21生物化学习题与解析--常用分子生物学技术的原理及其应用
常用分子生物学技术的原理及其应用作业习题
常用分子生物学技术的原理及其应用作业习题1. PCR技术（聚合酶链式反应）原理：PCR技术是一种在体外合成DNA的技术，通过热循环反应，能够迅速扩增特定DNA片段。
PCR反应主要分为三个步骤：变性、退火和扩增。
•变性（Denaturation）：将目标DNA加热至95°C，使其两条链分离，得到单链DNA模板。
•退火（Annealing）：在低温下，通过引物与目标DNA模板结合，形成DNA双链。
•扩增（Extension）：在适温下，酶引物复合物加入到目标DNA的3’端，使用DNA聚合酶酶合新的DNA链。
应用作业题目：1.解释PCR技术中的变性步骤的目的是什么？2.PCR反应中的引物是什么作用？3.如果需要扩增一个1000bp的目标DNA片段，你会选择哪种PCR引物的长度？4.为什么PCR技术可以实现高灵敏度的DNA检测？5.列举PCR技术的应用领域。
2. Western Blotting技术原理：Western Blotting技术通过检测蛋白质在凝胶中的分布来研究特定蛋白质的表达，该技术主要包括凝胶电泳、转印和探针探测等步骤。
•凝胶电泳：将蛋白质样品进行电泳，按照大小和电荷将蛋白质分离在凝胶平台上。
•转印：将凝胶上的蛋白质迁移到膜上，如聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维素膜。
•探针探测：使用特异性的抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记或荧光标记的二级抗体来检测目标蛋白质。
应用作业题目：1.为什么需要将蛋白质进行凝胶电泳分离？2.列出Western Blotting技术中常用的蛋白检测方法。
3.Western Blotting技术中为什么需要进行蛋白质转印到膜上？4.请解释什么是一级和二级抗体。
5.列举Western Blotting技术的应用场景。
3. DNA测序技术原理：DNA测序技术是以DNA为模板，通过测定不同的碱基序列，确定DNA分子的排列顺序。
目前常用的DNA测序技术主要包括Sanger测序和下一代测序两种方法。
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1. DNA分子的双螺旋结构是由谁提出的？A. 沃森和克里克B. 达尔文C. 孟德尔D. 摩尔根答案：A2. 以下哪个不是DNA聚合酶的功能？A. 合成DNA链B. 修复DNA损伤C. 催化RNA转录D. 校对新合成的DNA链答案：C3. 真核生物的mRNA帽子结构位于其5'端，其主要功能是什么？A. 促进翻译B. 保护mRNA不被降解C. 促进mRNA的剪接D. 促进mRNA的运输答案：B4. 以下哪种RNA分子在蛋白质合成中不直接参与？A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. snRNA5. 基因表达调控中，转录因子的作用是什么？A. 提供转录所需的能量B. 识别并结合到特定的DNA序列上C. 催化DNA复制D. 促进DNA修复答案：B6. 以下哪种技术用于研究基因功能？A. PCRB. DNA测序C. 基因敲除D. DNA指纹分析答案：C7. 以下哪个不是DNA复制的特点？A. 半保留复制B. 需要引物C. 双向复制D. 需要逆转录酶答案：D8. 以下哪个不是RNA干扰（RNAi）的作用机制？A. 降解特定的mRNAB. 抑制基因表达C. 促进基因突变D. 沉默特定基因答案：C9. 以下哪个是真核生物中常见的非编码RNA？B. siRNAC. tRNAD. rRNA答案：A10. 以下哪个是原核生物和真核生物共有的基因表达调控机制？A. 转录后修饰B. 转录因子调控C. mRNA剪接D. 核糖体结合位点调控答案：B二、填空题（每空1分，共20分）1. DNA分子的基本组成单位是_______，而RNA分子的基本组成单位是_______。
答案：脱氧核苷酸；核糖核苷酸2. 在DNA复制过程中，_______酶负责解开双链DNA，而_______酶负责合成新的DNA链。
答案：解旋酶；DNA聚合酶3. 真核生物的基因表达调控主要发生在_______水平，而原核生物的基因表达调控主要发生在_______水平。
第20章常用分子生物学技术的原理及其应用
第20章常用分子生物学技术的原理及其应用分子生物学技术是研究生物分子结构、功能、调控及其相互关系的重要手段，具有识别、分离、纯化、检测和重组生物分子的功能。
在生命科学研究和生物技术应用中，常用的分子生物学技术主要包括核酸提取、聚合酶链式反应（PCR）、限制酶切片段长度多态性分析（RFLP）、DNA测序、原位杂交、Northern和Southern blot杂交等。
