淀粉酶同工酶电泳
各种同工酶的染色方法
显色：将电泳后凝胶板浸入染色液，于37℃保温30～60分钟，即可显示蓝紫色区带。可用无离子水漂洗，再用7%醋酸固定，以终止酶促反应。
五、醇脱氢酶
制胶方法：同乳酸脱氢酶
染色方法：NAD+：0.025g
NBT：0.015g
PMs：0.001g
95%乙醇：2mL
0.2M Tris-HCl缓冲液：7mL
配制方法：
1%可溶性淀粉：0.1 g可溶性淀粉溶于10 mL pH8.9的Tris-柠檬酸缓冲液中，在水浴中煮沸，搅拌到完全透明无沉淀为止：——本试剂需随配随用。
0.15mol/LHAc缓冲液（pH5.0）：称取11.9 g NaAc，加重蒸水溶解，用冰HAc调pH至5.0，最终加重蒸水至1000 mL。
⑵、染色方法：
染色液：NAD+：0.05g
NBT：0.03g
PMS：0.002g
1mol/LL-苹果酸钠（pH7.0）：10mL
0.5 Tris-HCl缓冲液（pH7.1）：20mL
水：70mL
配制方法：
0.3%H2O2：1 mL 30%H2O2，加重蒸水至100 mL。
显色：将电泳后凝胶板浸入染色液，于37℃保温30～60分钟，显示深兰色区带。用无离子水漂洗，再用7.5%醋酸固定保存（或者用7.5%醋酸-30%乙醇-15%甘油）
蔗糖：6mL
TEMED：18uL
配制方法：
0.3%H2O2：1 mL 30%H2O2，加重蒸水至100 mL。
⑵、染色方法：
染色液：NAD+: 0.05g
NBT: 0.03g
PMS: 0.002g
1mol/L乳酸钠液（pH7.0）：10mL
0.1 mol/L氯化钠：5mL
木薯分支酶活性测定及同工酶电泳技术应用初探
２结果与分析
２．１木薯块根发育时期支链淀粉与分支酶活性的动态变化 对木薯块根各发育时间支链淀粉与分支酶活性动态变化研究，结果表明，随着木薯块根的发育，种
植后１００、１４０、２００ ｄ的支链淀粉含量相对于１２０、１６０、１８０ ｄ的比例略微低。因此在木薯块根发育过程 中，在不同的发育时期支链淀粉含量交错呈现上升和下降趋势（图ｌ—ａ）；在木薯块根中，支链淀粉总含
一 卷
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注：单株支链淀粉总量为单株块根干重×块根支链淀粉百分含量；单株支链淀粉积累量为这时期单株支链淀粉净增量
基金项目：国家９７３重大基础性项目（Ｎｏ．２０１０ＣＢｌ２６６００）；国家自然科学基金（Ｎｏ．３０８６０１５１）；中央级公益性科研院所基本科研项ｌ目（Ｎｏ．
ＩＴＢＢＺＤ０７２１）；木薯现代产业科技体系项目；２００８年海南省高校博士研究生创新科研课题（Ｎｏ．Ｈｘｗｂｙ２００８－０１）资 。
第一作者简介：闵义。女，１９８１，博士。从事植物生理与遗传育种方面的研究。Ｔｅｌ：１３６３７６１６３８４；Ｅ—ｍａｉｌ：ｍｉｎｙｉ０７２３＠１２６．ｃｏｍ。
第３ｌ卷第６期 ２０１０年６月
热带Байду номын сангаас物学报
ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＲＯＰＩＣＡＬ ＣＲＯＰＳ
Ｖ０１．３１ Ｎｏ．６ Ｊｕｎ．２０ｌＯ
检验科开展项目名称
第Ⅷ因子相关抗原测定
血浆因子Ⅷ抑制物测定
血浆因子ⅩⅢ缺乏筛选试验
凝血酶时间测定(TT)
血浆鱼精蛋白副凝试验（3P)
鱼精蛋白纠正试验
凝血酶抗凝血酶(Ⅲ)复合物测定（TAT)
血浆蛋白C活性测定(PC)
血浆蛋白C抗原测定(PCAg）
活化蛋白C抵抗试验（APCR）
葡萄糖测定
糖化血清蛋白测定
糖化白蛋白测定
糖化血红蛋白组分测定
全血半乳糖测定
果糖测定
木糖测定
乳酸测定
全血丙酮酸测定
血乙酰乙酸测定
血酮体检测
D—3羟丁酸检测
3.血脂及脂蛋白测定
总胆固醇测定
