精原干细胞的研究进展
精原干细胞移植技术研究进展
精原干细胞移植技术研究进展精子发生是男性生殖细胞增殖、分化的过程，始于青春期并维持终生。
精原细胞尤其是精原干细胞是持续维持精子发生的关键因素。
个体内可因缺乏精原干细胞或放疗、化疗而导致生精细胞发育障碍或产生无功能性精子等原因引起不育。
新近发展的精原干细胞移植技术为研究精子发生机理提供了新的途径。
本文简要综述这项技术的发展过程、主要方法以及最新进展和应用前景。
1 精原干细胞移植技术分类及发展过程精原干细胞同源移植技术包括自体移植和同种异体移植。
这项技术始于1994年Brinster等[1]将可育小鼠的精原干细胞注射到不育小鼠的曲细精管使受体鼠产生了具有受精能力的精子并产出了正常后代，这是精原干细胞移植的首次重要突破。
Honaramooz等[2]在实验中，将猪的生殖细胞移入自身对侧的睾丸（自体移植）和无关另外一头猪的睾丸中（同种异体移植），结果两者都未对供者的生殖细胞发生明显免疫应答，但植入猪睾丸中的小鼠生殖细胞却很快被清除，故他们认为免疫耐受现象只限于同源移植。
1996年Clonthier等[3]将大鼠睾丸细胞显微注射到无免疫应答的重度综合免疫缺陷(severe-combined immunodeficient mice，SCID)的裸小鼠的睾丸中，睾丸干细胞会继续发育，并产生带有供体细胞种属的精子发生，取得了跨物种产生精子的重大突破。
1999年Ogawa等[4]将小鼠的睾丸细胞移植到大鼠的睾丸中获得成功。
Sofikitis[5]等认为人类睾丸细胞移入小鼠或大鼠可使25%的受体产生精子，这似乎表明灵长类生殖细胞或多或少比其它非啮齿类、非灵长类种属与啮齿类动物生精小管的微环境更相容。
Napano等[6]发现人的精原干细胞能在小鼠睾丸中至少可以存活六个月，且在移植后第一个月能保持增殖但不能分化。
这种现象0gawa等认为可能是由于小鼠内源性的支持细胞缺乏足够的能力来支持系统发育距离较远的物种。
但用睾丸组织块异位移植可部分解决上述问题，2002年Honaramooz等将新生小鼠、猪或羊的睾丸组织块（0.5-1mm3）移植到阉割的裸鼠的背部皮下，结果60% 以上的移植物存活，而且体积增大，并最终产生成熟的精子。
《2024年牛精原干细胞分离纯化及长期培养研究》范文
《牛精原干细胞分离纯化及长期培养研究》篇一一、引言随着干细胞研究领域的发展，特别是精原干细胞的深入探讨，牛精原干细胞因其在畜牧业、医药研发等领域具有广泛的应用潜力而受到重视。
精原干细胞具备自我更新能力和多向分化潜能，可被用于研究雄性生殖系统的发育机制，并有望在再生医学中发挥重要作用。
本文将就牛精原干细胞的分离纯化及长期培养进行详细的研究与探讨。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的牛精原干细胞取自健康成年公牛的睾丸组织。
实验过程中使用的试剂和耗材均需符合无菌、无热原等要求。
2. 方法（1）干细胞分离纯化：采用酶消化法对睾丸组织进行消化处理，获取单细胞悬液，通过密度梯度离心法及流式细胞仪等方法进行干细胞的分离纯化。
（2）长期培养：将纯化后的干细胞接种于特定培养基中，进行长期培养，观察其生长情况及分化能力。
三、实验结果1. 干细胞分离纯化通过酶消化法处理睾丸组织，获取的单细胞悬液中包含多种细胞类型。
经过密度梯度离心及流式细胞仪的分离纯化，成功获得较高纯度的牛精原干细胞。
2. 长期培养将纯化后的牛精原干细胞接种于特定培养基中，通过显微镜观察，干细胞在培养基中呈现良好的生长状态，具有较高的增殖能力。
经过一定时间的培养，干细胞仍保持其多向分化的潜能。
