枸杞多糖提取论文

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第一章综述

1前言

1.1枸杞

1.1.1枸杞的自然属性

枸杞(Lycium barbarum)别名苟起子、甜菜子、地骨子等,是茄科植物枸杞(Lycium chinense Miller)的成熟果实。是我国重要的药用植物资源,是我国受原产地保护的药食两用的药材和传统出口创汇产品。早在2000多年前,人们已经开始了对枸杞的利用。《诗经》记载“陟彼北山,言采其杞”。宋?苏轼《小圃?五咏》赞枸杞曰“根茎与花实,收拾无弃物”。《本草纲目》中记:“久服杞子,坚筋骨,轻身不老,耐寒暑”。《本草汇言》记“枸杞能使气可充,血可补,阳可生,阴可长,火可降,风湿可去,有十全之妙焉”。《保寿堂方》载“春枸杞叶,名天精草;夏采花,名长生草;秋采子,名枸杞子;冬采根,名地骨皮”。根据《郭案驼种树书》记载,大约在1200多年前,我国就开始栽种枸杞了。此外,《神农本草经》、《食疗本草》、《本草纲目》和《本草备要》等古书中都有关于枸杞的记载。

枸杞具有滋补肝肾,益精明目的作用。作为我国常用中药,枸杞被广泛应用于临床,主治肝肾阴亏,头晕目眩,腰膝酸软,消渴遗精,目昏多泪,虚劳咳嗽。枸杞子又作为“药食同源”的植物性平补保健食品,被广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。大量研究表明枸杞中含有多种可被利用的生物活性成分,其中最具有提取利用价值的是枸杞多糖,其次是枸杞色素和枸杞籽油。

枸杞的生长状况

枸杞属约有80个种,多数分布在南、北美洲。以美国的亚利桑娜州和阿根廷形成两个分布中心,南美洲种类最多。欧亚大陆约有10个种。约在17世纪中叶引到法国,后来在欧洲,地中海国家,韩国以及北美洲国家都有栽种。我国有7个种和3个变种,多数分布在西北和华北。目前我国人工栽培的构祀有宁夏枸杞及北方枸杞。枸杞原产我国北方,河北、内蒙古、山西、陕西、甘肃、宁夏、新疆和青海等省都有野生,而中心分布区域在甘肃河西走廊、青海柴达木盆地以及青海至山西的黄河沿岸地带。常生于土层深厚的沟岸、山坡、田埂和宅旁。据统计我国枸杞种植区面积已经由1996年的45万亩迅速增加到100万亩,年产量达3000万公斤以上,其中新疆、宁夏、内蒙古、河北等省地区的枸杞种植面积和产量居全国前列。有500多年栽培历史的宁夏,所产枸杞以粒大、皮薄、肉厚、营养丰富、药用价值高而享誉国内外,远销港澳、东南亚、西欧及北美等地区和国家。2001年,宁夏省枸杞种植面积达25万亩,占全国枸杞种植面积的17%,年产量达115.5万公斤,全区枸杞干果产量和出口量分别占全

国的40%和50%以上。枸杞抗逆性强,适应性强,在干早盐碱地区是优良的绿化树种,对改善土壤、防风固沙、防治沙漠化具有特殊功能。枸杞根系发达,多干丛生,耐寒冷、耐干早、成活率高,能串根繁殖,栽培三五年就能株成丛、树成林,枸杞林地地表风速比风蚀区减弱70%左右。以枸杞作为草原防护林,可以很好的降低风蚀对草原植被的破坏程度,有利于恢复和提高草原生产力,增加草产量,提高草场畜牧力,扩大养殖规模,而且枸杞嫩枝叶的粗蛋白含量高于紫花苜蓿,粗脂肪、粗纤维、粗灰分含量与紫花苜蓿相当,是多种禽兽喜食的饲草。

1.2枸杞的营养成分及保健功能

枸杞营养价值很高,经卫生部1988年正式公布,既是食品,又是药品。有

关枸杞营养成分的研究报道很多,但由于枸杞栽培地域广泛,品种诸多,枸杞营

养成分及含量相差较大。每100克枸杞(产地北京,含水分26.6%)含蛋白质12.0g

脂肪0.3g,膳食纤维12.6g,碳水化合物46.3g,胡萝卜素107mg,维生素B10.2mg,维生素B20.3mg,尼克酸4.5mg,维生素C13mg,钾673mg,钠105.2mg,钙37mg,镁41mg,铁6.5mg,锰0.79mg,锌1.5mg,铜0.56mg,磷224mg,硒1.67ug,此外,还含有少量甜菜碱(Betaine)、香豆素、芦丁、挥发油,枸杞均含有多种氨基酸,包括人体必需的8种氨基酸,其中天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和脯氨酸含量最高。通常,牛磺酸主要存在于动物体内,枸杞是唯一被报道的含有牛磺酸的植物体。枸杞具有特殊功能,其富含枸杞多糖是重要原因之一,不同产地不同等级的多糖含量不同,大概范围为5.34%—8.23%。据最新出版的我国食物成分表,枸杞富含胡萝卜素,其含量显著高于水果蔬菜。

枸杞多糖

现代药理学认为枸杞多糖是枸杞中主要有效成分之一。枸杞多糖是一种非特异性免疫增强剂,具有增强免疫力、抗癌、抗氧化、防衰老、增加造血功能、防止遗传损伤等作用。因此枸杞多糖可作为第三代功能性食品的功能因子,有很好的开发前景。目前对枸杞多糖的研究主要集中在枸杞多糖的结构、药理作用等方面,对枸杞多糖的生产工艺报道却很少。我们对影响枸杞多糖的提取因素进行了较为系统的研究,优化提取条件,为其工业化生产提供依据。

1.3枸杞的功能介绍

枸杞子为茄科植物枸杞Lycium Chinense Mill或宁夏枸杞Lycium barbarum L.的成

熟果实,性味甘平无毒,为我国常用中药,广泛应用于临床,主治肝肾阴亏,腰膝酸软,头晕目眩,目昏多泪,虚劳咳嗽,消渴遗精。枸杞子为“药食同源”的植物性平补保健食品,广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。大量研究表明枸杞中含有多种可被利用的生物活性成分,其中最具有提取利用价值的是枸杞多糖,其次是枸杞色素和枸杞籽油。

