组织切片制作步骤
组织病理切片的制作流程(精品)
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 组织病理切片的制作流程(精品)组织病理切片的制作流程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1) 材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2) 组织块的大小：所取组织块较理想的体积为 2. 0cm2. 0cm0. 3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取 0. 1～0. 2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取 0. 3 ～0. 5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3) 勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
1 / 17夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5) 选好组织块的切面: 根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6) 保持材料的清洁: 组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7) 保持组织的原有形态: 新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片制作流程(完整版)组织病理切片是一种常规病理学检查方法，用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。
制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。
组织标本采集组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。
组织标本的质量直接影响到切片的质量。
因此，采集前需要确保标本来源正确，并与患者信息相符。
对于手术标本，需要注意保护血管、神经、肌肉等结构，避免对组织结构造成不必要的损害。
对于活检标本，需要选择有代表性的组织，避免损伤重要结构和血管。
组织处理组织标本采集后，需要进行组织处理。
对于手术标本，可以直接收取。
对于活检标本，需要迅速固定，避免组织发生变性和坏死。
常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等，选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。
样本包裹固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。
包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、增韧剂聚苯乙烯等塑料材料，包裹材料必须能够完全包裹组织标本，并保证固定。
切片制备组织标本包裹后，需要进行切片制备。
切片机是用于切割病理标本的设备，其切割面的厚度一般在4-6μm之间。
在切片制备中，需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。
切片后，标本必须尽快贴在玻片上进行染色。
组织染色组织染色是组织病理学检测的重要环节。
目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染色和免疫组化染色等。
苏木素-伊红染色是一种常规染色方法，可以显示出组织的基本结构和染色体。
免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。
组织标签和包装染色后的组织切片需要进行标签和包装。
标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期等基本信息。
组织切片还需要包装防止刮损和振动。
结果解释组织病理切片制备完成后，需要进行结果解释。
结果解释需要根据不同的病理学检测目的进行，一般是通过显微镜进行观察和诊断。
有时候，还需要通过综合分析临床病史和症状等信息来确定诊断结论。
总结组织病理切片制备流程需要严格按照一定的步骤来进行，包括组织标本采集、组织处理、样本包裹、切片制备、组织染色、组织标签和包装以及结果解释。
组织切片制作
一、取 材 取材应注意事项： 取材应注意事项：
1 切取组织应根据需要观察的部位进行选择。 切取组织应根据需要观察的部位进行选择。 所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层， 所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层，同时考虑 好切面方向。 好切面方向。 病理组织除切取病变部位外， 病理组织除切取病变部位外，还要切取病变和正常组织交 界区域，以利观察分析。 界区域，以利观察分析。 2 切取的组织必须新鲜。 切取的组织必须新鲜。 取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形， 取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形，发生自 溶现象。 溶现象。
1
固定液的用量 应充足，一般为组织块体积的 倍左右 倍左右。 应充足，一般为组织块体积的10倍左右。
