双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明
总蛋白试剂盒(双缩脲比色法)标准操作程序.
总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的总蛋白含量。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总蛋白试剂盒采用的是双缩脲比色法。
5.原理蛋白质中的肽键在碱性条件下，与铜离子反应生成紫红色络合物，并且引起550nm处吸光度的上升。
由于反应所产生的化合物在波长550nm处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm处吸光度的变化值与样本中总蛋白的含量成正比。
−C−→++2u紫红色络合物蛋白质中的肽键碱性条件−−6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：测定：酒石酸钾钠≥5g/L试剂：硫酸铜≥2g/L、碘化钾≥1g/L、NaOH≥30g/L校准品：白蛋白（含量见瓶签）7.3试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。
校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求shouyi
总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）
适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。
1.1产品规格
4×100mL；6×60mL；8×50mL；2×100mL
1.2产品组成成分
NaOH 600mol/L，硫酸铜12 mmol/L，酒石酸钾钠32 mmol/L。
2.1 外观
试剂为淡蓝色透明溶液。
2.2 装量
液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度
A≤0.15（光径1.0cm，波长540nm）。
2.4分析灵敏度
测定57.2g/L被测物时，吸光度变化在0.1631～0.2075范围内。
2.5 准确度
相对偏差应不超过±5%。
2.6 精密度
2.6.1 重复性
变异系数CV＜3%。
2.6.2 批间差
批间相对极差＜3%。
2.7 线性区间
a）（0，100]g/L。
在规定的线性区间内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）应不低于0.990。
b）（0，30]g/L区间内，线性绝对偏差应不超过±3g/L；（30，100]g/L 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。
2.8稳定性
原装试剂2～8℃避光保存，有效期18个月，有效期满后两个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
蛋白质检测方法双缩脲
蛋白质检测方法双缩脲
双缩脲法（二硫苏糖酸二缩脲法、2,2'-二(硫苯甲醛)-4,4'-二缩脲化合物法）是一种常用的蛋白质定量方法。
该方法是利用蛋白质和双缩脲在碱性条件下反应生成紫色产物，通过测量产物的吸光度可以确定蛋白质的含量。
具体操作步骤如下：
1. 将待测样品（蛋白质溶液）和双缩脲试剂按一定比例混合，并在碱性条件下孵育反应一定时间（一般为10-30分钟）。
2. 反应完成后，用酸性溶液停止反应，并将溶液转移到透明的96孔板中。
3. 使用光谱仪或分光光度计测量透明板中每个孔的吸光度（可以在450 nm波长下测量）。
4. 将吸光度数据与标准曲线进行比较，即可确定样品中蛋白质的含量。
需要注意的是，双缩脲法是一种相对定量方法，其结果仅供参考。
如果需要精确测量蛋白质的含量，建议使用比较准确的定量方法，如BCA法或Bradford法等。
总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求ruizhengshanda
总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。
1.1产品型号/规格及其划分说明1.2主要组成成分2.1外观2.1.1 外观（液体单试剂）.R应为蓝色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.1.2 外观（液体双试剂）a）R1应为无色溶液，无混浊，无未溶解物；b）R2应为蓝色溶液，无混浊，无未溶解物；c）校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；d）试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量R和校准液的净含量不少于标示值。
R1、R2和校准液的净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在主波长540nm, 副波长700nm处（光径1cm），试剂空白吸光度A≤0.20。
2.4分析灵敏度测量1g/L的被测物时，吸光度变化△A≥0.0010。
2.5 线性区间在[10，110]g/L线性范围内，线性相关系数r≥0.990。
在[10,20]g/L范围内，绝对偏差不超过±2g/L；在(20,110]g/L范围内，相对偏差不超过±10%。
2.6 精密度2.6.1 重复性重复测定(45±5)g/L、(70±10)g/L和 (100±10)g/L的样品，变异系数CV%≤5%。