四、讨论本实验研究了牛精原干细胞的分离纯化及长期培养，实验结果表明，通过酶消化法、密度梯度离心及流式细胞仪等方法，可成功获取较高纯度的牛精原干细胞。
在特定培养基中，干细胞呈现良好的生长状态，具有较高的增殖能力及多向分化潜能。
这为进一步研究牛精原干细胞的生物学特性、功能及其在再生医学中的应用提供了有力支持。
在实验过程中，我们还需要注意以下几点：首先，实验所使用的试剂和耗材需符合无菌、无热原等要求，以确保实验结果的准确性；其次，流式细胞仪等仪器的操作需严格按照规范进行，以确保干细胞的分离纯化效果；最后，在长期培养过程中，需定期观察干细胞的生长状态及分化能力，以评估其生物学特性和应用潜力。
精原干细胞研究进展
精原干细胞研究进展精原干细胞是精子形成的前体细胞，具有自我增殖和多向分化潜能。
本文对精原干细胞的微环境、体外培养和冻存的研究现状进行综述。
标签：精原干细胞；微环境；体外培养中图分类号R321.2 文献标识码 B 文章编号1674-6805(2012)11-0148-02精原干细胞(spermatogonial stem cells，SSCs)是位于睾丸曲细精管生精上皮基膜上的一群成体干细胞，具有高度自我增殖和多向分化潜能。
SSCs的终生扩增性和永生性是产生雄性生殖细胞的保证。
SSCs通过有序而严格调控的细胞增殖和分化，使精子发生的过程可以持续男性的一生，产生大量的精子。
现对近年来精原干细胞在增殖和冻存方面的研究成果做简要概述。
1 精原干细胞的微环境SSCs位于生精上皮基底部，是相对数量极少的一类细胞，据估计仅占睾丸精原细胞的0.03%。
如同小肠隐窝存在很多干细胞，SSCs既包括未分化的干细胞，也包括祖细胞，这两类细胞都在成年男性体内保持生殖能力。
有证据证明，根据被研究细胞的背景，SSCs的祖细胞具有与未分化SSCs相同的功能。
研究显示，SSCs龛境的结构和分子特征首先限制龛境内的SSCs[1]。
Sertoli细胞、基膜、小管周的肌样细胞构成睾丸SSCs龛框架或龛骨架，而这些框架或骨架围绕的空间形成的微环境称为龛境。
SSCs龛境简单定义为存在SSCs的曲细精管区域，在男性的一生中起支持SSCs增殖和自我更新的作用。
与其他干细胞类似，位于龛境中的SSCs可以维持其可塑性。
一旦离开龛境，SSCs 就会失去自我更新的能力，并且开始发生分化，最终形成成熟精子[2]。
曲细精管中，精原细胞的增殖、自我更新和分化说明基膜室是真正的SSCs龛境的分界区域。
基底膜的分子标志为鉴定和富集SSCs提供了基础。
曲细精管及其周围的间质组织由各种不同的细胞组成，为精子发生提供各种激素、生长因子和细胞因子。
合成和分泌的上述各种因子调节龛境SSCs的自我更新和增殖，离开龛境的SSCs会发生分化。
精原干细胞研究进展
精原干细胞研究进展宋瑞高;姚晓磊;石磊【摘要】Spermatogonial stem cells are oocytes of male mamals germ cells which not only can maintain the number of themselves but also can differentiate to spermatocyte. Spermatogonial stem cells are also closely related to the genetic background of the next male generation individuals. Therefore, the study of spermatogonial stem cells in the field of cell biology,medicine and transgene has broad application prospects. In this review,biological characteristics,isolation,purification,cultivation and transplantation of spermatogonial stem cells were discussed.