2
固定时间 应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、 应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、 种类 渗透力的强弱而定 而定。 渗透力的强弱而定。
一般组织， 左右， 如：一般组织，以10％福尔马林固定 ％福尔马林固定24h左右，波音 左右 波音(Bouin)氏固定液 氏固定液 12至24h，卡诺氏 固定液1h内 至 ，卡诺氏(Carnoy)固定液 内。 固定液
酒精固定液： 酒精固定液： 无水乙醇（纯酒精） 无水乙醇（纯酒精）85ml（或95ml） （ ） 15ml（或5ml） 蒸馏水 （ ） 优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入 ％－ ％－95 优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入85％－ 酒精中脱水。对糖原、 ％酒精中脱水。对糖原、纤维蛋白和弹性纤维等固定效 果好。 果好。 缺点：但固定速度较慢，易使组织变脆。一般先用 ％ 缺点：但固定速度较慢，易使组织变脆。一般先用85％ 酒精固定数小时再放入95％酒精继续固定。 酒精固定数小时再放入 ％酒精继续固定。 除此之外，还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、 除此之外，还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、丙酮 重铬酸钾 等单纯固定液。 等单纯固定液。
组织切片流程
组织切片流程常规石蜡包埋社团切片（常规切片）制备的操作流程及要求㈠社团块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。
㈡社团切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不患上有有焰的火，局部环境应有良好的透风和救火设施。
㈢常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间）1．水洗：用水流冲洗已经固定的社团块30min。
2．脱水（常温下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60~120min（2）80%乙醇60~120min（3）95%乙醇Ⅰ60~120min（4）95%乙醇Ⅱ60~120min（5）无水乙醇Ⅰ60~120min（6）无水乙醇Ⅱ60~120min（7）无水乙醇Ⅲ60min［注意事项］①未经充分固定的社团不患上进入脱水程序。
②用于脱水的试剂容积应为社团块总体积的5～10倍以上。
③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。
④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml乙醇可用于500个社团块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。
⑤较大社团块的脱水时间长于较小者，应将两者分隔进行脱水。
⑥社团置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。
⑦丙酮脱水性能强，会使社团块过缩、硬脆，不宜用以替换无水乙醇。
3．透明（1）二甲苯Ⅰ20min（2）二甲苯Ⅱ20min（3）二甲苯Ⅲ20min［注意事项］①二甲苯的容积应为社团块总体积的5～10倍以上。
②社团块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防社团硬、脆），并依不同品类社团及其大小而异；社团出现棕黄或暗红色透明即可。
③二甲苯应及时过滤、更换。
④社团经二甲苯程度适当处理后不显透明时，常提示该社团的固定或脱水不充分，应查找原因并妥帖处理。
4．浸蜡（1）石蜡Ⅰ（45~50℃）60min（2）石蜡Ⅱ（56~58℃）60min（3）石蜡Ⅲ（56~58℃）60min［注意事项］①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70℃）进行，不患上用有焰的火加温。
组织切片制作方法
组织切片制作方法
组织切片是制备病理学标本的主要方法之一，以下是其制作步骤：
1. 收集组织样本，并在一定时间内将其放入固定液中进行固定。
2. 将组织样本从水中逐渐转移到酒精中进行脱水。
3. 将样本置于包埋剂中，使其逐渐转移到蜡块中。
4. 用切片机将蜡块切割成极薄的切片，并用染色剂染色，以便在显微镜下进行观察和分析。
5. 将切片封入载玻片中。
此外，为了确保切片的质量，需要注意以下几点：
1. 载玻片应干净无油，如有云雾斑点，则不能使用。
2. 切片制作过程中，应将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向。
刀的倾斜度通常为15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为6μm，切成厚度均匀的切片。
3. 切片贴附后，放在空气中稍晾干，然后进行烤片。
烤片的温度以蜡溶解为准，也可以放置60℃烘箱内烘烤过夜。
血块组织、皮肤组织须及时烤片，但脑组织、脂肪组织待完全晾干后才能进行，这样可防止产生气泡而影响染色。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
组织切片制备技术