甘油三酯测定
磷脂测定
高密度脂蛋白胆固醇测定
低密度脂蛋白胆固醇测定
脂蛋白电泳分析
包括酯质、胆固醇染色
小密低密度脂蛋白测定
三碘甲状原氨酸（T3)测定
反三碘甲状原氨酸(T3)测定
游离甲状腺素（FT4）测定
游离三碘甲状原氨酸（FT3)测定
T3摄取实验
甲状腺结合球蛋白测定
甲状腺微粒体抗体测定
促甲状腺激素抗体分析
促甲状腺激素受体分析
全段甲状旁腺激素测定
降钙素基因相关肽测定
皮质醇测定
24小时尿游离皮质醇测定
尿17-羟皮质类固醇测定
检验科开展项目名称
项目名称
备注
一。临床体液、血液专业
1。血液一般检查(28）
血液分析仪血细胞分析
血红蛋白测定（Hb）
红细胞计数（RBC)
红细胞比积测定（HCT)
网织红细胞计数百分数
网织红细胞绝对数
网织红细胞分类
同工酶凝胶电泳
*表的行数根据情况可以调整。
@写出检测同工酶的原理。
一级带
带型绘制方法 二级带 三级带 四级带 一级带
二级带
三级带 四级带
同台两组共用一电泳槽。 注入两玻璃夹缝中，胶面上加1cm蒸馏水（自 然凝胶后倾出）。
本次实验涉及： 酯酶（Est）: 催化酯类化合物水解的酶系. 催化乳酸脱氢反应的酶.
乳酸脱氢酶(LDH):
过氧化物酶（PO）：催化过氧化物水解 应用： 1) 遗传育种 2）基因定位 ……
同工酶分析的过程
材料的采集 低温研磨、酶提取 凝胶制备 酶的保存
专一底物和特殊染料染色进行分析。
为节省时间，先做：架好胶板
电泳原理介绍 教师分头指导操作
配制分离胶（7.5%）（两组的量）：
双蒸水/mL 1.5mol/LTris· HCl（pH8.8）/mL Acr/Bis（30%）/mL TEMED/μL 10%Aps/μL 总体积/mL
9 mL 5 mL 5 mL 20 μL 100 μL 20 mL
染色约20分钟。
PO染液[第3桌配，60mL]
联苯胺 冰乙酸
1.0 g 9.0 mL
溶，可研磨
水
A液
36 mL
5.4 mL 0.6mL
A液
30% H2O2 水 54mL
混合成为染色液
染色5~10分钟，水洗停止反应。
五、方法步骤（合理分工、协调时间）
1. 提取酶液
每份材料（普通果蝇40只、大果蝇10只、或其他材料0.2g）
活性电泳
催化底物水解，染料复合显色酶谱的记录与分析带的位置，酶分子量差异、带的颜色深浅(反映酶的活性)
LDH染色原理
乳酸 LDH 丙酮酸 NADH NAD+ NBT(黄) PMS（氢递体） NBTH(蓝紫)
青南地区藏羊血清淀粉酶同工酶多态性的研究
扎孔!将装有胚胎的移植枪从此针眼进入子宫腔慢慢注入胚胎!还原子宫!切口较大时缝合!针"!#$#"#"!手术法移植!将受体羊在手术床上进行保定!用静松灵将其全身麻醉!术部剃毛!沿乳房前腹中线切口%O D 左右!按常规方法打开腹腔!取出子宫!观察黄体情况!对黄体发育好的受体羊进行移植!用曲别针在子宫角前端!##处避开血管扎孔!将装有胚胎的移植枪从此针眼进入子宫腔慢慢注入胚胎!还原子宫!进行缝合"!#$#$!妊娠诊断!在移植后$%!)(天用超声波诊断仪进行妊娠诊断!计算怀孕率""!移植结果"#!!腹腔镜与手术法移植效果比较"#!#!!两种不同移植方法对受体怀孕率的影响!由表!可知!腹腔镜法移植怀孕率为)(&!5!手术法移植怀孕率为%.&)5!前者略高于后者!但通过&检验!两种方法进行移植对受体怀孕率并无明显差异$"$(&(%%""#!#"!两种不同方法对移植速度的影响!由表!可知!用腹腔镜法移植平均每只受体可比手术法移植缩短#分钟!这样就明显提高了胚胎移植的速度""#!#$!两种方法对受体利用率的比较!连续用每种方法做#次!以大网膜与腹膜严重粘连或子宫角粘连不能顺利从创口取出为淘汰的基准"由表"可知!在重复利用受体做胚胎移植时!淘汰数都呈现增长的趋势!但从淘汰率来看!