%精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs）是各种雄性动物生殖细胞的母细胞，是一群具有自我更新和分化潜能的细胞，并且在雄性个体中精原干细胞与下一代的遗传背景密切相关。
因此，精原干细胞在细胞生物学、医学、转基因等领域的研究有着广阔的应用前景。
文章根据国内外相关研究进展，对精原干细胞的生物学特性、分离纯化与培养、移植等作一概述。
【期刊名称】《中国草食动物科学》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】4页(P54-56,57)【关键词】精原干细胞;生物学特性;分离纯化;移植【作者】宋瑞高;姚晓磊;石磊【作者单位】山西农业大学动物科技学院，太谷 030801;山西农业大学动物科技学院，太谷 030801;山西农业大学动物科技学院，太谷 030801【正文语种】中文【中图分类】Q2哺乳动物雄性成体中的精子发生系统在雄性配子的产生和进化过程中起着基因传递的作用，这一系统的基础就是精原干细胞（spermatogonial stemcells，SSCs）。
精原干细胞研究进展
是异体移植Ｓ Ｓ Ｃ 等 技 术 中 ，分 离 纯 化Ｓ Ｓ Ｃ 都 极 为 重 要 。但 由于 生精 上 皮 内 细胞 的组分 类 别 较 复杂 ， 且
Ｓ Ｓ Ｃ 数量 极少 ， 因此分 离 、 鉴定Ｓ Ｓ Ｃ 一 直 较 为 困 难 。在
可 以从青 春 期一 直持续 到繁 殖 能力结 束 ． 在此 期 间 ， Ｓ Ｓ Ｃ 不 断地发 生增 殖与 分化 。一 般将 Ｓ Ｓ Ｃ 分 为Ａ、 Ｂ 两
型。 Ａ 型 细胞 核染 色质 细小 ， 核仁 常靠 近核 膜 ， 而Ｂ 型 细 胞 的核 仁 位 于 中 央 ，核 膜 内 附着 有 粗 大 的 异 染 色 质 。根 据 曲 细 精 管 基 膜 上 局 部 排 列 特 征 ， 又 可 将 Ａ型
臻
速 ・Ｒ ｅ ｖ ｉ ｅ ｗ Ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ｓ
２ ０ ｉ ３ 坪 凳４ 卷 第 ５期
精原干细胞研究进展
杨 炜 蓉 ， 汪 勇 ， 张 姣 姣 ， 孙 燕 ， 张 家骅
（ １ ． 西 南大 学动物 科技 学 院 ， 重 庆 市牧草 与草食 家畜重 点 实验 室， 重庆
Ｓ Ｓ Ｃ 分离 、 鉴 定 中需 利 用 Ｓ Ｓ Ｃ 表面标志 ， 但 到 目前 为
止 还 没 有 任何 一 种 分 子 可作 为Ｓ Ｓ Ｃ 标志 ． １ ０ ０ ％地 分 离纯化Ｓ Ｓ Ｃ．所 以 寻 找 Ｓ Ｓ Ｃ 特 异 性 抗 原 标 志 一 直 是
良好 时 ， 细胞透明 ， 颗粒 较 少 ， 核 不 明显 ， 除单 个 细 胞外 ． 常见 ２ 个 或 多个Ｓ Ｓ Ｃ ｔ 。
对 精 原 干 细胞 的 生 物 学特 性 、 功 能 调 控 因子 、 体外 培养 和移植 等作 一综 述。 关 键词 ： Ｓ Ｓ Ｃ； 生 物 学特 性 ； 调 控 因子 ； 体 外培 养 ； 移植 ； 大鼠
牛精原干细胞研究进展