下面将介绍这些常用分子生物学技术的原理及其应用。
1.核酸提取：核酸提取是从细胞或组织中获得目的核酸的方法。
其原理是通过细胞破碎及蛋白酶消化等步骤，将细胞内的核酸释放出来，并进行纯化。
核酸提取技术广泛应用于基因克隆、基因组学研究、医学诊断以及法医学中的DNA分析等领域。
2.聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种体外合成DNA的技术，通过多轮的循环温度反应，可以快速扩增一段特定的DNA序列。
其原理是利用DNA聚合酶酶活与特定引物的作用，在一系列温度循环中，使DNA序列通过链分离、引物结合、DNA合成循环进行扩增。
PCR技术被广泛应用于基因分型、基因克隆、突变检测、DNA测序等领域。
3.限制酶切片段长度多态性分析（RFLP）：RFLP是一种检测DNA序列多态性的方法，通过限制酶切割目的DNA，在凝胶电泳中观察DNA片段的长度差异。
其原理是利用限制酶对特定序列的识别和切割，形成不同长度的DNA片段，经凝胶电泳分离，通过核酸探针杂交或染料染色等方法来观察差异。
RFLP技术广泛应用于基因分型、基因组学研究、变异检测等领域。
4. DNA测序：DNA测序是一种确定DNA序列的方法，通过测定DNA的碱基顺序，揭示基因组结构和功能。
常用的DNA测序技术包括Sanger测序和高通量测序。
Sanger测序原理是利用DNA聚合酶、引物和一种特殊的停止链终止剂，在DNA合成过程中随机终止，形成不同长度的DNA片段，通过电泳分离后，通过染料或探针检测碱基顺序。
高通量测序技术基于快速测序平台和大规模并行测序，提高了测序效率和准确性，广泛应用于基因组学、转录组学等领域。
生物化学与分子生物学习题(按章节含答案)
第一章蛋白质的结构与功能测试题一、单项选择题1.测得某一蛋白质样品的含氮量为0.40g，此样品约含蛋白质多少克?A.2.00gB.2.50gC.6.40gD.3.00gE.6.35g2.含有两个羧基的氨基酸是：A.CysB.GluC.AsnD.GlnE.Lys3.在生理条件下，下列哪种氨基酸残基的侧链所带的正电荷最多？A.CysB.GluC.LysD.ThrE.Ala4.下列哪种氨基酸为环状亚氨基酸?A.GlyB.ProC.TrpD.TyrE.Lys5.蛋白质分子中维持一级结构的主要化学键是：A.肽键B.二硫键C.酯键D.氢键E.疏水键6.不组成蛋白质的氨基酸是：A.蛋氨酸B.半胱氨酸C.鸟氨酸D.胱氨酸E.丝氨酸7.蛋白质的一级结构及高级结构决定于：A.分子中氢键B.分子中盐键C.氨基酸组成和顺序D.分子内部疏水键E.亚基8.血清蛋白(PI为4.7)在下列哪种PH值溶液中带正电荷?A.PH4.0B.PH5.0C.PH6.0D.PH7.0E.PH8.09.蛋白质合成后修饰而成的氨基酸是：A.脯氨酸B.胱氨酸C.赖氨酸D.蛋氨酸E.天冬氨酸10.蛋白质变性是由于：A.氨基酸排列顺序的改变B.氨基酸组成的改变C.肽键的断裂D.蛋白质空间构象的破坏E.蛋白质的水解11.蛋白质在280nm处有最大光吸收，主要是由下列哪组结构引起的？A.组氨酸的咪唑基和酪氨酸的酚基B.酪氨酸的酚基和色氨酸的吲哚环C.酪氨酸的酚基和苯丙氨酸的苯环D.色氨酸的吲哚环和苯丙氨酸的苯环E.苯丙氨酸的苯环和组氨酸的咪唑基12.蛋白质溶液的稳定因素是：A.蛋白质溶液有分子扩散现象B.蛋白质在溶液中有“布朗”运动C.蛋白质分子表面带有水化膜和同种电荷D.蛋白质溶液的粘度大E.蛋白质分子带有电荷13.蛋白质变性不包括：A.氢键断裂B.肽键断裂C.疏水键断裂D.盐键断裂E.二硫键断裂14.关于蛋白质等电点的叙述下列哪项是正确的?A.在等电点处蛋白质分子所带净电荷为零B.等电点时蛋白质变性沉淀C.不同蛋白质的等电点相同D.在等电点处蛋白质的稳定性增加E.蛋白质的等电点与它所含的碱性氨基酸的数目无关15.维持蛋白质分子二级结构的主要化学键是：A.氢键B.二硫键C.疏水键D.离子键E.磷酸二酯键16.蛋白质分子中α-螺旋构象的特点是：A.靠盐键维持稳定B.肽键平面充分伸展C.多为左手螺旋D.带同种电荷的氨基酸集中存在，不利于α-螺旋的形成与稳定E.以上都不是17.有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的PI为4.6、5.0、5.3、6.7、7.3，电泳时欲使其中的4种蛋白质泳向正极，缓冲液的PH应该是A.4.0B.5.0C.6.0D.8.0E.7.018.下列关于蛋白质结构叙述中，不正确的是：A.α-螺旋是二级结构的一种B.无规卷曲是在一级结构基础上形成的C.所有蛋白质都有四级结构D.一级结构决定二、三级结构E.三级结构即具有空间构象19.蛋白质和酶分子显示巯基的氨基酸是：A.赖氨酸B.半胱氨酸C.胱氨酸D.蛋氨酸E.谷氨酸20.蛋白质多肽链具有的方向性是：A.