1.3.1枸杞多糖的生理功能

枸杞多糖为枸杞子的主要功能活性成分,其研究报道最多,主要药理作用有,调节机体免疫功能、增强记忆力、抗氧化、抗肿瘤、抗癌、减肥、降血脂、降血糖、耐缺氧、防辐射等[xxvii,xxviii]

枸杞多糖具有多种生物活性,其中许多功能都与其免疫调节作用有关。罗琼等对枸杞多糖粗品和纯品的免疫促进作用进行比较,发现枸杞多糖纯品显示出更明显的免疫增强效应,枸杞多糖纯品LBP-X各剂量均能显著增加小鼠胸腺、脾脏的重量、增加巨噬细胞的吞噬功能,明显增加E玫瑰花结形成率,并有效促进淋巴细胞转化,表明LBP-X各剂量组对抗体均有良好的免疫促进作用此外,枸杞多糖还具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤,调节血压、血脂、血糖等重要生理功能。

27.Gan L,Zhang S H,Liu Q,Xu H B.A polysaccharide-protein complex from lyciumbarbarian upregulates cytokine expression in human peripheral blood mononuclear cells.J.Eurpoean Journa of Pharmacology,2003(471):217—222

28.Du G,Liu L,Fang J.Experimental study on the enhancement of marine splenic lymphocyte

proliferation by lycium barbarum glycopeptides.J..Journal of Huazhong University of Science andTechnology[Med Sci],2004,24(5):518—520

29.王建华,王汉中,张民等.枸杞多糖延缓衰老的作用[J].营养学报,2002,24(2):189—192

30.汪积慧.枸杞多糖免疫调节作用的研究[J].齐齐哈尔药学院学报,2002,23(11):1204

31.李岩,王丽华,邹英杰等.枸杞子多糖增强免疫与抗脂质过氧化作用的实验研究[J].广东药学院学报,2003,3(12):25

32.罗建宁,张金妹,高风辉.枸杞精抗肿瘤作用的研究团[J].现代应用药

学,1995,12(3):10—11

33.杜光,刘异.枸杞子糖缀合物对荷瘤小鼠的抑瘤作用[J].中国药房,2005,8(9):753—754

34.甘璐,张声华.枸杞多糖对人单核细胞细胞因子表达的影响[J].营养学

报,2002,24(1):67—69

35.张永祥,邢善田,周金黄.枸杞子多糖及合并应用厌氧短棒杆菌菌苗对大鼠腹腔巨噬细

胞抑制肿瘤增殖活性的影响[J].中国药理学与毒理学杂志,1989,3(3):169—174

36.董进文,高天顺,胡庆和等.中药LBP-GO抗癌的实验研究[J].中国中医基础医学杂志,1997,3(6):32—35

37.沈泳,钱大玮,王瑛等.宁夏枸杞中胡萝卜素的生理效用[J].营养学

报,1990,12(4):420—422

38.齐宗韶.枸杞化学成分的研究[J].中药通报,1986,11(3):35—43

39.何进,张声华.枸杞及枸杞多搪研究[J].食品科学,1995,16(2):14—21

40.陈万更,卢晓蕊.茶叶枸杞大枣发酵酒茶的研制[J].食品与发酵工业,2004(9):142—143

41.何进,阎淳泰,梁运样.枸杞果实化学成分研究概况[J].中国野生植物资源,1997(1): 8—11

酶法提取枸杞多糖工艺研究

技术·食品工程>>> C EREALS AN D OILS PROCESSING 酶法提取枸杞多糖工艺研究 梁敏1邹东恢1,2郭建华1,2 (1.齐齐哈尔大学2.黑龙江省普通高校齐齐哈尔大学农产品加工重点实验室) 【摘要】本文研究了酶法提取枸杞多糖的最佳工艺条件以及枸杞中多糖的分离方法。采用木瓜蛋白酶处理,对作用温度、加酶量、最适pH值、作用时间进行正交试验。确定了酶法提取枸 杞多糖的最佳工艺:加酶量0.3%,酶解反应的pH值为7.0,温度为45℃,反应时间为2h,提取 率可达14.9%。 【关键词】枸杞多糖;酶法提取;正交试验;工艺 中图分类号:TS255.7文献标识码:A文章编号:1673-7199(2010)03-0104-03 枸杞子为茄科植物枸杞的成熟果实,是我国传统的滋补中药材。《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气诸不足、明目安神、令人长寿等功效。目前人们对枸杞子多糖进行了较广泛的研究,发现枸杞多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧等功效,且无任何毒副作用,因此枸杞多糖的分离纯化及其药理作用研究已成为一个热点课题。近年来生物酶广泛应用于各个领域,在国内也开始将其应用于药物提取中,枸杞多糖通常被包裹在植物细胞壁内,并且多糖往往和蛋白质结合在一起,以蛋白多糖的形式存在。研究表明中性蛋白酶能有效酶解与多糖结合在一起的蛋白质,从而将多糖释放出来而提高多糖的得率,提高了多糖的纯度,对枸杞多糖的研究开发具有现实意义。 1试验方法与工艺过程 1.1试验原料 从市场中购得新鲜枸杞,清洗干净,去除杂质,之后适当切块放入真空干燥箱干燥,待枸杞恒重,放入粉碎机中粉碎,将粉碎后的枸杞粉依次通过40、60、80、100目的筛,过筛之后把各级枸杞粉分别装到清洁干燥的烧杯中,置于真空干燥箱中待用。 1.2试验试剂与仪器 木瓜蛋白酶,北京世纪时尚科贸有限公司;Sephadex G-75,Pharmacia;苯酚,天津市科密欧化学试剂开发中心;葡萄糖、活性炭,天津市凯通化学试剂有限公司;使用试剂均为分析纯。真空干燥箱,上海益恒试验仪器有限公司;电热恒温水浴锅、离心机、透析袋、THZ-82A台式恒温振荡器,上海跃进医疗器械厂;HL-2S恒流泵,上海青浦沪仪器厂;九阳料理机,山东九阳小家电有限公司;SHZ-D(III)循环水式真空泵、722紫外分光光度计、PB-10pH计,北京赛多利斯仪器系统有限公司;BSZ-100自动部分收集器,上海沪西仪器厂;Lambda-35紫外可见分光光度计,美国PE公司。 1.3试验方法与步骤 称取80目的枸杞粉3g,放入到250mL的三角瓶中,然后加蒸馏水35mL混合均匀后置于40℃水浴锅中,水浴30min,调节pH值,加入一定比例木瓜蛋白酶混合,加入5mL蒸馏水溶解,枸杞溶液放在水浴中预热至酶解温度,将酶液加入到枸杞溶液中,在恒温振荡器上提取,反应结束,将三角瓶放到沸水锅中,10min沸水浴灭酶,灭酶结束,冷却至室温,将酶提取液放入到离心管中,调至5000r/min离心,取上清液,即得到酶提取多糖清液。 1.4葡萄糖标准曲线的制定 以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标作图,绘制标准曲线,获得线性回归方程。直线方程为:Y= 104