第二次手术法的%5明显高于腹腔镜法的"&%5&第三次手术法的!)5明显高于腹腔镜法的-5!所以在胚胎移植产业化中!应该大力提倡用腹腔镜法进行受体移植!可以提高对受体的利用率""#"!腹腔镜熟练程度对怀孕率比较!由表#可以看出!外国专家使用腹腔镜相当熟练!怀孕率可达)"&-5!而本公司手术人表!!两种方法对受胎率!移植速度的影响实验时间方法移植受体怀孕数怀孕率$5%方法移植速度$分#只%"((#年!月手术法#$""(!%.&.腹腔镜法"(!!"!)(&""((#年"月手术法")!!%%%-&$腹腔镜法!")’’)!&!"((#年$月手术法"()!!.%’&"腹腔镜法!#$’-%-&!合!!计手术法.(-$’$%.&)腹腔镜法$)!"’’)(&!手术法)!.腹腔镜法#!%时间差#员对腹腔镜由于不太熟练!怀孕率仅为%%&.5!说明熟练利用腹脱镜会大大提高胚胎移植的怀孕率"表#!使用腹腔镜的熟练程度对怀孕率的比较移植人员移植数怀孕数怀孕数$5%外国专家$熟练%!"$’.)"&-一般手术人员$不熟练%’’$#%%&.%!小结%#!!应用腹腔镜技术进行移植可以加快胚胎移植速度!大大地减少劳动强度!对胚胎移植产业化的发展能起到很大的作用"%#"!应用腹腔镜技术进行移植可以减轻受体的创伤面!黄体不好的受体!发育不久还可以进行移植!以提高受体的利用率"%#$!熟练应用腹腔镜技术不仅可以用在胚胎移植方面!也可以应用在人工授精方面!可以大大地提高受胎率"%#%!随着对腹腔镜技术的熟练掌握!羊的受胎率与手术移植的受胎率没有明显差异"所以在以后的胚胎移植中!我们要大力提倡"表"!两种方法对受体利用的比较方法第一次移植受体怀孕数剩余数第二次淘汰数淘汰率$5%怀孕数剩余数第三次淘汰数淘汰率$5%怀孕数手术法#$""(!!$!’%’!)#!(!)"!腹腔镜法"(!!"!.(""&%$$###-!#青南地区藏羊血清淀粉酶同工酶多态性的研究拉环!!张才骏"$!&青海省大通种牛场!.!(!("&"&青海大学%!!收稿日期""(()"(!"!(作者简介"拉环!从事畜牧生产管理工作"文章编号"!((’"-’")$"(()%(#"((#!"("#中图分类号"!.")"!$!!材料与方法!#!!试验动物!青海省青南地区自然放牧的藏羊".)只!其中果洛州藏羊!.)只$其中达日县-"只!玛多县-$只%!玉树州藏羊!((只$其中治多县%(只!玉树县%(只%!试验藏羊营养中上等’健康!终年放牧饲养"放牧地为海拔#.((!$$((D 的高山牧场"!#"!样品采集!从试验藏羊颈静脉采取血液%D <!分离血清!冰冻保存备用"!#$!电泳与判型!采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法分离,1\同工酶!电泳操作参考胡能书等介绍的法进行"孵育!#第")卷第#期!!!!!!!!!!!!!!!!经验交流’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’’液用M N%&(!(&!%D D7<"S的醋酸"醋酸钠缓冲液#每个样本重复电泳"次#参考/01203等的图谱判定,1\表型#!#%!数据分析!按,1\"同工酶受一对等位基因,1\",和,1\"(控制!,1\",对,1\"(呈显性的假设计算基因频率$表型频率间的差异用!"检验统计分析#"!结果"#!!同工酶酶谱!青南地区藏羊的,1\按泳动速度!从阳极到阴极依次有,1\!%,1\"和,1\#三种同工酶#,1\!同工酶的泳动速度最快!全部呈现一条区带!在有钙离子和没有钙离子的缓冲液中孵育都显现酶活性#,1\"同工酶存在多态性!其泳动速度居中!在没有钙离子的缓冲液中孵育!不显现酶活性!在有钙离子的缓冲液中孵育时部分绵羊呈现酶活性#据此可以区分显现酶活性的,1\",和不显现酶活性的,1\"(两种表型#,1\#位于电泳起始部!