从5＇端到3＇端B.从3＇端到5＇端C.从N端到C端D.从C端到N端E.以上都不是21.α螺旋每上升一圈相当于氨基酸残基的个数是：A.4.8B.2.7C.3.6D.3.0E.2.522.人体蛋白质的基本组成单位是：A.L-β氨基酸B.D-β氨基酸C.D-α氨基酸D.L-α氨基酸E.L，D-α氨基酸23.关于蛋白质四级结构的描述正确的是：A.分子中必定含有辅基B.蛋白质变性时四级结构不一定受破坏C.依赖共价键维系四级结构的稳定性D.在两条或两条以上具有独立三级结构多肽链的基础上，肽链进一步折叠、盘曲形成E.每条多肽链都具有独立的生物学活性24.镰刀型红细胞性贫血是由于HbA的结构变化引起的，其变化的特点是：A.HbA的α链的N端第6位谷氨酸残基被缬氨酸所取代B.HbA的α链的C端第6位谷氨酸残基被缬氨酸所取代C.HbA的β链的N端第6位谷氨酸残基被缬氨酸所取代D.HbA的β链的C端第6位谷氨酸残基被缬氨酸所取代E.以上都不是25.在饱和硫酸铵状态下析出的蛋白质是：A.清蛋白B.纤维蛋白原C.γ-球蛋白D.α1-球蛋白E.β-球蛋白26.有一蛋白质水解产物在PH＝6用阳离子交换剂层析时，第一个被洗脱下来的氨基酸是：A.Val(pI 5.96)B.Asp(pI 2.77)C.Lys( pI 9.74 )D.Tyr(pI 5.66)E.Arg( pI 10.76)27.蛋白质沉淀、变性和凝固的关系，下面叙述正确的是：A.变性蛋白不一定失去活性B.变性蛋白一定要凝固C.蛋白质沉淀后必然变性D.变性蛋白一定沉淀E.蛋白质凝固后一定变性28.一个含有葡萄糖、N-乙酰谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和丙氨酸的溶液，在PH＝6条件下通过阴离子交换树脂，被保留最多的是：A.精氨酸B.天冬氨酸C.丙氨酸D.葡萄糖E.亮氨酸29.利用分子筛原理分离蛋白质的技术是：A.阴离子交换层析B.阳离子交换层析C.凝胶过滤D.亲和层析E.透析二、多项选择题1.侧链带羟基的氨基酸包括：A.SerB.ThrC.PheD.TrpE.Tyr2.含硫氨基酸包括：A.蛋氨酸B.苏氨酸C.组氨酸D.半胱氨酸E.丝氨酸3.下列哪些是酸性氨基酸?A.谷氨酸B.赖氨酸C.精氨酸D.天冬氨酸E.酪氨酸4.蛋白质中的非共价键有：A.氢键B.二硫键C.盐键D.肽键E.疏水键5.蛋白质的二级结构包括：A.α-螺旋B.β-片层C.β-转角D.无规卷曲E.双螺旋6.下列哪些因素影响α-螺旋的形成：A.R基团的大小B.R基团的形状C.R基团所带电荷性质D.螺旋的旋转方向E.带同种电荷的R基团集中区7.下列哪种蛋白质在PH＝5的溶液中带正电荷?A.PI为4.5的蛋白质B.PI为7.4的蛋白质C.PI为7的蛋白质D.PI为6.5的蛋白质E.PI为3.5的蛋白质8.蛋白质变性后A.肽键断裂B.一级结构改变C.空间结构改变D.分子内亲水基团暴露E.生物学活性改变9.蛋白质沉淀、变性和凝固的关系，下列叙述正确的是：A.蛋白质沉淀后必然变性B.蛋白质凝固后一定会变性C.变性蛋白一定要凝固D.变性蛋白不一定会沉淀E.变性就是沉淀，沉淀就是变性10.谷胱甘肽的功能包括：A.解毒B.是细胞内的重要还原剂C.参与细胞间的信息传递D.参与氨基酸的吸收及向细胞内的转运E.是细胞的重要供氢体11.蛋白质变性后会出现下列哪些现象?A.生物活性丧失B.溶解度降低C.粘度增加D.易被蛋白酶水解E.分子量发生改变12.关于蛋白质的组成正确的有：A.由C、H、O、N等多种元素组成B.由α－氨基酸组成C.可水解成肽或氨基酸D.含氮量约为16％E.含氮量约为14%13.关于蛋白质二级结构的论述哪些是正确的？A.一种蛋白质分子只存在一种二级结构形式B.是多肽链本身折叠盘曲而成C.主要存在形式有α-螺旋和β-折叠D.维持二级结构的化学键是肽键和氢键E.二级结构的存在形式是由氨基酸的组成决定14.蛋白质一级结构A.是空间结构的基础B.指氨基酸序列C.并不包括二硫键D.与功能无关E.主要靠肽键维持稳定15.蛋白质三级结构A.亲水基团多位于三级结构的表面B.是指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置C.具有三级结构的多肽链不一定具有生物学活性D.属于高级结构E.靠次级键维系16.关于α-螺旋的叙述不正确的是:A.酸性氨基酸集中区域有利于螺旋的形成B.每3.6个氨基酸残基为一周，螺距为3.4nmC.氨基酸侧链R基团分布在螺旋的外侧D.其结构靠氢键维持E.螺旋是一种左手螺旋构象17.使蛋白质沉淀但不变性的方法有:A.中性盐沉淀蛋白质B.常温乙醇盐沉淀蛋白质C.低温乙醇盐沉淀蛋白质D.鞣酸沉淀蛋白质E.重金属盐沉淀蛋白质18.蛋白质变性A.由肽键断裂而引起B.可增加其溶解度C.空间结构改变D.可使其生物活性丧失E.由次级键断裂引起三、问答题1.