枸杞多糖的提取分离纯化
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究石油化工与工艺 05160111 倪宜海指导教师：史高峰教授摘要本文主要对枸杞黄酮类化合物的微波辐射辅助提取取枸杞粉末和提取最佳工艺进行研究。
取得的主要研究成果如下：加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置一定时间（40-100min)，温度70-100摄氏度之间，功率（300-600w）。
取出过滤，取其溶液放置旋转蒸发仪中进行蒸馏。
枸杞渣滓放回搅拌器中进行二次提取，提出多糖混合液醇沉冷冻干燥后，为褐色絮状粉末固体。
确定最佳工艺：提取温度90 ℃；料水比1∶10(W∶V)，提取时间2h，功率600。
得出多糖再进行Sevage法脱蛋白，冷冻干燥后，为乳白色絮状粉末固体粗多糖。
在最佳条件下枸杞粗多糖提取率可达12.23%。
枸杞粗蛋白含量6.98%关键词：微波搅拌，冷冻干燥，Sevage法脱蛋白，分离纯化AbstractIn this paper, the main flavonoids of Lycium barbarum's the microwave-assisted extraction of radiation from wolfberry extract powder and the best technology for research. The main research results obtained are as follows: by adding some liquid ratio (1:8,1:10,1:12) aqueous solution into the microwave stirrer placed a period of time (40-100min), the temperature between 70-100 degrees Celsius , power (300-600w). Remove the filter, select the solution placed in Rotary Evaporator distillation. Barbarum waste back into the blender in the second extract, the polysaccharide mixture of freeze-drying alcohol, in order to brown flocculent solid powder. To determine the optimum process: extraction temperature 90 ℃; feed water ratio 1:10 (W: V), extraction time 2h, Power 600. Polysaccharide derived from another protein Sevage law, after freeze-drying for white flocculent powder Polysaccharide solid. Under the best conditions in barbarum Polysaccharide extraction rate of 12.23%. Barbarum 6.98% crude protein content.KEY WORDS: microwave mixing, freeze-drying, Sevage method of removing protein, purification 1.前言枸杞中的化学成分比较复杂，主要包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪、脂肪酸、菇类、甾醇类、维生素、色素类、生物碱类。
枸杞多糖的不同提取分离方法比较
枸杞多糖的不同提取分离方法比较2.1 枸杞多糖的提取方法2.1.1 溶剂提取法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，所以可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
研究证明了碱性条件下会通过破坏植物细胞壁及细胞膜，从而增加了细胞内多糖的溶出度，以此枸杞多糖的提取量就提高了。
但是酸碱提取法并不常使用，原因是其法会破坏糖苷键，使多糖的构型发生改变等，并且提取过程提取的物质在酸碱条件下，会发生特殊反应，产生干扰最终结果的副反应产物，提取后液体需要中和PH，其后期处理较为繁琐[3]，所以在溶剂提取法中最适宜和应用最广泛的是热水提取法，热水有成本低、来源广等优势，所以作为最优的溶媒介质。
下文的溶剂提取法主要探究热水提取法的有关事项。
热水提取法因为其简单的操作和实验设备简易的优点，是国内外提取多糖最常用的方法，但提取效率和纯度偏低。
在这个方法中，研究表明提取温度是影响提取率的最大因素，其中影响程度大小排列为提取温度>提取时间>提取次数>料液比[4]，根据查阅资料整理如下探究不同条件下热水回流法对提取率的影响，从而发现热水回流法提取枸杞多糖最适条件为下文序号1的条件。