牛精原干细胞研究进展王春伟;扶晓波;吕妍;赵军;郭秋萍;张卫艺;胡建宏【摘要】精原干细胞(SSCs)是雄性生殖系干细胞,位于睾丸曲细精管基底膜上,具有自我更新和定向分化的潜能,是自然状态下出生后动物体内在整个生命过程中进行自我更新并能将基因传递至子代的惟一成体干细胞.本文在阐述精原干细胞发生的基础上,通过分析犊牛精原干细胞分离纯化、培养鉴定、冷冻保存和诱导分化的现状,分析了牛精原干细胞研究领域目前存在的主要问题,展望了牛精原干细胞的应用前景,以期为精原干细胞的研究提供参考.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)010【总页数】4页(P6-9)【关键词】牛;精原干细胞;研究进展;存在问题;发展前景【作者】王春伟;扶晓波;吕妍;赵军;郭秋萍;张卫艺;胡建宏【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S811.6精子发生是雄性动物终身产生大量精子的一个过程，其特点是由二倍体生殖细胞(精原干细胞)的单向分化，通过减数分裂形成精母细胞，最后产生单倍体配子精子[1]。
精原干细胞(spermatogonial stem cells，SSCs)是哺乳动物出生后唯一能进行自我更新并将遗传信息传递给后代的具有像胚胎干细胞一样增殖和分化潜能的干细胞[2]。
精原干细胞的建立，不仅提供了一种新的工具来分析精子发生或干细胞的自我更新，同时也开辟了干细胞实际应用的新领域。
本文通过分析牛精原干细胞分离纯化、培养鉴定、冷冻保存和诱导分化的研究现状，指出目前存在的主要问题，并展望其应用前景，以期为精原干细胞的研究提供借鉴。
精原干细胞研究进展
境 。Ｓ Ｃ 龛境 简单定义为存在 Ｓ Ｃ Ｓｓ Ｓ ｓ的曲细精管区域 ，在男性 的
一
生 中起支持 Ｓ Ｃ 增殖和 自我更新 的作用。与其他干细胞类似 ， Ｓｓ
位于龛境中的 Ｓ Ｃ 可以维持其可塑性。—旦离开龛境，Ｓ Ｃ 就会 Ｓｓ Ｓｓ 曲细精 管 中，精原 细胞 的增 殖、 自我 更新 和分化 说明基 膜 室是 真正 的 Ｓ Ｃ 龛境 的分界区域。基底膜 的分 子标志为鉴定和富集 Ｓｓ
ｃ ｍ ｉｅ ｕｉｎＪ．ｎ ｌ ｉａａ ｈ ｍ，２ ０ ，３ ９７ ８ ２ ９ — １ ２ ｏ ｂｎｄｅ ｔ ［ Ａ ａ ｏｎ ｌ ｅ ｌ ｏ ］ Ｂ Ｃ ０ ７ ８ （－ ）： ０ ７ ２０ ．
［］ Ｓ Ｈａｅ ． Ｐ ｉｉｓ ｎ ｂ ｏ ｆ ｆ ｎｔ ｈｏ ｔｇａ ｈ ．ｎ ｄ ８ Ｄ．． ｇ，ＴＭ． ｈｌｐ． ｄ ｏ ｋｏ ｉ ｉ Ｃ ｒｍａｏ ｒｐ ｙ２ ｄｅ ． ｌ Ｈａ Ａ ｙ
Ｓ ｒ ｌ细胞 、基 膜、小管周的肌样细 胞构成睾丸 Ｓ Ｃ 龛框 激 ，内部受到来 自特异性 基因表达 的调节 ［。 ｅｔ ｉ ｏ Ｓｓ ３ ｌ 架 或龛骨架 ，而这些框架 或骨架围绕的空 间形成的微环境称 为龛 ２ 精原干细胞的体外培养 睾丸活检所获得 的 Ｓ Ｃ 数量不够进 行移植 ，这使得体外大 Ｓｓ
参 考 文 献
［ Ｐ ｒｙ Ｗａ ｇＭｏｏｉ ｉ Ｃ ｒｍａｏｒｐ ｙａｄｉ ｄ ｒ ｐｌ ａ ｏｓＭ］ １ ｅｒ １ ］ Ｇ． ｎ ． ｎ ｌｈｃ ｈｏ ｔｇａｈ ｎ ｓ ｔ ｔ ＭｏｅｎＡ ｐｉ ｔ ｎ ［ ． ｃｉ
ＵＫ ：Ｉ ＬＭ ｂ ｉ ａ ｉｎｓ ２ ０ ：７ ３ Ｐｕ ｌ ｔｏ ． ０１ ｃ －１ ．
Ｂ ｃ ｔ ｎ， Ｆ ：ＣＲＣ Ｐｒ ｓ ， ２ ５ ：１ ７ １ ２ ｏ ａＲａｏ Ｌ ｅ ｓ ００ ２ —７ ．
《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》范文