酸性氨基酸和碱性氨基酸各包括什么?2.哪些氨基酸属于必需氨基酸?3.使蛋白质变性的因素有哪些?变性后性质有哪些改变?4.什么是蛋白质的一、二、三、四级结构，维系各级结构的键是什么?5.写出四种有甘氨酸参与合成的不同类型的生物活性物质，并分别说明他们的主要作用?6.举例说明蛋白质的结构与功能的关系?7.列举分离纯化蛋白质的主要方法，并扼要说明其原理?8.沉淀蛋白质的方法有哪些?各有何特点?参考答案一、单项选择题1.B2.B3.C4.B5.A6.C7.C8.A 9.B 10.D 11.B 12.C 13.B 14.A15.A 16.D 17.E 18.C 19.B 20.C 21.C22.D 23.D 24.C 25.A 26.B 27.E 28.B29.C二、多项选择题1.ABE2.AD3.AD4.ACE5.ABCD6.ABCE7.BCD8.CE9.BD 10.ABD 11.ACBD 12.ABCD13.BCE 14.ABE 15.ABCDE 16.ABE17.AC 18.CDE三、问答题1.酸性氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。
生物化学(18.16)--作业常用分子生物学技术及应用(附答案)
简述肿瘤基因治疗常用的方案有哪些? [答案](1)细胞因子的转基因治疗，主要有干扰素类、白介素类、刺激因子类、肿瘤坏死因子及 转化生长因子。
(2)MHC 抗原基因的转基因疗法：肿瘤细胞逃避机体免疫系统的机制之一是其不表达 MHC—I 类抗原而不能被免疫系统所识别。因而将 MHC—1 分子基因导人缺乏 MHC—I 抗 原表达的肿瘤细胞中可诱导肿瘤特异性的细胞毒作用来杀灭肿瘤。
基因治疗的基本程序是什么? [答案]治疗性基因的选择一基因载体的选择一靶细胞的选择一基因转移 (病毒介导的基因转 移与非病毒介导的基因转移)一外源基因表达的筛选一外源基因回输体内。
简述基因诊断的基本途径、技术和方法。 [答案]基因诊断的基本途径：根据临床诊断的初步结论进行基因诊断，可以进行：①直接 探测基因结构是否存在突变；②检测基因转录产物 mRNA 是否表达异常。基因诊断的技术 和方法：DNA 探针技术；PCR 技术；DNA 探针技术与 PCR 技术结合的技术。
参考答案：
名பைடு நூலகம்解释 印迹技术 [答案]印迹技术是指将在凝胶中分离的生物大分子转移(印迹)或直接将其放在固定化介质上 并加以检测分析的技术。
分子生物学常用技术共35张-2024鲜版
•分子生物学概述•基因克隆技术•核酸测序技术•蛋白质组学技术•基因表达调控研究技术•细胞信号传导途径研究技术•生物信息学在分子生物学中应用contents目录01分子生物学概述分子生物学定义与发展分子生物学定义发展历程包括基因的结构、功能、表达调控以及基因组的结构、功能与进化等。
基因与基因组研究DNA 复制、转录与翻译蛋白质组学基因表达调控研究DNA 的复制、转录和翻译过程及其调控机制，揭示遗传信息在细胞内的传递和表达规律。
研究细胞内所有蛋白质的表达、功能及其相互作用，揭示蛋白质在生命活动中的作用机制和调控规律。
研究基因表达的时空特异性及其调控机制，包括转录因子、表观遗传学修饰等。
分子生物学研究内容分子生物学与生物技术关系生物技术定义生物技术是以生命科学为基础，利用生物（或生物组织、细胞及其他组成部分）的特性和功能，设计、构建具有预期性能的新物质或新品系，以及与工程原理和技术相结合进行社会生产或为社会服务的一种综合性技术。
分子生物学对生物技术的影响分子生物学的发展为生物技术提供了重要的理论基础和技术支持，推动了基因工程、细胞工程、发酵工程等生物技术的飞速发展。
同时，生物技术的发展也反过来促进了分子生物学的深入研究，为揭示生命现象的本质和规律提供了有力手段。
02基因克隆技术步骤目的基因的获取载体的选择与构建030201重组DNA分子的构建将目的基因与载体连接，形成重组DNA分子。
重组DNA分子的转化将重组DNA分子导入受体细胞，如细菌、酵母或哺乳动物细胞等。
转化细胞的筛选与鉴定通过选择性培养基或PCR等方法筛选含有重组DNA分子的细胞，并进行鉴定。
0102载体选择构建策略添加启动子和终止子添加选择性标记优化载体结构030405载体选择与构建策略重组DNA转化与筛选方法转化方法筛选方法03核酸测序技术1. DNA模板制备2. 引物设计3. 测序反应4. 产物纯化015. 变性凝胶电泳026. 放射自显影031 2 3NGS技术原理NGS技术特点NGS技术应用第二代测序技术（NGS）简介第三代测序技术（TGS）展望TGS技术原理TGS技术特点TGS 技术应用前景04蛋白质组学技术蛋白质组学概念及研究内容蛋白质组学概念研究内容层析法利用不同物质在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离，如凝胶层析、离子交换层析等。