详见表2-1。
表2-1 热水回流法提取枸杞中多糖的提取参数对比分分析图序号提取方法优化方法提取参数提取率/％10.33[5]1热水回流法单因素，正交温度为90℃，时间为2.5h，料液比为1：25，提取3次5.4[6]2热水回流法正交实验PH为1.5，温度为80℃，提取1.5h，提取2次，料液比为1：605.53[7]3热水回流法单因素，正交温度100℃，浸提4次，时间5h，料液比1：404热水回流法提取两次，每次3h 5.17[8]3.04[9]5热水回流法提取温度为80℃，提取时间为2h 6热水回流法单因素，正交提取温度为90℃，2.96[10]提取时间为4h，料液比为1：10，提取3次2.1.2 酶解提取法酶解法提取是在溶剂提取法之上加入合适的酶，利用酶的高度专一和高效的特点，分解或降解组成细胞壁的纤维素，果胶，蛋白质等物质，破坏枸杞细胞的细胞壁，这样，细胞里的多糖就会被释放，这样多糖提取量也就得到了增加，提取率也会升高。
枸杞多糖的提取及其组成的气相色谱分析
枸杞多糖的提取及其组成的气相色谱
分析
枸杞多糖是枸杞中的一种多糖类物质，具有多种生物活性，如抗氧化、促进免疫、抗疲劳等作用。
它的提取主要采用溶剂萃取法，通常使用乙醇或乙醚作为溶剂。
步骤如下：
1.将枸杞子放入搅拌机内，加入适量的溶剂，打成浆状。
2.将浆状物置于蒸馏器内，加热蒸馏，使溶剂与枸杞多糖分离。
3.过滤掉残留的枸杞粉，再将溶剂进行浓缩。
4.在浓缩后的溶剂中加入适量的水，使枸杞多糖沉淀。
5.用纸巾过滤掉水，并将枸杞多糖置于干燥箱内干燥，即可得到枸杞多糖。
枸杞多糖的组成可以通过气相色谱分析来确定。
气相色谱分析是一种常用的化学分析技术，可以用来研究物质中不同成分的组成。
在进行气相色谱分析时，需要使用一种叫做色谱柱的装置，将样品加入其中，并加热蒸发。
样品中的不同成分会在色谱柱中分离，并通过检测器检测得到光谱图，从而确定样品中各成成分。
枸杞中多糖成分的分离和提取技术
枸杞的功效十分强大，《神农本草经》中记载，枸杞能补气益血，清肝明目。
在1981—2010年，一系列与枸杞和枸杞多糖相关的中成药和制剂也是层出不穷，据统计已经达到876种。
对于天然产物的分析检测而言，得率和纯度至关重要，因此在多糖成分的分离和提取技术研究中必须在优化条件的同时，确保多糖的生物活性不会因提取工艺受到影响。
现阶段，碱溶液、酸溶液、水溶液都常被用于多糖的提取。
其中，热水凭借着易于获取、溶解度强等显著优势成为了提取多糖时首选的溶剂。
然而，多糖中含有醛基等官能团，所以碱性溶液也常被用于多糖的提取。
随着科学技术的不断进步，超声波技术、超临界萃取等技术也被广泛用于枸杞中多糖成分的分离[1]。
1 枸杞多糖的结构和理化性质随着科技的进步，人们发现枸杞中的生物活性成分较为复杂，既包括氨基酸、生物碱、脂肪酸、色素类物质，也含有离子盐等无机元素。
其中，枸杞多糖因为抗癌、抗氧化、免疫调节等作用受到广泛关注。
然而，枸杞多糖多与蛋白质相结合，这给枸杞中多糖成分的提取和分离带来了一定的难度。
研究表明，枸杞多糖成分较为复杂，多由葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖等己碳糖组成侧链（简单结构见图1），并与由氨基酸组成的多肽链紧密结合。
图1 简单多糖结构示意图2 多糖的提取分离方法2.1 多糖的提取方法枸杞中的多糖以不同形式存在，对于每种形式的多糖都需要采用针对性的预处理方法。
现阶段，在天然产物分离与提纯中常用的分析检测方法包括脱色处理、粉碎成末、清洗脱脂等。
其中，粉碎是为了促进枸杞中物质的溶解，最大限度的获取枸杞中的有效物质。
脱色处理主要是为了除去枸杞中的显色物质，避免对后续处理工艺的干扰。
脱脂是避免多余的脂质对后续结果的影响。
2.1.1 溶剂浸提法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，故而可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
其中，热水因成本低、来源广等优势常用作溶媒介质。
虽然多糖在酸、碱性溶液中也存在一定的溶解度，但是酸碱会影响多糖成分的活性，例如，溶解糖苷键，破坏多糖的三维立体结构等，故而此类方法常被用于对生物活性要求不高的成分的提取。
枸杞多糖的脱色纯化
精品整理
枸杞多糖的脱色纯化
枸杞多糖常含大量的糖蛋白、色素、溶剂残留等杂质，故需要对其进行除蛋白和脱色，然后再进行初纯化处理。
脱色方法
多糖脱色的方法主要有双氧水脱色、离子交换脱色、吸附脱色(纤维素、活性炭等)。
大量研究表明，双氧水脱色效果不错，但会引起糖分子氧化变质；活性炭脱色不破坏多糖结构，但会造成多糖大量损失；DATE-纤维素是目前常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅可达到脱色目的，而且能够分离多糖。
许程剑等采用单因素试验确定大孔树脂型号，糖溶液脱色试验中，AB-8大孔树脂的脱色效果好；温度是影响多糖溶液脱色的主要因素，其次为料液比和脱色时间；脱色条件为温度60℃，料液比1∶7，脱色时间3h。
纯化方法