2.6.2 批间差相对极差≤5%。
2.7 准确度测定标准物质BW3627-2，测定值与靶值的相对偏差不超过±10%。
2.8 稳定性原包装的试剂盒在（2～8）℃避光保存，有效期为18个月。
试剂盒在规定的储存条件下保存至有效期满后，检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
产品使用说明书BCA 蛋白定量试剂盒试剂盒简介以下货号试剂盒可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB380）。
BCA Protein Assay Kit ：500 / 2500 rxn 货号71285-3BCA 蛋白定量方法是基于双缩脲反应，即在碱性溶液中蛋白将Cu 2+ 还原成Cu 1+，而根据检测到的单价Cu 离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。
Bicinchoninic acid 是一种显色剂，可以螯合被还原的铜离子，产生一种在562nm 有强吸收的紫色复合物。
Novagen 的BCA 试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000µg/ml 范围内的蛋白的浓度，根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。
试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反应（50µl 蛋白样品加上1ml 反应试剂）或2,500次微型测定（25µl 蛋白样品加上200µl 反应试剂，可以在96孔板中进行高通量定量）。
试剂盒中提供的BSA （牛血清白蛋白，2mg/ml ）为用户制作标准浓度曲线提供了便利。
Novagen 的BCA 试剂盒准确度高，兼容性好，能与各种化学试剂和表面活性剂兼容，可以方便地配合默克Novagen 的BugBuster ®，PopCulture ®，CytoBuster™，Reportasol™和Insect PopCulture 抽提蛋白的细胞裂解试剂一起使用。
有些化学成分，例如螯合剂，强酸、强碱、还原剂等，可能会干扰BCA 法采用的还原及螯合定量过程，详细情况请看说明书后附列表。
试剂盒提供的组分500ml BCA 反应液（0.1M NaOH 缓冲的bicinchoninic acid ，碳酸钠，酒石酸钠，碳酸氢钠，pH11.25） 15ml 4% 硫酸铜3×1ml BSA 标准品（2mg/ml ）储存室温存放。
双缩脲比色法测定食品中蛋白质
双缩脲比色法测定食品中蛋白质食品中蛋白质含量的测定，国标中用凯氏定氮法[1]，该方法结果准确、可靠。
缺点是操作繁琐、费时。
本文利用蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中能与铜盐生成紫色络合物，其色泽深度与蛋白质含量成正比的特性，用于部分食品中蛋白质含量的测定，取得较满意的效果。
材料与方法1．仪器：722型分光光度计。
2．试剂：2．1．酒石酸钾钠溶液：取10mol.L-1氢氧化钾溶液10ml和25%酒石酸钾钠溶液20ml,注入930ml水中,用力振摇,然在不断搅拌下缓慢加入4%硫酸铜(CuSO4.5H2O)溶液40ml,防止出现氢氧化铜沉淀。
2．2．四氯化碳，分析纯。
3．操作步骤：3．1．标准曲线的绘制：准确称取混合均匀的面粉1.00g,用凯氏法测定蛋白质含量,测定3次,取其平均值为10.80%。
取上述样品0.00; 0.38; 0.52; 0.66; 0.79; 0.93g于50ml具塞比色管中,各加入1ml四氯化碳,用酒石酸钾钠溶液定容至50ml,剧烈振摇10min,放置1小时后过滤,取滤液于1cm比色皿,560nm处测各管光密度,根据测得的光密度绘制标准曲线。
3．2．样品的测定：称取混合均匀的样品，使蛋白质含量在40~110mg之间，置于50ml具塞比色管中，加入四氯化碳1ml，以下按标准曲线的绘制操作。
结果与讨论1．双缩脲比色法测定蛋白质标准曲线结果见表1。
表1 双缩脲法测定蛋白质标准曲线取样量(g) 0.00 0.38 0.52 0.66 0.80 0.94蛋白质量(mg) 0.00 41.04 56.16 71.28 86.40 101.52光密度0.058 0.259 0.324 0.398 0.468 0.525 2.标准曲线及线性范围:按上述实验方法测定蛋白质含量时,其线性范围在40~110mg内,相关系数r=0.9992,标准曲线的回归方程:y=0.004471x+0.01811。
3.方法的精密度：对1份面粉和1份肉松样品的蛋白质含量用本法各测定6次，其结果见表2。
双缩脲试剂检验蛋白质的步骤
双缩脲试剂检验蛋白质的步骤朋友们，今天咱们来聊聊那个让实验室里的人都兴奋不已的话题——如何用最简单粗暴的方法检验出那些隐藏在试管里的小精灵们。
没错，就是蛋白质！说到这个，我可是有一套自己的小秘诀哦！
首先得准备好试剂啊，这可是检验的基石。
双缩脲试剂嘛，就像一对默契的侦探搭档，一碰就发出那种“滴答滴答”的声音，告诉你蛋白质的秘密已经揭开了。
这玩意儿可神奇了，它里面藏着两种神奇的成分：一种叫硫酸铜，另一种叫氢氧化钠。
它们俩一拍即合，就像是化学反应中的老情人，一见钟情。
接下来就是操作啦。
先把试剂盒打开，像调戏心上人一样，轻轻地把试剂盒盖打开一条缝。
然后呢，就像侦探发现线索一样，小心翼翼地把一滴试剂滴进试管里。
这时候，你就能听到那“滴答滴答”的声音，就像是在说：“看，这就是你的小宝贝！”
接下来是最关键的一步——摇一摇。
这一步可是考验你观察力的时候到了。