常用分子生物学技术的原理及其应用
常用分子生物学技术的原理及其应用常用分子生物学技术是一系列用于分析和操作分子生物学层面的实验技术。
这些技术基于对核酸（DNA和RNA）和蛋白质的结构和功能的研究，以及对基因表达和调控机制的理解。
在本文中，我将介绍常用分子生物学技术的原理和应用。
1.聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种能够从极少量的DNA样本中扩增特定DNA序列的技术。
它基于DNA的两条链之间的互补配对，使用DNA聚合酶酶和引物来在离子和温度周期变化的条件下进行。
PCR技术广泛应用于分子生物学和生物医学研究中，包括基因克隆、基因突变分析、DNA指纹鉴定以及病原体的检测等。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：凝胶电泳是一种分离和分析DNA，RNA和蛋白质的常用技术。
其中，聚丙烯酰胺（或琼脂糖）是一种高分子量聚合物，能够形成孔隙凝胶。
在电场的作用下，DNA，RNA或蛋白质在凝胶中迁移，根据大小和电荷的差异进行分离。
凝胶电泳广泛用于DNA和RNA的分离和纯化，以及蛋白质的分析和鉴定。
3.DNA测序：DNA测序是确定DNA序列的技术。
它通过测量DNA片段中的碱基顺序来分析DNA的序列信息。
目前有多种DNA测序技术，包括链终止测序（Sanger测序）和高通量测序（如Illumina测序和Ion Torrent测序）。
DNA测序在基因组学、遗传学和基因诊断中起着重要的作用。
4.基因克隆技术：基因克隆是指将目标基因从其源DNA中扩增，并将其插入到载体DNA 中，然后转化到宿主细胞中。
利用基因工程技术，克隆的基因可以在宿主细胞中被表达。
这种技术被广泛应用于重组蛋白质的定制表达、转基因生物的制备以及基因治疗的研究中。
5. 蛋白质电泳和Western blot：蛋白质电泳是一种分离和分析蛋白质的技术。
与DNA电泳类似，蛋白质电泳通过在聚丙烯酰胺凝胶中迁移蛋白质来分离不同大小和电荷的蛋白质。
Western blot是一种检测目标蛋白质的特异性抗体的技术，通过将蛋白质转移到膜上，然后使用特异性抗体与目标蛋白质结合来检测和定量蛋白质。
21-生物化学习题与解析--常用分子生物学技术的原理及其应用
21-生物化学习题与解析--常用分子生物学技术的原理及其应用常用分子生物学技术的原理及其应用一、选择题（一） A 型题1 ．分子杂交实验不能用于A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交C ．单链 RNA 分子之间的杂交D ．单链 DNA 分子之间的杂交E ．抗原与抗体分子之间的杂交2 ．关于探针叙述错误的是A ．带有特殊标记B ．具有特定序列C ．必须是双链的核酸片段D ．可以是基因组 DNA 片段E ．可以是抗体3 ．下列哪种物质不能用作探针A ． DNA 片段B ． cDNAC ．蛋白质D ．氨基酸E ． RNA 片段4 ．印迹技术可以分为A ． DNA 印迹B ． RNA 印迹C ．蛋白质印迹D ．斑点印迹E ．以上都对5 ． PCR 实验延伸温度一般是A ．90 ℃B ．72 ℃C ．80 ℃D ．95 ℃E ．60 ℃6 ． Western blot 中的探针是A ． RNAB ．单链 DNAC ． cDNAD ．抗体E ．双链 DNA7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是A ．基本原理不同B ．无需进行限制性内切酶消化C ．探针必须是 RNAD ．探针必须是 DNAE ．靠毛细作用进行转移8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是A ．斑点印迹B ．原位杂交C ． RNA 印迹D ． DNA 芯片技术E ． DNA 印迹9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板A ． RNAB ．单链 DNAC ． cDNAD ．蛋白质E ．双链 DNA10 ． RT-PCR 中不涉及的是A ．探针B ． cDNAC ．逆转录酶D ． RNAE ． dNTP11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是A ．特异性引物B ．耐热性 DNA 聚合酶C ． dNTPD ．含有 Zn 2+ 的缓冲液E ．模板12 ． DNA 链末端合成终止法不需要A ． ddNTPB ． dNTPC ．引物标记D ． DNA 聚合酶E ．模板13 ． cDNA 文库构建不需要A ．提取 mRNAB ．限制性内切酶裂解 mRNAC ．