《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》篇一一、引言近年来，干细胞领域研究日渐受到科研工作者的广泛关注。
作为生命科学和医学领域中的研究热点，小鼠精原干细胞的研究不仅对于基础理论科学具有深远意义，还为人类生殖与发育疾病、再生医学等领域提供了重要研究依据。
本文将重点介绍小鼠精原干细胞的分离、纯化与去分化研究的相关内容。
二、小鼠精原干细胞的分离小鼠精原干细胞的分离是整个研究过程的首要步骤。
为了获取高质量的精原干细胞，我们需要从小鼠生殖系统中进行提取。
具体操作如下：首先，对小鼠进行安乐死并取其睾丸组织。
接着，采用机械法和酶解法相结合的方式对睾丸组织进行消化处理，释放出细胞。
然后，通过特定的培养基将处理后的细胞进行初步培养，使得精原干细胞得以在特定环境中增殖。
在此过程中，应尽可能去除其他类型的细胞和非必要的组织成分，以便后续纯化工作顺利进行。
三、小鼠精原干细胞的纯化精原干细胞的纯化是研究过程中的关键环节。
纯化目的主要是去除其他类型的细胞，以获取纯度较高的精原干细胞。
常见的纯化方法包括细胞贴壁法、流式细胞术和磁性微粒标记法等。
其中，流式细胞术具有高效率、高准确度的特点，可广泛应用于实验室中。
具体操作中，应依据细胞大小、表面标志物等特征选择合适的流式细胞仪参数，进行细胞分选。
通过反复纯化操作，可得到较高纯度的精原干细胞。
四、小鼠精原干细胞的去分化研究去分化研究是近年来干细胞领域的研究热点之一。
为了实现小鼠精原干细胞的去分化，我们需要对相关机制进行深入研究。
首先，要了解精原干细胞的分化过程和分化相关基因的表达情况。
然后，通过调控相关基因的表达、改变培养环境等方法，促使精原干细胞发生去分化现象。
在去分化的过程中，要密切关注细胞的形态变化、增殖能力以及多能性等指标的变化情况。
通过实验数据的分析，可以得出不同条件下精原干细胞的去分化效果及机制。
此外，我们还可以利用基因编辑技术对相关基因进行敲除或过表达，进一步探究去分化的分子机制。
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ｃｅｌｌｓ Ｔｈｉｓ
ｒｅｖｉｅｗ
ａｌｓｏ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｓ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｆａｃｔｏｒｓ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
Ｎａｔｌ Ｊ Ａｎｄｒｏｌ，２００３，９
（４）：２８８－２９１．２９５
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ
ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ
ｎｅｕｒｏｔ扣ｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）
ｈｏｒｍｏｎｅ，
作用下加速进行。同时还发现ＧＤＮＦ浓度的一圭墨 调控子为卵泡刺激素（ｆｏｌｌｉｃｌｅ—ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ 通路自我调控生殖干细胞的增殖。 ２．２干细胞因子和集落刺激因子的调控作用 Ｄｉｒａｍｉ等…‘采用富含钾的培养基（ａ
ｓｔｅｍ
ｃｅｌｌｓ；Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
