到达与卵子授精部位。

4、跟踪观察和补救措施：配种后8小时进行第二次直肠检查,确定是否排卵；对于没有排卵的牛，仔细做直肠检查判断卵泡的性质，在推断排卵时间后要适时输精，并根据具体情况使用外源性激素。

配种后在下个情期继续观察是否有发情症状表现，如果受配母牛连续两个情期以上没有发情，应在配种后两个月直肠检查确定是否妊娠。

二、如何提高性控冻精受胎率性控冻精在制作上经过了分离处理，虽然和常规冻精使用方法大致相同，然而许多细节还是决定着性控冻精的受胎率高低，因此对于奶牛配种工作，应该从各个细节抓起以提高受胎率。

1、按照种公牛系谱筛选性控冻精，制定选配计划在利用性控冻精实现快速扩繁奶牛数量的同时，必须严把质量关，确保快繁的后代具有优良遗传品质、无遗传缺陷。

为此应按照种公牛的系谱档案，为基础母牛制定严格的选配计划，从而有效的防止由于近交造成的奶牛质量退化。

2、提高参配母牛的选择标准（1）、首选育成牛育成牛要求在16－18月龄左右，体重达到350kg以上，体格健康，营养状况良好且生殖系统发育正常，均为高产奶牛的后代。

（2）、经产母牛的标准对于经产母牛要求身体健康，无生殖疾病、难孕史、胎衣不下病史和其他相关疾病，产后50天以上，发情正常的高产奶牛。

3、严格做好发情鉴定和母牛配前的卵泡检查准确的发情鉴定是确定适时输精时间的重要依据。

观察奶牛发情，并记录开始发情时间、站立发情时间、发情结束时间，是提高受胎率的重要手段，发情鉴定应该由人工授精技术员亲自鉴定。

母牛的检查在人工受精前的6小时左右进行，直肠检查时手法越轻越有利于提高受胎率，不宜牵动卵巢导致损伤卵泡。

4、最佳输精时间的把握最适宜的输精时间是发情结束后3－4小时，排卵前3小时，或比用常规冻精输精时间晚3－4小时。

5、掌握好性控冻精的输精方法和输精部位利用直肠把握输精，使输精枪沿着子宫颈外口――子宫颈――子宫颈内口――子宫体缓慢推入到有卵泡发育侧的子宫角处前端，稍将枪回退0.5cm（避免枪头顶住子宫粘膜造成精液回流），推完精液后缓慢退出。

在输精过程中一定要保证无菌操作，减少因污染而造成的子宫感染。

输精时不宜再次检查卵泡和卵巢，以免影响卵巢排卵。

6、外源激素的利用人工授精后可以肌注LHRH-A2,LHRH-A3等有利于促进卵巢排卵的外源性激素，提高受胎率。

7、加强参配母牛群前、中、后期的饲养管理在使用性控冻精配种过程中应该严格按照高产奶牛饲养管理规范进行饲养和管理，这是提高性控冻精情期受胎率的基础，应引起重视；同时，必须注意这期间的微量元素和维生素的供给，保证奶牛营养全面均衡。

8、其他（1）、注射疫苗后的30天，不宜使用性控冻精进行配种；（2）、严格做好性控冻精的配种纪录，及时观察返情状况；（3）、做好牛群的产犊纪录和产后子宫治疗处理记录。