多糖提取工艺流程

第一部分:野生灵芝菌种的分离、扶壮、保藏和培养 前言 采集吉林长白山野生灵芝,经过菌种分离,鉴定为GANODERMA(英文名称)多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.) Karst.的菌种。经过纯化扶壮培养,成为一支优良的灵芝菌种,为灵芝菌丝体发酵培养和灵芝多糖的提取奠定了基础。 实验室流程:(百级净化超净工作台)菌种分离菌种接种(恒温培养箱)菌种培养扶壮(恒温恒湿冷藏柜)优良菌种保藏(百级净化超净工作台)菌种分离菌种接种(摇床)发酵菌种摇瓶培养(用于接种菌种罐) 第二部分:灵芝菌丝体液体发酵培养 前言 液体发酵培养不同于灵芝子实体栽培,周期短,产量高,无污染,灵芝多糖含量高,节省木材和耕地。是一种灵芝多糖理想的工厂化现代科技生产方式。经过摇瓶培养的灵芝菌种接种于种子罐,待生长良好,在接种于扩大的发酵罐中,通过通气恒温培养,长成成年灵芝菌丝体,生长完全后,进行离心分离喷雾干燥,就得到相当于灵芝子实体的灵芝菌丝体粉,多糖含量达到15%左右。进一步提取加工得到高含量的灵芝多糖。 灵芝菌丝体发酵工艺流程:(配料罐)培养液的配制(菌种罐)菌种的发酵培养 (发酵罐)灵芝菌丝体发酵培养(离心机)灵芝菌丝体固液分离(浓缩液配制罐)灵芝菌丝体配制成浓缩液(喷雾干燥塔)浓缩液喷雾干燥,得到灵芝菌丝体粉 第三部分:灵芝菌丝体多糖的提取分离 前言 灵芝菌丝体粉,是大部分不溶解于水,食用以后象灵芝子实体一样,只有少部分成分被吸收,通过现代提取手段,将灵芝菌丝体经过提取罐的水提取,经过真空浓缩,在经过醇沉工艺,加工成可以全部被人体吸收,灵芝多糖含量提高到30-40%灵芝菌丝体提取物。极大的提高了功效,减少了服用量。 灵芝多糖提取工艺流程:(提取罐)灵芝菌丝体粉水提取(外循环真空浓缩罐)提取液真空浓缩(醇沉罐)浓缩液乙醇沉淀多糖(离心机)沉淀多糖分离 (浓缩液储罐)沉淀物配制成多糖浓缩液(喷雾干燥塔)灵芝多糖喷雾干燥 (粉碎机)灵芝多糖粉碎到100目(混合机)灵芝多糖粉批量混合(真空包装机)食品塑袋真空包装。灵芝多糖原料成品

多糖的提取分离方法

1.多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前是否做预处理。动物多糖和微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。 1.1溶剂法 1.1.1水提醇沉法 水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5 h,多糖的质量分数和得率均较高。影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,是一种可取的提取方法。但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。1.1.2酸提法 为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于H+的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之处。 1.1.3碱提法 多糖在碱性溶液中稳定,碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味和色泽。 1.1.4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。超临界流 体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态,这种流体兼有液体和气体的特点,密度大,粘稠度小,有极高的溶解,渗透到提取材料的基质中,发挥非常有效的萃取功能。而且这种溶解能力随着压力的升高而增大,提取结束后,再通过减压将其释放出来,具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。由于CO2的超临界条件(TC=304.6 ℃,Tp=7.38 MPa)容易达到,常用于超临界萃取的溶剂,在压力为8~40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物,在加入改性剂后则可溶解极性化物。 该法的缺点是设备复杂,运行成本高,提取范围有限。 1.2酶解法 1.2.1单一酶解法 单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖,从而提高提取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用,使其结构变得松散;蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解,降低它们对原料的结合

枸杞多糖提取工艺

目录 摘要 (1) 英文摘要 (2) 1 引言 (3) 2 材料与方法 (4) 2.1 实验材料与仪器设备 (4) 2.2.1 葡萄糖标准溶液的配制与曲线的绘制 (4) 2.2.2 枸杞多糖溶液的提取方法 (5) 2.2.3 苯酚-硫酸法测定多糖含量 (6) 3 实验结果与分析 (6) 3.1 单因素选择试验 (6) 3.2提取率与浸提温度之间的关系 (6) 3.3 提取率与料水比之间的关系 (7) 3.4 提取率与浸提时间之间的关系 (8) 3.5 正交试验优化工艺条件 (9) 4 结论 (10) 参考文献 (11) 致谢 (12)