逆转录合成 cDNAD ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体E ．重组载体转化宿主细胞14 ．标签蛋白沉淀是A ．研究蛋白质相互作用的技术B ．基于亲和色谱原理C ．常用标签是 GSTD ．也可以是 6 组氨酸标签E ．以上都对15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是A ．标签蛋白沉淀B ．酵母双杂交C ．凝胶迁移变动实验D ．染色质免疫沉淀法E ．噬菌体显示筛选系统16 ．动物整体克隆技术又称为A ．转基因技术B ．基因灭活技术C ．核转移技术D ．基因剔除技术2 ．核酸分子杂交可以形成的杂化双链有A ． DNA/DNAB ． RNA/RNAC ． DNA/RNAD ．寡核苷酸 /RNAE ．寡核苷酸 /DNA3 ． PCR 技术主要用于A ．目的基因的克隆B ．基因的体外突变C ． DNA 和 RNA 的微量分析D ． DNA 序列测定E ．基因突变分析4 ．分子杂交技术的原理涉及A ．分子杂交特性B ．基因文库C ．印迹技术D ．生物芯片E ．探针技术5 ．关于 DNA 链末端合成终止法正确的是A ．需加入的链终止剂 ddNTPB ． dNTP 需要标记C ．引物也需要标记D ．又称 Sanger 法E ． ddNTP 缺乏 5 ' -OH6 ．基因组 DNA 文库建立需要A ．基因组进行限制性内切酶消化B ． DNA 片段克隆到相应载体中C ．重组体感染宿主菌D ．筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行E ．以λ 噬菌体为载体的人基因组 DNA 文库的克隆数目至少应在 10 6 以上7 ．用于构建基因组 DNA 文库的载体有A ．酵母人工染色体B ．粘粒C ．λ 噬菌体D ．腺病毒E ．脂质体8 ．基因诊断较常规诊断其特点有A ．属于病因诊断B ．特异性强C ．适用范围窄D ．灵敏度高E ．有放大效应9 ．基因失活的常用技术包括A ．基因疫苗B ．核酶C ．小干扰 RNAD ．反义核酸E ．基因置换10 ．克隆羊多莉的产生属于A ．同种异体细胞转移技术B ．同种异体细胞核转移技术C ．试管内受精D ．无性繁殖E ．同种异体细胞转基因技术11 ．疾病动物模型可用于A ．探讨疾病的发生机制B ．克隆致病基因C ．新治疗方法的筛选系统D ．新药物的筛选系统E ．新疾病模型的筛选系统12 ．蛋白质芯片主要应用于A ．蛋白质结构的研究B ．蛋白质表达谱的研究C ．蛋白质功能的研究D ．蛋白质之间的相互作用研究E ．疾病的诊断和新药的筛选13 ．研究蛋白质相互作用的技术包括A ．标签蛋白沉淀B ．酵母双杂交C ．凝胶阻滞实验D ．噬菌体显示筛选系统E ． DNA 印迹14 ．基因治疗的基本程序包括A ．治疗性基因的选择B ．基因载体的选择C ．靶细胞的选择D ．基因转移E ．回输体内15 ．目前可用作基因治疗的基因载体包括A ．腺病毒相关病毒B ．噬菌体C ．腺病毒D ．逆转录病毒E ．粘粒二、是非题1 ． Southern blot 主要用于 RNA 的定性和定量分析。
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常用分子生物学技术的原理及其应用一、选择题（一）A 型题1 ．分子杂交实验不能用于A ．单链DNA 与RNA 分子之间的杂交B ．双链DNA 与RNA 分子之间的杂交C ．单链RNA 分子之间的杂交D ．单链DNA 分子之间的杂交E ．抗原与抗体分子之间的杂交2 ．关于探针叙述错误的是A ．带有特殊标记B ．具有特定序列C ．必须是双链的核酸片段D ．可以是基因组DNA 片段E ．可以是抗体3 ．下列哪种物质不能用作探针A ．DNA 片段B ．cDNAC ．蛋白质D ．氨基酸E ．RNA 片段4 ．印迹技术可以分为A ．DNA 印迹B ．RNA 印迹C ．蛋白质印迹D ．斑点印迹E ．以上都对5 ．PCR 实验延伸温度一般是A ．90 ℃B ．72 ℃C ．80 ℃D ．95 ℃E ．60 ℃6 ．Western blot 中的探针是A ．RNAB ．单链DNAC ．cDNAD ．抗体E ．双链DNA7 ．Northern blotting 与Southern blotting 不同的是A ．基本原理不同B ．无需进行限制性切酶消化C ．探针必须是RNAD ．探针必须是DNAE ．靠毛细作用进行转移8 ．可以不经电泳分离而直接点样在NC 膜上进行杂交分析的是A ．斑点印迹B ．原位杂交C ．RNA 印迹D ．DNA 芯片技术E ．DNA 印迹9 ．下列哪种物质在PCR 反应中不能作为模板A ．RNAB ．单链DNAC ．cDNAD ．蛋白质E ．双链DNA10 ．RT-PCR 中不涉及的是A ．探针B ．cDNAC ．逆转录酶D ．RNAE ．