在哺乳动物成体中存在几套自我更新系统，包 括造血系统、精子发生系统、肠上皮和皮肤等，就物 种延续而言最重要的莫过于精子发生（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎ— ｅｓｉｓ），、因为它承担着雄性配子的产生和进化所必需 的基因传递。青春期启动后，精子发生的过程持续 于整个雄性生命，其通过有序而又严格调控的细胞 增殖和分化步骤而产生大鼍的精子，这一系统的基 础便是精原干细胞（ｓｐｅｎｎａｔｏｇｏｎｉａｌ
・２８８・
第９卷第４期
２００３年７月
中华男科学
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｄｒｏｌｏｇｙ
ＶｏＪ．９
Ｎｏ．４
Ｊｔｔｌ．２００３
－综
述・
精原干细胞的研究进展
曾辛综述；徐斯凡审校
（江两医学院生理学教研室，江西南昌３３０００６）
摘要：精腺十细胞是具有自我更新和多向分化潜能等特件的多能干细胞，可在自身基因和／或外来信号调节下最终 分化为精于，对其研究近年来倍受关注。水文介绍ｒ精原于细胞的富集、初次分选技术，增殖调控因子以及移植技 术的研究进展。 关键词：精原ｒ细胞；富集；增殖；移植 中图分类号：Ｒ３２１ ｌ；Ｑ８１３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９．３５９１（２００３）０４４）２８８４３５３）
ｓｔｅｍ
１精原干细胞的富集 精子发生是起源于精原干细胞而最终导致成熟 精子形成的复杂而具生产性的过程。这些于细胞终 身具有自我更新的能力，但由于它们在睾丸中的数 量极少（２～３／１０４）和由于它们只有通过功能来鉴 定，使得生物学特性的研究变得非常困难。尽管精 原干细胞移植技术的发展提供了一个干细胞分析系 统，但有效的干细胞富集方法并未获得。Ｓｈｉｎｏｈａｒａ 等”ｏ运用多参数选择策略ｆｍｕｈｉｐａｒａｍｅｔｅｒ
ｓｔｅｍ
ｅｘｐａｎｄ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｔｏ
ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ
ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｌｆ
Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｒｅｖｉｅｗｓ
Ｓｏｍｅ
ｒｅｃｅｎｔ
ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ
ｓｏｒｔｉｎｇ
ｃｅｌｌ
பைடு நூலகம்
ａｎａｌｙｓｉｓ）进行精原干细胞的富集。将表达
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收稿日期：２００２４１５－２４；佳回日期：２００２ｍ９－９３ 作者简介：曾 辛（１９７５－），男，江西武宁县人．检验师，硕上研究生．从事生殖生列学专业。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｚｄｉｖｅ＠ｙａｈｏｏ ｍｎＬ
ｒｎ
万方数据
第４期
曾辛等精原下细胞的研究进展
Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ
Ｘｉｎ
ＺＥＮＧ，Ｓｉ—Ｆａｎ ＸＵ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ，ｆｌａｎｇｘｉ ３３０００６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｍ
２．１
一
ＧＤＮＦ／ＦＳＨ通路自我调控作用
问质细胞能
够分泌许多因子，维持干细胞的增殖，分化和存活。 Ｔａｄｏｋｏｒｏ等”利用没有生育能力的睾丸模型米研究 生殖干细胞自我更新机制，由于缺乏分化能力可消 除在自我更新的同时干细胞产生分化成熟的子细胞 的干扰，结果发现未分化精原细胞的增殖过程在苞 持细胞所产生的高浓度胶质细胞衍生的神经营养ｆｑ 子（ｇｉｌａｌ
２ ４
活体组织检查，结果显示这些病例中有１０％～ ４０％的患儿缺乏生殖细胞，缺乏牛殖细胞的病人有
３０％～１００
ｅ？ｒ可能导致不育。Ｃｏｒｔｅｓ等”ｏ应用促红
细胞牛成素（ｅｒ），ｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）治疗２例隐睾患 儿。最后取活体组织检查，结果显示每单位精曲小管 横截而精原十细胞的数量显著增加，由此可知，ＥＰＯ 在患隐宰病人生殖细胞增殖过程中可能起促进作 用。Ａｂｅ等”…将ｒｈＳＣＦ加人含蝾螈睾丸碎片的组掣｛ 培养物中，结果显示ｒｈＳＣＩｃ、刺激精原干细胞的增殖， 并且启动精子发生过程但并不分化为初级精母细胞 而是导致凋Ｃ一，提示ｒｈＳＣＦ促动精原于细胞的增殖 但不启动减数分裂过程。另外，Ｐｏｓｓｉ等…研究表 明，在体外，精原干细胞培养中加入ＳＣＦ可刺激精原 干细胞ＤＮＡ的合成，并且在体内注入抗ｎ—ｋｉｔ抗体 阻止＇厂精原干细胞的增殖，说明ＳＣＦ／ｃ—ｋｉｔ在精腻干 细胞的增殖过程中起关键作用。 ２．６运用荧光技术观察精原干细胞增殖过程 Ｏｈｔａ等“采＿Ｌ｝｛标记Ｊ：增强绿色荧光蛋白（ｅｎｈａｎｃｅｄ
ｃｅｉｌ ｓｏｒｌｉｎｇ
单克隆抗体５７ Ｂ（抗ＭＡＧＥ—Ａ４），该结果提示 ＭＡＧＥ．Ａ４Ⅱｆ能是生殖下细胞潜在的表面标志物，ｌ司 时他们的研究结果还提示ＭＡＧＥ—Ａ４可能也是生殖 细胞肿瘤潜在的表面标志物。Ｓａｔｉｅ等”１运用免疫 组织化学方法分析健康的胎儿期和成人的睾丸以及 ５９例小同类型的人类睾丸肿瘤的睾丸中ＮＹ—ＥＳＯ一１ 的表达情况，结果发现ＮＹ－ＥＳＯ一】在从１ ８周到出牛 为止的胎儿睾丸中，成ｔ八睾丸的精原十细胞和初级 精母细胞以及睾丸肿瘤的最早期阶段中均有较强的 表达，而在其他相关基质细胞中未见表达，从而提示 ＮＹ—ＥＳＯ一１可能为精原十细胞的表面标志物之 ２精原干细胞的增殖
ｂｙ ｌｈｔ’ｓｉｍｐｌｅｘ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．
ＫＳＯＭ）培养精原干细胞来研究干细胞因子（ｓｔｅｎｌ
ｃｅｌｌ
ｃｖｔｅ
ｆａｃｔｏｒ，ＳＣ｝）和巨噬细胞集落刺激闪子（ｇｒａｎｕｌｏ—
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ—ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ
ｆａｃｔｏｒ，Ｇ１Ｍ—ＣＳＦ）
对其增殖的作用，用电镀板聚集井纯化精原千细胞， 即剔除肌细胞和支持细胞的污染，并用免疫组化进 行ｃ－ｋｉｉ受体标记。在３４℃条件下使用ＫＳＯＭ培养 基进行培养１２０ ｈ，期间用ＭｒｌＴ比色分析仪每隔２４ ｈ观察精原干细胞的话力。结果表明在培养基中分 别加入ｒｈＳＣＦ（浓度不低于１００ ｎｇ／ｍ１）和ｒｈＧＭ－ＣＳＦ （浓度低于１０ ｎｇ／ｍｌ，因为高于此浓度ｒｈＧＭ—ＣＳＦ的 毒副作用会非常明显）均可明显提高干细胞的牛存 百分比，而两者同时加入培养基并不能进一步提高 干细胞的活力，说明两者参与精原干细胞增殖凋挖 过程。ＳＣＦ的加入引起一系列细胞外信号调控激酶
ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ
ｃｅｌｌ）。成体
中特定组织干细胞应具备的特点：长期增殖、自我更 新和多分化潜能，井对于损伤仍能维持更新的潜能 和重新增殖的能力…。同样，精原干细胞有着Ｅ述 的生物学特性。本文就精原干细胞的富集、增殖和 移植技术研究概况作简要概述。
ｓｔｒａｔｅｇｙ）结合体内患隐睾病的动物睾丸模型和体外 荧光激活细胞分选技术（ｆｌｕｏｒｅｓｏｅｒｔｔ２ｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ
ｒｅｃｅｎｔ
ｙｅａｒｓ，ｐｅｏｐｌｅ ｈａｖｅ ｐａｉｄ
ｍｏｒｅ ａｔｔｅｎｔｉｏｎ
ｔｏ
ｃａｎ
ｔｈｅ ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ
ｓｔｅｍ
ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｈａｖｅ ｔｈｅ ｃａｐａｃｉｔｙ亿ｒ ｓｅｌｆ ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ
ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ
ｍｕｈｉｌｉｎｅａｇｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｅ ｄａｕｇｈｔｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｇｅｎｅｓ ａｔ，ｄ ｅｘｔｅｍａｌ ｓｉｇｎａｌ
ｇｒｅｅｎ
Ｎｏｔｃｈ信号传导通路的调控作用
Ｎｏｔｃｈ信号
传导途径在无脊椎动物和脊椎动物中广泛存在且高 度保守，此途径介导由局部细胞间相互作用而产生 的对多种不成熟细胞分化的抑制信号在胚胎发育中 起重要作用。近来在哺乳动物中克隆了一系列 Ｎｏｔｃｈ同源分子，各种Ｎｏｔｃｈ同源分子的表达均很广 泛，遍及胚胎发育中的各种组织和各种成熟组织中 具有增殖能力的细胞层。这些分子编码的是跨膜蛋 白分子，胞膜外区含数量不等的表皮生长因子（ｅｐｉ—
ｍｅｄｉｕｍ ｄｅｒｉｖｅｄ
ｐｏｔａｓｓｉｕｍ—ｒｉ＜－ｈ
ＦＳＨ），这些结果表明在哺乳动物睾丸中ＧＤＮＦ／ＦＳＨ
ｓｙｓｔｅｍ）。有研究用该系统分选精原干细胞，收集到 的细胞经在含有多克隆抗兔ｃ—ｋｉｔ ｌｇＧｓ的培养液中 孵育而标上此多克隆抗体，此后还进行荧光标记，最 后通过流式细胞仪分析表明精原干细胞大量的富集 且无任何单倍体细胞滞留在磁珠部位，有着极高的 分离纯度，回收率也高，与传统的分选方法相比免疫 磁珠细胞分选方法是分离精原干细胞的一快速有效 的方法”１。、 当然这一过程需要我们首先能识别精原干细 胞。Ｓｈｉｎｏｈａｒａ等”１利用干细胞与基膜相互关联的 相关知识以及他们所构建的精原干细胞移植分析系 统来研究它们的表面标志物，结果表明ｃ－ｎ在胎儿 干细胞发展过程中持续表达且极为重要；１３，一和ａ。－ 整合素是鉴定精原于细胞的表面标志物并提示此两 者在精原干细胞表面形成一二聚体。抑制素Ｂ是抑 制素家族中主要的成员之一，它由１个ｎ亚单位和 １个１３亚单位组成，Ｋｒａｕｓｅ等”１研究结果表明抑制 素Ｂ在精原干细胞、精母细胞以及早期精子细胞中 均有表达，提示抑制素Ｂ可能是精原干细胞的标志 物之一、ＡｕｂｒＴ等”１在胚胎期（８周）生殖腺以及胎 儿不同时间点的（１５、１７和２８周）生殖腺中检测到