枸杞子多糖提取工艺的探索 化学化工学院应用化学专业 摘要:利用正交分析法对枸杞多糖的提取工艺进行优化。以枸杞为主要原料,先采用单因素试验法分别对影响枸杞多糖提取率的主要因素进行分析研究,最后再利用正交试验法优化选取一个最佳的工艺条件。试验结果表明,枸杞多糖的热水浸提法最佳工艺条件为浸提温度90℃,料水比1:20,浸提时间2h。 关键词:枸杞多糖;水浸提取;单因素试验;正交试验

Exploration of Lycium Barbarum Polysaccharides Extraction Technology College of Chemistry and Chemical Engineering Applied Chemistry Specialty Chen Fei (20907031003)Director: Xu Han (Lecture) Abstract: To optizime the extraction technology of lycium barbarum polysaccharides by orthogonal methodoloy. The main factors were studied effecting the extraction of lycium barbarum polysaccharides by single factor experiments. And then, the optimum extraction conditions of lycium barbarum polysaccharides was studied by orthogonal experiment. The optimized conditions for the extraction of polysaccharides was obtained as follows: extraction temperature 90℃, material to water1∶35(W∶V) , extraction time 2 h. Keywords:lycium barbarum polysaccharides; flooding extraction; single factor experiments; orthogonal experiment

银耳多糖的提取工艺

银耳多糖的提取工艺 李帅涛 摘要:国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法,酸碱提取法和酶解提取法等,其中酶解提取法具有提取时间短,条件温和等优点。本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象,探讨了不同条件下银耳多糖的收率,由试验结果表明,解法提取银耳多糖的最适条件为:银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%,酶解时间45min,提取时间60min。 关键词:银耳多糖;酶解法;提取工艺 引言:我国银耳资源丰富,为开发应用银耳多糖提供了有利条件。近年来,有关银耳多糖的研究越来越多,但这些研究多为银耳多糖的化学特性和药理作用方面的研究,少有关于银耳中提取银耳多糖的研究。目前银耳多糖的提取方法多为热水浸提法或酸碱法提取,但热水浸提法耗时过长,且收率较底,费时费力,因此不适合大规模的工业生产,而酸碱法提取虽然提取时间较短,却会破坏银耳多糖立的生物活性,使提取到的银耳多糖药用效果大大下降。本试验主要研究使用果胶酶酶解银耳,热水提取的技术来提取银耳多糖的方法。而如今生物工程工艺发展迅速,生物制品价格不断下降,这为用酶解法提取银耳多糖提供了可行性。用酶解法提取银耳多糖不仅能缩短单纯用热水法提取的时间,还不会像酸碱法那样破坏银耳多糖的生物活性。 材料与设备: ①实验材料:银耳;葡萄糖(分析纯):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中,定容至1000ml;果胶酶:按100ml:1g加入果胶酶;苯酚(分析纯);精确量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中,定容至100ml;浓硫酸(发烟硫酸) ②实验设备:101型电热鼓风干燥;YP202N型电子天平;HH系列恒温水浴锅;电子万用炉;TDZ5-WS型台式低俗离心机;722E型可见分光光度计 分离与纯化:取市售银耳适量,洗净,70℃烘干后,破碎成粉末状,称取粉末0.5g(2%),果胶酶0.25g(1%),同时加入蒸馏水25mL,迅速置于45℃水浴锅中酶解,3个样品为一组,第一组酶解30min,第二组酶解45min,第三组酶解60min。酶解后迅速升温至98℃将酶灭活,然后每组样品分别于98℃水浴中保温浸提30min,45min,60min,浸提完成后置于冷水中冷却至室温,然后于4500rpm离心分离10min,最后取上清液待用。 含糖量测定:银耳浸提液离心后,分别取上清液1ml,加水19ml,即稀释20倍,取银耳浸提稀释液1mL于一洁净试管中,再加入苯酚试液1.0mL,浓硫酸5mL,混匀,室温放置30min,冷却后,于490nm处测定吸光度。 结果与分析:本试验采用果胶酶酶解银耳的方法提取银耳多糖。试验讨论了不同酶解时间与不同提取时间对提取效果的影响,最终确定最佳提取工艺为:在45℃下,用1%果胶酶酶解,水与银耳比例为100ml:1g,酶解时间为45min,然后于98℃热水浴中浸提60min。用此法提取银耳多糖,提取率可达40% ,远高于传统的银耳多糖提取工艺。相比传统工艺,果胶酶提取银耳多糖不仅有较高的提取率,还可以明显缩短提取的时间。银耳多糖的生物活性在长时间高温环境和酸碱性条件下容易受到破坏,酶解法提取环境温和,且提取时间较短,能较好的保留银耳多糖的生物活性。固定酶解时间时,提高提取时间可显著提高提取效果,改变酶解时间时,提取效果有提高,但不大,且从45min 增加到60min增加不显著。

多糖分离纯化的基本原则和方法

多糖分离纯化的基本原则和方法 多聚糖(polysaccharide),简称多糖,常由一百个以上甚至几千个单糖基通过糖苷键连接而成的,其性质已大不同于单糖,如甜味和强的还原性已经消失,广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中,是构成生命的四大基本物质之一,与生命功能的维持密切相关。近年来,大量研究表明多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外,还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。 1、基本原则 在不破坏多糖活性的前提下进行多糖的分离纯化。尽量不引入新的杂质,或引入的新杂志易于除去,如小分子盐类可经过透析作用除去,铵根离子可通过加热挥发除去等[1]。 2、分离纯化方法 多糖的生物活性倍受关注,但不少多糖的提取方法和工艺尚未成熟,基于效率、成本多方面的考虑,各种方法的开发、比较、分析是研究工作的焦点之一。目前多糖提取方法主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。首先要根据多糖的存在形式及提取部位不同,决定在提取之前是否做预处理:提取时需注意对一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在用水提取前,应先加入甲醇或l:l的乙醇乙醚混合溶液或石油醚进行脱脂,而对含色素较高的根、茎、叶、果实类,需进行脱色处理。 2.1多糖的提取与分离方法 由于各类多糖的性质及来源不同,所以提取方法也各有所异,主要归纳为以下几类: 第一类难溶于水,可溶于稀碱液的主要是胶类,如木聚糖及半乳糖等。原料粉碎后用0.5mol/L NaOH水溶液提取,提取液经中和及浓缩等步骤,最后加入乙醇,即得粗糖沉淀物。 第二类易溶于温水,难溶于冷水的多糖,可用70~80℃热水提取,提取液用氯仿:正丁醇(4:1)混合除去蛋白质,经透析、浓缩后再加入乙醇即得粗多糖产物[2]。 第三类粘多糖的提取。在组织中,粘多糖与蛋白质以共价键结合,故提取