酶活性区带有宽窄和亮暗之分!但不能精确地区分出电泳表型#"#"!,1\"同工酶的多态性!青南地区藏羊,1\"同工酶的表型分布%基因频率和基因杂合度见表!#表!!青南地区藏羊,1\"同工酶的多态性特征采样地点!表型分析,1\",,1\"(基因频率,1\",,1\"(基因杂合度玉树州!(("#&"#&((’’’&’’&((’(&!""%(&.’’%(&"!%(果洛州!.)$!&""&($’!$%&’’&-)’(&!!’!(&.."-(&"().合计".))$&""&#.’"""&’’&)"’(&!!-((&..!((&"(-’!!注(括号内字为百分率#"#$!,1\"同工酶表型分布的地区差异!玉树州与果洛州藏羊,1\"同工酶的表型分布十分相似!经!"检验没有显著差异&!"G(&(#$#$"$(&(%’#$!讨论$#!!绵羊的,1\同工酶!/:O E?E:8&!+’*’对美利奴等%个品种的绵羊进行了研究!发现有+种电泳表型#以后!/01203及其同事&!+*$!!+*(’研究证实绵羊,1\有,1\!%,1\"和,1\$三种同工酶#国内尹镇华等&!++$’对引入湖南省的新疆细毛羊等$个品种绵羊进行了研究!提出绵羊,1\受’个等位基因&,1\!!,1\’’控制!存在!"种基因型的假设#本实验在青南地区藏羊中的研究结果证实该地区藏羊也存在,1\!%,1\"和,1\$三种同工酶!支持/01203及其同事&!+*$!!+*(’关于绵羊,1\存在三个基因座的假设!但笔者认为,1\"基因座不是单态而存在多态性!即存在显现酶活性的,1\",和不显现酶活性的,1\",两种表型#$#"!绵羊,1\!同工酶与,1\"同工酶的区别!结果与*:a V P O3:"N p8?:8等&!-’’’在牛中的研究结果相同!即在有钙离子的缓冲液中孵育时!,1\!与,1\"同工酶都显现酶活性!而在没有钙离子的缓冲液中孵育时!只有,1\!同工酶显现酶活性#由此提示!在研究绵羊,1\同工酶酶谱及其多态性时!可以用添加钙离子的方法将,1\!与,1\"同工酶区分开!既不会将,1\!与,1\"同工酶混在一起!又便于分型和遗传分析#$#$!青南地区藏羊血清淀粉酶同工酶多态性的特征!由本研究结果可见!青南地区藏羊与其他品种绵羊一样!具有,1\!% ,1\"和,1\#三种同工酶!其中,1\"同工酶存在多态性$ ,1\"同工酶有显现酶活性的,1\",和不显现酶活性的,1\"(两种表型!以,1\"(为优势表型&’’&)"5’$,1\"同工酶的表型分布没有地区差异#与环湖地区的藏羊&,1\" ,!"%&)!5$,1\"(!’$&#-5’相比较!两者,1\"同工酶的表型频率相似&"$(&(%’!表明藏羊,1\"同工酶多态性的特征比较稳定!不受地区%海拔高度的影响#调查!!! !!!研究山东肉牛杂交改良现状调查张善芝&山东畜牧兽医职业学院!潍坊!")!()!’!!!-.)年以来!山东养牛数量发展很快!存栏量由"-"&%万头发展到目前的!!)’万头!增长#’)5!列居全国第二位$牛出栏数达到$.(万头!出栏率#’&.5!牛肉产量由!-.)年的%&"万?增加到!--.年的.$万?!增长!%倍!居全国第一!牛肉产量占全国肉类总产量的!"5#山东已经成为牛肉%加工牛肉%供港活牛等产品的出口大省#!!收稿日期!"((%"!""#(作者简介!张善芝&!-)%"’!副教授#主要从事养牛生产的教学与畜牧技术推广工作#文章编号!!((’"-’")&"(()’(#"((#""(#"中图分类号!!."##!--(年以来!山东省肉牛杂交改良已经形成第二个高峰!肉牛杂交改良取得了较大成效#现将肉牛杂交改良现状调查报告如下#!!全省基本形成一套人工授精服务网络山东省以省畜禽良种推广中心%高密县肉牛中心%禹城家畜改良站等几处大种公牛站为依托!引进国外良种肉用公牛!((多头!形成全省绝大多数县推广人工授精的良好局面#山东省畜禽良种推广中心是全省最大的肉牛供种处!年生产冻精细管由!--)年的$&.#万份发展到了"(($年的"%(万份!发展速度很快#种公牛中心有较好的技术和设备条件!负责生产合格的冻"#中国草食动物!!!!!!!!!!!!!!!!!!"(()年。