组织切片制备技术在生命科学领域中，组织切片制备技术是一项基本且重要的技术，它被用于组织学、解剖学、病理学和神经科学等诸多领域。
组织切片制备技术可以产生高质量的组织切片样本，以便进行研究和分析。
本文将探讨组织切片制备技术的具体步骤和注意事项。
1. 组织处理在进行组织切片制备之前，需要对样本进行处理。
处理的目的是保护组织结构和细胞形态，以便在组织切片过程中得到高质量的切片。
处理的方法包括固定、脱水和浸渍。
2. 组织固定组织固定是组织切片制备技术中的一个重要步骤，目的是停止组织活动并保护组织结构。
固定的方法包括乙醛、甲醇和布氏液等。
3. 组织切片组织切片是组织切片制备技术的核心步骤之一。
合适的切片厚度应该根据需要来决定。
切片的方法包括手工切片和机器切片。
机器切片可通过旋转式、滑动式或挤压式制备。
4. 切片染色切片染色是组织切片制备技术中的关键步骤，可使细胞和组织结构变得更明显。
切片染色的方法主要有荧光染色和显微镜染色。
5. 成像和分析成像和分析是组织切片制备技术的最后一步。
通过显微镜成像和分析，可以观察到细胞和组织结构的形态和分布。
这种方法还可以被用于研究细胞和组织中的基因，蛋白质和其他特定目标。
注意事项：- 操作中要注意安全，佩戴手套和眼镜等防护设备；- 操作环境要保持清洁，防止异物进入；- 操作材料要储存妥善，避免过期或者污染；- 操作流程要规范，避免操作过程中发生错误。
结论：组织切片制备技术是在生命科学领域中非常基本的技术。
制备高质量的组织切片样本是开展组织学、解剖学、病理学和神经科学等领域的基础工作。
研究人员在进行组织切片制备时，必须依据标准的步骤和注意事项，以确保所获得的数据是可靠且具备参考价值的。
组织切片制作步骤
如何做出一张合格的组织切片？一般要先取材→固定→透明→包埋→切片，最后进行染色组化等操作。
本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。
包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。
.冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差，一般用来做原位杂交ISH，免疫荧光IF。
冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。
冰冻包埋步骤较为简洁，固定之后，直接用镊子将样品放置到样品托上，挤压OCT完全包裹组织，放入冷冻机待OCT凝固即可。
凝固后就可以直接切片。
如果不能及时切片，用锡箔纸包装好，放入-80℃存放。
.石蜡切片，一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。
厚度更薄，一般为4um，工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成，更加依赖制作者的经验，需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。
下面是石蜡包埋和切片的具体步骤：一、实验材料动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，ddH2O，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。
二、实验步骤1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。
2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。
PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。
冰冻切片可以直接用丙酮固定。
其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4。
固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。
固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。
关于固定液的选择可以参考这篇文章[1]。
3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。
4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下脱水：30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。
组织切片制作过程
组织切片制作过程一、组织切片技术1、取样：样品长度0.5—1cm，切面光滑（最好一刀切）2、样本处理：取样后立即放入Bowin氏固定液中固定（24—48h一般24h）3、组织冲洗：将组织用纱布或包埋盒包住，装入容器中，兑水冲洗过夜，一般为一夜。
4、组织脱水：70%酒精—80%酒精—85%酒精—90%酒精—95%酒精（各50min）无水酒精I—无水酒精II (各40min)5、组织透明：纯酒精（2）：二甲苯（3）（体积比为2:3混合液）（10min）纯酒精（1）：二甲苯（3）（体积比为1:3混合液）（5min）纯二甲苯(2min)6.透明石蜡和包埋：（两个蜡杯，一个1h,一个1—2h）,烘箱温度65—70℃（蜡的熔点为55—60℃）①接着步骤5马上取出样品后放入第一个蜡杯1h后转移到另一个蜡杯中，在第二个蜡杯中放置时间也为1h。
②包埋：a.制作中昌状包埋盒凹b.j将蜡倒入包埋盒中，然后用加热的镊子夹住样品让人包埋盒中（防止气泡）。