枸杞多糖提取论文

第一章综述 1前言 1.1枸杞 1.1.1枸杞的自然属性 枸杞(Lycium barbarum)别名苟起子、甜菜子、地骨子等,是茄科植物枸杞(Lycium chinense Miller)的成熟果实。是我国重要的药用植物资源,是我国受原产地保护的药食两用的药材和传统出口创汇产品。早在2000多年前,人们已经开始了对枸杞的利用。《诗经》记载“陟彼北山,言采其杞”。宋?苏轼《小圃?五咏》赞枸杞曰“根茎与花实,收拾无弃物”。《本草纲目》中记:“久服杞子,坚筋骨,轻身不老,耐寒暑”。《本草汇言》记“枸杞能使气可充,血可补,阳可生,阴可长,火可降,风湿可去,有十全之妙焉”。《保寿堂方》载“春枸杞叶,名天精草;夏采花,名长生草;秋采子,名枸杞子;冬采根,名地骨皮”。根据《郭案驼种树书》记载,大约在1200多年前,我国就开始栽种枸杞了。此外,《神农本草经》、《食疗本草》、《本草纲目》和《本草备要》等古书中都有关于枸杞的记载。 枸杞具有滋补肝肾,益精明目的作用。作为我国常用中药,枸杞被广泛应用于临床,主治肝肾阴亏,头晕目眩,腰膝酸软,消渴遗精,目昏多泪,虚劳咳嗽。枸杞子又作为“药食同源”的植物性平补保健食品,被广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。大量研究表明枸杞中含有多种可被利用的生物活性成分,其中最具有提取利用价值的是枸杞多糖,其次是枸杞色素和枸杞籽油。 枸杞的生长状况 枸杞属约有80个种,多数分布在南、北美洲。以美国的亚利桑娜州和阿根廷形成两个分布中心,南美洲种类最多。欧亚大陆约有10个种。约在17世纪中叶引到法国,后来在欧洲,地中海国家,韩国以及北美洲国家都有栽种。我国有7个种和3个变种,多数分布在西北和华北。目前我国人工栽培的构祀有宁夏枸杞及北方枸杞。枸杞原产我国北方,河北、内蒙古、山西、陕西、甘肃、宁夏、新疆和青海等省都有野生,而中心分布区域在甘肃河西走廊、青海柴达木盆地以及青海至山西的黄河沿岸地带。常生于土层深厚的沟岸、山坡、田埂和宅旁。据统计我国枸杞种植区面积已经由1996年的45万亩迅速增加到100万亩,年产量达3000万公斤以上,其中新疆、宁夏、内蒙古、河北等省地区的枸杞种植面积和产量居全国前列。有500多年栽培历史的宁夏,所产枸杞以粒大、皮薄、肉厚、营养丰富、药用价值高而享誉国内外,远销港澳、东南亚、西欧及北美等地区和国家。2001年,宁夏省枸杞种植面积达25万亩,占全国枸杞种植面积的17%,年产量达115.5万公斤,全区枸杞干果产量和出口量分别占全

植物多糖及其提取方法

植物多糖及其提取方法 1 前言 多糖是自然界和生物体中广泛存在的物质,它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子。它具有多种生物活性,与生物机能的维持密切相关,与蛋白质、脂类形成的糖蛋白、脂多糖在细胞的识别、分泌以及在蛋白质的加工、转移方面起着不容忽视的作用。近年来,植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现,各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相继被发现。我国对多糖研究始于20世纪70年代,植物多糖由于它们独特的功能和低毒性,作为新药发展的方向具有广阔的应用前景,越来越多的研究人员将目光投向植物多糖。 2 植物多糖的结构 植物多糖是由许多相同或不同的单糖以a或p一糖苷键所组成的化合物,普遍存在于自然界植物体中,包括淀粉、纤维素、多聚糖、果胶等。多糖有复杂的四级结构,一级结构指糖基的组成、排列顺序、相邻糖基的连接方式、异头碳构型及糖链有无分支、分支的位置与长短等;二级结构指多糖主链以氢键为主要次级键而形成的有规则构象;三、四级结构是指以二级结构为基础,糖单位之间的非共价相互作用,导致二级结构在有序地空间产生规则构象。植物多糖的

主链与支链形成了特殊的构型一凹形槽。凹形槽是一级结构与构象的体现。凹形槽的支链与活性关系为:支链度越大,凹形槽越多,生物活性越大。近年来,人们对多糖的结构和活性的研究不断深入,进一步阐明了多糖作用机制与结构的关系,其多样性的生理活性更加受到重视。 3 植物多糖的功能 多糖与蛋白质一样,具有生物大分子的复杂结构,具有一定的生理和生物学活性,概括起来多糖的生物活性包括:免疫调节性、抗肿瘤活性、降血糖活性、降血脂活性、抗病毒活性、抗衰老活性(抗氧化活性)、抗疲劳、抗突变活性,除此之外,还具有其他生物活性,包括抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等作用。 (1)免疫调节功能。由于现代医学、细胞生物学及分子生物学快速发展,人们对免疫系统的认识越来越深入。免疫系统紊乱,会导致人体衰老和多种疾病的发生。植物多糖是一种免疫调节剂。多糖对肌体的免疫调节作用,包括激活巨噬细胞,激活网状内皮系统,激活T和B细胞,激活补体,进干扰素的生成,促进白细胞介素的生成,诱生肿瘤坏死因子等。 2)抗肿瘤活性植物多糖主要是通过增强机体的免疫功能来达到杀伤肿瘤细胞的目的,许多高等植物中都含有抗肿瘤活性的多糖,如芦荟多糖、香菇多糖提取物、人参多糖具有