dNTP11 ．关于PCR 的基本成分叙述错误的是A ．特异性引物B ．耐热性DNA 聚合酶C ．dNTPD ．含有Zn 2+ 的缓冲液E ．模板12 ．DNA 链末端合成终止法不需要A ．ddNTPB ．dNTPC ．引物标记D ．DNA 聚合酶E ．模板13 ．cDNA 文库构建不需要A ．提取mRNAB ．限制性切酶裂解mRNAC ．逆转录合成cDNAD ．将cDNA 克隆入质粒或噬菌体E ．重组载体转化宿主细胞14 ．标签蛋白沉淀是A ．研究蛋白质相互作用的技术B ．基于亲和色谱原理C ．常用标签是GSTD ．也可以是6 组氨酸标签E ．以上都对15 ．研究蛋白质与DNA 在染色质环境下相互作用的技术是A ．标签蛋白沉淀B ．酵母双杂交C ．凝胶迁移变动实验D ．染色质免疫沉淀法E ．噬菌体显示筛选系统16 ．动物整体克隆技术又称为A ．转基因技术B ．基因灭活技术C ．核转移技术D ．基因剔除技术E ．基因转移技术17 ．目前主要克隆的致病基因是A ．糖尿病致病基因B ．恶性肿瘤致病基因C ．单基因致病基因D ．多基因致病基因E ．高血压致病基因18 ．基因疫苗主要是指A ．DNA 疫苗B ．RNA 疫苗C ．反义核酸D ．核酶E ．小干扰RNA19 ．目前基因治疗中选用最多的基因载体是A ．噬菌体B ．脂质体C ．逆转录病毒D ．腺病毒相关病毒E ．腺病毒20 ．目前基因治疗多采用的方法是A ．基因增补B ．基因置换C ．基因矫正D ．基因灭活E ．基因疫苗（二）B 型题A ．Southern blottingB ．Northern blottingC ．Western blottingD ．dot blottingE ．in situ hybridization1 ．不需要电泳、转膜等程序2 ．电泳前不需进行限制性切酶消化3 ．靠电转移完成生物大分子的转移4 ．直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交A ．逆转录PCRB ．原位PCRC ．实时PCRD ．多重PCRE ．RFLP5 ．将目的基因扩增与定位相结合6 ．能动态检测反应过程中的产物量7 ．将RNA 的逆转录和PCR 反应联合应用的一项技术8 ．在同一反应中采取多对引物A ．功能克隆B ．定位克隆C ．转基因技术D ．核转移技术E ．基因剔除9 ．也叫基因靶向灭活10 ．该技术中，被导入的目的基因称为转基因11 ．从对基因编码产物的功能的了解出发克隆致病基因A ．基因疫苗B ．基因矫正C ．基因置换D ．基因增补E ．基因失活12 ．目前基因治疗采用最多的方法是13 ．将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是14 ．将正常基因经体基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是15 ．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是A ．酵母双杂交技术B ．标签蛋白沉淀C ．电泳迁移率变动测定D ．染色质免疫沉淀E ．荧光共振能量转换效应分析16 ．凝胶阻滞实验17 ．需要设计诱饵基因18 ．近年该技术与芯片技术结合在一起，成为一项鉴定特定核蛋白的DNA 结合靶点的新技术（三）X 型题1 ．核酸探针可以是A ．人工合成寡核苷酸片段B ．基因组DNA 片段C ．RNA 片段D ．cDNA 全长或部分片段E ．核苷酸2 ．核酸分子杂交可以形成的杂化双链有A ．DNA/DNAB ．RNA/RNAC ．DNA/RNAD ．寡核苷酸/RNAE ．寡核苷酸/DNA3 ．PCR 技术主要用于A ．目的基因的克隆B ．基因的体外突变C ．DNA 和RNA 的微量分析D ．DNA 序列测定E ．基因突变分析4 ．分子杂交技术的原理涉及A ．分子杂交特性B ．基因文库C ．印迹技术D ．生物芯片E ．探针技术5 ．关于DNA 链末端合成终止确的是A ．需加入的链终止剂ddNTPB ．dNTP 需要标记C ．引物也需要标记D ．又称Sanger 法E ．ddNTP 缺乏5 ' -OH6 ．基因组DNA 文库建立需要A ．基因组进行限制性切酶消化B ．DNA 片段克隆到相应载体中C ．重组体感染宿主菌D ．筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行E ．以λ 噬菌体为载体的人基因组DNA 文库的克隆数目至少应在10 6 以上7 ．用于构建基因组DNA 文库的载体有A ．酵母人工染色体B ．粘粒C ．λ 噬菌体D ．腺病毒E ．脂质体8 ．基因诊断较常规诊断其特点有A ．属于病因诊断B ．特异性强C ．适用围窄D ．灵敏度高E ．有放大效应9 ．基因失活的常用技术包括A ．基因疫苗B ．核酶C ．