③修块：a.将蜡块修整为长方形或正方形，方便切片b.切片、展片、贴片①切片厚度为5—7μm，刀片要新，勿磨损，先用15—20μm厚度将蜡块修平，然后再将厚度调整到5—7μm②展片：温度调为43—44℃，与刀片相接触的面朝下，等到片子完全摊平（无白点）方可捞出。
（注：载玻片必须用盐酸浸泡清洗干净，无灰尘）③烤片：温度为45℃，烘烤时间为10—20分钟④再将玻片放入烘箱中（37—45℃）数小时，片完全贴住即可。
二、HE染色过程（苏木精—伊红染色）1.脱蜡：①二甲苯I 8min ②二甲苯II 5-8min2.洗去二甲苯：③无水酒精I 3min④无水酒精II 3min3.复水：⑤95%酒精5min—90%酒精5min—80%酒精5min—70%酒精5min—60%酒精5min—50%酒精5min—自来水5min—蒸馏水5min4.核染：⑥苏木紫 8min（染成蓝色）5.洗去苏木紫：⑦自来水 8—10min（拿出片子直接在自来水中冲洗）6.盐酸酒精分色（颜色由蓝变红即可）：⑧醇酸30s—1min(洗去其他细胞器染色，核染较深)注：醇酸配制：浓盐酸0.5—1ml，70%—95%酒精100ml7.蓝化：⑨10min—数小时（由红变蓝，一般半小时即可）将染缸放入盛满自来水的脸盆中，打开水龙头，小流速。
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植物组织石蜡切片技术是农学学生需要掌握的基本实验操作技术。
工具/原材料
药物：石蜡，酒精，二甲苯，藏红花/快速绿色染色溶液，胶，明胶，甲醛等
仪器：石蜡切片机，组织脱水器，载玻片台，培养箱，染料桶，载玻片，盖玻片，烧杯，量筒等
方法/步骤
1.取材
确定材料的来源和位置，纵向还是横向；
应尽快取走材料以防止进一步变化，并且材料量应适当。
下图显示了植物芽的实际采样。
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
2.固定
（1）固定剂的选择
最常用的固定剂是FAA。
该方法的优点是材料的固定时间不受限制。
固定时间可以短至几个小时，也可以长达几个月或几年。
（可用作材料保存溶液）
配方：50％或70％酒精90ml
冰醋酸5毫升
福尔马林5毫升
（含50％酒精的软质材料，含70％酒精的硬质材料）
（2）固定后材料的处理
洗涤或漂洗：固定后，应彻底清洗组织以去除固定溶液和残留在组织中的晶体沉淀，否则会影响染色效果。
（如果固定后该材料暂时无法进行下一步操作，则可以将其存储在70％的酒精溶液中或直接用FAA固定溶液在4℃的冰箱中存储。
）
下图显示了浸泡在固定液中的组织切片。
石蜡切片的制备步骤（附图）
3.脱水
目的：水和透明剂不能互溶，只有除去水后，透明剂才能进入。
试剂：梯度酒精溶液
工艺：70％--- 85％--- 95％-100％--- 100％。
每个步骤约为1h-2h。
注意：确保脱水梯度和脱水时间的每一步，都应将水彻底清除，但不要过度脱水（时间过长会使组织变脆和收缩，这时您可以根据自己的实验进行探索，不需要完全遵循此操作）。
下图显示了适用于大量样品脱水的自动组织脱水器。
如果物料体积和样品体积较小，则可以将小烧杯用作逐步脱水的容器。
石蜡切片的制备步骤（附图）
4.透明度
目的：纯酒精不能与石蜡溶解，但需要用能与酒精和石蜡溶解的溶剂代替组织中的酒精。
（二甲苯是最常用的透明剂，可以与石蜡很好地混溶）
工艺：等体积的二甲苯和乙醇的混合物1H ---纯二甲苯1H ---纯二甲苯1H。
5.蜡浸和嵌入
目的：用石蜡代替石蜡。
蜡浸程序：（恒温）
（1）低温浸蜡（36℃）：接下来，将碎蜡逐渐与二甲苯和物料一起加入烧杯中，直至其过饱和（石蜡无法溶解），并放置过夜12-24小时。
（2）高温蜡浸（55-60℃，比石蜡熔点高3℃）
倒出二甲苯和石蜡的混合物，不要倒出材料，将纯石蜡加入烧杯中5-24h。
纯石蜡需要更换三次。
关于石蜡熔点的选择：
对于硬质材料，使用熔点较高的石蜡包埋；
当切片较薄时（低于8μm），选择包埋的熔点更高的石蜡。
夏季应使用熔点较高（56.58℃）的石蜡，冬季应使用熔点较低（52.54℃）的石蜡。
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
6.切片
传统的切片方法是用刀片将嵌入的蜡块切成规则的梯形，将其粘在小木块上，然后在机器上切割。
新的切片方法是用嵌入框架（参见下图）代替木块的支撑作用，然后在机器上切片。
切片的厚度可以根据我们自己的实验要求确定，通常在8μm-20μM的范围内。
（下图显示了传统的切片机和新的自动切片机）
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
7.粘贴和烘烤
粘着：蜡片通过粘片牢固地固定在载玻片上，以防止材料掉入随后的操作。
在载玻片上涂抹粘性片剂（液体a），然后滴入蒸馏水（液体B），放在蜡载玻片上，并用滤纸吸收过量的水。
烘烤载玻片：将载玻片放在40℃的载玻片桌上干燥。
常用的粘合片是Haupt配方
液体A：明胶1g；溶液B：甲醛4毫升
蒸馏水100ml蒸馏水100ml
甘油15毫升
苯酚2G
石蜡切片的制备步骤（附图）
8.脱蜡，补水和染色
脱蜡的目的：干燥后的切片需要在水溶性染料染色之前进行脱蜡和补水。
补水的目的：脱蜡后的物料，如果不补水，直接进入染料中，会使物料严重变形，甚至难以染色。
染色目的：使细胞组织中的不同结构呈现出不同的颜色和足够强的差异，以便于观察。
整个过程：二甲苯→1/2二甲苯+ 1/2纯酒精→100％酒精→95％酒精→85％酒精→藏红花（4小时以上）→95％酒精→坚牢绿色（快）→95％酒精（快速）→100％酒精→1/2二甲苯+ 1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯。
以上水平大约需要5-10分钟。