采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，纯化可将多糖混合物分离为单一多糖。
枸杞多糖的纯化方法有化学试剂法、色谱层析法、透析和膜分离法等。
目前，国内学者对于枸杞多糖的纯化已做了大量的研究，均取得了较好的效果。
采用DEAE纤维素分离和葡聚糖凝胶柱色谱纯化枸杞多糖。
采用D101大孔树脂和DEAE-52阴离子交换柱对枸杞叶粗多糖进行纯化，纯化后使多糖含量提升为92.5%。
采用超滤膜法分离枸杞多糖的水解物，得到4个分子量段的水解物，然后再采用DEAE-52阴离子柱对Mw3KDa部分水解物进行了纯化。
黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究
黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究黑果枸杞是一种传统的药用和保健植物，被广泛应用于中药制剂、健康食品和保健品等领域。
它富含多种成分，其中黑果枸杞多糖是其重要的活性成分之一。
本文将重点探讨黑果枸杞多糖的分离纯化方法以及其抗氧化活性。
首先，本研究选取优质的黑果枸杞作为研究对象。
经过采摘、清洗、晾干等处理步骤后，将黑果枸杞粉碎并进行提取。
采用常规的水煮法提取方法，将黑果枸杞与适量的水混合煮沸，然后过滤得到提取液。
接下来，采用酒精沉淀法将提取液中的多糖沉淀得到多糖样品。
随后，使用超滤和凝胶渗透色谱等技术对多糖样品进行分离纯化。
首先，采用超滤技术将大分子的杂质去除，得到较为纯净的多糖样品。
然后，将多糖样品经过经典的凝胶渗透色谱技术进行进一步分离。
通过调节填料和溶剂体系，可以分离出多种不同大小和结构的多糖组分。
分离纯化得到黑果枸杞多糖后，使用一系列的物化性质和化学分析方法对其进行表征。
例如，使用紫外光谱和红外光谱技术分析黑果枸杞多糖的吸收峰和波谱特征，以确定其结构和功能基团。
同时，还可以采用高效液相色谱技术对多糖的组成单糖和链长进行分析。
这些分析方法可以为黑果枸杞多糖的结构特性提供重要的信息。
最后，对黑果枸杞多糖的抗氧化活性进行评估。
采用自由基清除试验和金属离子螯合试验等方法，测定黑果枸杞多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基以及金属离子的清除能力。
实验结果表明，黑果枸杞多糖具有显著的抗氧化活性，具有一定的自由基清除和金属离子螯合能力。
这种抗氧化活性可能与多糖中的多糖结构和官能团有关。
综上所述，本研究通过合理的分离纯化方法，成功得到黑果枸杞多糖样品，并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。
研究结果表明，黑果枸杞多糖具有良好的抗氧化活性，有望成为一种重要的天然抗氧化剂和保健品原料。
然而，还需要进一步深入研究黑果枸杞多糖的生物活性、药理特性和机制等方面，以更好地利用其在医药和保健品领域的潜力综上所述，本研究成功得到了黑果枸杞多糖样品，并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。
枸杞多糖的提取与含量测定
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实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
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实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
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实验数据记录与处理
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实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖， 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
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实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支，按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液 。
在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡 萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。
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实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品，溶于50ml 蒸馏水中，制成样品液。 分别吸取0.5ml，1ml 多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却，再加入4ml 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min ，取出后自来水冷却，620nm 比色，其他条件与作标准曲线同 。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