多糖的提取和纯化

多糖的提取和纯化目前,真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得,但以从子实体中提取多糖为主。首先是将子实体粉碎,加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液,水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。其次是用残渣提取多糖,常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。水提法采用的较多,适合于提取水溶性多糖。稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短,温度不超过50℃,以防止糖昔键断裂。稀碱法适合于提取碱溶性糖。然后除去小分子杂质,常采用透析法,将多糖提取液置于半透膜透析袋中,逆向流水透析1一3天。第四步是沉淀多糖。大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小,所以可用有机溶剂来沉淀。常用4一5倍低级醇、丙酮,一般在pH=7.0左右沉淀多糖,制得粗多糖。最后是除去蛋白质。除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。 多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。纯化方法很多,主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质,逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。 纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量,因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。因此,测得的分子量一般为平均分子量。过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量,但由于这些方法测定起来比较麻烦,且误差较大,现多数已不采用。目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法,对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。 1.2.1发酵、提取 取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养,逐级扩大培养至10O0L,25℃下通 气培养72h,压滤,得香菇深层培养菌丝体。 上述菌丝体经水洗涤后,用3倍量热水(90一100℃)浸取3h,浸取液经浓缩加3倍量95肠乙 醇,离心得乙醇沉淀物一Le[‘’。 1.2。2分离、纯化 取Le上样于DEAE一纤维素柱上,用O。Olmol/L pH 6.95 Tris-HCI缓冲液洗脱,洗脱液分 部收集,分别用UV(280nm)和酚硫酸法测定其吸收值(A值),合并吸收峰重叠的洗脱液,经浓 缩、透析、冻干得淡黄色絮状物Le一2· Le一2进一步用DEAE一纤维素(DE52型)分离,先用pH7.8的0.oosmol/L硼酸缓冲液洗脱, 后用含lmol/L NaCI的o.Zmol/L硼酸缓冲液洗脱.各洗脱液按上法用UV230nm和酚硫酸法 检测,分别收集既含肤又含糖的洗脱液.用o.005mol/L硼酸缓冲液洗脱的组分为Le一2一1,用含 lmol/L NaCI的硼酸缓冲液洗脱的组分称Le一2一2o 1.2.3鉴定 1.2.3.1纯度 (l)HPLC法将样品配成1%浓度后进样.进样量20召L。流动相:0.002mol/L NaAc;

枸杞多糖的提取工艺研究

枸杞多糖的提取工艺研究 [摘要]枸杞为茄科植物枸杞的干燥成熟果实,主产于河北与宁夏,是一种食药两用植物,味甘、性平、入甘、肾经,具有多种药理作用和生物功能。枸杞多糖是枸杞中的主要活性成分之一。其中有关枸杞多糖的化学、药理与临床研究十分瞩目,已有不少研究报道枸杞多糖具有增强免疫力、抗癌、防衰老、增强造血功能、防止遗传损伤、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用。鉴于枸杞多糖具有多种药理作用和生理功能,引起了人们的广泛关注。本试验研究超声辅助提取法在枸杞多糖提取中的应用,采用正交实验的方法筛选出提取枸杞多糖的最佳提取条件。当加水量为20倍,提取时间为40min,提取温度为80℃,超声功率为250W 时枸杞多糖得率最高,可达到3.06%。 [关键词]枸杞多糖;超声辅助提取;正交实验 多糖(Polysaccharide)又称多聚糖,由是由十个以上的单糖基通过普键连接而成的一类结构复杂的大分子化合物。多糖类一般不溶于水,无甜味,不能形成结晶,无还原性和变旋现象。多糖可以水解,最终水解得到单糖。枸杞多糖是枸杞的有效成分之一,经研究发现,枸杞多糖既是保健功能因子,又是一种非特异性免疫增强剂,具有调节免疫功能、降血糖、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、增加造血功能、防止遗传损伤等作用。 本实验采用正交试验方法研究超声辅助提取法在枸杞多糖提取中的应用,并筛选出提取的最佳工艺条件。 1 实验材料与仪器 2实验步骤与方法 2.1 多糖含量标准曲线的绘制:采用H2SO4苯酚法对其加以改良。精密称取无水葡萄糖标准品25.0mg,置于25ml容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,配成1mg/ml的储备液,分别精密吸取储备0、0.5,1.0,1.5,2.0,2.5ml,置25ml 容量瓶中,加5%苯酚溶液1.0ml,摇匀,用移液管迅速垂直滴加浓硫酸各5.0ml,再用蒸馏水稀释至刻度,沸水浴中煮沸15min;冷却后用分光光度计在490nm波长处测定其吸光度值;以试样糖含量C(mg/ml)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程。 2.2 枸杞多糖得率计算:多糖得率=枸杞粗多糖质量(g)÷枸杞原料质量(g)×100% (公式2-1) 2.3 超声辅助提取枸杞多糖 2.3.1 枸杞多糖提取工艺流程:枸杞→粉碎→石油醚回流脱脂(水浴温度60℃)→过滤→滤渣风干→样品称重(预处理样)→超声波法提取→抽滤→粗

多糖各种提取方法

一、植物多糖的提取 1 溶剂提取法 1.1 水提法 水对植物组织的穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质,沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出,有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。 1.2酸碱提法 有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势,目前报道的并不多。而且即使有优势,在操作上还应严格控制酸度,因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。 有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾,为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样,碱提优势也是因多糖类的不同而异。与

酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。

1.4 生物酶提取法 酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶等。 1.5 超声提取法 超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。另外,超声波的热效应使水温基本在57℃,对原料有水浴作用。超声波提取与传统的提取方法相比,有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提取的影响因素有:超声时间、超声频率(一般低频中提取效率高,但也有例外)、料液比和温度等。 1.6 微波提取 微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波,微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部,由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波技术应用于植物细胞破壁,有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、加