你得轻轻摇晃试管，让试剂和蛋白质充分接触。
这时候，如果你能感觉到试管里传来一阵“咕
嘟咕嘟”的声音，那就说明蛋白质已经被成功捕捉啦！
最后当然是比一比颜色啦。
拿出你的尺子或者手机，看看试管里的颜色变化。
如果颜色变得深了，那就说明蛋白质被成功检测出来了。
这时候，你可以得意地笑出声，因为你知道，你成功地发现了那些隐藏在试管里的小精灵们！
怎么样，是不是觉得这个过程既有趣又简单？检验蛋白质的过程就像是一场侦探游戏，需要我们细心观察、耐心等待，才能揭开真相。
所以，下次当你看到那些神秘的小精灵们时，不妨也来试试用双缩脲试剂检验一下，说不定你也能找到它们的踪迹哦！。
总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求mairui
2性能指标
2.1外观
试剂1（R1）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂2（R2）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；包装标签文字符号应完整、清晰。
2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37 ℃ 1 ℃，546 nm 波长条件下，吸光度应小于0.200。
2.4分析灵敏度
当样本浓度为70 g/L 时，吸光度变化应不小于0.150。
2.5线性范围
试剂盒在（2～120）g/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.995；
b)当样本浓度不小于30 g/L 时，线性相对偏差应不超过±6.0%；当样本浓度小于30 g/L 时，线性绝对偏差应不超过±3.6g/L。
2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 2.0％。
2.6.2批间差
相对极差：R 应不大于 4.5％。
2.7准确度
2.7.1国家标准品测试
测定国家标准品，测定结果与靶值的相对偏差应不超过±5.0% 。
2.7.2质控品测试
测定质控品，测定结果应在靶值范围内。
2.8分析特异性
血红蛋白浓度在250 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在30 mg/dL 内、内源性酯浓度在1200 mg/dL 内、结合胆红素在21 mg/dL 内、非结合胆红素浓度均在21 mg/dL 内、葡聚糖（分子量：7w 或4w）浓度在3000 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10 .0%以内。
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双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明
货号:PC0040
产品简介:
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度强碱性溶液中，双缩脲与CuSO
4
成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
该方法测定范围为1~10mg蛋白质，适用于蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
标准品：液体×1瓶，5mg/mL，4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取:
1.液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取
约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
（动物样品常常需要稀释）
3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比
例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤:
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后
室温静置15min，于540nm比色，记为A空白管。
3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后
室温静置15min，于540nm比色，记为A标准管。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后
室温静置15min，于540nm比色，记为A测定管。
样品中蛋白质浓度计算：
C待测（mg/mL）=C标准管×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
=5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
注意事项：
1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml
须做相应稀释。
因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。
2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。
该法受硫酸
铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。