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实验内容
枸杞多糖的提取工艺流程
枸杞多糖的提取工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!枸杞多糖的提取工艺流程详解摘要：枸杞多糖是从枸杞中提取出的一种生物活性物质，具有多种保健功效。
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枸杞多糖的提取、分离纯化及其 构成
枸杞
果实含枸杞多糖，甜菜碱、阿托品、天仙子 胺；另含玉蜀黍黄素、酸浆红素、隐黄质、 东莨菪、胡萝卜素、核黄素、烟酸、维生 素B1、 B2及C． 有增强非特异性免疫作用 、延缓衰老作用 、 抗肝损伤 、降血糖 、补肾功能 、保肝功 能 、抗脂肪肝作用 、对血压的作用 、抗 疲劳作用 、抗肿瘤作用 。
枸杞多糖
枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主 要的活性成分，相对分子质量为68-200， 成为国内外研究热点。其中又以枸杞多糖 的免疫调节和抗肿瘤作用的研究最多。现 已有很多研究表明枸杞多糖具有促进免疫、 抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、 抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作 用。
实验研究过程
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成分分析结果
经高效气相色谱分析得出出峰时间表
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气相色谱图
六种单糖的摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖： 葡萄糖：半乳糖=2.07：2.38：3.11：1.00：1.12： 2.86。
多糖的环境扫描电镜照片
谢谢 再见
枸杞多糖的提取
热水提取法：称取150g干燥滤渣加入3000mL蒸馏水， 90℃热水提取2小时，重复2次，合并离心，收集上清液。 利用旋转蒸发仪浓缩至1/4体积，然后加入4倍体积的 95%乙醇，静置过夜。离心，收集沉淀并重复醇沉一次， 即得水提粗糖。
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Sevage法脱蛋白
Sevage法：正丁醇、氯仿混合溶液（正丁醇：氯仿=1： 4或1：5）和样物提取液混合并且振荡，不需要加热利用 离心机离心，直到离液面交界处无白色混悬，也就是蛋白 质介于提取液与试剂交界处 ，然后分别提取。 分别取一定量上述水提粗多糖，用蒸馏水完全溶解，得多 糖水溶液。采用Sevage法脱蛋白，加入多糖水溶液体积 1/5的Sevage试剂(三氯甲烷：正丁醇=4：1)，震荡 20min后离心，收集上清液，弃去中间变性蛋白和下层三 氯甲烷，重复操作至中间无变性蛋白层出现。将上清液对 流水透析3天，真空冷冻干燥得水提脱蛋白枸杞多糖 WLBP。
材料预处理及提取方法 Sevage法脱蛋白 枸杞多糖的分离 枸杞多糖的纯化 成分分析结果
பைடு நூலகம்
材料预处理
(1)粉碎 将枸杞子洗净晾干，再放入烘箱供至干透(烘箱温 度50℃，避免温度过高使之焦糊)。烘干后取出，冷却至 室温，然后用粉碎机将干燥的枸杞子粉碎，备用。 (2)脱脂 将粉碎的枸杞粉末置于大烧杯中，加入4倍体积 95%的乙醇，60℃水浴加热搅拌脱脂2小时，滤去乙醇， 重复脱脂3次，收集滤渣，晾干，装袋备用。
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枸杞多糖的分离
酸性亚组分的分离 取WLBP4.0g溶于75mL蒸 馏水中，加入50mL十六烷基三甲基溴化铵，过 夜沉淀12h，然后以4000r/min、4℃离心 20min，收集沉淀。沉淀用10%NaCl溶解后， 加入3倍体积95%乙醇，产生沉淀，4000r/min、 4℃离心20min收集沉淀，蒸馏水溶解并透析3天， 冻干得WLBP。
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枸杞多糖的纯化 枸杞多糖的纯化釆用SephadexG-150色 谱柱层析法纯化多糖样品。填料为 SephadexG-150葡聚糖凝胶，层析柱规 格为2.5×50cm，用蒸馏水洗脱。选取冻 干后的WLBP组分40mg溶于5mL蒸馏水中， 上SephadexG-150色谱柱，用蒸馏水洗 脱，自动收集每管3mL。用苯酚-硫酸法检 测多糖含量，合并出峰管，浓缩，冻干， 得纯化多糖WLBP-I、WLBP-II