AMS（淀粉酶）—搜狗百科
AMS（淀粉酶）—搜狗百科测定血清淀粉酶同工酶时，发现有两个主要的同工酶区带及数个次要区带。
两个主要区带中的一个和胰腺的提纯物或分泌物电泳的位置相同，因此命名为P-同工酶；另一个和唾液腺提纯物或唾液电泳在同一位置，因此命名为S-同工酶。
测定淀粉酶同工酶有助于对胰腺疾病的鉴别诊断。
参考值：限定性底物法：血清淀粉酶 220U／L（37℃）尿淀粉酶 1200U／L（37℃）P同工酶血清115U／L尿800U／L新生儿血清淀粉酶约为成年人的18%，主要为S-型，到5岁时达成人水平；在一岁内测不出血清P-型淀粉酶，以后缓慢上升，在10～15岁时达成人水平。
血清淀粉酶和尿淀粉酶测定是胰腺疾病最常用的实验医|学教育网搜集整理室诊断方法，当罹患胰腺疾病，或有胰腺外分泌功能障碍时都可引起其活性升高或降低，有助于胰腺疾病的诊断。
尿淀粉酶水平波动较大，所以用血清淀粉酶检测为好，或两者同时测定。
淀粉酶活性变化亦可见于某些非胰腺疾患，因此在必要时测定淀粉酶同工酶具有其鉴别诊断意义。
1.血清淀粉酶升高：最多见于急性胰腺炎，是急性胰腺炎的重要诊断指标之一，在发病后2～12h活性开始升高，12～72h达峰值，3～4天后恢复正常。
淀粉酶活性升高的程度虽然并不一定和胰腺损伤程度相关，但其升高的程度越大，患急性胰腺炎的可能性也越大，因此虽然目前还都用淀粉酶作为急性胰腺炎诊断的首选指标，但其特异性和灵敏度都还不够高。
当怀疑急性胰腺炎时，应对患者血清和尿淀粉酶活性连续作动态观察，还可结合临床情况及其他试验，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定共同分析，作出诊断。
淀粉酶测定对监测急性胰腺炎的并发症如胰腺假性囊肿，胰腺脓肿亦有价值，此种时候血淀粉酶活性多持续升高。
重症急性胰腺炎时可以引起胸腔积液或／和腹腔积液，积液中的淀粉酶活性甚至可高于血清淀粉酶活性100倍以上。
急性胰腺炎的诊断有一定的困难，因为其他急腹症也可以引起淀粉酶活性升高。
所以当怀疑急胰腺炎时，除应连续监测淀粉酶外，还应结合临床情况及其他试验，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定结果共同分析，作出诊断。
淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌实验实验报告
(此文档为word格式，下载后您可任意编辑修改！) 实验报告：淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌（amp+）中的表达目录相关背景目前研究情况简略研究步骤相关实验详细介绍实验结果与讨论参考文献1、相关背景1、1淀粉酶1、1、1 淀粉酶的发现和分类淀粉酶是较早发现的酶类之一，早在1833年Payen和Persoz已首次从麦芽的水抽提物中用酒精沉淀分离到淀粉酶。
1894年高峰让吉从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取出作为消化剂的酶，即高峰淀粉酶。
1919年法国Boidin和Effront首次用枯草杆菌生产淀粉酶。
淀粉酶(amylase，AMY,AMS)是作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α－1，4-葡聚糖，水解α－1，4-糖苷键的酶类的总称。
现在淀粉酶大致可分为四大类。