小干扰RNAD ．反义核酸E ．基因置换10 ．克隆羊多莉的产生属于A ．同种异体细胞转移技术B ．同种异体细胞核转移技术C ．试管受精D ．无性繁殖E ．同种异体细胞转基因技术11 ．疾病动物模型可用于A ．探讨疾病的发生机制B ．克隆致病基因C ．新治疗方法的筛选系统D ．新药物的筛选系统E ．新疾病模型的筛选系统12 ．蛋白质芯片主要应用于A ．蛋白质结构的研究B ．蛋白质表达谱的研究C ．蛋白质功能的研究D ．蛋白质之间的相互作用研究E ．疾病的诊断和新药的筛选13 ．研究蛋白质相互作用的技术包括A ．标签蛋白沉淀B ．酵母双杂交C ．凝胶阻滞实验D ．噬菌体显示筛选系统E ．DNA 印迹14 ．基因治疗的基本程序包括A ．治疗性基因的选择B ．基因载体的选择C ．靶细胞的选择D ．基因转移E ．回输体15 ．目前可用作基因治疗的基因载体包括A ．腺病毒相关病毒B ．噬菌体C ．腺病毒D ．逆转录病毒E ．粘粒二、是非题1 ．Southern blot 主要用于RNA 的定性和定量分析。
2 ．蛋白质印迹分析技术中蛋白质的转移，可以用电转移，也可以靠毛细作用转移。
3 ．实时PCR 技术与普通PCR 技术相比，它可以动态监测反应过程中产物的量。
4 ．Sanger 法在测定核酸序列时，反应管中加入的dNTP 仅标记一种即可。
5 ．生物芯片可以是DNA 芯片、cDNA 芯片或蛋白质芯片。
6 ．酵母双杂交技术是分析DNA—蛋白质相互作用的一项重要技术。
7 ．核转移技术，是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的卵细胞，使之发育成个体。
8 ．基因矫正是用正常的基因通过体基因同源重组，替换致病基因来达到治疗目的。
9 ．目前基因治疗多采用基因增补的方式。
10 ．RNA 印迹技术中，RNA 分子在转移前需进行限制性切酶切割。
11 ．PCR 反应中变性主要是使模板DNA 完全变性为单链。
12 ．实时PCR 技术中，TagDNA 聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针，可发挥3 ' →5 ' 核酸外切酶活性。
13 ．酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生物信息学推测。
14 ．转基因技术即动物克隆技术，是无性繁殖。
15 ．源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。
16 ．基因转移和基因剔除技术在医学中最重要的用途是建立疾病动物模型。
17 ．定位克隆是指从对基因编码产物的功能的了解出发来克隆致病基因。
18 ．目前DNA 序列分析是找出患者有关基因变异所在的最为直接和确切的基因诊断法。
三、填空题1 ．分子杂交是利用DNA 和这一基本性质来进行DNA 或RNA 定性、定量分析的。
2 ．在印迹技术中，将DNA 片段在琼脂糖凝胶中使其成为，利用使胶中的生物大分子转移到膜上，使之成为固相化分子。
3 ．印迹技术的基本流程依次为、、和。
4 ．Southern blotting 主要用于定性和定量分析，亦可用于和的分析。
5 ．Northern blotting 主要用于检测的表达水平，敏感性较PCR ，但其具有和的优点。
6 ．Western blotting 主要用于检测样品中的存在、细胞中以及的相互作用研究等。
7 ．PCR 的基本反应步骤包括、、。
8 ．基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的，其原理是基于。
9 ．在转基因技术中，被导入的目的基因称为，目的基因的受体动物称为。
10 ．标签融合蛋白结合实验主要用于证明是否存在直接的物理结合，分析结合的及筛选细胞与融合蛋白相结合的。
11 ．染色质免疫沉淀法是目前可以研究与相互作用的主要方法。
12 ．目前克隆致病相关基因主要有和两大策略。
13 ．根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为的基因治疗和的基因治疗两大类。
14 ．目前使用的基因载体有和两大类。
15 ．在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有和两大类。
四、名词解释1 ．probe2 ．blotting technologe3 ．gene libary4 ．核转移技术5 ．gene chip6 ．gene therapy7 ．gene diagnosis8 ．基因疫苗9 ．gene inactivation10 ．gene replacement11 ．gene augmentation12 ．PCR13 ．ex vivo五、问答题1 ．简述印迹技术的分类及应用。