枸杞多糖的提取与鉴定

枸杞多糖的提取与鉴定 1242818杨立君实验原理 强酸可以使糖类脱水生成糠醛。生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。颜色的深浅可以作为定量的标准。这一方法具有很高的灵敏度,糖含量在30μg左右就能进行测定,所以可以作为微量测糖之用。 一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适]1[。 实验试剂 1.标准葡萄糖试剂:将葡萄糖105℃烘干至恒重(2h),准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL. 2.蒽酮-浓硫酸试剂:称取0.1997g蒽酮,溶于100mL浓硫酸,现用现配。 3.葡萄糖,阿拉伯糖,甘露糖]3[],2[ 4.硫代硫酸钠溶液,活性炭,正丁醇,无水乙醇,丙酮。三氯甲烷,甲苯胺乙醇溶液 实验器材 分光光度计,超速离心机,电炉,烧杯,试管,干燥器,滤纸,层析缸以及其他相关玻璃仪器 实验流程 (一) 提取 枸杞干果粉碎,氯仿- 甲醇(2∶1)回流脱脂8~10 h 近无色,挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中,分3次加15、12、10 倍量的蒸馏水于90 ℃水浴提取,每次2 h;收集3 次的滤液减压浓缩至约200 mL,转移到大烧杯中,加4 倍量的95%乙醇,沉淀12 h 后抽滤,并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚 洗涤,干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。]4[ (二)纯化 多糖粗品加水溶解,4 000 r/min 离心10 min 后取上清液,加30%双氧水适量,40 ℃保温4~6 h 后,加三氯甲烷-正丁醇(4∶1,Sevag 法)溶液沉淀蛋白,取上清液;此步骤反复多次,直到无白色絮状沉淀出现。将除去蛋白的多糖溶液浓缩后,转移到分子排阻为8 000~10 000 Da 的透析袋中,流水透析24 h 后,蒸馏水透析过夜,溶液颜色变淡,浓缩后 真空干燥得枸杞多糖精制品。]4[ (三) 理化性质分析 将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中,观察其溶解性。另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用,于界面处观察颜色变化。 (四)蒽酮比色法测定含量

枸杞多糖提取工艺比较及体外抗氧化性研究

不同工艺的枸杞多糖提取率比较及其体外抗氧化性研究 枸杞多糖是一种优质的水溶性植物多糖,提取自宁夏枸杞的果实。现代药理研究已表明,枸杞多糖能够改善老年人易疲劳、食欲不振、视力模糊等症状,同时还是枸杞子中调节人体免疫、延缓衰老的主要活性成分。 枸杞多糖作为西安源森生物公司的主打产品,已被广泛应用于食品饮料以及保健品领域。为向客户提供更高品质的产品,日前,西安源森生物实验室就枸杞多糖的不同提取工艺进行对比研究,并对枸杞多糖体外抗氧化性进行了测定。 实验概述: 1. 西安源森生物实验室分别用三种提取方法:浸泡提取法、超声波提取法和微波提取法提取枸杞多糖;然后采用硫酸- 苯酚法对多糖含量进行定性定量分析,得出不同提取方法所得的枸杞多糖含量及提取率; 2. 根据枸杞粗多糖对自由基的清除率以及对超氧阴离子的清除作用的测定,比较同浓度条件下的VC 与枸杞多糖对抗氧化活性。枸杞多糖体外抗氧化性结论。 一、三种提取方法提取枸杞多糖的提取率研究 (一)实验材料与试剂 1. 材料 宁夏枸杞西安源森生物实验室自产地直接采购; 2. 试剂 (1)5% 苯酚; (2)8mmol/L HCl;25mmol/L 邻苯三酚溶液; (3)0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.2);10%三氯乙酸; (4)邻苯三酚(焦性没食子酸,分析纯); (5)三羟基甲基氨基甲烷(Tris)(分析纯); (6)1,1-二苯基-2-苦基苯肼(1,1-dipheny1-2-picryl-hydrazyl, DPPH)。 (二)仪器与设备 (1)索氏提取装置,HH-S 数显恒温水浴锅; (2)YHW-102 型远红外干燥箱; (3)KQ3200 型超声波清洗仪; (4)WFJ-7200 型可见光分光光度计; (5)LDZ5-2 低速自动平衡离心机; (6)WP700 型微波炉; (7)TU-1900 双光束紫外可见分光光度计; (8)DL-1 万用电炉规格(单联电压220V,功率:LX/KW); (9)ZDHW 型调温电热套(规格250ml,功率150W); (10)JA2003 型电子天平。 (三)实验步骤 1.枸杞预处理 将宁夏枸杞放于60℃恒温箱中恒温干燥24h→称量→剪碎→回流脱脂(回流两次,每次3 h)→弃去溶剂,残渣风干,残渣即为经过预处理的枸杞。 2. 利用三种方法进行枸杞多糖的提取 (1)浸泡法提枸杞多糖 用电子天平称取等量经预处理后的枸杞,浸泡3h,然后用90℃的水浴提取1.5h,用脱脂棉过滤,重复提取3 次,弃去残渣,合并滤液,浓缩,离心(3000r/min,30min),弃去残

多糖提取实验设计流程【复习准备】

食用菌多糖的提取方法有水提法、碱提法和酶提法等,其中酶提法是利用酶对细胞结构的破坏作用,使存在于细胞内部的多糖释放出来,从而提高了多糖的得率。 本次实验采用纤维素酶和果胶酶对紫蘑菇进行水解,研究香菇多糖的最佳提取工艺,并探讨蘑菇粒度、蘑菇溶解方法以及酶法提取中多糖提取效果的评价方法。 可以同步做三组对比试验:⑴采用水提,不加酶;⑵采用酶法提取;⑶采用酶空白(只加酶,不加蘑菇粉)。 由于酶中也含有少量的糖类成分,其存在将会对蘑菇多糖的提取产生影响。因此,在计算酶法提取多糖的效果时,要减去酶本身所引入的糖。在确定最佳酶浓度时更要考虑。 一、实验流程:蘑菇干燥→粉碎过筛→加水浸泡0.5h→调PH→加入纤维素酶→提取→离心过滤→测多糖提取率 式中:n一提取液稀释倍数; C一提取液中多糖的浓度(mg/mL); V一提取液体积(mL); m一蘑菇的质量(mg)。 测定时取三个平行样,结果数据为平行样的平均数值。 二、具体实验步骤: 1、多糖标准曲线的绘制 精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖标准品100mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL分别置于50 mL 容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取上述各种溶液2.0 mL,分别加入5%苯酚溶液1.0 mL,摇匀,迅速加入5.0 mL浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15 min,然后置冷水浴中冷却30 min,随行空白,在490 nm波长处测定吸光度。以标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,并计算其标准曲线回归方程。 (1)精密度试验:精密吸取1.0 ml供试液按“标准曲线的制备”项下操作,分别测定吸光度,求得RSD。 (2)重现性及多糖含量测定:精密称取巴西蘑菇多糖0.1000g,按“供试液

枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定

枸 杞 多 糖 的 提 取 与 含 量 测 定 2011级药学班 A6组 丁艺兰,冯霞

枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定 一、实验目的: 1、解中药品种品质研究的思路和方法 2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法 3、掌握查阅文献和数据处理的方法 二、实验原理: 枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实,它既可以作为药材,又可以作为保健食品。经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖,主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。现代医学研究证明:它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用,能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。 萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。通过萃取,能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。它的基本原理是利用化合物在两种不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。经过反复的多次萃取,将绝大部分的化合物提取出来。萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。在本次实验中,是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物,属于液-固萃取。本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。 三、实验步骤

1、枸杞多糖的提取 称取干燥的枸杞80g,用研钵研成粉末状,放入烧杯内,加入一定料液比(1:8、1:10、1:12)的水溶液,放入微波搅拌器中放置30min,温度70-100摄氏度之间,功率300w,过滤,得滤渣,再加入一定料液比(1:8、1:10、1:12)的水溶液,放入微波搅拌器中放置30min,温度70-100摄氏度之间,功率300w,合并滤液,采用旋转蒸发器真空浓缩,得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀,滤布过滤,得滤渣用丙酮。石油醚混合液(体积比1:1)于50~60℃回流0.5h,滤布过滤,得沉淀,烘干,得到枸杞粗多糖。 2、Sevage法脱蛋白 取一定量的粗多糖,加蒸馏水完全溶解,使其浓度约为100mg/m L,用Sevage法脱蛋白,按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷,再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇,剧烈振摇20min,使其充分混匀,1000r/min离心,倾出上清液,除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷,重复以上操作直至中间层无变性蛋白,得到脱蛋白多糖。 3、含量测定 (1)对照品溶液制备精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg,置500 mL 量瓶中,用适量水溶解后,稀释至刻度,摇匀,即得0.1 mg·mL (2)样品溶液的制备枸杞子样品粉碎,备用。取各种枸杞子粗粉约0.5 g,精密称定。加乙醚100 mL,加热回流1 h,静置,放

中药多糖提取工艺的研究进展

中药多糖提取工艺的研究进展 于红梅 (聊城大学农学院,山东,聊城,252059) 摘要:中药对动物免疫功能具有多方面的影响。近年来,大量研究结果表明,中药可促进免疫器官的发育,提高机体的免疫力,并通过激活单核巨噬细胞和天然杀伤细胞、促进T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖、分化和免疫球蛋白的产生,增强机体的抗病力;中药的活性有降低肿瘤细胞端粒酶活性的作用,表明中药在抗肿瘤方面具有一定潜力。 关键词:中药;提取;方法 中药化学成分复杂,药材往往需要经过提取、纯化处理。中药提取即利用现代技术最大限度提取其中的有效成分,尽可能避免或减少杂质类的溶出,并在一定程度上降低毒副作用,提高中药材资源的附加值。 中药提取在我国已有悠久的历史,春秋战国时期的《黄帝内经》是我国现存最早的医学药典之一,其已记载了经过简单提取的汤、丸、膏、药酒等药物剂型。东汉著名的医学家张仲景编著的《伤寒杂病论》中也有经过提取的煎剂、浸剂、软膏剂等。东汉时期成书的《神农本草经》,是我国现存最早的药物学专著,书中记载“药性有宜丸者,宜散者,宜水煮者,宜酒渍者,宜膏煎者,亦有一物煎煮者,亦有不可入汤、酒者,并随药性,不得违越”。 清明时期,伟大的医学家、药学家李时珍著作的《本草纲目》中,记载了当时我国的中药提取,已不限于一些简单的提取制剂,出现了一些提纯品,书中还记载了蒸馏、结晶、升华、沉淀、干燥等现代化学中应用的一些操作方法[m]。 新中国成立以来,随着现代科学技术的发展,为了进一步开大利用中药材,提取中草药有效提取物在中药生产过程中所占比例越来越重,由于中药材药性、有效成分的不同,中药提取应根据中药材以及目标产物的特性,选择不同的提取方法及提取工艺条件进行提取,中药提取纯化方法为中药实现生产向专业化和现代化方向迈进。 1水提取法 水提取法即以水为溶剂,将药材一定温度加热,煎煮一定时间,将有效成分提取出来的一种常用方法,是我国最为传统的提取方法,对有效成分尚未清楚的药材或方剂进行剂型改进时,通常先采用水提取粗提。水提法是中药制剂生产中首选的提取方法,也是多糖提取最为常用的提取方法。徐青梅[]应用水提取法提取黄芪多糖,通过单因素实验和正交实验设计优化实验得到黄芪多糖提取的最佳提取条件。实验结果表明,黄芪多糖最佳提取条件为:提

资料-多糖含量测定的各种方法优缺点

苯酚-硫酸法测多糖含量 一、原理 多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 二、试剂 1、浓硫酸:分析纯,95.5% 2、80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。 3、6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配) 4、标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia)或分析纯葡萄糖。 5、15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 6、5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 7、6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。 8、6mol/L 盐酸 三、操作 1、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。 2、样品含量测定 1)取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液于10毫升离心管中,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液,重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意:总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。 2)离心,转速3000转/分钟,共三次。第一次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。 3)水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。 4)定容取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液,以蒸馏补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,

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