第一类α-淀粉酶，广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物。
微生物的酶几乎都是分泌性的。
此酶以钙离子为必需因子并作为稳定因子，既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地切断α－1，4-链。
因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以麦芽糖为主，此外，还有麦芽三糖及少量葡萄糖。
另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精。
一般分解限度以葡萄糖为准是35-50％，但在细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70％分解限度的（最终游离出葡萄糖）。
按照使用条件α-淀粉酶可以分为中温型，高温型，耐酸耐碱型。
按产生菌不同又可分为细菌、真菌、植物和动物淀粉酶。
第二类β-淀粉酶(EC3.2.1.2)从底物非还原性末端顺次水解每隔一个α-1,4糖苷键，切下的是麦芽糖单位。
β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α－1，4-葡聚糖链。
主要见于高等植物中（大麦、小麦、甘薯、大豆等），但也有报告在细菌、牛乳、霉菌中存在。
对于象直链淀粉那样没有分支的底物能完全分解得到麦芽糖和少量的葡萄糖。
淀粉酶及其同工酶
三. 实验材料及设备
1、材料 淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液） 淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液） 2、仪器 分光光度计 恒温水浴 沸水浴 3、器材
刻度试管： mL× 刻度试管： 25 mL×17 试管 移 液 管： 1 mL×3（取稀释后的酶液） mL× 取稀释后的酶液） mL× 烧 杯： 250 mL×1 滴 管： 2 洗 耳 球： 2 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒： 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1 专取NaOH 移 液 器：专取NaOH 注 射 器：专取蛋白样品
（1） 当用酶偶联法测定时，在偶联反应中存在 ） 当用酶偶联法测定时， 几个时期：预孵育期、延滞期、恒态期、 几个时期：预孵育期、延滞期、恒态期、非恒 态期。 态期。 （2）延滞期是酶偶联反应与一般酶反应的一个 ） 重要区别。从酶反应开始至稳态期间， 重要区别。从酶反应开始至稳态期间，指示酶 反应较慢且不稳定，称为延滞期。 反应较慢且不稳定，称为延滞期。在这期间指 示酶反应速度不能代表测定酶量多少。 示酶反应速度不能代表测定酶量多少。 （3）设计和选择酶偶联测定方法时，延滞期越 ）设计和选择酶偶联测定方法时， 短越好，测定时间要避开此期。 短越好，测定时间要避开此期。
盐析液 (2)
脱盐液 (3)
0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 5min时刻 5min时刻 5min时刻 B1 B1’ F1 F1’ B2 B2’ F2 F2’ B3 B3’ F3 F3’ B1’ F1’ B2’ F2’ B3’ F3’ 0.3 0.2 各 1 ml 各 1 ml 摇匀， 摇匀， 37 ℃ 水浴 2 min 1 1 1 1 1 各 1 ml，迅速摇匀 ml， 37 ℃ 水浴 5 min (准确计时) (准确计时 准确计时) 1 1 1 1 1 1 0.5